Practica 2 Microscopio y Tecnicas Para Realizar Preparaciones Microscopic As

5/10/2018 Practica 2 Microscopio y Tecnicas Para Realizar Preparaciones Microscopic A...

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PRACTICA No.2MICROSCOPIO Y TECNICAS PARA HACER PREPARACIONES MICROSCOPICAS

!. INTRODUCCION.La biologia es una ciencia netamente experimental, la queha avanzado gracias a la

. implernentacion tecnolcqica, el exito de su estudio depende de varios factores talescomo la observacion, el ernpleo de instrumentos y tecnicas especiales; para 10 cual esnecesario apoyar las explicaciones teoricascon practices de laboratorio; en donde cadapersona puede realizar ~lUS propias observaciones e investigaciones y de esta formaIlegar a sacar conclusiones.Los seres vivos presentan variedad en tamafio, forma, estructura, tunoion, etc. Conrelacion al tarnario este varia, el ojo humano logra identificar objetos hasta de 200rnicras, por 10 que se hace necesario recurrir a instrurnentos optlcos que faciliten 18observaci6n de objetos de menor tamano, este instrumento es el microscopio, queconsisteen juegosde lentes que agrandan la imagen.AI principio, el rnicroscopio surqio como una lente que agranda la imagen (!upa), 10 quedio origen al microscopio optico compuesto; queconsta de juego de lentes (parteoptica), sostenida por estucturas metalicas (parte mecanica).Para observar los objetos a traves del rnicroscopio optico cornpuesto.ves necesariocolocarlos sobre una lam nilla de vidrio (Porta objetos) y qeneralrnente se Ie coloca otralaminilla de vidrio mas delgada (Cubre objetos); en esta forma S8 obtiene la preparacionmicrnsc6pica; la que puedo durar poco tiernpo (preparacion temporal), puade serguardada (preparacion permanente), 10 que nos da la clasificaci6n de preparaciones d iSacuerdo a su duracion.En esta practica sedara-i Ips lineamientos generales para el uso del microscopio, asicomo para hacer preparaciones microscopicas y efectuar el reporte de laboratorioII. OBJETIVOS,AI finalizar la practica, el estudiante sera capaz de:./ Identificar las partes 6pticas y rneeanicas del microscopio.,,/ Realizar preparaciones rnicroscopicas temporales.v/ Elaborar adecuadamente sus reportes de iaboratorio. . , .y" Reconocer el uso adecuado de cada una de las partes del microscooro OptlCOcompuesto



I.. Microscopic optico compuesto Frascos gotero con agua destilada.. Porta Objetos y Cubre Objetos.. Papel impreso (periodico) conletra pequeria".. Tijeras yhoja de afeitar nueva*.. Papel y lapiz" l.apiz de colores".. Lana* 0 algod6n de colores*.. Corcho"., Papellimpia lentes".. Polen de flor *.. Polvillo de ala de mariposa*

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III. M.ATERIALES:

EI material marcado conasterisco (") 10aportan los estudiantesIV. PROCEDlMIf:NTO.'1 . MICROSCOPIO PARTES Y FUNCION: Se explicaran las partes opticas y rnecanicasdel microscopicMicroscopio Optico Compuesto

PARTE OPTICA

OBJETIVOS.Son los elementos mas importantes del microscopio. Estan formados par la reunion devarias lentes para corregir las aberraciones. Deben tratarse con mucho cuidado, puescualquier golpe puede variar la posiciori de las lentes y averiarlas. Se atornillan a laparte inferior del tuba 0 a! revolver portaobjetivos.La lente inferior del objetivo denominase lente frontal. De ella depende prineipalmentela mayor 0 menor ampliaci6n. Es siempre plano-convexa, de foco muy corto y dediametro tanto menor cuanto mayor sea el aumento.Dotras de esta lente hay otras, que son las que eorrigenlas aberraciones cromaticas Yestericas



