Pseudomona y Burkholderia 2013 Enero
-
Upload
aurico-sousa-fonseca -
Category
Documents
-
view
176 -
download
0
Transcript of Pseudomona y Burkholderia 2013 Enero
Géneros
Pseudomonas y Burkholderia
Prof. Aurico Sousa Fonseca Cátedra de Microbiología e Inmunología F.C.V.-U.C.V.
CARACTERÍSTICAS GENERALES
• El género Pseudomonas pertenece a la familia Pseudomonaceae – Integrada por variedad de especies que
habitan en el suelo y las aguas estancadas – Algunas forman parte de la flora residente
del intestino en animales y el hombre.
• Son de vida libre – Se encuentran en materiales orgánicos en
descomposición – Tienen un importante papel en la
degradación de dicho material.
CARACTERÍSTICAS GENERALES
• Son bacilos Gram negativos • De 0,5 – 1 m por 1,5 – 5 m • Aerobios • No esporulados • Móviles • Algunos poseen micro cápsulas y
pigmentos solubles en agua • Son bacilos no fermentadores (BNF) • Acusada resistencia a la fagocitosis,
los antibióticos y los metales pesados
• Posee los tres sistemas de recombinación genética
¿Grupos de Pseudomonas? según la homología del ARNr
Grupo no fluorescente
P. Stutzeri, P. Mendocina,
P. alcaligenes , P. pseudoalcaligenes
I. Grupo fluorescente
P. aeruginosa, P. fluorescens, P. putida
II. B. pseudomallei, B. mallei, B. cepacia, P. picketti , B. glandioli
III. (Acidovorax, Comamonas) A. delafieldii, C. acidovorans, C. testosteroni
IV. P. diminuta, P. versicularis
V. Stenotrophomonas: S. maltophilia
Clasifica a las Pseudomonas basándose en la homología ARNr/ADN y en las características comunes del cultivo.
INFECCIONES CLINICAS
• Pseudomonas aeruginosa
• Burkholderia mallei
• Burkholderia pseudomallei
Pseudomonas aeruginosa
• Fue identificada en 1882 por Gessard. • Patógeno más importante dentro del
género Pseudomonas teniendo en cuenta: – Cantidad y tipos de infecciones (invasivas y
toxígenas) – Morbilidad y mortalidad que ocasiona.
• A partir de la década del 60 se ha incrementado el interés médico por esta especie – Es uno de los principales agentes causantes
de enfermedades adquiridas en el ámbito hospitalario, especialmente en pacientes inmunocomprometidos
Pseudomonas aeruginosa
• Organismo ambiental
• Requerimientos nutricionales simples
• Patógeno oportunista ante mecanismos de defensa alterados, suprimidos o comprometidos
– Es necesaria la presencia de factores predisponentes para que ocurra la infección • Enfermedades malignas • Quemaduras • Diabetes • Pacientes sometidos a la instrumentación o manipulación
– Cateterizaciones uretrales, traqueotomías, punciones lumbares, infusiones intravenosas de medicamentos y líquidos)
Pseudomonas aeruginosa
• En este organismo es inherente la resistencia a la mayoría de los antibióticos – Plásmido R
• Se considera un importante patógeno en la infección intrahospitalaria, reportándose por encima del 20 % de esas infecciones
• Los pacientes hospitalizados se infectan con fuentes exógenas y endógenas
• La infección raramente ocurre en aquellos con defensas normales.
MORFOLOGÍA E IDENTIFICACIÓN
• Microorganismos típicos. – Bacilos Gram negativos rectos o
curvos (bastoncillos) – Pueden aparecer aislados, en pares
o en cadenas – Diámetro de 0,6 a 2 µ m. – Son aerobios – No esporulados – Móviles – Poseen de 1 a 3 flagelos polares y
muchas proyecciones en su pared denominadas fimbrias.
– Algunos poseen una microcápsula.
CULTIVO de
Pseudomonas aeruginosa
• Aerobio obligado, • De fácil crecimiento en medios de cultivos • En ocasiones poducen, un olor dulzón, o de uvas. • Se desarrolla a temperaturas entre 10 y 42 °C. • Algunas cepas son hemolíticas • Los cultivos pueden mostrar varios tipos de colonias:
– Lisas, rugosas, mucoides, redondas, alargadas, con pigmentos verde metálico y olor dulzón
– Presentan, además, características bioquímicas enzimáticas y de susceptibilidad antimicrobiana diferentes.
CULTIVO DE
Pseudomonas aeruginosa
• Producen pigmentos de fenazina en agar nutritivo, después de 24 horas de incubación a 37 C y posteriormente a temperatura ambiente. Los mismos pueden ser : – azul (piocianina), – amarillo verdoso (pioverdina) – rojo (piorrubina) y – Marrón oscuro(piomelanina)
• Existe, aproximadamente, un 10 % de P. aeruginosa que son apigmentadas
Pseudomonas aeruginosa Características de crecimiento
• La mayoría crece en medios mínimos, sin
factores orgánicos de crecimiento – Iones amonio como única fuente de nitrógeno – Glucosa como única fuente de carbono y
energía.
