PROCEDIMIENTO DE ENSAYO PARA DETERMINAR EL ÍNDICE DE ...

LABORATORIO DE ANÁLISIS QUÍMICO DE SUELOS Y FOLIARES DE LA UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PEREIRA

PROCEDIMIENTO DE ENSAYO DEL MÉTODO PARA DETERMINAR EL ÍNDICE DE ENCALADO EN SUELOS

Versión: 01 Fecha de edición: 2009-04-01

Código: LAS-PDE- 06

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1

PROCEDIMIENTO DE ENSAYO PARA

DETERMINAR EL ÍNDICE DE ENCALADO EN

SUELOS

NTC-ISO-IEC 17025/2005

Requisitos generales de competencia de laboratorios de ensayo y calibración

Vigencia: Ruta de acceso:

Elabora: ___________________

Revisa: ____________________

Aprueba: _____________________

Fecha: ___________________

Fecha: _____________________

Fecha: _____________________





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2

Página

1. OBJETO 3

2. ALCANCE 3

3. DEFINICIONES 3

3.1 ABREVIATURAS EMPLEADAS 3

4. CONTENIDO 4

4.1 FUNDAMENTO DEL MÉTODO 4

4.2 PROCESAMIENTO Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA 4

4.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS 4

4.4 NORMAS DE SEGURIDAD Y RECOMENDACIONES 5

5. PROCEDIMINETO 7

5.1 PREPARACIÓN DE REACTIVOS 7

5.2 REGISTRO DE DATOS 8

5.3 CÁLCULOS Y RESULTADOS 8

5.4 REPORTE DE RESULTADOS 10

6. RESPONSABLES 10

7. DOCUMENTOS DE REFERENCIA 10

ANEXOS 11





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3

1. OBJETO

Establecer el procedimiento para la determinación del índice de encalado en

suelos, en el Laboratorio de Análisis Químico de Suelos y Foliares de la

Universidad Tecnológica de Pereira.

2. ALCANCE

Esta metodología analítica se aplica a todas las muestras de suelo sometidas a la

determinación del índice de encalado, en el Laboratorio de Análisis Químico de

Suelos y Foliares de la Universidad Tecnológica de Pereira.

3. DEFINICIONES

Encalado de suelos: Es la operación por la cual se aplica al suelo compuestos de

calcio o calcio y magnesio que son capaces de reducir la acidez al neutralizar los

iones Al+3 y H+ que se producen en suelos ácidos, incrementando de esta manera

el pH.

3.1. ABREVIATURAS EMPLEADAS

CaCO3: carbonato de calcio

Ca(OH)2: hidróxido de calcio

mL: mililitros

g: gramos

N: normalidad

ppm: partes por millón

ha: hectárea

da: densidad aparente

A.A.: absorción atómica





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4

4. CONTENIDO

4.1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

Los mecanismos de reacción de los materiales encalantes en el suelo permiten la

neutralización de los iones H+ en la solución del suelo por medio de iones OH-

producidos al entrar en contacto la cal con el agua del suelo. Es por esta razón

que la cal es efectiva solamente cuando existe humedad en el suelo. Las

reacciones básicas de la cal en el suelo pueden ser ilustradas con el caso del

carbonato de calcio o calcita. Estas reacciones se presentan a continuación:

CaCO 3 + CO3-2-2

CO32- + OH2 HCO 3

- + OH -

HCO 3- + OH2 H2CO3 + OH -

H2CO3 CO2 + H2O

H2O+H+-OH(solución de suelo)

Ca2+

Las tasas de reacciones indicadas y por lo tanto la disociación del CaCO3 está

directamente relacionada con la tasa a la cual los iones OH- son removidos de la

solución del suelo a través de la neutralización del H+ y la formación de H2O.

Mientras exista H+ en la solución del suelo el Ca2+, CO32-, HCO3

- y H2CO3

continuarán apareciendo en la solución. En esta forma el pH aumenta debido a

que se disminuye la concentración de H+ en el suelo. El incremento de pH permite

la precipitación del Al3+ como Al(OH)3, que es un compuesto insoluble, eliminado

de esta forma el efecto tóxico del Al3+ en las plantas y la principal fuente de iones

H+.





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5

4.2. PROCESAMIENTO Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS

Las muestras deben ser etiquetadas debidamente en la bolsa en la cual el usuario

debe traerla y registradas en el formato LAS-TMM-F03 (ver anexo 1). Se llevan al

horno de secado a 60ºC por 2 días, luego se pasa por un tamiz “mesh 10”, y se

envasa en un frasco identificado con el número interno de laboratorio para esa

muestra.

4.3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.

4.3.1. Materiales

� Vasos plásticos taparrosca de 125mL

� Limpión

� Botellón con agua destilada

� Dispensador de 25 ó 50mL

� Embudos

� Papel filtro

� Matraces aforados de 50 y 100mL

� Pipetas de 10 y 20mL

4.3.2. Reactivos

� Solución buffer de 4.0 y 7.0

� Patrones de calcio para A.A.

� Hidróxido de calcio Ca(OH)2

4.3.3. Equipos

� Agitador magnético y mecánico

� Espectrofotómetro de Absorción Atómica

� Balanza Analítica





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6

� pH-metro (Fisher Accumet Basic AB15)

4.4. NORMAS DE SEGURIDAD Y RECOMENDACIONES

4.4.1. Seguridad. Esta prueba no tiene mayores riesgos de accidente químico,

pero como la solución titulante es básica (de baja concentración) se debe usar

guantes y gafas, además de una mascara con filtros especiales para partículas

3M, ya que al momento de procesar y pesar la muestra se podrían aspirar

partículas de suelo.

4.4.2. Calibración del pH-metro. Primero debe revisarse que el electrodo se

encuentre en óptimas condiciones. Luego se debe lavar para eliminar residuos de

la solución de KCl en la que se almacena, sumergir en el buffer de pH 7.0 mínimo

durante 30 minutos, lavar y sumergir en buffer de pH 4.0 otros 30 minutos.

4.4.3. Manejo del espectrofotómetro de absorción atómica.

I. Accionar el interruptor de encendido del aparato.

II. Colocar la lámpara del elemento a analizar (para cada elemento metálico

existe una lámpara y unas condiciones especificas).

III. Ajustar la intensidad de la corriente de la lámpara (mA) recomendada por el

fabricante.

