Bol. San. Veg. Plagas, 23: 167-175, 1997

Presencia del virus del bronceado del tomate (TSWV) en el cultivo del tabaco

R. SANTIAGO, J. J. MORENO, J. A. RODRÍGUEZ y E. VERDEJO

En agosto de 1995 se detectaron plantas de tabaco con síntomas del virus del bronceado del tomate (Tomato Spotted Wilt Virus, TSWV) en la zona tabaquera de las Vegas del Alagón (Cáceres). El test inmunoenzimático ELISA, sandwich DAS, confirmó la presencia del virus. En este trabajo se dan a conocer los síntomas que provoca y se cuestiona la estrategia de lucha.

R. SANTIAGO, J. A. RODRÍGUEZ, J. J. MORENO y E. VERDEJO: Servicio de Sanidad Vegetal (SSV). Junta de Extremadura. Plaza de la Soledad,5-la. 06001 Badajoz.

Palabras claves: Virus del bronceado del tomate, TSWV, Tomato Spotted Wilt Virus, tabaco, Extremadura, España

INTRODUCCIÓN

El virus del bronceado del tomate TSWV (Tomato Spotted Wilt Virus) es un tospovi-rus de la familia Bunyariradae, una familia de virosis animales que incluye otros virus como Impatiens Necrotic Spot Virus (INSV). Los tospovirus tienen partículas casi esféri­cas de 85 nm de diámetro con una envuelta lipoprotéica. El virus es capaz de infectar a numerosos huéspedes silvestres y cultiva­dos; se citan unas 360 especies diferentes (ADAM y KEGLER, 1994). TSWV es trans­mitido por insectos de la familia Thripidae en particular por Frankliniella occidentalis (ADAM y KEGLER, 1994).

Descrita la enfermedad por primera vez en 1919 al observarse sobre tomates en 1915 en Australia (ROSELLO et al, 94), se ha identifi­cado posteriormente en muchos países, en­contrándose ahora ampliamente extendida por todo el mundo. En Europa el virus fue descri­to por primera vez en 1932, en Inglaterra y más tarde en otros países (Países Bajos, Ale­mania, Francia, etc.) (BERLING et al, 1992).

En España el virus del bronceado del to­mate se diagnosticó de forma oficial por pri­mera vez en la campaña 1988-89 en dos zonas importantes de cultivos hortícolas, Almería en cultivos de pimiento y tomate bajo invernadero (CUADRADO y OSCA et al., 1991) y en tomate al aire libre en Valencia (JORDA y OSCA et al, 1991).

En Australia en 1931, y nuevamente en 1933, el 35% de las plantas de tabaco de un semillero experimental fueron destruidas por TSWV (PITTMAN, 1934). Actualmente causa importantes pérdidas en la producción tabaquera de varios países. Está extendido y es especialmente dañino en Centro Europa y Grecia, también en zonas del sudeste de Brasil y en áreas tabaqueras de Estados Uni­dos (GOODING, 1991).

El TSWV puede atacar al tabaco desde el estado de plántula hasta la madurez pudien-do inducir diferentes síntomas, dependiendo de la edad y el sitio de la planta donde se producen (REICH, 1986), de las condiciones ambientales (especialmente la temperatura), nivel de infección y número de razas del

virus que infectan el huésped; los síntomaspueden aparecer en plantas con 2-4 días,marchitarse y morir en una semana por in-fección sistémica (GOODING, 1991).

El virus causa anillos cloróticos-necróti-cos en hojas (ROSELLO et al., 1994), comotiros a una diana (MOORE et al, 1997), quea menudo se unen para formar grandesáreas de tejido muerto (REICH, 1986). Alprincipio las manchas de las hojas son ama-rillas, más tarde los tejidos mueren y ad-quieren coloraciones marrones-rojizas. Lasplantas afectadas quedan enanas y el broteapical se languidece o encorva (GOODING,

1991) distorsionándose y deformándose(REICH, 1986). Con frecuencia los tejidosmuertos delimitan zonas alrededor de lasvenas principales de la hoja que permane-cen verdes durante más tiempo que lasáreas internerviales. Generalmente los pri-meros síntomas aparecen en la yema termi-nal o en las hojas jóvenes que llegan a dis-torsionarse. En plantas de tabaco más desa-rrolladas los síntomas pueden ser sistémi-cos afectando al principio a un lado de laplanta, o localizados afectando a una o doshojas. Las plantas infectadas sistémicamen-te frecuentemente se distorsionan especial-mente en el brote terminal (MELTON et al.,1996).

