+PRÁCTICA # 1 Grupo Sanguíneo Tipificación del RhCoombs Directo Ana Sofía Sánchez Gómez 343400

Lizbeth Danelia González Caraveo 755192

Jassiel Hernández López 755613Alejandra Salcedo González

641276Paulina Asian Loya 749783

+PRUEBAS A REALIZAR

1. Determinación de grupo sanguíneo y Rh

2. Prueba de Coombs Directa

• Objetivo de la Práctica:• Entender el proceso mediante el cual es posible

el tipo de sangre que posee una persona, así como realizar el proceso de tipificación del Rh.

• Aprender a realizar la prueba de Coombs Directo y su interpretación.

+PARA ENTENDER UN POCO…

La prueba para determinar el grupo sanguíneo de una persona es un método que nos indica la presencia o ausencia de antígenos en los glóbulos rojos de dicha persona. Generalmente se clasifica el tipo de sangre de acuerdo al Sistema ABO, en donde existen cuatro categorías [A, B, AB, O]. El tipo de sangre va a depender de los tipos que se hayan heredado de los padres.

+PARA ENTENDER UN POCO…

La prueba de Coombs Directo busca anticuerpos que se adhieran al antigeno D sobre los eritrocitos causando así su destrucción (hemólisis). El resultado de la prueba dependerá de si existe aglutinación de eritrocitos debido a una reacción antígeno-anticuerpo.

+GRUPO SANGUÍNEO Y TIPIFICACIÓN DEL RH

¿Qué se necesita?

Sangre del paciente en tubo lila (EDTA)

Pipeta de Pasteur

Placa con círculos

3 aplicadores de madera

4 tubos de ensayo

Cinta adhesiva y plumón

Solución salina a temperatura ambiente (en Piseta)

Suero anti A, anti B, y anti Rh

+

¿Cómo se realiza?

1•Aspirar

sangre con Pipeta de Pasteur

2

•Poner una gota de sangre en tres círculos de la placa

•A un círculo se le agrega una gota suero Anti A, a otro suero Anti B y al último suero Anti Rh (se mezcla con aplicador)

•Observar si existe aglutinación

3

•En un tubo de ensayo (ver prueba de Coombs) poner de 3-4 gotas con Pipeta de Pasteur•Sangre que

sobra debe ir al tubo lila

•Al mismo tubo se le agrega solución salina temperatura ambiente hasta la mitad y se reuvelve con la pipeta de arriba abajo para formar solución Rojo Tomate (Pasos 1 y 2 en Prueba de Coombs)

GRUPO SANGUÍNEO Y TIPIFICACIÓN DEL RH

+

¿Cómo se realiza?

4

•Con la solución rojo tomate agregas a 3 tubos de ensaye 2 gotas (utilizando la pipeta de Pasteur)

•Recuerda que los tubos deben estar marcados: A, B, Rh y el número de equipo.

5

•A los tubos se le agrega una gota de suero anti A, anti B y anti Rh según los hayan marcado.

6

•Centrifugar 1 minuto a 1500 rpm

•Observar si existe aglutinación y comparar con la placa

GRUPO SANGUÍNEO Y TIPIFICACIÓN DEL RH

+

¿Cómo interpretarla? Si los glóbulos rojos se aglutinan al mezclarse con:

Suero anti A Sangre tipo A Suero anti B Sangre tipo B Suero anti A y Anti B Sangre tipo AB

Si los glóbulos rojos no se aglutinan: Sangre tipo O

Si los glóbulos rojos se aglutinan al mezclarse con suero anti Rh entonces la sangre es (+)

GRUPO SANGUÍNEO Y TIPIFICACIÓN DEL RH

• ¿Para qué nos sirve hacer las dos pruebas?• Así podemos comparar resultados y ver qué

método es de nuestro mayor agrado• ¿Cuáles son unos de los usos que tienen estas

pruebas?• Nos ayudan a saber qué tipo de sangre se

requiere para una transfusión o un transplante• En el caso de embarazadas nos ayudan para

saber si es necesario sensibilizar a la madre para evitar una enfermedad hemolítica del recién nacido.

GRUPO SANGUÍNEO Y TIPIFICACIÓN DEL RH

+COOMBS DIRECTO

La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos anti-D que se han unidos a los antigenos D fijado a la superficie de los glóbulos rojos.

La presencia de estos anticuerpos media la destruccion de los glóbulos rojos afectados.

Esta prueba algunas veces se lleva a cabo para diagnosticar la causa de anemia o ictericia.

La pureba de Coombs indirecto utliza suero en lugar de sangre.

+COOMBS DIRECTO

¿Qué se necesita?

Sangre en la que se realizará la prueba

Antiséptico, banda elástica, aguja, algodón

Tubo lila (EDTA)

Pipeta de Pasteur

Solución salina temperatura ambiente (piseta) y a 37°

2 tubos de ensaye

Cinta adhesiva, plumón

Centrífuga

Suero de Coombs

+COOMBS DIRECTO

¿Cómo realizarla?

