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FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNTESCUELA DE MEDICINA

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA

TEMA:

“INFORME DE LABORATORIO” ALUMNO :

SÁNCHEZ R OJAS, JOSÉ CARLOS

ZAVALA CASTILLO, OSTWALD ARNOLD

GRUPO: D AÑO: 4TO

PROMOCIÓN: LII

FECHA DE PRESENTACION: 26 de abril de 2016

TRUJILLO – PERÚ

2016




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RECUENTO PLAQUETARIO EN ESTUDIANTES DE MEDICINA DEL GRUPO DDE LABORATORIO EN LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

RESUMEN

Introducción: Las plaquetas desempeñan una función importante en el mecanismo de lahemostasia, así como en la respuesta a la lesión vascular. La cuantificación de la cifra de plaquetas en sangre periférica puede realizarse, de una forma aproximada, contando lostrombocitos presentes en varios campos de una extensión sanguínea observadamicroscópicamente. Sin embargo, también se puede llevar a cabo un recuento de plaquetasmás exacto, mediante el empleo de una cámara de recuento o, mejor aún, con contadoreselectrónicos de células. La mayoría de referencias consideran como cifra normal de plaquetas para la población adulta la comprendida entre 150 - 450 x 109/L, aunque se handescrito en España cifras inferiores en sujetos sanos, por lo que dichos límites podrían noser los más adecuados para nuestra población. Objetivo: Conocer la cantidad de plaquetasen sangre venosa de estudiantes de medicina del grupo D de laboratorio en la Universidad Nacional de Trujillo. Métodos: El estudio fue descriptivo de corte transversal, se realizó en15 estudiantes de medicina del grupo D que compartieron sus datos hematimétricos querealizaron por parejas. Resultados: El promedio fue de 391 700 plaquetas (con unadesviación estándar de 157) mediante un conteo de 20 campos de sangre coloreada continción Wright, mientras que fue de 313 800 plaquetas (con una desviación estándar de97.4) usando la cámara de Neubauer. Conclusiones: Los valores obtenidos en el estudio seencuentran normales con respecto a los valores de referencia. El valor promedio para eltiempo de sangría fue de 3 minutos y el valor promedio para el tiempo de coagulación fuede 7 minutos.

Palabras claves: Plaquetas, frotis sanguíneo, cámara de Neubauer, estudiantes de medicina

INTRODUCCIÓN

Las plaquetas desempeñan una función importante en el mecanismo de la hemostasia, asícomo en la respuesta a la lesión vascular (1). La detención de la hemorragia depende de laformación de un trombo plaquetario que se consolida con la formación de fibrina poractivación del mecanismo de la coagulación; su disminución o incorrecto funcionamientose relaciona con trastornos hemorrágicos.

La cuantificación de la cifra de plaquetas en sangre periférica es esencial como herramientadiagnóstica en distintas situaciones patológicas. Puede realizarse, de una formaaproximada, contando los trombocitos presentes en varios campos de una extensiónsanguínea observada microscópicamente. Sin embargo, también se puede llevar a cabo unrecuento de plaquetas más exacto, mediante el empleo de una cámara de recuento o, mejoraún, con contadores electrónicos de células. El recuento de plaquetas practicado mediante




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el examen de un frotis sanguíneo permite, además, el estudio de la morfología de lostrombocitos.

La mayoría de los laboratorios, así como los libros de consulta, consideran como cifranormal de plaquetas para la población adulta la comprendida entre 150 - 450 x 10 9/L,

aunque se han descrito en España

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cifras inferiores en sujetos sanos, por lo que dichoslímites podrían no ser los más adecuados para nuestra población.

Para constatar esto, en el presente trabajo, hemos realizado un estudio del recuento de plaquetas y sus límites en una muestra sangre venosa de estudiantes de medicina de laUniversidad Nacional de Trujillo, clínicamente sanos de 20 a 30 años.

Se plantea el siguiente problema de investigación: ¿Cuál es el número de plaquetas ensangre venosa de los estudiantes de medicina del grupo D de laboratorio en laUniversidad Nacional de Trujillo? Debido a que nuestro estudio es del tipoobservacional, no se plantea una hipótesis.

Objetivos Objetivo general:Conocer la cantidad de plaquetas en sangre venosa de estudiantes de medicina del grupo Dde laboratorio en la Universidad Nacional de Trujillo

Objetivos específicos:

- Identificar el número de plaquetas en una cámara de Neubauer en sangre venosa deestudiantes de medicina del grupo D de laboratorio en la Universidad Nacional deTrujillo.

