8/14/2019 Preparacion y Esterilizaion de Medios de Cultivo

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INTRODUCCIN

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientesque en concentraciones adecuadas y en condiciones

fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.

Estos medios son esenciales en el Laboratoriode Microbiologa por lo que un control en su

fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegurala exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los

resultados obtenidos.

En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentestipos de medios de cultivo que pueden ser

preparados en forma lquida o en forma slida.

Usualmente para preparar un medio slido se partede un medio lquido al que se le aade un agente solidificante

como el agar, la gelatina o la slicagel.(1)

PREPARACIN Y ESTERILIZACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVO:

Al finalizar el trabajo prctico el estudiante estar en capacidad de:

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Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y apartir de medios de cultivo sintticos como los trabajados (agar, caldo).

Indicar el mtodo de esterilizacin apropiado.

FUNDAMENTO:

La preparacin adecuada de un medio de cultivo nos permite disponerde los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimientode los microorganismos en el laboratorio.

Es un conjunto de nutrientes (fuentes de nitrgeno, minerales, etc.) quenecesitan los microbios segn su metabolismo.

Son diferentes nutrientes de acuerdo a la necesidad de cada microbio.

Contienen los diferentes tipos de combinaciones de nutrientes para lanecesidad de los microbios.

MEDIOS DE CULTIVO { NUTRIENTES { GELLIDIUM (agar-agar)

TIPOS:

SOLIDOS ( 1,5% agar ) AGARA) CONSISTENCIA: { LIQUIDOS (0% agar) CALDOS

SEMISOLIDOS (< 0.5% agar) MEDIO

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SIMPLES B) COMPOCICIN: { ENRIQUECIDOS

BIOQUMICATRANSPORTEANTIBIOGRAMA

SELECTIVOSDIFERENCIALES

CONSISTENCIA:

MEDIOS SOLIDOS: Es cuando se va a emplear en ambiente y permite que suconsistencia sea slida por contener un polisacarido (el gellidium) que bajociertas condiciones forme un gel denominado agar agar o colapez.

Sirve para aislar colonias.

MEDIOS LQUIDOS: No tiene agar, jams van a ser slidos y se denominancaldos.

Sirven para favorecer el crecimiento en masa de un determinado grupo demicrobios.

MEDIOS SEMISLIDOS: Tiene menos de 0.5% de agar y se le conoce comomedio, sirve para determinar la capacidad que tienen de movilizarse losmicrobios.

Sirve par evaluar el movimiento psicomotriz de los microbios como se muevendejan un rastro.

COMPOSICIN:

SIMPLES:Tienen nutrientes esenciales (fuente de carbono y energa) para el crecimiento de losmicrobios.

ENRIQUECIDO:

Tiene fuentes de carbono, protenas, lpidos, sales, etc. Se le puede incorporar sangre,leche, huevo, etc.

BIOQUMICA:Son medios para detectar la capacidad bioqumica del microorganismo.

TRASNPORTE:Preserva las propiedades fisiolgicas de los microorganismos .Sirve intactas para sutransporte de una ciudad a otra y se mantenga en buenas condiciones.

ANTIBIOGRAMA:

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Es el comportamiento de microorganismos frente a los microbios. Permite elcrecimiento de cualquier microbio, tambin la capacidad o resistencia frente a unfrmaco.

SELECTIVA:

De acuerdo a sus componentes permite el crecimiento del medio seleccionado,selecciona que microbio crece y que no crece.

DIFERENCIALES:Permite diferenciar fisiolgicas, morfolgicas, patgenas y no patgenasPREPARACIN PARA LA MUESTRA DE UN MEDIO DE CULTIVO:

CON AGAR SIN AGARPASOS A SEGUIR T P T TUBO

ESTERILIZAR LAS PLACASMEDIR EL AGUA DESTILADAPESAR EL MEDIO DE CULTIVOMEZCLAR EN MATRAZMEZCLAR EN BALONCALENTAR EN HORNILLADISOLVERAL AMBIENTEREPARTIR EN TUBOSLLEVAR AL AUTOCLAVEENFRIAR PLACASREPARTIR EL MEDIO DE CULTIVO A PLACASACONDICIONAS LOS TUBOS.

MATERIALES A USAR EN LA PRACTICA: 6 placas petri 6 tubos de 20 x 150 6 tubos de 13 x 100 Agar thayer martin Caldo BHI Agar simple

PROCEDIMIENTOS GENERALES:

1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparacin del medio de cultivoasignado.

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2. Pesar la cantidad exacta del medio o las porciones correctas decada uno de los ingredientes.3.Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo.4. Disolver la porcin pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante.5.Si es necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar.

I. PROCEDIMIENTOS CON LAS PLACAS PETRI::

Previo a todo el procedimiento se corta el papel kraft a la medida, se procede a

envolver cada placa y sujetar con pabilo.

