ESTUDIO FITOQUÍMICO DE LOS COMPUESTOS FENÓLICOS PRESENTES EN EL LÁTEX DE

Brosimum alicastrum “MACHINGA”

RESUMEN

El estudio fitoquímico del látex de la especie Brosimum alicastrum “machinga” perteneciente a la familia Moraceae, proveniente de la ciudad de Tingo María (660 m.s.n.m), provincia de Leoncio Prado del departamento de Huánuco. Se obtuvo el látex por incisiones en la corteza del tronco del árbol de machinga, el uso tradicional común le asigna propiedades antiinflamatorias y para problemas reumáticos. Para empezar la investigación el látex fue sometido a un análisis físico-químico, ensayos de solubilidad y marcha fitoquímica, luego se hicieron tres extracciones con solventes de diferente polaridad: metanol, diclorometano y hexano, separándose los extractos mediante filtración al vacío y decantación. Con los extractos metanólico, diclorometánico y hexánico se hicieron análisis cromatográficos en capa fina (CCF) analítica para detectar el número de metabolitos secundarios y compuestos fenólicos presentes en cada fracción. El extracto diclorometano permitió aislar un compuesto fenólico que mediante espectroscopia UV visible y reacciones de desplazamiento, fue identificado como 4´,7- dihidroxi flavona, del extracto metanólico se aislaron 5 fracciones que correspondían a compuestos fenólicos que al ser analizados por espectroscopia UV visible se demostró que no correspondían a flavonoides, posiblemente podría tratarse de fenoles simples o de fenilpropanoides. La fracción hexánica contenía dos sustancias no fenólicas. Palabras clave: Brosimum alicastrum, látex, espectrofometría UV visible, compuestos fenólicos, flavona. SUMMARY The phytochemical study of the latex of Brosimum alicastrum "Machinga" belonging to the family Moraceae, from the town of Tingo Maria (660m.s.n.m), Leoncio Prado province of Huanuco. Latex was obtained by incisions in the bark of the tree of Machinga, used by traditional medical

practitioners for the rheumatic treatment y with anti-inflammatory properties. To begin the investigation, the latex was subjected to physical and chemical analysis, solubility tests and phytochemical, then made three extractions with solvents of different polarity: methanol, dichloromethane and hexane extracts separated by vacuum filtration and decanting. With the methanol extracts, dichloromethane and hexane were thin-layer chromatographic analysis (TLC) analytical to detect the number of

secondary metabolites and phenolic compounds present in each fraction. The dichloromethane extract allowed to isolate a phenolic compound using UV-visible spectroscopy and displacement reactions, was identified as 4 ', 7 - dihydroxy flavone, were isolated from the methanol extract 5 fractions corresponding to phenolic compounds to be analyzed by UV-visible spectroscopy showed that did not correspond to flavonoids, phenols possibly could be simple or phenylpropanoids. The hexane fraction contained two phenolic substances. Key words: Breadnut, latex, UV visible spectrophotometry, phenolic compounds, flavone.

INTRODUCCIÓN

La selva amazónica de Perú es una de las zonas con mayor diversidad biológica del planeta. Es tan grande la variedad de especies que estimándose en promedio más de 2.000 especies de árboles y más de 3.000 de plantas, muchas de esas especies se encuentran aún sin ser estudiadas adecuadamente, siendo estas utilizadas en forma empírica por sus bondades terapéuticas en el cuidado y restauración de la salud mediante el uso tradicional. Dentro de este contexto, el látex extraído de los troncos posee productos naturales de gran valor e importancia (1,2, 3,4, 5). Brosimum alicastrum Sw. “machinga” es una de las especies arbóreas más estudiadas en las zonas tropicales, debido principalmente a su gran variedad de usos (madera, alimento, medicinas). Una de las características propias del género Brosimum es la gran cantidad de látex presente en la corteza de los troncos, otorgándole una gran capacidad regenerativa en sitios perturbados y terrenos abandonados (6,7). El látex pegajoso que se torna rosáceo al contacto con el aire permiténdole diferenciarse del resto de árboles. Entre los metabolitos presentes, generalmente contienen sustancias en suspensión tales como gomas y mucílagos, almidón, alcaloides, compuestos fenólicos, flavonoides, terpenoides, entre otros (8).