• Formación de película en medio líquido (ayuda a distinguirla de otras especies)
• Produce ácidos de una serie de carbohidratos, (pero no de disacáridos) en medio OF de Hugh-Leifson
• Su metabolismo es estrictamente aerobio.
ESTRUCTURA ANTIGÉNICA
• Poseen antígenos O, H, M. – El antígeno somático se denomina O (AgO)
• El antígeno O está dado por el LPS, el cual está formado por el lípido A (muy tóxico, (que comprende la endotoxina), un centro constituido por polisacáridos y por las cadenas laterales largas de oligosacáridos O (específicos de grupo) que es la parte más externa del LPS y permite seroagruparlas
– El antígeno flagelar se designa con la letra H y – El antígeno mucoide, con la letra M.
• Tienen pili o fimbrias (tipo IV) que se extienden desde la pared celular y permiten la fijación a células epiteliales del hospedero.
• Los anticuerpos contra antígenos O, H y los pili permiten tipificar las cepas con fines epidemiológicos.
FACTORES DE
VIRULENCIA 1. Pili:
De importancia en la adherencia.
2. Flagelos: Permiten la motilidad y son inmunogénicos.
3. Alginato: Permite la adherencia de la bacteria a la célula
epitelial, interfiriendo en la actividad fagocítica de los neutrófilos.
4. Sideróforos: Adquisición de Fe.
5. Proteínas de la membrana externa: Inmunogénicas.
FACTORES DE
VIRULENCIA
6. Piocianina y otros pigmentos fenazínicos: Inhiben la movilidad ciliar y la proliferación de
linfocitos. Tienen actividad antibiótica.
7. LPS: Actividad endotóxica. Es inmunogénico.
8. Elastasa (enzima proteolítica):
Solubiliza la elastina del pulmón
9. Proteasa alcalina (enzima proteolítica): Inhibe la proliferación de los linfocitos. Es
inmunogénica.
FACTORES DE
VIRULENCIA 10. Proteinasa:
Estimula la activación de mucina de las células del tracto respiratorio. Inactiva la antitripsina 1.
11. Leucocidina: Citotóxica para los PMN y linfocitos; daña los capilares pulmonares.
12. Ramnolípidos (hemolisinas termoestables): Inactivan o destruyen la estructura ciliar. Realzan la liberación de mucinas.
13. Fosfolipasa C (hemolisina termolábil): Degrada la lecitina (componente importante del sulfactante del pulmón).
Induce la liberación de histamina (importante mediador anafiláctico). Es inmunogénica.
FACTORES DE
VIRULENCIA 14. Lipasa:
Inhibe la quimiotaxis de los monocitos.
15. Exotoxina A: Producto de mayor toxicidad presente en Pseudomonas
aeruginosa. Inhibe la síntesis de proteínas. Tóxica para los macrófagos. Es inmunogénica.
16. Slime: inhibe la fagocitosis por los PMN. Es citotóxico para los leucocitos.
17. ß –lactamasa: Le confiere resistencia a los antibióticos.
18. Creatinasa.
19. Catalasa.
20. Argininhidrolasa.
FACTORES DE
VIRULENCIA 21. Nitratorreductasa.
22. Ureasa.
23. Fibrinolisina.
24. Colagenasa.
25. Toxina eritrodérmica.
26. Bacteriocinas.
27. Exotoxina S Inhibe la síntesis proteica; dicho mecanismo no
está bien aclarado.
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
• Muestras – Dependen del cuadro clínico y del tipo
de infección, siendo útiles el pus, la sangre, la orina, el líquido cefalorraquídeo y el esputo.
• Frotis. – Un frotis coloreado con tinción de Gram
muestra bacilos Gram negativos rectos o en forma de bastoncillo, que pueden encontrarse aislados, en pares o en cadenas.
– Los mismos no tienen características específicas que permitan distinguir entre las Pseudomonas contenidas en las muestras y los bastoncillos intestinales o gramnegativos de otros tipos.
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
• Cultivo. – P. aeruginosa crece bien en los
medios habituales del laboratorio como: • Agar Cetrimida
– Agar de elección
• Agar Mc Conkey, • Agar SS,
– En condiciones de aerobiosis, y acepta un rango de temperatura entre 10 y 42 °C, siendo su temperatura óptima de 35 a 37 C.
Diagnóstico de laboratorio
• Son oxidasa positivas
• Son catalasa positivas;
• Son móviles;
• Oxidan la glucosa;
• crecen a 42 °C en medio líquido con formación de película
• Hidrolizan la arginina y
• Muestran Kligler alcalino.
IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA COMERCIALIZADA
Entre los sistemas de identificación comerciales tenemos: 1. Sistema API 20 E (BioMérieux-Vitek). 2. Rapid NFT (BioMérieux-Vitek). 3. Unit N/F System (Remel Laboratories). 4. Oxi/Ferm System. 5. The Vitek GNI. 6. The Minitek.
PRUEBAS SEROLÓGICAS Y DE TIPIFICACIÓN
Estas pruebas son importantes desde el punto de vista epidemiológico, utilizándose combinaciones de dos o más técnicas para estos fines: 1.Serotipaje:
Se utilizan antígenos somáticos y antígenos flagelares.
2. Piocinotipia: Permite agrupar las cepas en tipos y subtipos,
designándose los tipos con números y los subtipos con letras (A-E).
3. Antibiotipo. 4. Biotipo. 5. Fagotipo.
PRUEBAS SEROLÓGICAS Y DE TIPIFICACIÓN
Estas pruebas son importantes desde el punto de vista epidemiológico, utilizándose combinaciones de dos o más técnicas para estos fines: 6. Análisis con endonucleasas de restricción y
plásmidos.
7. Electroforesis en campo pulsante (PFGE).
8. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
9. Ribotipaje.
10. Análisis del polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP).
TRATAMIENTO • Es necesario emplear fármacos de
forma combinada, pues pueden desarrollar resistencia cuando se usan de forma única.
• Deben utilizarse penicilinas activas contra Pseudomona como: – Ticarcilina, mezlocilina, piperacilina,
combinadas con un aminoglucósido: gentamicina, tobramicina, amikacina.
• Otros medicamentos eficaces son: – Aztreonam, imipenem, quinolonas
(ciprofloxacina) y cefalosporinas (ceftazidima y cefoperazona).
Burkholderia
• Propuesta por Yabuuchi et al., en 1992
• La clasificación se basó en: – Secuencia de de los ARNr 16s
– Homologías ADN-ADN
– Composición de lípidos y ácidos grasos
– Carácterísticas fenotípicas
CARACTERÍSTICAS GENERALES
• Son bacilos Gram negativos, • Aerobios estrictos • No esporulados • Móviles (Excepto B. mallei) • Acumulan gránulos de poli-beta-
hidroxibutiratos • Fuentes de Carbono: glucosa,
glicerol, inositol, galactosa, sorbitol, manosa y manitol
• Hábitat: – Suelos y vegetales – Patógenos oportunistas
ESPECIES SIGNIFICATIVAS
• Especie tipo: –Burkholderia cepacia
• 24 especies descritas – Importantes desde el punto de
vista veterinario: • B. mallei (MUERMO EQUINO)
• B. pseudomallei (MELIOIDOSIS)
• Son bacterias multiresistentes
Cuadro comparativo de las características de cultivo de P. aeruginosa, Murkholderia mallei y Bulkholderia pseudomallei
Características Pseudomonas Burkholderia Burkholderia aeruginosa mallei pseudomallei
Morfología de la colonias Grande y plana con Blanca y suave Desde suaves y mucosa hasta bordes dentados Granular y marrón con rugosa y de color marrón- la edad amarillento
Hemólisis en Agar Sangre +a - +a
Producción de pigmentos + - - difusibles
Olor de las colonias como de uva ninguno rancio
Crecimiento en Agar + +b +
MacConkey
Crecimiento a 42°C + - +
Motilidad + - +
Producción de oxidasa + -c +
Oxidación de:
Glucosa + + +
Lactosa - - + Sucrosa - - +b
a 40% de las cepas positivas b Sobre el 75% de las cepas positivas C 25% de las cepas positivas
CONDICIONES CLÍNICAS QUE SE PRESENTAN POR INFECCIÓN CON Pseudomonas aeruginosa
• Bovinos – Mastitis, metritis, pneumonia,
dermatitis y enteritis en terneros
• Ovinos – Mastitis, pudrición de la lana,
pneumonia y otitis media
• Porcinos – Infecciones respiratorias y otitis
• Equinos – Infecciones del tracto genital,
pneumonía y queratitis ulcerativa
• Caninos y felinos – Otitis externa, cistitis,
pneumonía y queratitis ulcerativa
• Reptiles – Estomatitis necrótica
CONDICIONES CLÍNICAS QUE SE PRESENTAN POR INFECCIÓN CON Burkholderia
• Burkholderia mallei
– Muermo equino, transmisible ocasionalmente a carnívoros y humanos • Forma nasal y cutánea
• Burkholderia pseudomallei
– Melioidosis o pseudomuermo
DISTRIBUCIÓN MUNDIAL DE Burkholderia pseudomallei