Luego se lleva a la esterilizadora.

Se debe de hacer asepsia personal y desinfeccin del rea de trabajo.

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1 AGAR THAYER MARTIN

Cada placa petri contiene -----------------------17mlN de placas--------------------------------------- 6

102mlRedondeamos a 100ml

*sabiendo que 39 gr es para 1000 ml de agua destilada.

EFECTUAMOS:

39---------------1000 mlX----------------100 ml

X= 3.9*Entonces usaremos 3.9 gr. De agar thayer martin.

PESAMOS:

Teniendo en cuenta que el papel pesa----------- 0.5 gr.Aadimos el agar-------------------------------------3.9gr4.4

- Entonces usaremos 3.9 gr de agar.

MEZCLAR:

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La medida de agua destilada a usar es de 100 ml, se mesclara con el 3.9 de agar en elmatraz de elenmeyer de 250ml.

CALENTAR:

Se lleva a la hornilla moviendo constantemente, evitando que ebullicione y rebaze, seencontrara listo al trmino de la primera ebullicin.

Se colocara un tapn de algodn el la boca del matraz. Y cubrir con el papel kraft delagar lquido de llevar al autoclave.Dejar en el autoclave 15 min. Y se espero que enfrie 15min (t 121 C x 15 min)

Pasado los minutos estimados se hace enfriar colocandolo en chorros de agua hasta quese encuentre en temperatura ambiente.

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Cerca de un mechero de bunsen se procede a servir en las 6 placas, para evitar unacontaminacin no se debe alejar la boca del matraz del fuego que ocasiona el mecherode bunsen.

Esperamos que se gelifique, se envolver y sujetara cada placa petri.Para una adecuada conservacin se llevara a una refrigeradora a t adecuada para su

posterior uso.

II.-PROCEDIMIENTOS CON LOS TUBOS DE 20 X 150

CALDO DE CULTIVO BHI Cada tubo contiene------------------------------10ml

N de tubos-------------------------------- 660ml

*sabiendo que 37gr es para 1000 ml de agua destilada.

EFECTUAMOS:X------------- 60ml

X----------------37 mlX= 2.2

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*Entonces usaremos 2.2 De Caldo BHI

PESAMOS:

Teniendo en cuenta que el papel pesa----------- 0.2grAadimos el agar---------------------------------2.2gr

2.4

- Entonces usaremos 2.4de caldo BHI

MEZCLAR:La medida de agua destilada a usar es de 60ml, se mezclara con el 2.4 de caldo decultivo.

Se disuelve la mescla a t ambiente.Se sirve el caldo en los 6 tubos.Se coloca tampones de algodn a cada tubo y se sujeta con el papel kraft y el pabilo.

Se lleva al autoclave, durante 15 min

III.- PROCEDIMIENTO EN TUBOS DE 13 X 100:

AGAR SIMPLE

Cada tubo contiene ----------------------3.5mlN de tubos-------------------------------- 6

21.0ml*se redondea a 20ml

EFECTUAMOS:X-----------------1000mlX--------------------20gr

X= 1.1gr*Entonces usaremos 1.1 de agar simple

PESAMOS

Teniendo en cuenta que el papel pesa----------- 0.2grAadimos el agar------------------------------------1.1gr

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1.3 gr- Entonces usaremos 1.1 de agar simpl

MEZCLAR:La medida de agua destilada a usar es de 20ml se mezclara con el 1.1gr de caldo de

cultivo.

CALENTAR:

Se lleva a la hornilla moviendo constantemente, evitando que ebullicione y rebaze, seencontrara listo al trmino de la primera ebullicin.

Se sirve el caldo de agar en los 6 tubos se colocara tampones de algodn, se cubre ysujeta con el papel y el hilo.

Se coloca los tubos en la lata y se lleva al autoclave.

Pasado el tiempo se retira del autoclave y se deja enfriar en posicin recta.

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Cuando ya a secado se envuelve la lata y se lleva a concervar.

RESULTADOS

El agar THAYER MARTIN al retirar del autoclave se encontraban en estadolquido.

El agar THAYER MARTIN en las placas quedaron gelificadas despus delservido.

El caldo de cultivo siempre permanecera lquido en los tubos. El agar simple mantiene una consistencia semisolida despus de enfriarse.

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DISCUSIN O COMENTARIOS:

1.-Devemos de tener cuidado con el material que vamos a pesar antes demezclar,evitando cualquier contratiempo.

2.-Concluimos que todo tpo de agar se lleva a calentamiento en la hornilla y que todocaldo se disuelve a t ambiente

3.- Al dejar enfriar debemos de tener en cuenta:

-medio lquido enfria en forma vertical. medio de cultivo semisolido en forma inclinada apoyado en una Madera para evitar el contacto del medio con el algodn.

BIBLIOGRAFIA: