UNIDAD V- PRACTICAS DE LABORATORIO U.D. BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

PRACTICA DE LA SEMANA RECONOCIMIENTO Y COMUNICACIÓN INTERCELULAR INTRODUCCION. A continuación se le presenta una Hoja de Trabajo y un Crucigrama que

deberá de resolver, aplicando los conocimientos adquiridos. Discuta en clase los resultados obtenidos.

HOJA DE TRABAJO 1. ¿Pueden los receptores intracelulares interactuar en el plasmalema con las

moléculas hormonales? ¿Por qué? 2. ¿Cuál es la importancia del plasmalema y el citoplasma en el

reconocimiento y comunicación intercelular? 3. ¿Qué importancia celular tienen el reconocimiento y comunicación

intercelular? 4. ¿Qué caracteriza a una célula blanco para su hormona específica y qué

participación tiene en la comunicación intercelular? 5. ¿Qué significa, cómo ocurre y qué utilidad celular tiene la acción hormonal? 6. ¿Es la señalización química una característica del reconocimiento y

comunicación intercelular? 7. Si agregásemos a la célula muscular esquelética AMPc ó Ca++ a nivel

citoplasmática ¿sería posible imitar el efecto de la epinefrina? Justifique su respuesta.

8. ¿Es generalmente el efecto de las hormonas esteroideas más lenta en

manifestarse en sus células objetivo que el efecto de la hormona epinefrina en las suyas?. Justifique su respuesta.

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9. Describir un proceso que ejemplifique el fenómeno de amplificación de la interacción ligando-receptor.

10. ¿Por cuál mecanismo la epinefrina favorece el alza de la concentración de

glucosa en el citosol? Complete su reporte de laboratorio de HOJA DE TRABAJO. CRUCIGRAMA

INSTRUCCIONES Auxiliándose de todos los textos a su alcance, resuelva el crucigrama de la

siguiente manera: Las casillas 1 y 8 se responden con un sustantivo propio que está

compuesto por dos palabras.

Todas las demás definiciones deberá responderlas con una sola palabra.

Horizontales: 1  y  8)    Enzima  membranal  que  cataliza  la  conversión  de  ATP  en  3’5’  AMPc. 15) Primer mensajero. 17) Segundo mensajero, cuya síntesis es catalizada por la enzima Guanilato

Ciclasa. 18) Catecolamina, Hormona, neurotransmisor que actúa como primer mensajero. 19) Unión comunicante. 20) Comunicación intercelular que se realiza por medio de substancias.

23) Receptores de ligandos liposolubles que se localizan entre el plasmalema y membranas nucleares. (Nota: También los hay en el núcleo).

26) Señal que inicia una respuesta celular. 28) Sinónimo de estímulos químicos. 29) Catión divalente, considerado como un segundo mensajero.

31) Estructura a la cual se une el primer mensajero específicamente y que permite  que  la  célula  que  lo  posea  sea  llamada  “Diana  u  objetivo”  de  dicho  ligando.

32) Sinónimo de célula Diana u objetivo. Verticales: 7) Afín al H20

10) Enzima que cataliza la modificación covalente de compuestos químicos por fosforilación.

14) Cataliza su degradación la AMPc-Fosfodiesterasa. 16) Primer Mensajero, secretado al medio extracelular, que puede viajar grandes

distancias por medio del líquido extracelular, podría poseer variado número y tipos de células blanco.

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21) Receptores de ligandos hidrolubles, localizados en el plasmalema. 22) Afín a los lípidos

24) Estructura celular que compartimentaliza. Está compuesta por dos capas de fosfolípidos anfipáticos y proteínas también anfipáticos. Componente ubicuo del mundo celular.