III OBJETIVOS EN SECO: :30n los que seemplean mas corrientemente. Entre la lentefrontal y el cubreobjetos solo hay aire. A este grupo .oertenecen los objetivos demenores aumentos. Las lentes frontales tienen de 3 a 10 milfmetros de diametroPoseen gran profundidad de foco, 10cual permite observar diferentes pianos paralelos

delobjeto.OBJETIVOS DE INMERSION: Se llama as! a aquellos en los cuales, para 18observaci6n, deben interponerse entre la lente frontal y la preparaci6n un liquido que,por su indice de refraccio.i apropiado, permita una mayor lurninostdad. Este Ifquidopuede ser agua, aceite, monobromuro de naftaleno, etc. Son, estosobjetivos, de granaumento y de gran poder definidor. Se emplean en Bacteriologfa y ParasitologiaRequieren gran lurninosidad y empleo de condensador.

OBJETIVOS APOCROMAriCOS: Todos los objetivos, secas 0 de inmersion,estan acromatizados solo para dos rayos del espectro, el rojo y el azul. Son los!lamados cromaticos, pero si conseguimos corregir este defecto para tres rayos, seelimina casi completarnente el lIamado espectro secundario, y tenemos los objetivosapocrornaticos.OCULARES.Los forman dos lentes separadas por un diafragma, y van montados en la extremidadsuperror del tube. La lente superior se llama lente ocular; la inferior, lente de campo.Hay dos.Jipos de oculares 10$positiyos 0 de Ramsden, gue tienen dos lentes planQ-~Qnvexas, y cuyas convexidades se .oponen una a la otra y .105 negativos, 0 d_.Hu hens, que se Ilamar t . , de _cpco ensaeiQn _ or t_ene~com ensadas lasdesigua a es del espectnJ y en los Lie las CLirvaturas de las I'l;mtl3sse dill, en alpbjeto. an 0 e microscopic simple como el compuesto pueden ser binoculares; estosdan mejor calidad a la imagen y mas cornoda vision. EI tubo se bifurca, con 10:3correspondientes prisrnas de reflexi6n total, y terrnina en dos oculares iquales.

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DIAGFRAGMA Y CONDEt--ISADORES:EI diafragma va montado bajo la platina. Es de sistema iris, y permite, par media deuna palanca, obtener a voiuntad cones luminosos de distinto tarnario y,mediantecondensadores, conos lurr inosos muy grandes. Los condensadores constan de unsistema de ientes de gran abertura sujetos a una rnontura y colocados entre la platina yel espejo, pueden subirse y bajarse a voluntad y tienen un diafragma unido al conjunto.

PARTES MECANICAS:Esta compuesta por el pie, la platina y el tubo



EL PIE. Es una pieza maciza y pesada, para asegurar la estabilidad del aparato yservir desoporte a sus demas partes. Suele estar provista de charnela, que per-mite lainclinacion de la parte superior.LA PLATINA: Es una pieza metalica, redonda 0 cuadrada, donde se colocan las

preparaeiones; tiene en el centro una abertura circular poria que pasaran los rayosluminosos procedentes del sistema de iluminaci6n. EI pie se prolonga por encima dela platina, en arco mas 0 menos curve. La parte superior de este arco es la quesostiene el tubo y su mecanisme de traslaci6n vertical. Esta tiene suma importancia,pues permite enfocar el objetivo mediante dos movimientos uno rapido, gracias a unacremallera, y otro lento, con un tornillo rnicrornetrico.CARRO: En los microscopies corrientes la platina puede ser fija.o estar endosada aun carro can dos tornillos y cremallera que permitan dos mcvimie'ntos de translacion,para centrarla, y tamblen, si los tornillos estan graduados, para medir susdesplazamientos.UNAS 0 GANCHOS: La preparacion se sujeta, en las platinas fijas, con dospalanquitas rnoviles; y en las platinas de carro, por un reborde , en forma de escuadra ypestillo, que Ie impide cualquier movimiento imprevisto.EL TUBO: 'En el esta instalado el sistema optico. Esta constituido por dos tubos 0cuerpos Uno de ellos, externo, en el que se encuentran la cremallera y el ocular, Y ,otro, interne, adosado al anterior, donde esta el objetivo. Ena parte superior hay una;Jivision milimetrica (ue permite modificar Ie distancia entre obetivo y ocular. Soncorrientes en los aparatos modernos los binoeulares, que faci. itan la vision con los osojos, y los revolveres portaobjetivos, con los cuales se pueden cambiar los objetivosinstantaneamente, sin desenfocar la preparacion,

