Presentacin de PowerPoint

Reparacin de lesiones Tq ( >7 cm ) No existen alternativas Qx definitivas Estenosis Neoplasias Reseccin + TraqueoplastaLas alteraciones en la estructura y funcin del cartlago, provocan obstruccin de la va area

Introduccin: TrqueaPatologa5

Introduccin: TrqueaHistologa

Masson (10X)

Histologa: Consta de 4 capas: Mucosa, Submucosa, Cartlago y Adventicia.3MMP7 (Matrilisina, 20KDa, hidroliza proteoglicanos y glicoproteinas) MMP13 (Colagenasa (tipo I,II y III), 48KDa, remodelacin vascular)Introduccin: TrqueaHistologa: Matriz Extracelular

(H&E,40x) (Safranina O, 40x)

4Matriz Extracelular: Diseos Experimentales de Criopreservacin Traqueal

antigenicidad (ST utilizado en la reconstruccin)

integridad estructural del cartlago (resultados contradictorios) Aplicacin clnica del procedimiento

Modelo Animal (Dimensiones Anatmicas Tq)Tamao ST Criopreservado (3 - 7), Solucin (MCC + SBF + Crioprotector)Temperatura (-60 / -196)C, Tiempo (7d 2s)

Sotres-Vega A, Villalba-Caloca J. [Cryopreserved Tracheal Grafts: A Review Of The Literature]. J Invest Surg 2006, 19(2):125-35. Introduccin: Criopreservacin

Reparacin Experimental de Lesiones Traqueales > 7cm con ST criopreservados El efecto de la criopreservacin sobre la integridad del cartlago se refleja en la funcin y durabilidad del injerto utilizado en la reconstruccin Utilidad en el mantenimiento de parmetros estructurales bioqumicos y funcionales Reseccin ST Reemplazo ST Evaluacin Post-Mortem Criopreservado (Cartlago)Introduccin: TrqueaSegmentos traqueales CRIOPRESERVADOS7Reconstruccin de lesiones Tq >7cm Problema Clnico No ResueltoDemanda Estrategia Qx Reconstruccin definitiva No candidatos (reseccin Tq)

Insuficiencia respiratoria (complicaciones funcionales e infecciosas)Tratamientos paliativos recurrentesCriopreservacin (conservacin de clulas y tejidos)ST CriopreservadosIntegridad Estructural del Cartlago (Sostn y Permeabilidad Tq) +Destruccin Epitelio ( Antigenicidad)Indicador mantenimiento del tejido traqueal MMP 7 y MMP 13

Calidad del ST criopreservado en una reparacin QxPLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA81.- Evaluar la integridad de la matriz extracelular del cartlago criopreservado enmuestras de tejido traqueal que fueron obtenidas bajo diferentes esquemas deCongelacin

2.- Determinar las condiciones de criopreservacion ms adecuadas para mantener viable el tejido traqueal y que aseguren la calidad del injerto en una reconstruccinGeneralesParticularesEvaluar el efecto de:1) La solucin2) La temperatura y3) El tiempo de criopreservacin sobre los cambios macroscpicos, microscpicos y en la expresin de MMP 7 y MMP 13 en el tejido traqueal criopreservadoOBJETIVOS9Las alteraciones en la expresin de las metaloproteinasas en el tejido traqueal por el efecto de la preservacin, dependern principalmente del esquema temperatura/tiempo, mas que de los esquemas solucin-temperatura y solucin-tiempoHIPTESIS10

Modelo Experimental Canino (NOM-062-ZOO-1999)

Procuracin y Obtencin de ST

Diseccin, Reseccin, Segmentos Tq 5 Referencia ( Proximal al C.Cricoides)

TQ (n=9)

Fin de estudio,No relacionados con Qx-Tq

Lavado ST Solucin Glucosada MATERIAL Y MTODOS: Diseo Experimental11Distribucin de ST

ST Grupo Control Sin Criopreservacin Resto de ST: Distribucin al azar 8 Grupos de Criopreservacin (Solucin, Tiempo, Temperatura)MATERIAL Y MTODOS: Obtencin ST12

SolucinMedio F12K ( 20% SBF + 10% DMSO + Ab Am)SBF 90% (10% DMSO + Ab Am)

Temperatura1) (-70C) 2) (-70C) + (-196 C)

Tiempo48 horas15 das

NL: Fase de Vapor (-196C) MATERIAL Y MTODOS: Criopreservacin ST13

(n=6, ST / Grupo de Estudio) Concluido el Tiempo de Criopreservacin: Descongelacin ST (37C) / F12K (37C) MATERIAL Y MTODOS: Grupos de Estudio14Integridad aparente del STFracturas

Grupo 1 Control Sin Criopreservacin:Post-obtencin

Grupos 2 al 9: Pre y Post-criopreservacin

Concluidas las Evaluaciones Macroscpicas G1 & Post-Criopreservacin:ST Formol al 10% / 24h ST cortado en 5

Inclusin en parafina + Cortes 4uEvaluacionesMicroscpicaIHQ MMP7 yMMP13

Control y Post-Criopreservacin1

35MATERIAL Y MTODOS: Evaluaciones15

Integridad y Alteraciones:Cartlago y Tipo de Colgena

H&E (2.5X) Rojo Sirio (2.5)MATERIAL Y MTODOS: Evaluacin Histolgica16Control Negativo

ControlPositivo MMP13 (20X)IHQ (Streptavidina-Biotina-Peroxidasa). Rabbit Polyclonal Ab MMP7 (ab5706), MMP13 (ab39012). Abcam. Tincin (DAB) - Contratincin (Hematoxilina)

MATERIAL Y MTODOS: Evaluacin Inmunohistoqumica

17Condiciones de Criopreservacin

Sin Criopreservacin18 (100%)48h(-70C) F12KSBFG2:15 (83.33%) G3:18 (100%)G2:3 (16.66%) 15d(-70C) F12KSBF G4:18 (100%) G5:2 (11.11%)

G5:13 (72.22%)

G5:3 (16.66%)ANDEVA+Tukey: p