Proyecto de Productos Listo

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EFECTO DE DOSIS ELEVADAS DE CLORANFENICOL EN LA POBLACIÓN LEUCOCITARIA DE Cavia porcellus, EN EL PERIODO SEPTIEMBRE (2015) - DICIEMBRE (2015)” Autor: TARRILLO DÁVILA MIGUEL ÁNGEL Asesor: ESPINOZA VALERA, CARLOS A.

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

“EFECTO DE DOSIS ELEVADAS DE CLORANFENICOL EN LA POBLACIÓN LEUCOCITARIA DE Cavia porcellus, EN EL PERIODO

SEPTIEMBRE (2015) - DICIEMBRE (2015)”

Autor:

TARRILLO DÁVILA MIGUEL ÁNGEL

Asesor:

ESPINOZA VALERA, CARLOS A.

Lambayeque, Septiembre del 2015

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1. Título del Proyecto“EFECTO DE DOSIS ELEVADAS DE CLORANFENICOL EN LA

POBLACIÓN LEUCOCITARIA DE Cavia porcellus”

2. Personal Investigador 2.1. Autor:

Tarrillo Dávila Miguel Ángel

2.2. Asesor: Espinoza Valera, Carlos A.

3. Carrera profesional/Especialidad Escuela Profesional de Biología con mención en el área Microbiología –

Parasitología.

4. Régimen de Investigación:Orientada - Experimental

5. Local o institución donde se desarrollara el proyecto Laboratorio de la especialidad de Microbiología - Parasitología de la Facultad

de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional “Pedro Ruiz Gallo”,

Provincia de Lambayeque, Departamento de Lambayeque.

6. Duración del proyecto: 10 semanas

7. Fecha de Inicio: 29 de Septiembre del 2015

8. Fecha de Término: 24 de Noviembre del 2015

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9. Cronograma de Actividades

ACTIVIDADES / TIEMPO semanas

2014-2015

SEPTIEMBRE OCTUBRE NOVIEMBRE

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

FASE DE PLANEAMIENTO

Revisión bibliográfica. X

Elaboración del proyecto. X

Presentación del proyecto. X

FASE DE EJECUCION

Recolección de muestra. X

Procesamiento de muestra. X X X

Registro de datos X X X

FASE DE COMUNICACIÓN

Análisis e interpretación. X

Elaboración del informe. X

Presentación del informe. X

10. Recursos disponibles10.1 Personal Este proyecto contará con el apoyo del personal técnico del Área de

Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas en

la Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo.

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11. Presupuesto y Financiamiento 11.1. Presupuesto

A.- Bienes Material de escritorio

Papel bond………………………………...S/ 5.00

Folders………………………..……….…..S/3.00

Impresiones………………………………..S/11.00

Material de laboratorio Tubos de ensayo……………………..……..S/3.00

Laminas portaobjetos………………...……..S/3.00

Alcohol………………………………………..S/7.00

Algodón…………………………..….……….S/6.00

Guantes…………………………..………….S/5.00

Pabilo……………………………...…………S/3.00

Jeringas de 1mL y 5 mL…………………...S/8.00

Material Biológico 1 cobayo…………………………………….S/20.00

Cloranfenicol………………..……………....S/10.00

B.- Servicios

Pasajes……………………………..……….S/40.00

TOTAL……...………..…………………………… S/124.00

12. Financiamiento El presente proyecto será financiado por el responsable, con ayuda de

materiales y equipo del Área de Microbiología y Parasitología de la

Facultad de Ciencias Biológicas en la Universidad Nacional Pedro Ruiz

Gallo.

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“EFECTO DE DOSIS ELEVADAS DE CLORANFENICOL EN LA POBLACION LEUCOCITARIA DE Cavia porcellus”

1. INTRODUCCIÓN

El consumo inadecuado y excesivo de ciertos medicamentos viene acarreando en la actualidad diversos problemas en la salud. Se sabe que los antibióticos, al ser consumidos en dosis elevadas y de manera continua acarrean efectos secundarios sobre la médula ósea roja, el sistema linfoide, eritroide y demás células del organismo. Uno de esos problemas es la disminución en la población plaquetaria en sangre, conocida como “Trombocitopenia”, definida como la disminución del número normal de plaquetas (< 150,000 plaq./mm3) en la sangre circulante. Existen diversos tipos de trombocitopenia, siendo la más común en la actualidad la Trombocitopenia Inducida por Fármacos (TIF).En el presente trabajo se estudiara el efecto sobre la población plaquetaria de dosis elevadas de un antibiótico (cloranfenicol) en cobayos hembras de mediana edad