TORNILLOS MACROMETRICO Y MICROMETRICOS: Son tornillos que permite elmovimiento 0 desplazamiento del preparado, el rnacrometrico permite deplazamientosgrandes y 61 micrometrico desjJlazamiento fino que ayudan a darle nitidez a la imagen2 _ ENfOQUE DEL MICROSCOPIO'I. Baje completamente la platina del microscopic.2 Hacienda usa del mecanisme del revolver, coloque Frente a Ia preparacion elobjetivode menor aumento (seeo debil 10 X).3. Colaque la preparacion microscopica sobre la platina suieta ioola can las pinzas delcarro y centre la preparaoion haciendo uso de los tornillos del carro4 Regule la luz mediante el uso del mecanismo del diafragma5. Haciendo uso del tornillo macrometrico suba al maximo 1 8 preparaci6n hasta queencuentre tope sin observar par los oculares.

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6. Observando a traves del ocular, accioneellornillo macrometrica hasta qUe visualicela imagen en el camoo microsc6pico. .7. Una vez. enfacad" la imagen, afrne el emoque microscopico, hacienDa Usa del tornilloicrometrico.8. Si desea mayor detalle, cambie de aumento rotando el mecanismo del revolver a unobjetivo que Ie proporeione el aumento deseado, corrigiendo el enfoque de imagenmoviendo el tornillo rnicrornetrico, y graduando la intensidad de luz con el diafragma9. Despues de haber realizado la observacion, se limpian las lentes con papel limpialentes, se coloca el objetivo de menor aumento en posiCion de ~nfoque, se baja I.platina, se desconElcta y se tapa. EI microscopioqueda I;sto;:)ara la pr6ximaobservaci6n:

PARA OBSERVAR EN UN MICROSCOPIO CORRECTAMENTE: se debe poner Iernano derecha en los tornillos que mueven la platina y la mano izquier'da en los torrullosmacro y/o micrornetricos se deben graduar los oculares a ndestros ojos si elmicroscopio es binocular, si es monocular la observaci6n se debe hacer con los dosojos abiertos.3. PROPIEDADES ElASICAS DEL MICROSCOPIO,./ Poder de ampliacion: Propiedad que aumenta el tamano de la imagen delobjeto, 10 cual depende de la calidad de los lentes del objeto y (jel ocular. Tanto elocular como el objetivo poseen un poder de aumento determinado iEI aumento total dela imagen observada equivale a muitipiicar el aumento del lente del ocular par elaumento del lente del objetivo .

.,/ Poder de penetracion 0profundidad del foco: Es la propiedad que tiene elmicroscopio de permitir observar varios pianos del preparadocon Urla rnisma posicionde enfoque . .

.,/ Poder de definicion. Es Ia capacidad del microscopio d.8 permitir observarimagenes claras de contornos nftidos tanto en el centro como en la!periferia del campovisual.

-./ Poder de reso/ uci6n. Capacidad que ofrece el microscopio de permitirdistinguir2 puntos adyacentes 0 pr6ximos, cuya distancia entre sf es tan pequena que los haceparecer. como uno solo ante el ojo human?Poder de resoluci6n d31 ojo humano:- 100!JPoder de resoluci6n rricroscopio compuesto; 0,2 fJPoder de resoluci6n del microscopio electr6nicoO:0.001 ! J,./ Apertura mimE~rica(A.N) . Es Ia capacidad que. tiene (')1 objetivo de reclbir elcono anular luminosa~ue pasa a traves de la muestrq,procedentede la fuente de luz.