- Identificar el número de plaquetas mediante coloración Wright en sangre venosa deestudiantes de medicina del grupo D de laboratorio en la Universidad Nacional deTrujillo.

MATERIAL Y MÉTODOS

1. Materiales:

Población de estudio

Estudiantes de medicina del grupo D de laboratorio en la Universidad Nacional de Trujilloen el año lectivo 2016.

Muestra de estudio

Se consideró como muestra de estudio a todos los estudiantes de medicina del grupo D enla Universidad Nacional de Trujillo que aceptaron compartir los datos obtenidos delrecuento de leucocitos que se realizó por parejas. Ingresaron al estudio 15 estudiantes demedicina del grupo D de laboratorio.




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Unidad de análisis

Se usó una encuesta virtual compartida en un documento Excel publicada a través delservicio Drive de una cuenta de Gmail:

<https://docs.google.com/spreadsheets/d/1E0qdjk4uj1dwlgHbsQJNguXi9AdlZZvsPMGne5rTC14/edit#gid=0 >

Criterios de inclusión y exclusión

Se incluyó en el estudio a:

- Estudiantes de medicina del grupo D de laboratorio en el año lectivo 2016 en laUniversidad Nacional de Trujillo.

- Estudiantes que compartieron los datos que obtuvieron de su recuento de plaquetasmediante campos sanguíneos coloreados y usando cámara de Neubauer.

Se excluyó en el estudio a:- Estudiantes de medicina del grupo A, B y C de laboratorio en el año lectivo 2016 en la

Universidad Nacional de Trujillo.- Estudiantes de medicina del grupo D de laboratorio en el año lectivo 2016 en la

Universidad Nacional de Trujillo, que no obtuvieron todos los datos del recuento plaquetario mediante campos sanguíneos coloreados y mediante la cámara de Neubauer.

Materiales y equipos de laboratorio (Ver anexo 1)

Se emplearon distintos materiales dependiendo del procedimiento a realizar:

- Técnica de extracción de sangre: Agujas N 21, algodón, Alcohol 70°, recipiente conEDTA (Etildiaminotetraacético), banda elástica de látex, tela de drill de 25cmx25cm yguantes de látex limpios.

- Extendido Sanguíneo: Láminas portaobjetos, Varilla de plástico (Funda de la aguja).

- Coloración Wright: Cubeta de tinción, Colorante Wright, Agua destilada, Agua decaño.

- Conteo de plaquetas mediante campos sanguíneos coloreados: Microscopio ópticocon objetico de inmersión, aceite de cedro, cámara fotográfica..

- Conteo de plaquetas mediante cámara de Neubauer: Cámara de Neubauer, micropipeta, diluyente (Oxalacetato de amonio al 1%), muestra sangre total conanticoagulante (EDTA).




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2. Método:

Tipo de estudio

El presente trabajo de investigación es de tipo descriptivo de corte transversal.

Diseño de estudio

Para el estudio se eligieron por afinidad grupos de trabajo conformados por dos alumnos,los cuales procedieron a extraerse sangre venosa mutuamente. Se obtuvieron los datos en base a dos pruebas de conteo de plaquetas: mediante campos de sangre total coloreada ymediante cámara de Neubauer en los estudiantes de medicina del grupo D en laUniversidad Nacional de Trujillo mediante los procedimientos más adelante descritos; yfinalmente, los datos obtenidos en esta práctica se compartieron vía on-line entre losintegrantes del grupo.

Procedimientos

Técnica de extracción de sangre:

1. La persona encargada de tomar la muestra utilizó guantes de látex limpios y extrajola sangre de una vena del pliegue del codo.

2.

El sitio de punción se limpió con alcohol al 70% luego se colocó una banda elásticaalrededor de la parte superior del brazo con el fin de ejercer presión y favorecer lasalida de muestra sanguínea.

3. Se introdujo una aguja N 21 en la vena y se recogió la sangre en un tubo de ensayoque tenía un nivel de 1 mm marcado.

4. Durante el procedimiento, se retiró el torniquete para restablecer la circulación yevitar un hematoma.

Fig. 1. Esquema que muestra el diseño de estudio.




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5. Una vez que se recogió la sangre, se retiró la aguja y se cubrió el sitio de puncióncon algodón embebido de alcohol y se instó a presionarlo por cinco minutos paradetener cualquier sangrado.

Extendido Sanguíneo:

1. Se realizó tomando una pequeña muestra del recipiente de vidrio. Se usó la funda de plástico de la aguja usada anteriormente para colocar una gota de sangre en lalámina portaobjetos.

2. La gota de sangre se colocó en un lado de la lámina portaobjetos, luego con otralámina portaobjetos se procedió a colocarlo sobre la primera en un ángulo deaproximadamente 30°.