IV. Elegir la longitud de onda teórica de trabajo, según el elemento a trabajar.

V. Se abre el paso de los gases y se enciende la llama (primero se abre el aire

y luego el acetileno y para apagarla, primero se cierra el acetileno y luego el

aire).

VI. Ajustar la ganancia para seleccionar la longitud de máxima absorción en

condiciones experimentales, mientras se aspira el patrón de máxima

concentración.





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7

VII. Verificar la calibración del aparato y la orientación correcta de la llama con

un patrón de referencia.

VIII. Ajustar el cero de absorbancia en un blanco (agua destilada).

IX. Calibrar las condiciones ópticas y de llama con el patrón de mayor

concentración.

X. Introducir los estándares de concentraciones conocidas del elemento en

cuestión en la llama anotando las lecturas del aparato.

XI. Introducir la muestra problema en la llama.

XII. Hacer curva de concentración vs. lectura con la curva patrón y por

interpolación se obtiene la concentración de la muestra problema en ppm.

4.4.4. Todo el material de trabajo debe estar limpio y seco.

4.4.5. Como muestra patrón se usa “Serie Catalina”.

5. PROCEDIMIENTO

Se pesan 25g de suelo, se depositan en un vaso plástico taparrosca de 125mL y

se agregan 25mL de agua destilada, se agita mecánicamente la solución suelo

agua durante 1h a 200rpm, se lee el pH inicial y se reporta en la tabla de datos

para índice de encalado, se adicionan 10mL de la solución titulante de Ca(OH)2 de

concentración conocida y se llevan a agitación de nuevo durante 1h a 200rpm,

luego se lee el pH y se reporta en la respectiva tabla de datos. Se repite el mismo

procedimiento de adiciones de base hasta que el pH de la solución suelo agua sea

mayor o igual a 7. (Ver anexo 2).

5.1. PREPARACIÓN DE REACTIVOS

5.1.1. Solución titulante de Ca(OH)2 0,1N. Pesar 1.927g de Ca(OH)2 al 96%,

llevar a 500mL con agua destilada, agitar magnéticamente durante 1h, y como no





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8

hay disolución completa del hidróxido de calcio es necesario filtrar la solución lo

cual altera la concentración inicial de 0.1N, por eso se hace necesario determinar

la concentración de calcio en la solución filtrada por medio del espectrofotómetro

de Absorción Atómica. La solución filtrada debe ser almacenar en botellas bien

cerradas para ser protegida del CO2. (Ver anexo 3).

5.1.2. Procedimiento para determinar la concentración de calcio en la

solución titulante de Ca(OH)2 por A.A. Tomar 1mL de la solución titulante

filtrada, llevar a un matraz de 100mL, adicionar 4mL de oxido de lantano al 1% y

aforar con agua destilada. Determinar la concentración en ppm de calcio según la

curva de calibración con patrones de calcio. (Ver anexo 4).

5.1.2.1. Oxido de lantano al 10%. (Realizar en frío) 100g La2O3 en 500 mL de

agua destilada. Agregar poco a poco 250mL de HCl agitando permanentemente.

Realizar en cabina. Enfriar y aforar a 1L. (Ver anexo 5).

5.1.2.2. Óxido de lantano al 1%. Tomar 10mL de la solución de oxido de

lantano al 10% y aforar a 100mL con agua destilada (ver anexo 6).

5.1.3. Patrones de calcio. Se parte de titrisoles de 1000ppm de Ca o de una sal,

para preparar un patrón de 1000ppm. De este se hace la respectiva dilución para

obtener un patrón de 100ppm, luego preparar patrones de 2, 5, 10, 20 y 50ppm,

aforados a 50mL con previa adición de 4mL de oxido de lantano 1% (ver anexo 7).

Se usa la siguiente formula para realizar el cálculo de las diluciones:

)(

)()()(

)()()()(

oconcentradC

diluidoCdiluidoVoconcentradV

diluidoCdiluidoVoconcentradCoconcentradV

×=

×=×





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9

5.1.4. Curva de calibración. Hacer curva de calibración en el equipo de

Absorción Atómica con los patrones de calcio preparados y determinar la

concentración de calcio en la solución titulante.

5.2. REGISTRO DE DATOS

Utilizar el formato LAS-TRE-F04 para registrar los datos del ensayo de la

determinación del índice de encalado de un suelo. (Ver anexo 8).

5.3. CALCULOS Y RESULTADOS

El equipo de A.A. arroja la concentración de Ca en solución titulante como Xppm

calcio. Se convierte la concentración Xppm de calcio a Xg de calcio / Lsol.

Lsol

XgCa

mgCa

gCa

Lsol

XmgCa

11000

1

1=×

El volumen de solución titulante que se adicionó fue de 10mL a cada muestra de

suelo.

YgCaLsolLsol

XgCa=× 010,0

1

El valor de Yg calcio, indica entonces la cantidad de Ca que se está adicionando

a la solución de suelo con cada alícuota.

El peso de cada muestra de suelo fue de 25g. Entonces:

Kgsuelo

ZKgCa

Kgsuelo

YKgCa

gsuelo

YgCa==

2525





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10

El peso promedio de una hectárea (ha) de suelo con densidad aparente de 1, es

de 2´000.000Kg.

hasuelo

FKgCa

hasuelo

Kgsuelo

Kgsuelo

ZKgCa=×

1

000.0002́

Si se conoce la densidad aparente (da) del suelo, entonces se reemplaza el valor

J (2´000.000 Kg de suelo) por el valor que de la multiplicación de J*da.

El valor F arrojado por la ecuación anterior se convierte a Kg de CaCO3 / ha de

suelo, de la siguiente manera:

hasuelo

MKgCaCO

KgCa

KgCaCO

hasuelo

FKgCa 3

40

3100=×

El valor de M indica la cantidad de cal que se debe aplicar al suelo analizado por

cada hectárea.

5.4. REPORTE DE RESULTADOS

Los resultados se expresan como Kg de CaCO3 / ha de suelo y se entregan al

usuario en el formato LAS-TRE-F05. (Ver anexo 9).

6. RESPONSABLES

La responsabilidad recae sobre el analista el cual debe seguir la metodología

establecida para el análisis.

7. DOCUMENTO DE REFERENCIA





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11

El formato para diligenciar este documento es el establecido por la norma cero del

Laboratorio de Análisis Químico de Suelos y Foliares de la Universidad

Tecnológica de Pereira, llamada: Requisitos generales de competencia de

laboratorios de ensayo y calibración, Norma Técnica Colombiana NTC-ISO-IEC

17025.

LAB

OR

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OR

IO D

E A

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UÍM

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F

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LA

S-P

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- 06

Pági

na 12 d

e 19

12

ANEXOS

Anex

o 1. F

orm

ato para la recepción de muestras particu

lares.

LABORATORIO DE ANÁLISIS QUÍM

ICO DE SUELOS Y FOLIARES

UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PEREIRA

FORMATO DE RECEPCIÓN PARA M

UESTRAS PARTICULARES

Versión 02

Página 1 de 1

Código: LAS - TMM - F03

Vigencia: Abril 2009

# LAB

SOLICITANTE

FINCA

LOTE

MUNICIPIO

VEREDA

CULTIVO

EDAD

DENSIDAD

ANALISIS

R

evi

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Coo

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ad

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Fe

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F

ech

a:





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13

Anexo 2. Flujograma para el procedimiento de encalado.

Repetir proceso de adiciones de solución titulante hasta que el pH de la solución de suelo sea ≥ 7,0

Fin

Registrar en formato LAS-

TRE-F05

Graficar datos reportados en TRE-F05

Registrar en formato LAS-

TRE-F04

Adicionar 10mL de solución titulante de Ca(OH)2 (ver anexo 2)

Agitar mecánicamente 1h a 200rpm

Leer pH

Registrar pH en formato LAS- TRE-F04

Agregar 25mL de H2O destilada

Agitar mecánicamente 1h a 200rpm

Leer pH

Pesar 25g de suelo

Inicio





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14

Anexo 3. Flujograma para la preparación de la solución titulante de Ca(OH)2

0.1N .

Agitar magnéticamente 1h

Filtrar la solución y almacenar en frascos taparrosca para proteger del

CO2

Determinar la concentración real de calcio en la solución por absorción atómica

(ver anexo 3)

Fin

Pesar 1.927g de Ca(OH)2 al 96% y aforar a 500mL con H2O

destilada

Inicio





Página 15 de 19

15

Anexo 4. Flujograma para el procedimiento de determinación de la

concentración de calcio en la solución titulante por A.A.

Aforar a 100mL con agua destilada, con previa adición de 4mL de oxido de lantano al 1%

Determinar concentración de calcio según curva de calibración con patrones

de calcio (ver anexo 6)

Fin

Tomar 1mL de la solución titulante filtrada

Inicio





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16

Anexo 5. Flujograma para preparación de solución de óxido de lantano al

10%.

Anexo 6. Flujograma para preparación de solución de oxido de lantano al

1%.

Agregar poco a poco 250mL de HCl con agitación permanente (realizar en cabina)

Enfriar y aforar a 1L con agua destilada

Fin

Pesar 100g de La2O3 y aforar a 500mL (realizar en frío)

Inicio

Aforar a 100mLcon agua destilada

Fin

Inicio

Tomar 10mL de oxido de lantano al 10%





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17

Anexo 7. Flujograma para preparación de patrones de calcio.

Aforar a 100mL con agua destilada para obtener una solución de 100ppm de Ca

Llevar a 5 matraces de 50mL las siguientes cantidades: 1 - 2.5 - 5.0 – 10 – 25mL de la solución de 100ppm de Ca, para obtener patrones de 2, 5, 10, 20,

50ppm de Ca respectivamente

Adicionar a cada matraz 4mL de oxido de lantano al 1% y aforar con agua destilada

Fin

Inicio

Tomar 10mL de una solución estándar de 1000ppm de Ca

LAB

OR

AT

OR

IO D

E A

NÁ

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DE

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01

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9-04

-01

Códi

go:

LA

S-P

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- 06

Pági

na 18 d

e 19

18

Anex

o 8. F

orm

ato para reg

istro in

terno de datos y en

sayo

s.

LABORATORIO DE ANÁLISIS QUÍMICO DE SUELOS Y FOLIARES


FORMATO INTERNO PARA REGISTRO DE DATOS DE ENCALADO

Versión 01

Página 1 de 1

Código: LAS – TRE- F04


Valor de pH con las adiciones de 10mL de Ca(O

H) 2

# LAB

pH inicial

1

2

3

4 5

6

7 8

9

10

Re

visó

:

__

___

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9-04

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LA

S-P

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Pági

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e 19

19

Anex

o 9. F

orm

ato para entreg

a de resu

ltad

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INFORME DE ENSAYO

Versión: 01

Página 1 de 1

Código:

LAS-TRE-F05


Solicitante___________

________

______

Finca ______

________

Tipo de m

uestra _______________

Fecha ejecución del ensa

yo ___

__________

Dpto ______________

Tipo de análisis _______

____

____

Fecha de impresión _____________

Municipio ____________

__

# de muestras ___________

____

Fecha de registro ________

_____

Vereda _______

_______

Cultivo _______________

# de registro _____________

Teléfono ______________

Densidad _______________

Método:

Po

ten

cio

mé

tric

o,

con

ad

icio

nes

de

hid

róxi

do

de

calc

io.

INDICE DE ENCALADO "ROSARIO"

y =

0,0

003x +

4,4

417

R2 =

0,9

983

4,2

4,4

4,6

4,85

5,2

5,4

5,6

5,86

6,2

6,4

6,6

6,87

05

00

10

00

15

00

20

00

250

03

000

35

00

400

04

50

05

000

55

00

600

06

50

07

000

750

08

00

0

KgCaCO3/hasuelo

pH

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LABORATORIO DE ANÁLISIS QUÍMICO DE SUELOS Y FOLIARES DE LA UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE

PEREIRA PROCEDIMIENTO DE ENSAYO DEL MÉTODO PARA LA

IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS CELULOLÍTICOS EN SUELOS



Página 1 de 20

PROCEDIMIENTO DE ENSAYO PARA LA

IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS

CELULOLÍTICOS EN SUELOS




Elabora: _____________________

Revisa: _____________________

Aprueba: _____________________

Fecha: _____________________

Fecha: _____________________

Fecha: _____________________






Página 2 de 20

Página

1. OBJETO 3

2. ALCANCE 3

3. DEFINICIONES 3


4. CONTENIDO 4





5. PROCEDIMINETO 8





6. RESPONSABLES 10


ANEXOS 12






Página 3 de 20

1. OBJETO

Establecer el procedimiento microbiológico para la identificación de

microorganismos celulolíticos en suelos, en el Laboratorio de Análisis Químico de


2. ALCANCE

Este procedimiento se aplica a todas las muestras de suelos sometidas al

procedimiento de identificación de microorganismos celulolíticos, en el Laboratorio

de Análisis Químico de Suelos y Foliares de la Universidad Tecnológica de

Pereira.