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La apertura numerica depende directamente del indice de rofraccion del medio en quese propaga la luz (aqua, aire, vidrio, aceite de inmersi6n), pues mientras mayor sea elindice de refracci6n, mayor es el pader de resolucion../ Ajuste de Dioptrias, en el ocular izquierdo se encuentra un anillo, que sirvepara ajustar la vision Binocular. El proceso es como sique: se mira con el ojo derecho,por el ocular respectivo (izquierdo), manteniendo cubierto el ocular derecho, con unahoja de papel 0 algo similar. Se enfoca entonces can el tornillo rrucrornetrico, !o mejorposible, con el OJO derecho, y se procede a ajustar el izquerdo asi, se tapa el ocularderecho y se enfoca con el ojo izquierdo, utilizando esta vez el anillo de dioptrias, y notornillo micrometrico, .

I 3.1 SISTEMA DE ILUMINACION.Se.encuentra situado bajo la platina y tiene lamisi6n de iluminar los: objetivos por mediode luz transmitida,8 causa de que la mayoria de las observaciones se realizan partransparencia. Consta de un espejo y de un diafragma. EI Espejo, redondo y adaptablea las mas variadas posiciones, tiene una superficie plana y otra concava, que puedenintercambiarse a voluntad. Es espejo plano, para objetivos de escaso aumento, y elc6ncavo, para grandes aumentos. La fuente luminosa puede ser natural 0 artificiaL.Esta ultima es id6nea cuando proviene de una tarnpara especial-para estos aparatos.

3.2 REG LAS GENERALES DE OBSERVACION

ILUMINACION. Puede utilizarse luz natural 0 artificial electrica: En general bastacualquier lampara patente, de filamento y esmerilada Si no se dispone de larnparaesmeriiada, se intercalara en el sitio correspondiente un vidrio deslustrado 0 azui, 0 unsencillo matraz Ilenode agua con sulfato de cobre y unas getas de, amon faco que filtrelos rayos amarillos Si se utiliza luz natural, no debe ser nurca la directa del sol, sin luzdifusa; una excesiva iluminaci6n en lamesa de trabajo perturba la observacl6nENFOQUE. Es regia general enfocar la preparaci6n de abajo arriba: se aproxima elobjeUvo a la preparaci6n de modo que la distancia entre arnbosl sea menor que ladistancia focal. Se mira por el ocular y se hace retrocederel tubo lentarnente medianteel tornillo rapido, hasta conseguir ver !a preparaci6n mas d' menos enfocadaSeguidamente, lograse el enfoque exacto con ei tornillo micrometricoEs conveniente efectuar la observaci6n monocular con los dos ojos abiertos, peromirando solo con uno. Es facil de conseguir cuanto rnenor ilurninada este la mesa EIobjetivo de inmersi6n requiere mas cuidado: depositada ya la gota de Ifquido sabre lapreparaci6n, bajase el objetivo hasta que la toque. Paraentocar Sf; utilize 81 tornillomicrornetrico, pero sin perder contacto con lagota y sin tocarlapreparaci6n.

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1L1MPIEZA. Una vez terrninada la observacion debe Iimpiarse el objetivo con papellimpia lentes, empapado de xilol 0 de toluene.4. CUIDADO' DEL MICROSCOPIO.EI microscopio es un instrurnento costoso.Debemos darle el mejor cui dado posible. Siqa siempre estas instrucciones generalescuando 10 utilice./ Transporte el microscopio sujetandolo con las dos manos: una por debajo de labase y la otra en el brazoy Col6quelo alejado del borde de la mesa. Si hay una lampara unida 811microscopio, tenga cuidado con los cables. Cuandotrabaje con el mlcroscopio quite dela mesa de laboratorio aquellas cosas que no sean absolutamente necesarias.-/ Las lentes del microscopic cuestan casi tanto como todas las de mas partesjuntas. NUNCA LAS LlMPIE CONOTRA COSAQUE NOSEA PAPEL LlMPIALENTE,L.; Cuando termine su trabajo guarde el microscopio,. NO SIN DESMONTAR LASPREPARACIONES MICRO:5COPICAS QUE HA OBSERVADOY COLOQUE EL OBJETIVO DEMENOR AUMENTO EN LA POSICION DE ENFOQUE, CON LA PLATINA EN SU POSICION MASBAJA.

