Sección Inmunología. Instituto de Investigaciones Médicas

“Alfredo Lanari”

Proteínas:

Conformadas por: C – H – O – N – S, que forman aminoácidos

Estructura: los aminoácidos forman péptidos formando largas cadenas que se pliegan entre sí dando forma a las estructuras proteicas complejas.

Proteinograma:

Cuatificación de Proteínas Totales y sus fracciones con métodos instrumentales adecuados (densitometría, colorimetría, nefelometría, turbidimetría)

Separación de las proteínas presentes en sangre y orina y su análisis cualitativo, para la detección de anormalidades proteicas.

Método de elección para el estudio de las proteínas: electroforesis sobre sostén.

Instrumental:

Sostén o soporte: acetato de celulosa; agar/agarosa; gel; poliacrilamida, etc.

Buffer: soluciones iónicas de pH alcalino. Buffer Veronal sódico/Michaelis.

Voltaje: otorgado mediante fuente de energía. Voltaje 220 V; ≈ 7mA por tira.

Material a separar: suero fresco o congelado a -20ºC; orina de 24 hs; LCR.

¿Suero o plasma?

Plasma: encontramos proteínas como el fibrinógeno, la protrombina, el factor V y el factor VIII. Corren electroforéticamente en la fracción Gama del proteinograma. Se puede confundir con componente monoclonal.

Suero: las proteínas anteriormente mencionadas son consumidas en la formación del coágulo. No existen interferencias.

Orina de 24 hs: concentrada de acuerdo a la proteinuria del paciente.

Fracciones de un proteinograma:Albúmina:

o Valor normal: 3.0 - 5.0 g/l.o Indicadora del estado nutricional del paciente.

Fracción Alfa 1 (α1)o α1 antitripsinao α1 antiquimiotripsinao α1 glucoproteína ácidao α1 fetoproteína

Fracción Alfa 2 (α2)o Haptoglobinao Ceruloplasminao α2 macroglobulinao Lipoproteinas

Fracción Beta (β)o Transferrinao β2 microglobulinao Componentes C3; C4 y C5 del complemento

Fracción Gamma (γ)o Inmunoglobulinas IgG; IgA; IgM, IgD, IgE

ALBÚMINA

ALFA 1 (α1)ALFA 2 (α2)BETA (β)

GAMMA

+

-

PROTEÍNA AUMENTO DISMINUCIÓN

Albúmina

o Hemoconcentracióno Bisalbuminemia

o Lesión hepáticao Malnutricióno Pérdida de proteínas por orina

Alfa 1 (α1)

o Enfermedades inflamatorias agudas o crónicaso Anormalidades hematológicas

o Lesión hepáticao Déficit de α1 antitripsinao Malnutrición

Alfa 2 (α2)

o Reactante de fase aguda

o Síndrome nefrótico

o Suero hemolizadoo Tumores malignos

o Anemia hemólíticao Hepatitis agudao Lesiones hepáticas severas

Corrida electroforética NORMAL:

Beta (β)

o Embarazo

o Tumores

o Anemia ferropénica crónicao Hepatitis aguda

o Enfermedades inflamatoriaso Síndrome nefróticoo Pérdida de proteínas

Gama (γ)

o Aumento policlonal de las Inmunoglobulinaso Aumento monoclonalo Aumento biclonal o biclonalidad

o Pérdida de proteínaso Síndromes deficitarioso Linfomaso Leucemiaso Mieloma micromolecular

Corrida electroforética NORMAL:

o Hepatopatías agudas (Cirrosis biliar primaria; Hepatitis Autoinmune)

o Infecciones crónicas (Tuberculosis; HIV; parasitosis; malaria)

o Enfermedades autoinmunes (Lupus Eritematoso sistémico; Artritis Reumatoidea; Síndrome de Sjögren, Polimiositis)

Aumento policlonal de las Inmunoglobulinas: varios clones de Linfocitos B se activan frente a un estímulo, generando un aumento difuso de las inmunoglobulinas.

Aumento monoclonal de las Inmunoglobulinas: un único clon de Linfocitos B y con una especificidad única, genera un único tipo de Inmunoglobulina en forma de banda homogénea.

¿ Cómo estudiar una banda monoclonal?

o Dosaje de Proteínas Totales y Albúminao Dosaje de Inmunoglobulinaso Determinar “identidad estructural” de la banda

• Tipo de cadena pesada: IgG; IgA; IgM; IgD• Tipo de cadena liviana: Kappa o Lambda

o Métodos de identificación:• Inmunoelectroforesis en suero y orina de 24 hs.• Inmunofijación en suero. Eventualemente Inmunofijación en orina• Difusión simple en orina de 24 hs.

Inmunoelectroforesis:1.Electroforesis en agar o gel2.Aplicación de antisuero mono o poli específico3.Difusión por 24 hs.4.Lavado 24 hs5.Revelado

Inmunofijación:1.Electroforesis en gel2.Aplicación de antisuero monoespecífico3.Difusión 15 min.4.Lavado y revelado

Aumento biclonal de las Inmunoglobulinas: dos clones de linfocitos B con especificidad única o diferente, generan dos bandas homogéneas.

Suero: doble banda en zona de Beta y Gamma lenta.

Orina de 24 hs concentrada: Albúmina

Inmunofijación en suero: doble especificidad: IgG e IgA, cadena liviana Kappa.

Disminución de las Inmunoglobulinas

Hipogamma común variable del adulto:

Mieloma micromolecular

Suero: disminución de las Inmunoglobulinas y banda en zona de Gamma rápida.

Orina de 24 hs: banda en zona de Gama rápida.

Inmunofijación en suero: banda de cadena liviana Lambda

IgGIgA

IgM

Kappa Lambda

Difusión simple de orina: cadena liviana Lambda.

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