Los productos biológicos han sido desde su aparición de gran ayuda para la prevención (vacunas), tratamiento (antibióticos) y cura (sueros, antisueros, anticuerpos monoclonales) de diferentes enfermedades que aquejan a la humanidad. Desde entonces se notó que el uso excesivo (dosis elevadas) y el tratamiento prolongado con dichos productos traían consigo efectos adversos no deseados, esto por la toxicidad inherente a dichos medicamentos o por la idiosincrasia de cada individuo (Cuellar, 2003; Fernández, 2006; Flores et. al.1992). Se sabe que el consumo excesivo de antibióticos trae consigo efectos secundarios en el plasma y células sanguíneas (trombocitopenia,agranulocitosis, lupus, alergias entre otros); las vacunas aunque en su mayoría son usadas para la inmunización, algunas presentan afectos adversos de hipersensibilidad (respuestas inmunitarias exageradas como vómitos, dolor de cabeza, fiebre) (Hardman y Limbird, 1996; Goodman y Snyper, 2005, López et.al. 2005).Se sabe además de una gran mayoría de productos biológicos que producen efectos parecidos. El tratamiento quimioterapéutico produce daños en la medula ósea que a su vez produce una disminución en la hematopoyesis, también se han reportado casos de productos tan comunes como el Naproxeno y el Paracetamol que pueden llegar a producir una disminución en la población plaquetaria total. En nuestro caso a estudiar sabemos que la mayoría de los antibióticos pueden llegar a producir trombocitopenia y otros transtornos sanguíneos (Lahita, 2003; Krauss, 2003;Page et. al. 1998).

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2. ASPECTOS DE LA INVESTIGACIÓN

2.1 REALIDAD PROBLEMÁTICA

El efecto adverso más serio del Cloranfenicol es la depresión medular. Las discrasis sanguíneas graves y fatales (anemia aplásica, anemia hipoplásica, trombocitopenia y granulocitopenia) pueden ocurrir luego de la administración del Cloranfenicol. La agranulocitosis inducida por este medicamento puede resultar de la lesión de alguno de los pasos de la secuencia de la hemopoyesis o de la lesión de los granulocitos en la sangre periférica.

3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

¿Inoculando cloranfenicol en Cavia porcellus habrá variación en la población leucocitaria?

4. OBJETIVOS:

1. Determinar la población leucocitaria basal en Cavia Porcellus.2. Determinar la dosis y volumen del cloranfenicol.3. Determinar la vía de inoculación del cloranfenicol.4. Determinar la población leucocitaria post-inoculaciones de cloranfenicol

en cobayos.

5. JUSTIFICACIÓN:

El desarrollo de este trabajo es importante porque el Cloranfenicol es un medicamento de uso común en las personas, por lo tanto, observando sus efectos en la población leucocitaria de Cavia porcellus “Cobayos” (mamíferos) es posible tener una idea más cercana a su efecto en personas. Además de alertar a la población de que el consumo de cloranfenicol en niveles elevados puede causar una intoxicación.

6. ANTECEDENTES BIBLIOGRÁFICOS

Rosenback (1960), reporto efectos no usuales en M.O. en dos pacientes que recibieron Cloranfenicol, en ambos casos había arresto de la maduración, con prominente vacuolización citoplasmática de células eritroides de M.O. Después de descontinuar la droga estos cambios desaparecieron y los pacientes se recuperaron.

Cooper (1983), Las primeras publicaciones que describían casos de agranulocitosis incriminaron la aminofenazona (amidopirina), otras

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pirazolonas, fenotiacinas, sulfamidas, antitiroideos, cloranfenicol, antihistamínicos como la tenalidina y butilpirazolidinas («butazonas»).

Herbert (1934), La agranulocitosis inducida por medicamentos puede resultar de la lesión de alguno de los pasos de la secuencia de la hematopoyesis o de la lesión de los granulocitos en la sangre periférica.

Cuellar y Rodríguez (2003) afirman que la trombocitopenia inducida por medicamentos es un tipo de hipersensibilidad de tipo II y que muchos pacientes presentan anticuerpos dirigidos contra dos de los receptores plaquetarios principales gpIb y IIb/IIIa.