1

•Aspirar sangre con Pipeta de Pasteur del tubo lila (EDTA)

•Colocar de 3-4 gotas con la misma pipeta en un tubo de ensaye (marcado con cinta y que diga Solución Rojo Tomate)

•Ver paso 3 de la prueba de grupo sanguíneo. Solo realizar UNA solución rojo tomate para ambas pruebas

2

•Al tubo de ensaye se le agrega solución salina a temperatura ambiente hasta la mitad (esto se realiza con la Piseta)

•Revolver con Pipeta de arriba abajo para obtener la solución Rojo Tomate

•Ver paso 3 de la prueba de grupo sanguíneo. Solo realizar UNA solución rojo tomate para ambas pruebas

3

•Al otro tubo de ensaye (marcado como CD # equipo) agregar 4 gotas de solución rojo tomate

•Agregar a este mismo tubo Solución Salina Caliente (37°C)

+COOMBS DIRECTO

¿Cómo realizarla?

4

•Centrifugar 1 minuto a 1500 rpm

•Decantar•Resuspe

nder

5

•Agregar solución salina caliente hasta la mitad del tubo de ensayo (Esto es el Segundo Lavado)

6

•Repetir el paso 4 (centrifugar, decantar y resuspender)

7

•Se realiza el tercer lavado agregando de nuevo solución salina caliente hasta la mitad del tubo

8

•Repetir paso 4 (centrifugar, decantar, y resuspender)

+COOMBS DIRECTO

NOTA: Si la sangre no es proporcionada, es importante saber cómo obtenerla. Generalmente la sangre se obtiene de una vena y de la parte interior del codo (en niños se realiza con una lanceta en

manos sobretodo) Limpiar el sitio con un antiséptico Envolver el brazo con la banda elástica Introducir aguja en la vena y recoger la sangre en el tubo lila Cubrir el sitio de punción.

9•Agrega

r una gota de suero de Cooms

10•Centrif

ugar 1 minuto a 1500 rpm

11

•Tratar de resuspender

•Observar si existe aglutinación o no

+COOMBS DIRECTO

¿Cómo interpretarla? Con esta prueba se busca detectar anticuerpos adheridos a la superficie

de los glóbulos rojos. Lo normal es que no se observe aglutinación (agrupación de células), es

decir que no existan anticuerpos para eritrocitos Resultados anormales pueden indicar:

Anemia hemolítica autoinmunitaria Anemia hemolítica inducida por fármacos Eritoblastosis fetal Sífilis Lupus eritematoso sistémico Reacción a Transfusión Entre otras.

+

PRUEBA DE COOMBS

INDIRECTA

+OBJETIVO

Detectar la presencia en suero, de

anticuerpos circulantes que se puedan

fijar a la membrana de los eritrocitos.

+FUNDAMENTO

La prueba de la antiglobulina o prueba

de Coombs indirecta (in vitro), permite

la detección e identificación de

globulinas ligadas inmunológicamente a

los hematíes.La adición del reactivo antiglobulina a

los mismos ocasionará su aglutinación.

+

INTRODUCCIÓN

Cuando la Prueba de Antiglobulina se emplea para detectar anticuerpos en el suero por sensibilización de los eritrocitos in vitro, se conoce como prueba indirecta de antiglobulinas o de Coombs (PCI).

La prueba indirecta de antiglobulina o Coombs indirecto pone de manifiesto la sensibilización de los hematíes que se ha producido in vitro con diversos fines: pruebas cruzadas pretransfusionales, investigación de anticuerpos antieritrocitarios en un suero problema, determinación del fenotipo eritrocitario mediante sueros específicos.

 

Detecta los anticuerpos o los componentes del complemento fijados in vitro a los hematíes durante un tiempo de incubación en el laboratorio.

El reactivo antiglobulina que se utiliza básicamente en todas las aplicaciones indicadas es un suero poliespecífico que contiene principalmente anti-IgG y anti-componente C3d del complemento.

¿QUÉ NECESITO?

MATERIAL• 1.- TUBOS DE

ENSAYE• 2.- PIPETA PASTEUR• 3.- GRADILLA

EQUIPO• 1.- CENTRIFUGA• 2.- INCUBADORA

REACTIVO• 1.- SUERO DE

COOMBS• 2.- SOLUCION

SALINA

MUESTRA BIOLOGICA• 1.- SUERO SERICO

¿CÓMO LO VOY A HACER?

PRIMER

PASO

• Se tomara una muestra de sangre venosa al paciente y se centrifugara para obtener el paquete globular y el suero de la sangre.

SEGUNDO PASO

• Prepare una suspensión al 2-5 % con la mezcla de hematíes O y en el caso del Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para preparar la suspensión.

TERCER PASO

• En un tubo debidamente rotulado añada dos gotas del suero y dos gotas de la suspensión y mezcle bien.

CUARTO PASO

• Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y añada en él dos gotas de la suspensión de hematíes O y dos de suero hemoclasificador anti-D y mezcle bien. Incube ambos tubos en un Baño de María a 37ºC por 30 minutos.

QUINTO PASO

• Lave tres veces con solución salina escurriendo totalmente el sobrenadante del último lavado. Añada dos gotas de suero de Coombs poli-específico a cada tubo. Centrifugue 1minuto a 1000 rpm.

POSIBLES RESULTADOS Prueba de Coombs (indirecta) Positiva: El botón de glóbulos rojos no se disuelve.

 

Prueba de Coombs (indirecta) Negativa: El botón de glóbulos rojos se disuelve.