Principios de criopreservación de corteza ovárica · 2018. 11. 8. · La fragmentación de la...
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Principios de criopreservación de corteza
ováricaClara González Llagostera
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2004 Primer nacimiento. 2017 ∼60
2004- Vitrificación de ovocitos y embriones
Vitrificación de tejido ovárico?
2 Nacidos vivos
Introducción
J Assit Reprod Genet (2015) 32:1167-1170
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Distintos tipos celulares. - Parénquima.
- Estroma fibroso.-Folículos
Corteza ovárica
Folículos primordiales en cortical ováricaDr. Francesc Tresserra. Quirón-Dexeus, Barcelona
Protocolos de criopreservación complejos
Diferentes requerimientos: - Concentraciones óptimas de crioprotectores
para prevenir cristales hielo.-Tiempos de equilibración.
- Tasas de enfriamiento/calentamiento.
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Criopreservación
1. Condiciones de transporte del tejido
2.Tamaño de los fragmentos del tejido
3. Soporte para la criopreservación (criotubo, bolsa EVA, rejilla metálica)
4. Protocolo de criopreservación
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1. Transporte de la muestra al laboratorio:
- En frío 4-8ºC- Reportado desde RT (Chang et al, 2011) hasta 37ºC (Suzuki et al, 2015)
2. Tamaño de los fragmentos:
Menor tamaño
- fácil penetrancia de los crioprotectores - mayores tasas de enfriamiento y calentamiento
- reduce el tiempo de isquemia
- ¿rotura de folículos?- dificultad para la cirugía de trasplante
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3. Soporte utilizado:
- Crioviales- Rejillas metálicas- Bolsas de etil vinil acetato
Riesgo de contaminación cruzada en sistemas abiertos.
¿Esterilización de nitrógeno?¿Soporte cerrado?
Kuwayama 2009, cryotissue
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Vitrificación (VF)Congelación lenta (SF)
4. Protocolo:
Congelación lenta
Vitrificación
vs
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VitrificaciónCongelación lenta
- Tasa de enfriamiento lenta.
- Deshidratación celular moderada.
- Baja concentración de crioprotectores.
- Formación de cristales de hielo.
- Equipo específico.
- Costoso económicamente.
- Protocolo largo.
- No realizable en quirófano.
- Tasa de enfriamiento ultra rápida.
- Deshidratación celular importante.
- Elevadas concentraciones de
crioprotector.
-No existe formación de cristal, es un
sólido en estado amorfo.
- No requiere equipo específico.
- Protocolo sencillo y rápido.
- Realizable en quirófano.
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Fertil Steril, 2014; 101 (3):775-784.
Objetivos: Determinación del protocolo y soporte óptimo de criopreservación.
Variables estudiadas: Densidad folicular, proliferación y viabilidad estroma celular.
Preservación de folículos quiescentes VF superior a SF. Mantenimiento del injerto.
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Vitrificación y congelación lenta presentan resultados equivalentes respecto a número de folículos primordiales intactos.
Variabilidad protocolos.
¿Determinación del protocolo óptimo?
Medicine (2016) 95:39(e4095)
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Resultados comparables.
Vitrificación ofrece ventajas en simplicidad y coste.
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Técnicas combinadas
J Assist Reprod Genet,2011;28:1147-1149.
Hum Reprod, 2016;31:750-762.
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La fragmentación de la corteza ovárica per se, actúa como catalizador de la activación de los folículos primordiales. Disrupción de la vía de señalización inhibidora Hippo.
Activación vía PI3K-PTEN-AKT-FOXO3. Activación crecimiento fols primordiales.
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Conclusiones
Criopreservación tejido ovárico (SF/V), técnica buen rendimiento:
- Mantenimiento densidad folículos primordiales - Morfología folicular- Preservación de folículos quiescentes
Fácilmente realizable. ¿Problema sistemas abiertos? No disponible sistemas cerrados (vitrificación).
Investigación con el objetivo de:Estandarizar protocolos de criopreservaciónSeguimiento a largo plazo de los niños nacidos a partir de to*
Valorar estrategias combinadas: crio de tejido con crio de ovocitos MIV. cultivos in vitro de activación folicular.
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Muchas gracias