Solal-Céligny Ph.(1999), El efecto adverso más serio del Cloranfenicol es la depresión medular. Las discrasis sanguíneas graves y fatales (anemia aplásica, anemia hipoplásica, trombocitopenia y granulocitopenia) pueden ocurrir luego de la administración del Cloranfenicol

7. VARIABLES DE ESTUDIO 7.1 VARIABLE INDEPENDIENTE: Cloranfenicol

7.2VARIABLE DEPENDIENTE:Leucocitosis

7.3 POBLACIÓN Y MUESTRA:En este presente trabajo experimental, la población que será estudiada

es de un animal de experimentación, Cavia porcellus, en la cual se le

administrará dosis y volumen de Cloranfenicol.

La muestra extraía del animal de experimentación será sangre para

procesarla y conocer su número de células leucocitarias; antes, durante

y después de la administración del medicamento problema.

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8.2 MÉTODOS8.2.1 PREPARACIÓN DEL INOCULO

Primero se determinará tanto la concentración como el volumen del

inoculo (cloranfenicol) que será inoculado en el cobayo. Para esto

utilizaremos cálculos simples, basándonos en las concentraciones

de Cloranfenicol administrado en humanos, y utilizando también

como dato el peso del cobayo.

8.2.2 DETERMINACIÓN DE LA DOSIS DE INOCULACIÓNPara determinar la dosis de inoculo que se administrara al cobayo,

también se tomara como referencia la dosis de administración de

Cloranfenicol en humanos.

8.2.3 VÍA DE INOCULACIÓN EN EL COBAYO

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La vía apropiada para las inoculaciones de Cloranfenicol en el

Cobayo será la vía intramuscular, debido a que otra vía de

inoculación podría acarrear complicaciones iniciales en el cobayo.

8.2.4 EXTRACCIÓN DE SANGRE DEL COBAYOPara la determinación de la población leucocitaria basal y post

inoculaciones, se le extraerá sangre de la mano al cobayo y luego

será puesto en una laminilla porta objeto para su posterior fijación y

posterior tinción de Wright.

8.2.5 TINCIÓN DE WRIGHTEs una tinción de tipo Romanowsky. Es extremadamente importante

en el laboratorio de hematología este tipo de tinción, ya que puede

obtenerse una cantidad abundante de información a partir del

examen de un frotis de sangre periférica bien teñido Una tinción de

Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de

oxidación, así como eosina Y o eosina B.

La acción combinada de estos colorantes produce el efecto

Romanowsky y da una coloración púrpura a los núcleos de los

leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y de color rosado a los

eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina

Y. Las propiedades de tinción de Romanowsky dependen del enlace

de los colorantes a las estructuras químicas y de las interacciones

del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de ácidos nucleicos, las

proteínas de los núcleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo,

fijan el azul B, colorante básico.

La eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de

las moléculas de hemoglobina y a las proteínas básicas.

Material :

- Frotis sanguíneo

- Agua destilada

- Eosina B

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- Eosina Y

- Azul de metileno

- Alcohol metílico

Procedimiento :

1.- Hacer un frotis sanguíneo, ni demasiado delgado, ni que llegue al

extremo del portaobjetos.

2.- Fijar el frotis y dejar secar.

3.- colocar el colorante Wright.

4.- luego colocar agua destilada y dejar reposar por 10 minutos

hasta que tome un color plateado.

5.- enseguida lavar con agua destilada y dejar secar al ambiente.

6.- Observar al microscopio.

9. Referencias Bibliográficas

Solal-Céligny Ph. Neutropenia e agranulocitose. In: Farmacovigilancia. São Paulo: Andrei, 1999.

Agranulocitosis por medicamentos. Butlletí Groc. Fundació Institut Català de Farmacología. Num 10. Enero-febrero 1987.

Shapiro S. La agranulocitosis y las pirazolonas. Lancet 1984; 1: 451-2.

Curmutte JT. Disorders of granulocyte function and granulopoiesis. Drug induced neutropenia. In: Nathan D, Oski F. Hematology of infancy and childhood. 4ª ed. Philadelphia: WB Saunders, 1993; 948-9.

Beta-lactam-induced neutropenia. An old forgotten companion. Galo Peralta, María Blanca Sánchez-Santiago.  Servicio de Medicina Interna. Hospital Sierrallana. Torrelavega. Servicio de Farmacología Clínica. Hospital Universitario Marqués de Valdecilla. Santander. España.

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Linkografia

http://www.eugenomic.com/es/home/mas_informacion_inomic/Links/neutropenia

http://www.sedolor.es/2001ponencia.php?id=105

http://www.boletinfarmacos.org/?p=37903

http://scielo.isciii.es/scielo.php?pid=S021271992002000600002&script=sci_arttext