La importancia de la fitoterapia en nuestros días pone de manifiesto la necesidad de investigar sobre las propiedades farmacológicas de numerosas plantas que aún no han sido del todo estudiadas e investigadas en extenso como es el caso del Brosimum alicastrum Sw. muy usada en la Medicina Tradicional, para el tratamiento de diversas dolencias como problemas reumáticos, inflamatorios, digestivos entre otros.

MATERIAL Y MÉTODOS RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA DE Brosimum alicastrum “MACHINGA”

El látex fue recolectado en la ciudad de Tingo María (660 m.s.n.m.), capital de la provincia de Leoncio Prado, departamento de Huánuco; fueron extraídas mediante incisiones hechas verticalmente y no más de 4 sangrías al mismo tiempo en la corteza del tronco. Luego se recolectó en un recipiente de vidrio ámbar de boca ancha, manteniéndolo cerrado hasta el momento de los análisis correspondientes.

EXTRACCIÓN DE LOS COMPONENTES DEL LÁTEX DE Brosimum alicastrum “MACHINGA” La obtención de los componentes del látex de “machinga” se realizó mediante extracción por solventes en una pera de decantación, con solventes de polaridad decreciente, asistidos mediante filtración al vacío y decantación. Se usaron metanol, diclorometano y hexano. El método consistió en colocar 100g de látex en un beaker de 250mL, con 100mL de metanol, se agitó moderadamente varias veces, luego se procedió a filtrar en un matraz de kitasato al vacío, repitiendo el proceso con 50mL de metanol. Los filtrados se recibieron en un beaker de 100mL que a las 24 horas se tornó a una coloración parduzca, observándose un precipitado oscuro. Obteniéndose un residuo blanquecino (torta), pasándose a un beaker de 250mL, se le añadió 100mL de diclorometano y se agitó hasta obtener una solución transparente que fue filtrada al vacío, se repitió el proceso con 50mL de diclorometano, se juntaron los filtrados en un beaker 100mL a temperatura ambiente, el cual a las 24 horas formó un precipitado blanquecino escamoso. Al residuo que quedó se trató con 50mL de n-hexano que fue decantada aun beaker de 100mL. ANÁLISIS FISICO-QUÍMICO Para el análisis organoléptico del látex de machinga se tomó una alícuota y se dispuso en una placa petri para poder distinguir el olor, color y aspecto de la muestra. Se recomienda previa agitación antes de proceder con los análisis. SOLUBILIDAD Los ensayos de solubilidad se llevaron a cabo utilizando solventes de diferente polaridad: agua, metanol (MeOH), etanol, diclorometano (DCM), acetato de etilo (AcEt) y n-hexano. Para ello se preparó un juego 7 tubos de ensayos conteniendo cada uno 1mL del látex con 1mL de cada solvente; el sétimo tubo se utilizó como blanco y tubo de comparación.

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA ANALÍTICA (CCF) Una vez preparadas las placas cromatográficas se procedió a sembrar con ayuda de capilares las tres extracciones obtenidas a partir del látex de machinga en una placa de 20 x 20 cm. Se sembró a 1.5 cm de la supeficie, y se secó para colocarlo en el sistema de solventes: diclorometano y metanol en la proporción 4:1, respectivamente.

Posteriormente se procedió a revelar con UV a 254 nm y 366nm de longitud de onda. Seguidamente se reveló con reactivo de Dragendorff para determinar alcaloides; tricloruro férrico, grupos fenólicos; y ácido sulfúrico, flavonoides.

Finalmente, se aislaron los metabolitos que lograron separarse a partir de la CCF en viales, utilizándose el metanol como solvente.

ESPECTROSCOPIA UV VISIBLE

Se utilizó el espectrofotómetro UV visible con arreglo de yodo 8452 HEWLETT PACKARD para realizar la identificación de las fracciones obtenidas a partir de la CCF.

RESULTADOS

Características organolépticas del látex de “machinga”: presentó un color blanquecino rosáceo, un olor característico y aspecto semilíquido denso y lechoso.

Propiedades físico – químicas del aceite esencial de “muña”: presentó una densidad relativa (25 ºc) de , una rotación específica (20 ºC) de , un índice de refracción (20 ºC) de .