Los síntomas en los tallos son también va-riables, al principio del cultivo la parte másbaja del tallo puede mostrar un oscureci-miento, como hundido, pareciendo areas da-ñadas. Cerca de la época del despunte pue-den verse bandas necróticas oscuras parale-las en los tallos por debajo de las hojas in-fectadas (curvadas o rectas), distintas de lasque producen los productos para el desbro-tado (MOORE et al, 1997). En las plantasmás viejas se observan manchas oscurasalargadas y concéntricas en los tallos princi-pales, por encima y por debajo de hojas consíntomas. En algunas plantas donde las in-florescencias no se suprimen, se observanpequeñas manchas necróticas en cáliz y co-rolas (CULBREATH et al., 1991).

La muerte de una parte de la planta, o detoda ella, puede producirse unos días des-

pués de que aparezcan los síntomas, espe-cialmente al comienzo de la temporada(REICH, 1986). Las plantas infectadas per-manecen sin crecer durante algunas sema-nas, después las hojas caen y mueren, y laplanta enseguida sucumbe. Ocasionalmente,en lugar de morir las plantas desarrollan uncrecimiento secundario con nuevas hojascasi normales, pero más tarde pueden desa-rrollar síntomas necróticos (SAMUEL y BALD,

1933).

MATERIAL Y MÉTODOS

Material vegetal

Desde 1992, año en que se diagnosticópor primera vez el virus en Extremadurasobre muestras de tomate y lechuga envia-das por el SSV (Servicio de Sanidad Vege-tal) a la ETSIA de Valencia (Escuela Supe-rior de Ingenieros Agrónomos) (JORDA,comunicación personal), se iniciaron inspec-ciones periódicas en las comarcas tabaque-ras de la provincia de Cáceres, las Vegas delTiétar y del Alagón, en alerta por la impor-tante cantidad de plántulas de tabaco que seadquieren en la zona del Levante Español,ampliamente contaminado con TSWV.

Inicialmente la prospección se dirigió aconstatar la presencia del trips transmisor delvirus, Frankliniella occidentalis (Pergande).Para ello se tomaron muestras de plantas desemilleros de tabaco, tipo Virginia y tipoBurley, invernaderos de hortícolas y orna-mentales de la zona, y malas hierbas próxi-mas a ambos. Con posterioridad se visitaronlas parcelas de tabaco buscando anomalías osíntomas que hicieran sospechar que se trata-ba de lesiones causadas por el TSWV.

Durante las campañas de 1993 y 1994 seanalizaron, por el test ELISA, plantas de se-milleros de tabaco para conocer el estadosanitario de los mismos con respecto alvirus del bronceado del tomate.

Desde que se detectó el virus en tabaco(septiembre 1995), y posterior confirmación

con análisis serológicos, se realizaron los si-guientes muéstreos y análisis:

- Nueva toma de muestras y análisis deplantas de tabaco con síntomas de la parcelaoriginaria para confirmación de los resulta-dos iniciales.

- Se muestreó el 0,5% de las plantas delcampo, a base de tomar al azar un surco decada 8 y una muestra cada 25 plantas paraanalizar y valorar la incidencia del virus.

- Se analizaron plantas sintomáticas deparcelas próximas o colindantes con el focoinicial, para valorar la extensión del proble-ma. Se tomaron muestras en los términosmunicipales de Riolobos, Montehermoso,Galisteo, y Guijo de Galisteo.

- Para completar las valoraciones, y debi-do a que el virus no fue detectado hasta finalde campaña, se analizaron troncos despro-vistos de hojas, en tabaco tipo Virginia yacosechado.

- Se hicieron análisis serológicos en in-vierno de malas hierbas y plantas cultivadas,próximas al campo contaminado por elvirus.

- Se recolectó en invierno el vector trans-misor Frankliniella occidentalis.

Método

Para la extracción del vector se utilizó elembudo de Berlesse, así como la técnica degolpear las plantas sobre una superficieblanca y posterior recogida de los trips conpincel. La determinación se realizó siguien-do las claves de Lacasa (LACASA, 1990).

Para la detección del virus TSWV se em-pleó la técnica inmunoenzimática ELISA-sandwich- DAS utilizando anticuerpos po-liclonales BR-01 de Loewe.

En el caso de plantas que presentabananomalías sospechosas,se selecionaron parael proceso trozos de hojas con síntomas. Ensemilleros, por tratarse en general de plantasasintomáticas, se agruparon 10 plantas enuna misma muestra y se procesaron porcio-nes de la zona del cuello.

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

En la prospección realizada en 1992 paradeterminar la presencia del vector, se identi-ficó F. occidentalis (fig. 1) en la mayoría delas muestras tomadas en el interior de los in-vernaderos o junto a éstos, siendo muchomenos frecuentes en las tomadas lejos deellos, donde apareció Trips tabaci (Lind) enprácticamente todas las muestras.

Los resultados de las inspeciones y análi-sis realizados para determinar el TSWV ensemillero y campos de producción anterio-res a septiembre de 1995 fueron negativas,correspondiéndose con plantas asintomáti-cas en semilleros y plantas con síntomas notípicos del virus, presumiblemente causadospor otros agentes bióticos o abióticos.

En septiembre de 1995 se obtienen losprimeros resultados positivos de la infec-ción viral, encontrándose plantas con gra-ves necrosis (fig. 2) y distorsiones en brotesapicales (fig. 3), con parada de crecimientoy con porte más pequeño que el resto (fig.4). En hojas se aprecian anillos concén-tricos necróticos (fig. 5) y manchas cloróti-cas y necróticas que a menudo se unen yprovocan la muerte de las hojas (fig. 6). Enotros casos amarilleo y posterior necrosisde los nervios de las hojas (fig. 7). Algunossíntomas encontrados eran sistémicos, afec-tando al principio a un lado de la planta(fig. 8), deformando o frunciendo las hojas(fig. 9), como resultado de un crecimientodesigual. Los tallos de las plantas más vie-jas presentan unas lesiones amplias, en al-gunos casos de hasta 30 centímetros, oscu-ras, deprimidas y concéntricas por encima ydebajo de la inserción de hojas con sínto-mas (figs. 10 y 11).

Se obtuvieron resultados positivos por eltest Elisa de los análisis realizados a plantascon la citada sintomatologia en el párrafoanterior, procedente de dos tomas de mues-tra de tabaco Virginia variedad K326 reali-zadas en el paraje «El Rincón», de Alagón,pedanía de Galisteo (fig. 11).

La incidencia del virus en la parcela delfoco inicial ha sido muy baja, pues no se de-

Fig. 1.-Trips vector del virus Frankliniella occidentalis.

tectó ninguna planta positiva del muestreorealizado al azar sobre el 0,5% de ellas.

Se obtuvieron resultados positivos en par-celas próximas (fig. 12):

- En el término de Alagón (Galisteo),tanto en tabaco Virginia como en Burley, enun radio aproximado de 2 Km. desde el focoinicial.

- En la margen izquierda del río Alagónen el término de Riolobos, en 2 parcelas detabaco Burley, situadas junto al río en lazona más próxima al inicio del foco. No seencontró ninguna planta con el virus en elresto del municipio.

La incidencia en estas parcelas al igualque la del paraje «El Rincón» fue tambiénmuy baja.

Las muestras de las explotaciones de Monte-hermoso y Guijo de Galisteo fueron negativas.

Todos los resultados de los análisis a ta-llos de tabaco Virginia a final del cultivofueron negativos, pensamos que debido aque las lesiones eran muy viejas y práctica-mente no existia actividad vegetativa.

Lactuca sativa L. y las malas hierbasGnaphalium luteoalbum L., Mentha suaveo-lens Ehrh. y Sonchus sp. recolectadas en di-ciembre de 1995 del campo contaminado yanalizadas por ELISA con resultado positi-vo, parecen ser los reservónos de TSWV, apesar de no presentar síntomas. Los análisisde Nicotiana tabacwn L. y otras especies deflora espontánea como Lactuca sp., Seneciovulgaris L., Solanum tuberosum L., Polygo-num persicaria L., Solanum nigrum L.,Daucus carota L., Capsella bursa-pastoris(L) Medie, Galium aparine L., Datura sp.,Rumex sp., Urtica sp., Scandix sp., Viciasp., Malva sp.y Stellaria sp. han resultadonegativos.