25) Espacio de lugar o de tiempo que media entre dos cosas. 27) Compuesto Químico que lleva información extra e intracelularmente; se le

clasifica en primario y secundario. 30) Coenzima, nucleótido, intermediario energético universal; posee en su

estructura dos enlaces macroérgicos; donador de grupos fosforilo. CRUCIGRAMA SEMANA CRUCIGRAMA-COMUNICACIÓN Y RECONOCIMIENTO INTERCELULAR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32

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Nombre del estudiante:____________________Carné____________ Profesor:___________________ Día:_____________________ HOJA DE TRABAJO DE BIOTECNOLOGÍA LA BIOTECNOLOGÍA ha ido favoreciendo a las ciencias de la Salud por medio de descubrimientos de métodos que ayudan a producir medicamentos y a diagnosticar enfermedades con mayor precisión. A) La Biotecnología del ADN recombinante contiene como piedra angular el uso de las enzimas de restricción, que cortan el ADN por secuencias de reconocimiento específicas.

1. Indique cuales son las funciones de Vectores y las células huèsped. 2. Qué son las secuencias palindrómicas 3. Que medicamentos actualmente utiliza la Tecnología del ADN recombianante para beneficio de

los humanos, mencione tres ejemplos. 4. Cuál es la utilidad del plásmido? 5. Por qué se utilizan a las bacterias como vectores y no la célula humana en la tecnología del

ADN recombinante? B) PCR Reacción en Cadena de la polimerasa. En 1993 Kary Mullis recibió el premio nobel por el desarrollo de la técnica del PCR. Este método permite la clonación rápida de segmentos de ADN sin necesidad de células ó vectores. Utiliza un equipo llamado termociclador. Esta metodología está siendo utilizada para la detección de enfermedades en el humano en La facultad de Ciencias Médicas de la Universidad de San Carlos desde 2005.

6. Indique para que sirven los cebadores ó primers? 7. Para qué sirve la polimerasa termoresistente ? 8. Muchos programas de PCR utilizan 3 distintas temperaturas, que ocurre en cada distinta

temperatura? 9. Investigue que enfermedades pueden ser diagnosticadas por medio del PCR (por lo menos 5)

C) La terapia Génica es utilizada para beneficio del humano implica la transferencia de una copia de gen NORMAL en un tejido diana (blanco); idealmente al ingresar e integrarse el gen normal al tejido defectuoso, este deberá activarse y producir cambios en beneficio del humano enfermo.

10. Defina qué es terapia génica somática, terapia de línea germinal y terapia génica de incremento.

11. Por qué hay preocupación ETICA con el uso de Terapia génica génica de incremento? d) Microordenaciones de ADN ó conocidos como MIcroarray DNA Son utilizadas para el rastreo ó diagnóstico más rápidos y específico de múltiples genes anómalos en el ser humano.

12. Indique en que consiste esta técnica moderna en la medicina

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D) SECUENCIA DE ADN y Banco de genes De los glóbulos blancos (linfocitos) se extrajo ADN y se realizó una prueba de PCR la cual dio un producto….  Este  producto  se  envía  para  secuenciar el ADN y el laboratorio reporta la siguiente secuencia de bases siguiente: SECUENCIA REPORTADA DEL ADN ENVIADO: ATGGAGACTCTTTGCCAACGTTTAAATGTGTGTCAGGACAAAATACTAACACATTATGAAAATGATAGTA CAGACCTACGTGACCATATAGACTATTGGAAACAAATGCGCCTAGAATGTGCTATTTATTACAAGGCCAG AGAAATGGGATTTAAACATATTAACCACCAGGTGGTGCCAGCACTGGCTGTATCAGAGAATAAAGCATTA CAAGCAATTGAACTGTAACTAACGTTAGAAACAATATATAACTCACAATATAGTAATGAAAAGTGGACAT TACAAGATGTTAGCCTAGAAGTGTATTTAACTGCACCAACAGGATGTATAAAAAAACATGGATATACAGT GGAAGTGCAGTTTGATGGAGACATAAGCAATACAATGCATTATACAAACTGGAAATATATATATATTTGT GAAGAAACATCAGTAACTGTGGTAGAGGGTCAAGTTGACTATTATGGTTTATATTATGTTCATGAAGGAA TACAAACATATTTTGTGCAGTTTAAAGATGATGCAGAAAAATATAGTAAAAATAAAGTATGGGAAGTTCA TGCGGGTGGTCAGGTAATATTATGTCCTACATCTGTGTTTAGCAGCGACGAAGTATCCTCTGCTGAAATT AATAGGCAGCACTTGGCCAACCACTCCGCCGCGACCCATACCAAAACCGTCGCCTTGGGCACCAAAGAAA CACAGACGACTATCCAGCGACCAAGATCAGAGCCAGACACCGGAAACCCCTGCCACACCAACAAGTTGTT GCACAGAGACTCAGTGGACTGTGCTCCAATCCTCACTGCAGTTAACAGCTCACACAAAGGACGGATTAAC TGAAATAGTAACACTACACCCATAGTACATTTAAAAGGTGATGCTAATACTTTAAAATGTTTAAGATATA GATTTAAAAAGCATTGTAAATTGTATACGGCAGTGTCGTCCACATGGCATTGGACAGGACATAATGTAAA ACATAAAAGTGCAATTGTTACACTTACATATGATAGTGAATGTCAACGTGAACAATTTTTGTCTCAAGTG AAAATACCAAAAACTATTACAGTGTCTACTGGATTTATGTCTATATGA Para saber a que corresponde esta secuencia se le aconseja realizar lo siguiente:

1. en su buscador de Internet de preferencia Google escriba BLAST presione  “enter”  

Mueva el cursor y presione enter en BLAST: Basic Local Alignment Search Tool y aparecerá la siguiente página

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Coloque el cursor en nucleotide blast y presione ENTER aparecerá la siguiente pantalla Copie y pegue la secuencia que se Le informo en la casilla más Grande a la izquierda

seleccione en la Opciones de la casilla Data Base “    Nucleotide  Collection  nr/nt  “ Escriba en la casilla Add Title Prueba 1 y presione ENTER Aparecerá finalmente la pantalla siguiente en donde se le indica a que corresponde la secuencia que consultó. Observe que se le hace comparación a una serie de banco de secuencia por lo regular se comparan las primeras 10. En este caso es la secuencia del HPV por sus siglas en inglés Virus del papiloma 16.

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continúe explorando las página hacia abajo y observará la base de datos

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Ejercicio A continuación se le darán diferentes secuencias reportadas por laboratorio donde se realizó la secuencia del producto de 3 PCR , realizadas en la Facultad de Ciencias Médicas . Si usted desea saber a que corresponde esta secuencia; deberá consultar en banco de genes vía Internet a que corresponde. Ejercicio 1- secuencia de ADN AGGACACCAAATGAAAGAATGCACAGAGAGACAGGCTAATTTTTTAGGGAAAATCTGGCCTTCCAACAAG GGGAGGCCAGGGAACTTTCTTCAGAACAGGCCAGAGCCAACAGCCCCACCAGCAGAGAGCTTCGGGTTCG GAGAAGAGATAGCCCCCTCCCCGAAGCAGGAGCCAAAGGAGAAGGAGCTATATCCCTTAGCCTCCCTCAG ATCACTCTTTGGCAACGACCCTTAGTCACAGTAAAAATAGGGGGACAGCTAATAGAAGCCCTATTAGATA CAGGAGCAGATGATACAGTATTAGAAGAGATAACTTTACCAGGAAAATGGAAACCAAAAATGATAGGGGG AATTGGAGGATTTATCAAAGTAAGACAATATGATCAGATACTTATAGAAATTTGTGGAAAAAGGGCCATA GGTACAGTATTAGTAGGACCTACACCTGTCAACATAATTGGACGAAATATGTTGACTCAAATTGGTTGTA CTTTAAACTTTCCAATTAGTCCTATTGAAACTGTACCAGTAAAATTAAAGCCAGGAATGGATGGTCCAAG GGTTAAACAATGGCCATTAACAGAAGAAAAAATAAAAGCGTTAACAGAAATTTGTAATGAAATGGAAAAG GAAGGAAAAATTTCAAAAATTGGGCCTGAAAATCCATACAACACTCCAATATTTGCTATAAAGAAAAAAG ACAGCACTAAATGGAGGAAATTGGTAGATTTCAGAGAACTCAATAAAAGAACTCAAGATTTCTGGGAGGT CCAATTAGGAATACCTCATCCCGCGGGATTAAAAAAGAAAAAATCAGTAACAGTACTAGATGTGGGGGAT GCATATTTTTCAGTTCCCTTAGATCCAGACTTTAGAAAGTATACTGCATTCACTATACCTAGTGTAAACA ATGAGATACCAGGGATTAGATATCAGTACAATGTGCTTCCACAGGGATGGAAAGGATCACCAGCAGTATT Ejercicio 2- Secuencia de ADN TCAACGGCTTGCCCGTCTCCGCCCGTAGGGGCCGAGAGATACTGCTCGGGCCGGCCGATGGAATGGTCTC TAAGGGGTGGAGGTTGCTGGCGTCCATCACGGCGTATGCCCAGCAGACAAGGGGCCTCCTAGGGTGCATA ATTACCAGCCTAACTGGCCGGGACAAAAACCAAGTGGAGGGTGAGGTCCAGATCGTGTCAACTGCTACCC AAACCTTTCTGGCAACATGCATCAATGGGGTATGCTGGACTGTCTACCACGGAGCCGGGACGAGGACCAT TGCATCACCCAAGGGCCCCGTCATCCAGATGTATACCAATGTGGACAAAGACCTCGTGGGCTGGCCTGCT CCTCAAGGTGCCCGCTCATTGACACCCTGCACCTGCGGCTCCTCGGACCTTTACCTGGTCACGAGGCATG CCGATGTCATTCCCGTGCGCCGGCGGGGTGATAGCAGGGGCAGCCTGCTTTCGCCCCGGCCCATTTCCTA CTTGAAAGGCTCCTCGGGGGGTCCGCTGTTGTGCCCCGCGGGACACGCCGTCGGCATATTCAAGGCCGCG Ejercicio 3- Secuencia de ADN TCTGTGGCAAGAGTTGTAAATACTGATGATTATGTGACTCGCACAAGCATATTTTATCATGCTGGCAGTT CTAGATTATTAACTGTTGGTAATCCATATTTTAGGGTTCCTGCAGGTGGTGGCAATAAGCAGGATATTCC TAAGGTTTCTGCATACCAATATAGAGTATTTCGGGTGCAGTTACCTGACCCAAATAAATTTGGTTTACCT GATAATAGTATTTATAATCCTGAAACACAACGTTTAGTGTGGGCCTGTGCTGGTGTGGAAATTGGCCGTG GTCAGCCTTTAGGTGTTGGCCTTAGTGGGCATCCATTTTATAATAAATTAGATGACACTGAAAGTTCCCA TGCCGCTACGTCTAATGTTTCTGAGGACGTTAGGGACAATGTGTCTGTAGATTATAAGCAGACACAGTTA TGTATTTTGGGCTGTGCCCCTGCTATTGGGGAACACTGGGCTAAAGGCACTGCTTGTAAATCGCGTCCTT TATCACAGGGCGATTGCCCCCCTTTAGAACTTAAAAACACAGTTTTGGAAGATGGTGATATGGTAGATAC Salmo 139;16 “Mi  embrión  vieron  tus ojos , y en tu libro estaban escritas todas aquellas cosas  que  fueron  luego  formadas,  sin  faltar  una  de  ellas”

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PRACTICA DE LA SEMANA de

Envejecimiento 1. Qué significado tiene el hecho de que cada especie posea una longevidad

característica? Dé algunos ejemplos: 2. Mencione los cambios celulares que han sido observados en células

cultivadas para la estudio del envejecimiento. 3. La capacidad replicativa de las células se encuentra disminuida en células

que envejecen in vitro; ¿es esta característica una causa o efecto del envejecimiento celular?

4. Defina que son radicales libres, como actúan y cuál es la principal molécula

afectada por su acción en el organismo que envejece. 5. ¿Cuál es la relación entre radicales libres y envejecimiento? 6. El término ANTIOXIDANTES, ¿a qué se refiere? 7. ¿Qué relación tiene la teoría autoinmune con el envejecimiento? 8. De acuerdo al proceso de envejecimiento, la teoría del error catastrófico se

refiere: 9. ¿Cuáles son los cambios químicos que ocurren en la molécula de colágeno

por el envejecimiento? 10. Mencione los aspectos cardinales del envejecimiento. Complete su reporte de laboratorio de HOJA DE TRABAJO.

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Practica de la Semana: OBSERVACION DE CELULAS CANCEROSAS

I. INTRODUCCION. En algunos casos, el control que regula la multiplicación celular se altera una

célula empieza a crecer y a dividirse SIN CONTROL, aunque el organismo no necesite de ellas. Cuando las células descendientes de dicha célula heredan la propensión de crecer y dividirse sin responder a regulación, el resultado es una clona de células que puede alcanzar un tamaño considerable. Esta masa de célula es llamada TUMOR y está formada por una clona no deseada. Debido a que los tumores tienen efectos debastadores en los animales que los desarrollan, gran parte de la investigación se ha encaminado a entender su mecanismo.

Los eventos genéticos no son heredados por los gametos, son cambios en el

DNA de las células somáticas. El principal cambio es la alteración de genes preexistentes a ONCOGENES, cuyos productos causan crecimiento celular inapropiado.

La investigación de las bases moleculares de cáncer, utiliza el cultivo celular, de

esta forma se pueden ver las características de la enfermedad y explicar sus propiedades por el análisis de células y moléculas.

Existen TUMORES BENIGNOS que poseen células que recuerdan a las células

normales con actividad normal siendo localizados (no invaden a otros tejidos ni organos), y los TUMORES MALIGNOS que se diferencian de los BENIGNOS por su capacidad de invasión y diseminación produciendo METASTASIS ( afecta a tejidos ú órganos vecinos ó a distancia) siendo potencialmente de mal pronóstico.

Las células cancerosas tienen suficientes características para ser diferenciadas

de una célula normal; esta observación se hace al microscopio y analizamos lo siguiente: PERDIDA DE RELACION NUCLEO-CITOPLASMA, NUCLEOLO PROMINENTE, AUMENTO EN LA TASA DE MITOSIS Y UNA ESTRUCTURA POBREMENTE ESPECIALIZADA.

Las diferentes células del cuerpo pueden desarrollar células cancerosas, las

cuales tienen características muy parecidas a una célula inmadura normal en cuanto a sus propiedades. La transformación de células normales a cancerosas incluye EFECTOS SOBRE EL CONTROL DE CRECIMIENTO, MORFOLOGÍA CELULAR, INTERACCION DE CELULA A CELULA, PROPIEDADES DE MEMBRANA, ESTRUCTURA DE CITOESQUELETO, SECRECION DE

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PROTEINA, EXPRESION DE GEN Y MORTALIDAD (CELULAS TRANSFORMADAS PUEDEN CRECER INDEFINIDAMENTE).

Mas de 20 distintos genes celulares normales, pueden convertirse en oncogenes

por alteración genética. II. OBJETIVOS: 1. Identificar características de la célula cancerosa. 2. Comparar características de célula cancerosa y célula normal. 3. Manejar el Microscopio de Luz. III. MATERIALES: Laminillas de tejido del cérvix normal. Laminillas de tejido con cáncer del cérvix Laminillas conteniendo muestras de tejido ESOFAGICO con células

cancerosas y células normales. IV. PROCEDIMIENTO: 1. Observación de las preparaciones por medio de Microscopio de Luz y

descripción de las características celulares observadas. 2. Haga esquemas con objetivo seco fuerte. 3. Complete su reporte de laboratorio de MICROSCOPIA.

V. INVESTIGAR:

1. Anomalías cromosómicas ó en genes relacionadas a Tipos de Cáncer

TIPO DE CANCER ANOMALÍA EN CROMOSOMA(S) Ó GEN(ES) LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA CÁNCER DE MAMAS CÁNCER DE OVARIOS

2.- Agentes Infecciosos que promueven el cáncer en: A. Cáncer del Cérvix :_____________________ B. Cáncer Gástrico_______________________ V. VI. BIBLIOGRAFIA: -Advances in Cancer Research (Yearly Volumes). Academic Press. Becker, E.F. de 1992. CANCER: A Comprehensive Treatise. PLENUM. RECUERDE QUE EL 80 % DE LAS ASISTENCIAS LE DA DERECHO A EXÀMEN FINAL .