LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA III

PRACTICA 6 IDENTIFICACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA.

6.1 OBJETIVO

Conocer la técnica de separación en capa fina y aplicarla para separar los pigmentos de un vegetal.

6.2 INFORMACIÓN GENERAL

La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente versátil que presenta distintas variantes. En toda separación cromatografía hay dos fases (solida, liquida o gas) una móvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto intimo. La muestra se introduce en la fase móvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la móvil. Los componentes de la mezcla a separar se invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separación. Si un componente esta la mayor parte del tiempo en la fase movil el producto se mueve rápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho mas lenta. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa.

La fase móvil será un disolvente apolar (mezcla de éter de petróleo/acetona/benceno en proporción 85/10/5). La fase estacionaria, de naturaleza polar, será el agua adsorbida en el papel de celulosa utilizado como soporte.La fase móvil ascenderá por el papel sin mezclarse con el agua, al tiempo que los pigmentos se irán separando en función de su polaridad. Los pigmentos más polares se retendrán más en la fase estacionaria, mientras que los más apolares avanzarán más rápido junto con la fase móvil. La movilidad de cada compuesto respecto al frente del disolvente tiene un valor característico, en unas condiciones experimentales determinadas, que se conoce como coeficiente o factor de reparto (Rf).

Rf = Xp/XdXp= distancia alcanzada por el pigmentoXd= distancia alcanzada por el disolvente

Método1. Extracción: en el papel de celulosa se dibujan 2 líneas con lápiz. Una a 2 cm de uno de los extremos y otra a 1 cm del otro extremo.2. Se Cortar una hoja de espinaca en tiras estrechas. Colocar un trozo de hoja y machacarla sobre una superficie plana con las pinzas. Retirar los restos de hoja. Colocar una mancha sobre la línea

situada a 2 cm del papel de celulosa, repetir el proceso, hasta tener una mancha oscura de pigmentos en el papel.

6.3. MATERIALES Y REACTIVOS

Reactivos

Papel de silicagel G60100 ml éter de petróleo/acetona/benceno en proporción 85/10/5.3 vasos de precipitado de 100 ml1 plancha de calentamientoTubos capilares

6.4 PROCEDIMIENTO

Se concentra la solución obtenida de la extracción de pigmentos anterior por evaporación a baño maria hasta obtener un mililitro. Después se enfría y tapa la muestra para su posterior aplicación sobre la placa.

Entonces se divide la placa en 8 columnas con la ayuda de una punta de lápiz y cada una de ellas se aplica (parte inferior de la placa) una poción de cada pigmento, mediante un capilar procurando que cada mancha no forme un circulo de mas de 5 mm de diámetro. Además se aconseja que la muestra problema se aplique en la columna central.

Se deja evaporar el solvente de la muestra sobre la placa y se procede a efectuar el corrimiento, colocando la placa dentro de una cámara de desarrollo previamente saturada con la solución eluyente. La placa se conserva dentro hasta que el líquido llegue a la línea límite de corrimiento (marcada con lápiz desde el principio).

Entonces se retira la placa de la cámara y se deja que se escurra con cuidado. Una vez seca la placa se observa el número de pigmentos que se presenta en la muestra problema y se mide la distancia recorrida por el líquido de desarrollo y la recorrida por cada mancha coloreada, se toma como referencia el lugar de aplicación de cada mancha. Hay que calcular el Rf correspondiente a cada mancha.

6.5 CALCULOS Y RESULTADOS

Entregar un dibujo que muestre los resultados obtenidos, el número y tipo de cada colorante presente en la gelatina y el Rf de cada colorante estándar y de los colorantes que presente la muestra problema.

Investigar:

La formula química y los usos comunes de los siguientes pigmentos vegetales. Calcular el RF.