3. DEFINICIONES

Los microorganismos celulolíticos se encargan de degradar la celulosa que es un

constituyente de los restos vegetales que se incorporan al suelo. Estos

organismos poseen enzimas hidrolíticas: endo beta- 1,4 glucanasa, exo beta-1,4

glucanasa y beta 1,4 glucosidasa que son inducidas por la presencia de celulosa.


G.A.: Grado Analítico

U.F.C.: Unidades Formadoras de Colonia






Página 4 de 20

4. CONTENIDO


La celulosa es un polímero cuya molécula tiene más de dos mil unidades de D-(+)-

Glucosa, que poseen un enlace glucosídico (1,4) de tipo beta. Las moléculas de

celulosa se unen mediante puentes de hidrógeno de dos tipos diferentes, dando

lugar a una estructura polimórfica. Se han reconocido, al menos, cuatro formas

cristalinas, además de la celulosa amorfa. De la hidrólisis se obtienen

celodextrinas, celobiosa y, finalmente, glucosa.

Aunque romper el enlace glucosídico β (1-4) es relativamente sencillo, los puentes

de hidrógeno en las formas cristalinas de la celulosa configuran cristales con una

disposición tan comprimida que ni el agua ni las enzimas pueden penetrar en ellos

(formas insolubles). La estructura cristalina sólo puede ser atacada por un tipo de

celulasas, las exoglucanasas, que son capaces de hidrolizar los enlaces

glucosídicos terminales, rompiendo dicha estructura cristalina y transformándose

en celulosa amorfa. En esas condiciones puede intervenir otro grupo de enzimas

del complejo enzimático, las endoglucanasas, continuando ya el proceso hasta la

degradación total de la molécula. La hidrólisis completa de la celulosa transcurre

en distintos episodios, en los que intervienen diferentes enzimas del sistema

enzimático celulolítico (sensu lato). Se distinguen tres fases en la degradación de

la celulosa:

1. Transformación de la celulosa insoluble (cristalina) en celulosa soluble

(amorfa).






Página 5 de 20

2. Transformación de celulosa soluble en oligosacáridos y celobiosa (dímero

de la glucosa).

3. Transformación de la celobiosa en glucosa.

En las dos primeras fases intervienen diversas enzimas que podemos incluir

dentro del grupo de las celulasas (sensu stricto), mientras que en la tercera está

presente una enzima que cataliza la ruptura del enlace beta del disacárido,

denominada (-Glucosidasa. El proceso se puede resumir según el siguiente

esquema:

Exoglucanasa Endoglucanasa ββββ-Glucosidasa CELULOSA (Cristalina) → CELULOSA (Amorfa) → CELOBIOSA → GLUCOSA

La intervención de la β-Glucosidasa resulta decisiva para que se produzca la

degradación completa de la celulosa, puesto que en caso contrario se produciría

un aumento de la concentración de celobiosa, que inhibe precisamente la acción

de exocelulasas y endocelulasas.

Para poner en evidencia la actividad de las Beta –D- Glucanasas se usa un

sustrato soluble agarizado (carboximetilcelulosa). La cajas de Petri se lavan con

una solución de cloruro de sodio 1M durante 5 minutos, luego por el agregado del

Rojo Congo al medio, este adquiere el color propio del colorante visualizándose

las zonas de hidrólisis como zonas decoloradas (claras) alrededor de la colonia y

rodeando a las hifas las cuales quedaron teñidas de rojo.






Página 6 de 20

4.2. PROCESAMIENTO Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS.

Las submuestras deben ser recolectadas en recipientes limpios y con

instrumentos previamente esterilizados con alcohol, la muestra compuesta

obtenida después del cuarteo debe ser recolectada en una bolsa plástica de cierre

hermético y esterilizada, esta se debe conservar a aproximadamente a 4ºC para

evitar un incremento de la microbiota original. Una vez llegue al LAS-UTP debe ser

debidamente etiquetada en la bolsa en la cual el usuario la trae y registrada en el

formato LAS-TMM-F04 (ver anexo 1), en un ambiente aséptico debe ser

homogenizada en un tamiz mesh 10 (estéril) y de nuevo guardada en una bolsa

plástica hermética y estéril, se debe almacenar a 4ºC hasta su análisis que deberá

hacerse en el menor tiempo.


4.3.1. Materiales

� Cajas de Petri

� Asas microbiológicas y de Hockey

� Tubos de ensayo y gradilla

� Erlenmeyer, beaker

� Frascos taparrosca autoclavables

� Pipetas graduadas de 1, 5, y 10mL

� Micropipeta de 10-100µL y puntas

� Mecheros Bunsen

� Probeta de 50, 100 y 1000mL

4.3.2. Reactivos






Página 7 de 20

� Agua destilada

� Agar agar

� Carboximetil celulosa

� Extracto de suelo

� NO3NH4

� NaCl 1M

� Rojo congo 0,1%

� Solución de NaCl 0.85%

4.3.3. Equipos

� Balanza analítica

� Agitador magnético con calentamiento

� Autoclave

� Incubadora

� Nevera

4.4. NORMAS DE SEGURIDAD Y RECOMENDACIONES.

4.4.1. Seguridad. En un laboratorio de microbiología se trabaja con

microorganismos que pueden ser patógenos, por tanto, hay que seguir unas

normas estrictas de higiene y seguridad. Este trabajo requiere una técnica

aséptica y por tanto ambiente limpio y ordenado.

4.4.2. Recomendaciones. Todo el material a emplearse debe estar exento de

impurezas y estéril. Usar siempre guantes y tapabocas que deberán desecharse

una vez terminado el trabajo. Al manejar una muestra debemos evitar que

microorganismos ajenos a los cultivos, la contaminen, o que los microorganismos






Página 8 de 20

e la muestra nos contaminen a nosotros. Los microorganismos deben manejarse

siempre alrededor de la llama. Se deben evitar los desplazamientos innecesarios

por el laboratorio, ya que se pueden crear corrientes que originen contaminaciones

o producir accidentes. No se debe pipetear nunca con la boca. Usar siempre

pipeteadores manuales. Dentro del laboratorio se utilizará una bata blanca (para

proteger la ropa) que habrá que quitarse al abandonar la sala de trabajo. Durante

las prácticas no se puede comer, fumar ni beber. Los cabellos largos deberán

estar recogidos. Cuando se manipulan microorganismos hay que evitar llevarse

las manos a la boca, nariz, ojos. Evitar hábitos como llevarse a la boca

instrumentos, lápices, etc. todo ello para evitar riesgos de contaminación. Las

mesas de trabajo se desinfectan diariamente al iniciar y terminar el trabajo y cada

vez que sea necesario (derrame de productos contaminados). Seguidamente se

lavarán las manos cuidadosamente con agua y jabón. El cultivo con que se trabaja

puede no ser patógeno, manéjelo como si lo fuera.

5. PROCEDIMIENTO

Pesar 2,5g de carboximetil celulosa, 0,5g de NO3NH4, 25 mL de solución de NaCl

0,85%, 7,5g de agar, 475mL de extracto de suelo. Llevar a ebullición hasta

disolución completa, ajustar el pH a 7,0. Esterilizar en autoclave a 115ºC durante

20 minutos. Servir en cajas de Petri. Una vez hayan solidificado llevar a la nevera.

Para sembrar, tomar 0.1mL de la dilución 10-1, adicionar sobre la caja de Petri que

debe estar a temperatura ambiente sembrar por superficie con el asa de Hockey;

repetir el procedimiento de igual manera con las otras diluciones. Incubar a 28ºC

durante 48h. Para revelar se adiciona NaCl 1M a la superficie de la caja durante 5

minutos, luego se desecha y se agrega el rojo congo 0,1% durante 30 minutos, y

se lava con agua destilada hasta que los halos de las colonias puedan ser






Página 9 de 20

observados. Contar UFC que presenten reacción positiva en el agar (colonias con

halo). Se hacen tres repeticiones por cada dilución. (Ver anexo 2).


5.1.1. Preparación de diluciones: La dilución 10-1, se prepara adicionando 10g

de la muestra de suelo a analizar en un frasco que contiene 90mL de NaCl 0.85%.

La dilución 10-2 se prepara tomando 1mL de la dilución 10-1 y agregándolo a un

tubo de ensayo con 9mL de NaCl 0.85%. La dilución 10-3 se prepara tomando 1mL

de la dilución 10-2 y adicionándolo a un tubo de ensayo con 9mL de NaCl 0.85%.

Las otras dos diluciones se preparan de igual manera. (Ver anexo 3).

5.1.1.1. Solución salina (NaCl 0.85%). Pesar 8.5g de NaCl y aforar a 1000mL

con agua destilada. (Ver anexo 4).

5.1.2. Preparación de extracto de suelo. Pesar 100g de un suelo cualquiera,

pasarlo por un tamiz Nº 10, mezclarlo con 900mL de agua destilada, agitar y dejar

reposar por 3 días, filtrar la solución y esterilizarla. (Ver anexo 5).

5.1.3. Preparación de solución de NaCl 1M. Pesar 58.44g de NaCl y aforar a 1L


5.1.4. Preparación de solución de rojo conga 0.1%. Pesar 0.1g de rojo congo y

aforar a 100mL. (Ver anexo 7).



identificación de microorganismos celulolíticos. (Ver anexo 9).






Página 10 de 20

5.3. CÁLCULOS Y RESULTADOS

Seleccionar las cajas que presenten entre 20 y 200 UFC con halo de degradación.

Contar todas las colonias seleccionada de cada caja. Si corresponden a la misma

dilución hallar la media aritmética de los dos valores y multiplicar por el factor de

dilución. Si cajas de dos diluciones consecutivas se encuentren en el rango 20 y

200 colonias, se hace el recuento para cada una de las diluciones, y se reporta la

media aritmética de las dos diluciones, a menos que el recuento mayor contenga

dos veces al menor, en este caso se reporta el recuento menor.

Si no hay presencia de colonias en las cajas correspondientes a la dilución mas

concentrada se informa como menor de 1 multiplicado por el valor de la dilución.

InoculadoVolumenDiluciónInversoColoniasN

gsuelo

CFU ..º.

.. ××=


Los resultados se expresan en unidades formadoras de colonia por gramo de

suelo (U.F.C. / g de suelo) y se le entregan los resultados al usuario en el formato

LAS-TRE-F07 (ver anexo 9).

6. RESPONSABLES








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7. DOCUMENTOS DE REFERENCIA





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ANEXOS

Anex

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icrobiológico.




FORMATO DE RECEPCIÓN DE M

UESTRAS PARA ANALISIS M

ICROBIOLÓGICO

Versión 01

Página 12 de 1



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SOLICITANTE

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Anexo 2. Flujograma de procedimiento para siembra de microorganismos

celulolíticos.

Agregar 950mL de extracto de suelo y 50mL de NaCl 0.85% (ver anexos 3 y 4)

Llevar a ebullición para disolución completa

Ajustar pH a 7.0

Esterilizar en autoclave a 115ºC por 20 minutos

A

Enfriar, servir en cajas de Petri y dejar

solidificar

Inocular cada caja con 0,1mL de cada una de las diluciones decimales

consecutivas (ver anexo 2)

Pesar 5.0g de carboximetil celulosa, 1.0g de NO3NH4, 15g de agar

Inicio






Página 14 de 20

Sembrar por superficie con asa de Hockey, invertir las cajas e incubar a

28ºC durante 48 horas

Revelar los halos de celulólisis adicionando NaCl 1M a la superficie de

la caja por 5 minutos (ver anexo 5)

A

Desechar el NaCl y adicionar rojo congo al 0.1% por 30 minutos (ver anexo 6)

Contar UFC que presenten halo de celulólisis

Lavar con agua destilada hasta que se observen los halos

Registrar el número de colonias en el formato

LAS-TRE-F06

Fin






Página 15 de 20

Anexo 3. Flujograma para la preparación de diluciones.

Tomar 1mL de esta dilución y agregar a un tubo de ensayo que contiene 9mL de NaCl

0.85% estéril (dilución 10-2)

Tomar 1mL de la dilución 10-2 y agregar a un tubo de ensayo que contiene 9mL de

NaCl 0.85% estéril (dilución 10-3)

Tomar 1mL de la dilución 10-3 y agregar a un tubo de ensayo que contiene 9mL de


Tomar 1mL de la dilución 10-4 y agregar 9mL de NaCl 0.85% estéril (dilución 10-5)

Fin

Pesar 10g de suelo y mezclar con 90mL de NaCl 0.85% (dilución 10-1)

Inicio






Página 16 de 20

Anexo 4. Flujograma para la preparación de solución salina 0.85%.

Anexo 5. Flujograma para la preparación de extracto de suelo.

Llevar a 1L con agua destilada

Fin

Pesar 8.5g de NaCl

Inicio

Mezclar con 900mL de agua destilada y dejar en reposos tres días

Filtrar y esterilizar

Fin

Pesar 100g de suelo

Inicio






Página 17 de 20

Anexo 6. Flujograma para la preparación de NaCl 1M.

Anexo 7. Flujograma para la preparación de rojo congo 0.1%.

Aforar a 1L con agua destilada

Fin

Pesar 58.44g de NaCl

Inicio

Aforar a 1L con agua destilada

Fin

Pesar 1.0g de rojo congo

Inicio

LAB

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Anex

o 8. F

orm

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terno para registro de datos y en

sayo

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FORMATO INTERNO PARA REGISTRO DE DATOS M

ICROBIOLÓGICOS

Versión 01

Página 18 de 1



Conteo de UFC

# LAB

Dilución 10-1

Dilución 10-2

Dilución 10-3

Dilución 10-

4 Rep

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Anex

o 9. F

orm

ato para entreg

a de resu

ltados de an

álisis m

icrobiológicos.




INFORME DE ENSAYO

Versión: 01

Página 1 de 1

Código:

LAS-TRE-F07


Solicitante___________

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Tipo de m

uestra _______________


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Dpto. ________

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Den

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GRUPO FUNCIONAL

# LAB

Degradadores de Urea

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s GERMAN ANTONIO M

UNERA VELEZ

Universidad Tecnológica de Pereira – Escu

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nología Quím

ica – Vereda la Julita – Teléfono (6) 3213295






Página 20 de 20

Anexo 10. Desechos. Los residuos de medios, muestras, microorganismos,

guantes, tapabocas y demás, deben depositarse en bolsas especiales marcadas

como “Residuos biológicos” y no se deben mezclar con las demás basuras. Se

deberá contar con una empresa especializada en la recolección y manejo de este

tipo de residuos.



IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DEGRADADORES DE UREA EN SUELOS



Página 1 de 17



DEGRADADORES DE UREA EN SUELOS




Elabora: _____________________

Revisa: _____________________

Aprueba: _____________________

Fecha: _____________________

Fecha: _____________________

Fecha: _____________________






Página 2 de 17

Página

1. OBJETO 3

2. ALCANCE 3

3. DEFINICIONES 3


4. CONTENIDO 4





5. PROCEDIMINETO 7





6. RESPONSABLES 9


ANEXOS 10






Página 3 de 17

1. OBJETO

Establecer el procedimiento microbiológico para la identificación de

microorganismos degradadores de urea en suelos, en el Laboratorio de Análisis

Químico de Suelos y Foliares de la Universidad Tecnológica de Pereira.

2. ALCANCE


procedimiento de identificación de microorganismos degradadores de urea, en el


Tecnológica de Pereira.

3. DEFINICIÓN

La urea es la forma más conveniente para la fijación del nitrógeno en el suelo y al

aplicarla esta se hidroliza y para su solubilización necesita la presencia de la

enzima Ureasa que es producida por bacterias, actinomicetos y hongos. Con la

reacción de la enzima, la urea se transforma en amonio el cual luego es nitrificado

por otros microorganismos, donde al final del proceso se obtiene NO3-.









Página 4 de 17

4. CONTENIDO


La ureasa es una enzima del ciclo del nitrógeno; cataliza la reacción de hidrólisis

de la urea en amonio y dióxido de carbono, y se encuentra presente en plantas

superiores y en microorganismos (particularmente bacterias). Durante largo tiempo

ha sido estudiada en los suelos puesto que afecta a reacciones de pérdida de

fertilizantes nitrogenados en forma de urea, muy utilizados en agricultura; tiene por

tanto importancia en el campo agrotecnológico. Su presencia en los suelos tiene

un origen microbiano.

En medios de cultivo de agar Urea es necesario que haya en el medio, una fuente

de carbono, nitrógeno, vitaminas, y aporte de nutrientes esenciales para el

desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato constituyen el sistema buffer, el rojo de

fenol es el indicador de pH y la urea es el sustrato de la enzima ureasa.

Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrógeno

proveniente de la urea, la hidrolizan, liberando amoniaco y dióxido de carbono.

Estos productos metabólicos alcalinizan el medio, haciendo virar el rojo-fucsia

fenol del amarillo al rojo-fucsia.

4.2. PROCESAMIENTO Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS










Página 5 de 17

evitar un incremento de la microbiota original. Una vez llegue al debe ser


formato LAS-TMM-F04 (ver anexo 1), en un ambiente aséptico debe ser




4.3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO

4.3.1. Materiales

� Cajas de Petri



� Erlenmeyer, beaker, frascos taparrosca autoclavables



� Mecheros Bunsen


4.3.2. Reactivos

� Agua destilada

� Agar base Urea

� Solución de urea al 40% estéril


� Diluciones 10-1 hasta 10-5






Página 6 de 17

4.3.3. Equipos



� Autoclave

� Incubadora

� Nevera

4.4. NORMAS DE SEGURIDAD Y RECOMENDACIONES









de la muestra nos contaminen a nosotros. Los microorganismos deben manejarse














Página 7 de 17






5. PROCEDIMIENTO

Pesar 2,4g de agar base Urea, adicionar 95mL de agua destilada. Llevar a

ebullición hasta disolución completa. Esterilizar en autoclave a 115ºC durante 20

minutos. Enfriar a 50ºC y añadir 5mL de solución de urea al 40%. Mezclar bien y

distribuir en cajas de Petri. Una vez hayan solidificado llevar a la nevera durante

toda la noche para una buena solidificación del medio. Tomar 0.1mL de la dilución

10-1, adicionar sobre la caja de Petri que debe estar a temperatura ambiente

(sacar de la nevera y dejar al lado del mechero, no se puede calentar porque las

altas temperaturas degradan la urea), sembrar por superficie con el asa de

Hockey; repetir el procedimiento de igual manera con las otras diluciones. Incubar

a 35ºC durante 24h. Se hacen tres repeticiones por cada dilución. Contar UFC que

presenten reacción positiva en el agar (colonias con coloración fucsia-rojo). (Ver

anexo 2).


5.1.1. Preparación de diluciones. La dilución 10-1, se prepara adicionando 10g









Página 8 de 17

de la dilución 10-2 y adicionándolo a un tubo de ensayo con 9mL de NaCl 0.85%.




5.1.2. Solución de urea al 40%. Pesar 40g de urea (G.A.) aforar a 100mL con

agua destilada, como la urea se degrada a temperaturas altas no se puede

autoclavar esta solución, entonces se debe hacer una filtración por membrana

para su esterilización. (Ver anexo 5).



determinación del índice de encalado de un suelo. (Ver anexo 6).
















Página 9 de 17


gsuelo

CFU ..º.

.. ××=



suelo (U.F.C. / g de suelo) y se le entregan al usuario en el formato LAS-TRE-F07

(ver anexo 7).

6. RESPONSABLES








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7

ANEXOS

Anexo 1. Formato de recepción de muestras para análisis microbiológico.



FORMATO DE RECEPCIÓN DE MUESTRAS PARA ANALISIS MICROBIOLÓGICO

Versión 01

Página 1 de 1



# LAB

SOLICITANTE

FINCA

LOTE

MUNICIPIO

VEREDA

CULTIVO

EDAD

PROFUNDIDAD DE

MUESTREO

ANALISIS

R

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só:

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Anexo 2. Flujograma de procedimiento para la identificación de

microorganismos degradadores de urea.

Guardar en la nevera a 4ºC durante una noche, para mejor solidificación

A

Agregar 95mL de H2O destilada



Llevar a 50ºC ± 3

Adicionar 5mL de solución de urea al 40% (estéril) y mezclar (ver anexo 4)

Servir en cajas de Petri, entre 20 y 25mL, dejar solidificar

Pesar 2,4g de Agar Base Urea

Inicio






Página 12 de 17

Llevar las cajas a temperatura ambiente con calentamiento suave



Sembrar por superficie con asa de Hockey, invertir las cajas e incubar a 35ºC

durante 24 horas

Registrar el número total de colonias en el formato

LAS-TRE-F06

Contar UFC que presenten coloración rojo-fucsia

Fin

A






Página 13 de 17



Fin

Tomar 1mL de esta dilución y agregar a un tubo de ensayo que contiene 9mL de


Tomar 1mL de la dilución 10-2 y agregar a un tubo de ensayo que contiene 9mL

de NaCl 0.85% estéril (dilución 10-3)

Tomar 1mL de la dilución 10-3 y agregar a un tubo de ensayo que contiene 9mL

de NaCl 0.85% estéril (dilución 10-4)

Inicio







Página 14 de 17


Anexo 5. Flujograma para la preparación de solución de urea al 40%.

Aforar a 100mL con H2O

Acondicionar el sistema de filtración dentro de la cabina de flujo laminar

Adicionar la muestra a filtrar

Aplicar vacío parcial mediante la bomba conectada al sistema de filtración.


Fin

Pesar 8,5g de NaCl

Inicio

Inicio

Pesar 40g de urea (G.A.)

Fin

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Pági

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7

Anexo 6. Formato interno para registro de datos y ensayos.



FORMATO INTERNO PARA REGISTRO DE DATOS MICROBIOLÓGICOS

Versión 01

Página 1 de 1



Conteo de UFC

# LAB

Dilución 10-1

Dilución 10-2

Dilución 10-3

Dilución 10-4

Reporte UFC/g suelo

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Pági

na 16 d

e 1

7

Anexo 7. Formato para entrega de resultados de análisis microbiológicos.



INFORME DE ENSAYO

Versión: 01

Página 1 de 1

Código:

LAS-TRE-F07


Solicitante_________________________

Finca ______________

Tipo de muestra _______________

Fecha ejecución del ensayo _____________

Dpto ______________

Tipo de análisis _______________


Municipio ______________

# de muestras _______________

Fecha de registro _____________

Vereda ______________

Cultivo _______________

# de registro _____________

Teléfono ______________

Densidad _______________

GRUPO FUNCIONAL

# Lab


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Proteolíticos

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Celulolíticos

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s GERMAN ANTONIO MUNERA VELEZ

Universidad Tecnológica de Pereira – Escuela de Tecnología Química – Vereda la Julita – Teléfono (6) 3213295






Página 17 de 17





tipo de residuos.



IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS PROTEOLÍTICOS EN SUELOS



Página 1 de 19



PROTEOLÍTICOS EN SUELOS




Elabora: _____________________

Revisa: _____________________

Aprueba: _____________________

Fecha: _____________________

Fecha: _____________________

Fecha: _____________________






Página 2 de 19

Página

1. OBJETO 3

2. ALCANCE 3

3. DEFINICIONES 3


4. CONTENIDO 4





5. PROCEDIMINETO 7





6. RESPONSABLES 9


ANEXOS 11






Página 3 de 19

1. OBJETO

Establecer el procedimiento microbiológico paral a identificación de

microorganismos proteolíticos en suelos, en el Laboratorio de Análisis Químico de


2. ALCANCE


procedimiento de identificación de microorganismos proteolíticos, en el Laboratorio

de Análisis Químico de Suelos y Foliares de la Universidad Tecnológica de

Pereira.

3. DEFINICIÓN

Los microorganismos proteolíticos son los encargados de desintegrar las

moléculas proteicas a polipéptidos y luego a aminoácidos (humificación), después

sufren el proceso de nitrificación pasando por NH3 y NO2- hasta llegar a NO3

- que

es la forma en la cual la mayoría de plantas absorben el nitrógeno.









Página 4 de 19

4. CONTENIDO


Las paredes y membranas celulares contienen diferentes e innumerables

proteínas, las cuales juegan diversos roles como catalizadores de reacciones

celulares (enzimas) o como material estructural (en membranas y paredes

celulares).

Los aminoácidos, junto con las proteínas, son usualmente considerados

principalmente como fuentes de nitrógeno, aunque también pueden actuar como

única fuente de carbono para algunos microorganismos. La mayoría de los

microorganismos son capaces de asimilar un gran rango de aminoácidos, aminas

y amidas. Un constituyente común en los medios de cultivo para la detección de

proteasas es la caseína (proteína de la leche), la cual al ser hidrolizada da como

resultado todos los aminoácidos comunes, exceptuando el triptófano que es

destruido durante la hidrólisis. Una vez hidrolizada la caseína se convierte en sus

aminoácidos componentes, los cuales transmiten la luz en vez de reflejarla como

la caseína coloidal. Las colonias de bacterias productoras de proteasas presentan

un halo claro de hidrólisis alrededor, producto de la degradación de la caseína por

parte de las proteasas secretadas al medio.

4.2. PROCESAMIENTO Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS.










Página 5 de 19

evitar un incremento de la microbiota original. Una vez llegue al LAS-UTP debe ser


formato LAS-TMM-F04 (ver anexo 1); en un ambiente aséptico debe ser





4.3.1. Materiales

� Cajas de Petri



� Erlenmeyer, beaker

� Frascos taparrosca autoclavables



� Mecheros Bunsen


4.3.2. Reactivos

� Agua destilada

� Agar agar

� KH2PO4

� Extracto de levadura

� MgSO4.7H2O

� Extracto de suelo






Página 6 de 19

� HCl 0.1N


� Diluciones 10-1 hasta 10-5

4.3.3. Equipos



� Autoclave

� Incubadora

� Nevera

4.4. NORMAS DE SEGURIDAD Y RECOMENDACIONES.









de la muestra nos contaminen a nosotros. Los microorganismos deben manejarse











Página 7 de 19









5. PROCEDIMIENTO

Pesar 5g de caseína, 0,05g de extracto de levadura 0,75g de KH2PO4, 0,25g de

MgSO4.7H2O, 25 mL de solución de NaCl 0,85%, 7,5g de agar, 475mL de extracto

de suelo, todo esto se adiciona a un erlenmeyer de 1L. Llevar a ebullición hasta

disolución completa, ajustar el pH a 6,8. Esterilizar en autoclave a115ºC durante

20 minutos. Servir en cajas de Petri. Una vez hayan solidificado llevar a la nevera

durante para una mejor solidificación. Para sembrar, tomar 0.1mL de la dilución

10-1, adicionar sobre la caja de Petri que debe estar a temperatura ambiente

sembrar por superficie con el asa de Hockey; repetir el procedimiento de igual

manera con las otras diluciones. Incubar a 28ºC durante 48h. Para revelar los

halos de proteólisis se adiciona a la superficie HCl 0.1N durante 5 minutos. Contar

UFC que presenten reacción positiva en el agar (colonias con halo). Se hacen tres

repeticiones por cada dilución. (Ver anexo 2).






Página 8 de 19


5.1.1. Preparación de diluciones: La dilución 10-1, se prepara adicionando 10g




De la dilución 10-2 y adicionándolo a un tubo de ensayo con 9mL de NaCl 0.85%.




5.1.2. Preparación de extracto de suelo. Pesar 100g de un suelo cualquiera,

pasarlo por un tamiz Nº 10, mezclarlo con 900mL de agua destilada, agitar y dejar

reposar por 3 días, filtrar la solución y esterilizarla. (Ver anexo 5).

5.1.3. Preparación de HCl 0.1N. Tomar 10mL de HCl 1.0N y aforar a 100mL. (Ver

anexo 6).



identificación de microorganismos proteolíticos. (Ver anexo 8).










Página 9 de 19








gsuelo

CFU ..º.

.. ××=



suelo (U.F.C. / g de suelo) y se le entregan los resultados al usuario en el formato

LAS-TRE-F07 (ver anexo 8).

6. RESPONSABLES











Página 10 de 19



17025.

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ANEXOS

Anex

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FORMATO DE RECEPCIÓN DE M

UESTRAS PARA ANALISIS M

ICROBIOLÓGICO

Versión 01

Página 11 de 1



# LAB

SOLICITANTE

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CULTIVO

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Página 12 de 19

Anexo 2. Flujograma de procedimiento para siembra de microorganismos

proteolíticos.

Agregar 950mL de extracto de suelo y 50mL de NaCl 0.85% (ver anexo 3 y 4)


Ajustar pH a 6.8


Enfriar, servir en cajas de Petri y dejar solidificar



Pesar 10g de caseína, 0.1g de extracto de levadura, 1.5g de KH2PO4, 0.5g MgSO4, 15g de agar.

Inicio

A






Página 13 de 19

Sembrar por superficie con asa de Hockey, invertir las cajas e incubar a

28ºC durante 48 horas

A

Fin

Revelar los halos de proteólisis adicionando HCl 0.1N a la superficie de

la caja por 5 minutos (ver anexo 5)

Contar UFC que presenten halo de proteólisis

Registrar el número total de colonias en el formato

LAS-TRE-F06






Página 14 de 19


Tomar 1mL de esta dilución y agregar a un tubo de ensayo que contiene 9mL de NaCl


Tomar 1mL de la dilución 10-2 y agregar a un tubo de ensayo que contiene 9mL de NaCl


Tomar 1mL de la dilución 10-3 y agregar a un tubo de ensayo que contiene 9mL de NaCl



Inicio


Fin






Página 15 de 19


Anexo 5. Flujograma para la preparación de extracto de suelo.


Fin

Pesar 8.5g de NaCl

Inicio

Mezclar con 900mL de agua destilada y dejar en reposos tres días

Filtrar y esterilizar

Fin

Inicio

Pesar 100g de suelo






Página 16 de 19

Anexo 6. Flujograma para la preparación de HCl 0.1N.

Aforar a 100mL con agua destilada

Inicio

Tomar 10mL de HCl 1.0N

Fin

LAB

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Anex

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FORMATO INTERNO PARA REGISTRO DE DATOS M

ICROBIOLÓGICOS

Versión 01

Página 17 de 1



Conteo de UFC

# LAB

Dilución 10-1

Dilución 10-2

Dilución 10-3

Dilución 10-

4 Rep

orte UFC/g suelo

R

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Anex

o 8. F

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icrobiológicos.




INFORME DE ENSAYO

Versión: 01

Página 1 de 1

Código:

LAS-TRE-F07


Solicitante_____

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GRUPO FUNCIONAL

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Celulolíticos

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Metodología:

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GERMAN ANTONIO M

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ica – Vereda la Julita – Teléfono (6) 3213295






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tipo de residuos.

PROCEDIMIENTO DE ENSAYO PARA DETERMINAR EL ÍNDICE DE ...

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