Fig. 2.-Planta con infección grave de TSWV. Fig. 4.-Planta con severa necrosis en sus hojasy aparente reducción de su crecimiento.

Fig. 3.-Planta con distorsiones en brotes apicales.

Fig. 5.-Hojas con anillos concéntricos necróticos. Fig. 6.-Hojas con nervios cloróticos empezandoya a necrosarse.

Fig. 7.-Hoja con amplias áreas necróticas por uniónde lesiones y necrosis de venas.

Fig. 8.-Planta con infección sistémica afectandoal desarrollo de una parte de la planta.

Durante todo el invierno de 1995-96 seencontraron individuos adultos del vector F.occidentalis.

La incidencia del TSWV en semilleros detabaco fue nula, lo que sugiere que la infec-ción en este caso no se inició en los plante-les, sino después del transplante por inoculooriginario de campos próximos de tomatefuertemente afectados por TSWV. En estecaso, las plántulas de tomate procedían deun semillero tradicional, enclavado en unazona donde el virus del bronceado del toma-te está ampliamente extendido.

Aunque los daños en 1995 han pasadocasi desapercibidos, se esperaba que en lassiguientes campañas, al igual que ocurriócon el TSWV en tomate, se produjera un au-mento del foco en extensión y gravedad, ymás si tenemos en cuenta que tanto el vectorcomo el virus se encuentran en la flora es-pontánea de ésta zona. Por el contrario, y aligual que en hortícolas la incidencia en 1996

Fig. 9.-Atrofia, distorsión y necrosis en hojas jóvenes.

Fig. 10.-Lesiones necróticas en tallo principal. Fig. 11.-Detalle de manchas oscuras, alargadasy concéntricas en el tallo principal

ha sido casi nula, encontrándose sólo unaplanta de tabaco con síntomas de TSWV.Creemos que puede ser debido a las condi-ciones climáticas, con invierno y primaveramuy lluviosas.

Es de resaltar que en la parcela donde seapreciaron los síntomas por primera vez,estaba bastante mal cuidada y con fuertessíntomas de otros virus, como lo pusieronde manifiesto análisis posteriores. Losvirus detectados con más frecuencia fue-ron: PVY (virus Y de la patata), TMV(virus del mosaico del tabaco) y CMV(virus del mosaico del pepino), en la mayo-ría de los casos agrupados en la mismaplanta.

En vista a los resultados obtenidos, sepuede concluir que las inspecciones y análi-sis deben ir dirigidos, al menos en un princi-pio, a la búsqueda de plantas con síntomas,

ya que en ningún caso se han obtenido re-sultados positivos en los análisis por ELISAde plantas asintomáticas.

ESTRATEGIA Y CONTROLDE LUCHA

En los Estados Unidos han llegado a laconclusión que eliminar las plantas infesta-das, dar tratamientos contra los trips y la ro-tación de cultivos , tiene poco o ningúnvalor en la lucha contra el TSWV en el cul-tivo del tabaco (MELTON et a/., 1996).

El mejor método de control para el virussería la obtención de material resistente alvirus del bronceado, pero hasta la fecha lasdistintas variedades de tabaco tienen unamayor o menor suceptibilidad, pero ningunaes resistente al virus.

Fig. 12.-Zona tabaquera con TSWV.

Por tanto, y hasta que se consiga introdu-cir resistencias se debe luchar con los me-dios existentes:

- Control del intercambio del materialvegetal, evitando el traslado de plántulasde zonas contaminadas a otras que no loestán.

- Control de la sanidad de las plantas enel semillero, antes del transplante.

- Eliminación de malas hierbas y deplantas afectadas por el virus.

- Lucha directa para controlar al vector,solo en último extremo.

AGRADECIMIENTOS

A Dña. Isabel Colino Nevado e Isabel Sa-yago Hernández por su valiosa ayuda en larealización de los análisis de laboratorio. ACarlos García Barreto y Antonio MorcuendeBachiller por su colaboración en la toma demuestras. A D. Inocencio Blanco Martín yal resto del equipo técnico de CETARSApor la toma y envío de muestras de tabaco ytrips así como por toda la documentación bi-bliográfica que nos suministró y a Dña. In-maculada Montero Ruiz por la determina-ción de las especies vegetales.