TABLA 1. Ensayo de solubilidad del látex de Brosimum alicastrum

SOLVENTE OBSERVACIÓN

agua SOLUBLE

metanol POCO SOLUBLE

etanol POCO SOLUBLE

diclorometano INSOLUBLE

acetato de etilo INSOLUBLE

n-hexano INSOLUBLE

TABLA 2. Cromatografía en capa fina analítica (CCF) de los extractos del látex de Brosimum alicastrum

EXTRACTO

OBSERVACIÓN

Tricloruro férrico

Dragendorff Ácido

sulfúrico

UV

METANÓLICO

COLOR VERDE

OSCURO

(Grupos fenólicos)

COLOR

ROSADO

NO HAY COLOR

NO HAY FLUORESCENCIA

DICLOROMETÁNICO

COLOR VERDE

OSCURO

(grupos fenólicos)

NO HAY COLOR

NO HAY COLOR

FLUORESCENCIA AZULINA A 366nm

FLUORESCENCIA VERDE LIMÓN DESPUÉS DE

AÑADIR H2SO4

HEXÁNICO NOY HAY COLOR

NOY HAY COLOR

NO HAY

FLUORESCENCIA

Análisis espectrofotométrico de la fracción en DCM del látex de

Brosimum alicastrum. (flavonoide)

Mediante espectrofotometría UV visible de la fracciòns aislada del

extracto del latex de Brosimum alicastrum “machinga” de Tingo María,

se obtuvieron los respectivos espectros; que al ser comparadas con lo

publicado por Mabry TJ. et al 1970 y por análisis de los reactivos de

desplazamiento se propone una estructura química correspondiente a

un flavonoide (ver FIGURAS)

Fracción 1. Lecturas en el espectro UV-visible:

: 295, 324 nm

: 320, 376 nm

: 292, 324 nm

: 292, 324 nm FIGURA 1. 4’,7-dihidroxi flavona

FIGURA 2. FRACCIÓN 1 EN METANOL

FIGURA 3. FRACCION 2 EN METANOL

FIGURA 4. FRACCION 3 EN METANOL

FIGURA 5. FRACCION 4 EN METANOL

FIGURA 6. FRACCION 5 EN METANOL

FIGURA 6. FRACCION DE DICLOROMETANO EN METANOL

FIGURA 7. FRACCIÓN DICLOROMETANO EN METANOL CON METOXIDO DE SODIO

FIGURA 8. FRACCIÓN DICLOROMETANO EN METANOL CON TRICLORUO DE ALUMINIO

FIGURA 9. FRACCIÓN DICLOROMETANO EN METANOL CON TRICLORUO DE ALUMINIO Y ÁCIDO CLORHÍDRICO

DISCUSIÓN

Según el espectro en metanol el esqueleto básico que corresponde

esta fracción es de una flavona, al tratarlo con metóxido de sodio hay

un marcado efecto bactocrómico tanto en el anillo A como el anillo C,

lo que nos indicaría que el compuesto tiene hidroxilos libres en la

posición 4’ y en 7, al hacer reaccionar con tricloruro de aluminio no se

observa efecto bactocrómico que luego al tratarlo con HCl los picos se

mantienen, esto nos indica ausencia de hidroxilos libres en la posición 5,

así como ausencia de hidroxilos adyantes o en posición orto. Por

consiguiente se propone la estructura de la figura 1.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. The systematic Identification of flavonoids. T.J.Mabry, K.R.Markham, M.B. Thomas. SPRINGES-VERLAD.Printed in the United States of America. Berlin,1976.

Web:

1. Plan de Negocios del Sistema de Información de la Diversidad Biológica y Ambiental de la Amazonía Peruana, SIAMAZONÍA. Villacorta, Edwin J.. Instituto de Investigaciones de la Amazonía Peruana (IIAP). 2007.

2. http://siatac.siac.net.co/web/guest/inicio 3. http://www.rngr.net/Publications/ttsm/Folder.2003-07-

11.4726/PDF.2003-11-12.2112/file 4. http://www.theequilibriumfund.org/page.cfm?pageid=2996 5. http://www.fao.org/nr/land/en/ 6. http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/617/61790102.pdf 7. http://www.fincaleola.com/ojoche_espa.html 8. http://vidaysaludnatural.blogspot.com/2005_10_01_archive.html