5. PREPARACIONES IVlICROSCOPICAS TEMPORALES.EI profesor explicara la tecnica correcta de hacer las preparaciones rnicroscopicastemporales, con los rnateriales que 6 1 estudiante aporteilizando agua destilada comomedic de montaje.

1. PREPARACION DE CORCHO:Haga varies cortes delgadosdecorcho utilizando lahoja de afeitar nueva V escoja el mas fino. .En un porta objetos coloque una gota de agua destilada y coloque. en 81 el pedazo decorcho seleccionado, 'y coloquele un cubre objetos, .procurando que no 1 0 quedeburbujas de aire. Proceda a SLI observaei6n mierose6piea. Haga su esquemacorrespondjente utilizando los objetivos seco debil y seco tuerte.2. LETRA IMPRESA:Busqueen 0 5 1 peri6dico la letra "e" mas pequena que eneuentre,cortela V eol6quela en un porta objetos que tenga una gota de agua destilada, cubralacon el cubre objetos y cbservela en el.microscopic usando el objetivo seco debil y secofuerte yhgQ? susesquernas.Haga los dibujos comparatives de la imagen que observa con sus ojos y de la imagenvista a traves del microscopic

a. A simple vista b. Con menor aumenlo



(,Oue diferencias encuentra entre la observaci6n microsc6pica y la observaci6n a I "simple vista?(,Cual es la posicion de laletra observada en el microscopic? IUna vez terminado este ejercicio, enfoque nuevamente la letra . con el objetivo demenor aurnento, y observando a traves del microscopic, mueva el carro hacia delante.(,En que direcci6n se mueve la tetra?Ahara mueva el carro 0 la lamina portaobjetos hacia atras (,Hacia: donde se rnueve laimagen'?LComo es el desplazamiento de la imagen con relaci6n al movimiento de la larntnaportaobjetos?

3. Ff8RA DE LANA 0 ALGOOONColoca varias fibras de algod6n 0 lana de diferentes colores sobre un portaobjetos.Encontrara en el sitio varias de estas superpuestas, cualquiera puede visualizarsecambiando el nivel del enfoque. Entonces algunas SE l veran borrosas. Determine losniveles de las fibras coloreadas cambiando el enfoque.4. GRANOS DE POLEN

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3. 2.,Que retacion exists entre el poder de aumento de los objetivos y e\ area decampo visual?4. Explique porque en la medida en que aumenta el objetivo disminuye el nurnero dealas de mariposa y ;Jranos de polen observados

VI. PREGUNTAS DE CONSULTA.1. Cuales puedon ser las causas de danos de los lentes del m'croscopio?2. Consulte los tipos de microscopios y sus caracterfsticas principales3. La imagen dada por el microscopic 2.,8S real 0 virtual? Exp!ique por que4 2.,Porquela image l aparece invertida en el microscopio compuesto?

VII. BIBLlOGRAFIA.Avers J., Charlotte. Biologfa Celular. 1a. Edic. Mexico, Iberoamericana, 1989CURTIS, Helena. BARJ'mS, N. SUL Et At Biologia Mexico: 2000. 1490 PAudesirk T Audesir T. Biologfa. 4ta. Edic. Mexico, Prentice Hall. :1996.Gerald Karp. Bioloqia Celular. 3era.. Edic, Mexico, MACGRAWHILL. 1998.


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HOJA D E R EPO RTE

A) Preparacioll,---~~ ~ _

Aumento empleado ~_~ X ~~~ __= ~~~_(Ocular) (Objetivo) TOTAL

Descripcion _

B) Preparacionj, __ .----~-~-------

Aumento emp leado . X _(Ocular) (Objctivo) TOTAL

6n__ .._~ ._. ~___. .._.~._._. . ._..___._

C) .Preparacion _

Aumentoempleado X ~. ~=; ~ _(Ocular) (Objetivo) TOTAL

Descripcion ---------.--~-----_-----

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