ABSTRACT

SANTIAGO, R., MORENO, J. J., RODRÍGUEZ, J. A. y VERDEJO, E., 1997: Presenciadel virus del bronceado del tomate (TSWV) en el cultivo del tabaco. Bol. San. Veg.Plagas, 23(2): 167-175

Spotted wilt, caused by TSWV, was first reported in tobacco in Extremadura,Spain, in August of 1995. The virus was identified by ELISA sandwich DAS. Concen-tric ring, large lesions with necrotic tissue, necrotic lines mainly along the sides ofveins, apical necrosis, stunting and malformation of leaves, elongated concentric darke-led spots and lesions on the main stalks were observed.

Key words: Tomato Spotted will Virus, TSWV, Tobacco, Extremadura, Spain.

REFERENCIAS

ADAM, G. y KEGLER, H., 1994: Tomato spotted wiltvirus and related tospoviruses. (Abstr.). Archivesof Phytopathology and Plant Protection, 28(6):483-504.

BERLING, A.; GEBRE-SELASSIE, K. y MARCHOUX, G.,1992:. El Virus del Bronceado del tomate: Situa-ción-Perspectivas. «Jornadas técnicas sobreTrips/Virus del Bronceado (TSWV). Murcia 26-27Febrero». Ed. Consejería de Agricultura, Ganaderíay Pesca de Murcia: 23-28.

CULBREATH, A. K.; CSINOS, A. S.; BERTRAND, P. F. yDEMSKI, J. W., 1991: Tomato Spotted Wilt VirusEpidemic in Flue-Cured Tobacco in Georgia. PlantDisease, 75: 483-485.

CUADRADO, I. M.; DE JUAN, E.; MORENO, P. y SAEZ, E.,1991: Detección del virus del Bronceado del Tomate(TSWV) en cultivos de pimiento y tomate bajo in-vernadero en el poniente almeriense. «Estudios deFitopatología. Ed. Consejería de Agricultura, Indus-tria y Comercio de Badajoz»: 216-221.

GOODING, G. V., 1991: Diseases caused by viruses.To-mato Spotted Wilt Virus. Compendium of TobaccoDiseases. Edited by H.S.Shew and G.W. Lucas. APS.Press The American Phytopathological Society.

JORDA, C. y OSCA, J. M., 1991: Un nuevo virus en Espa-ña: El TSWV. Estudios de Fitopatología. SociedadEspañola de Fitopatología. Ed. Consejería de Agri-cultura, Industria y Comercio de Badajoz: 35-40.

LACASA, A., 1990: Datos de taxonomía, biología y com-portamiento de Frankliniella occidentalis. CuadernosPhytoma España, 6: 9-15.

MELTON, T. A.; PORTER, D. y WOOD, K., 1996: DiseaseManagement. Flue-Cured Tobacco. InformationNorth Carolina.Cooperative Extensión Service 111

MOORE, J. M.; BERTRAND, P.; JONES, D.; GIVAN, W. D.;SUMNER, P.; TYSON, A. W.; DANGERFIELD, C. W.;HARRIS, G. WH. y KIGHTLINGER, K. D., 1997. Geor-gia Tobacco Grower's Guide. Cooperative Exten-sion Service. The university of Georgia, College ofAgricultural and Environmental Sciences in coope-ration with Georgia Tobacco Commisión: 78.

PITTMAN, H. A., 1934: Virus diseases of plants with par-ticular reference to the spotted or bronzy wilt diseaseof Tomatoes. (Abstr.) Journ. Dept. Agrie. WesternAustralia, Ser. 2, xi, 1: 123-140.

REICH, R. C , 1986: Flue-Cured Tobacco. Field Ma-nual. R. J. Reynolds Tobacco Company. Winston-Salem, North Carolina (Second Edition): 26.

ROSELLO, S., JORDA, C. y NUEZ, F., 1994. El virus delbronceado del tomate (TSWV). I. Enfermedades yepidemiología. Phytoma España, 62: 21 -34.

SAMUEL, G. y BALD, F. G., 1933: Tomato spotted wilt ontobacco. (Abstr.). Journ. Dept. Agrie. Australia XXX-VII, 190-195.

(Aceptado para su publicación: 4 octubre 1996)