PresentacióN1
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Medida del crecimiento bacteriano
Métodos: a) Recuento total de células.b) Recuento de células viables.c) Determinación de Masa celular.d) Medida de la Turbidez.
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b) Recuento de células viables.
Célula viable: “Aquella capaz de dividirse y formar una progenie”
La viabilidad se determina por el nª de células capaces de formar colonias,el recuento se denomina “recuento en placa o de colonias”.
1 célula 1 colonia
2 métodos:a) Método de siembra en placa por extensiónb) Método de vaciado en placa (la bacteria debe soportar los 45ºC del agar)
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En ambos métodos necesitamos “Diluciones Seriadas” para Asegurarnos de obtener placas donde el recuento sea posible:
El resultado se expresa como número deUFC (Unidades Formadoras de Colonias),cada colonia puede proceder de 1 o + células.
Método muy usado en microbiología dealimentos, aguas,lácteos, médica.....
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MEDIOS DE CULTIVO
Imprescindibles para el estudio de microorganismos en laboratorio.Muchos tipos según su composición en nutrientes, condiciones ambientales....etc.
Se necesitan para:
-Separar y aislar distintas especies.-Como paso previo a la identificación de 1 especie.-Conocer el metabolismo bacteriano.-Estudios macroscópicos (morfología).-Realización de antibiogramas.-Conservación de especies
Las bacterias tienen ciertos requerimientos ENERGÉTICOS y NO-ENERGÉTICOSpara su crecimiento, que deberán ser aportadas por los medios de cultivo:
Energéticos: Fuente de C y N.No-Energéticos: Iones, factores de crecimiento, inhibidores.........
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PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO
1) Elección de ingredientes2) Pesada3) Hidratación: en agua destilada o desionizada (milliQ) calentada a 50-60ºC4) Ajuste de pH: Con papel indicador o pHímetro, se ajusta con tampones de
HCl o NaOH (1% o >).5) Adición de agar6) Distribución: en recipientes, a ser posible, definitivos:
- Tubos (tapados con algodón graso o tapón de rosca)- Matraces Erlenmeyer, Botellas de pyrex....etc (para Placas Petri)
7) Esterilización: generalmente en AUTOCLAVE (121ºC, 1.2 atm presión y 15-20 min)8) Vertido en placas: Con el medio atemperado (45-50ºC) y en condiciones estériles.9) Enfriamiento:
- Medios líquidos: tal y como sale del autoclave.- Medios sólidos: * Tubos: A Tª ambiente en horizontal (para picadura) o
inclinados (en superficie, slant) * Placas: en superficie horizontal (mejor en campana flujo)
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TÉCNICAS DE SIEMBRA: INOCULACIÓN Y AISLAMIENTO
TÉCNICAS DEL CULTIVO PURO: Para estudiar los microorganismo debemosde cultivarlos en el laboratorio y aislados de otras especies.
Cultivo puro Aislamiento de una especie a partir de una población mixta,Mantenimiento de la especie aislada en ambiente de lab.
Los recipientes y medios de cultivo han de ser estérilesLa principal fuente de contaminación: la atmósfera
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INOCULACIÓN
Inóculo: material microbiano que se utilizará para sembrar o inocular el recipiente de cultivo.
Métodos de Inoculación:a) En medio líquido: con asa o pipeta, directamente al medio
b) En medio sólido:1. En PLACA:
- Inoculación PREVIA al vertido del medio- Inoculación SOBRE medio sólido
2. En TUBO:
- Estría en superficie inclinada - Picadura
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AISLAMIENTO
Se hace en PLACA y su objetivo es obtener CEPAS (Cultivos) PURAS
1) Por DILUCIÓN: 2) Por AGOTAMIENTO:
a) SIEMBRA EN ESTRÍA O ZIG-ZAG
b) SIEMBRA EN ESTRÍA MÚLTIPLE
c)TÉCNICA DE LOS 4CUADRANTES
d)TÉCNICA DE LOS 3 GIROS
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El MICROSCOPIO: Fundamento y manejo
Partes de un microscopio óptico
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Sistema óptico OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecánico SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,
binocular,....REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar
los objetivos.TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micromético,
que consigue el enfoque correcto.