3. Se esperó que el borde de la última lámina se llene por completo de sangre y con untrazo firme y consistente se procedió a extender la muestra hacia el extremo opuestode la gota.

4. Finalmente se dejó secar por cinco minutos.

Coloración Wright (3):

1. Se colocó el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangrehacia arriba y se cubrió completamente la lámina portaobjetos con el colorante deWright gota a gota.

2. Se dejó que permanezca en el frotis aproximadamente de un minuto, para fijar losglóbulos sanguíneos.

3. Se agregó directamente al colorante un volumen de agua destilada suficiente paracubrir totalmente la lámina, para evitar la co loración débil.

4. Esperar la formación de brillo metálico. Se dejó actuar de ocho minutos.

5. Se lavó con abundante agua de caño hasta que la extensión presente un aspectovioleta al examinarlo a simple vista.

6. Se secó al aire y se guardaron las láminas una semana.

Conteo de plaquetas mediante campos sanguíneos coloreados:

1. Se colocó la lámina portaobjetos en e l miscroscopio con objetivos de inmersión, paralo cual se usó aceite de cedro.




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2. Se enfocó desde el objetivo de menor aumento hasta completar 100x de aumento. Elrecuento se realizó en el lado extremo de donde se colocó la gota en el momento delextendido sanguíneo.

3. Finalmente, se contaron plaquetas en 20 campos.

4. El número de plaquetas se obtuvo mediante la siguiente fórmula (fórmula 1):

Conteo de plaquetas mediante cámara de Neubauer:

1. Se diluyó 20 µL de sangre total con anticoagulante (EDTA) en una tubo de ensayo

con 1.98 mL oxalato de amonio al 1%. Se dejó reposar 10 minutos.2. Se colocó una gota de la dilución anterior en una cámara de Neubauer y esta se

llevó al microscopio óptico y se observó con el objetivo de 20X. El recuento serealizó teniendo en cuenta toda la zona media de la cámara de Neubauer, es decir, seconsideró todo el recuadro central.

3. El número de plaquetas se obtuvo mediante la siguiente fórmula (fórmula 2):

Análisis de datos

Se realizó el análisis de datos a través del software Microsoft Excel 2010. Mediante este programa se obtuvieron las gráficas presentadas a continuación.




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RESULTADOS

CUADRO 1. Resumen valores obtenidos por las pruebas de hemostasia paraestudiantes de medicina del grupo D de laboratorio en la Universidad Nacional deTrujillo.

Muestra de:

RECUENTO DE PLAQUETAS

CON CÁMARA DE NEUBAUER CON TINCIÓN DE Wright

Romero Bermúdez Jam Piere 296 333

Sánchez Rojas José Carlos 299 194

Segura Franco Kevin Bryant 383 422

Shimizu Varas Rómulo 392 359

Sichez Rodríguez Yolanda Isabel 244 380

Simón Cruz David 339 291

Socorro Gamboa Bryan Donny 128 528

Trujillo Gallardo Aníbal Eduardo 264 648

Vallejo Zarate Guillermo Alamiro 266 613

Vargas Chávez Iris Jezabella 193 202

Vargas Machuca Gutiérrez Andrea 238 664

Vega Arqueros Sallie Angela 472 350

Zavala Castillo Ostwald Arnold 355 187

Zegarra Zegarra María Esperanza 480 361

Zuñiga Luna Luis Jhoel 358 343

PROMEDIO ( ) 313.8 391.7

DESVIACIÓN ESTÁNDAR (DE) 97.4 157

El cuadro 1 resume los valores obtenidos por los dos métodos para contar plaquetas: concámara de Neubauer y con sangre total coloreada con tinción Wright. El promedio fue de391 700 plaquetas mediante un conteo de 20 campos de sangre coloreada con tinción

Wright (Ver fórmula 1) , mientras que fue de 313 800 plaquetas usando la cámara de Neubauer (Ver fórmula 2). Según las desviaciones mostradas, el conteo de 20 camposcoloreados mostró mayor error que el método usando la cámara de Neubauer.




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GRÁFICO 1. Número de plaquetas mediante cámara de neubauer y mediante sangrecoloreada para estudiantes de medicina del grupo D de laboratorio en la UniversidadNacional de Trujillo.

En el Gráfico 1 se muestran los promedios obtenidos para el número de plaquetas mediantela cámara de Neubauer y mediante coloreado de sangre venosa.Además se colocó la barrade error, que indican las desviaciones estándar para ambas pruebas. El promedio de plaquetas mediante cámara de Neubauer fue 313 800 plaquetas (con una desviaciónestándar de 97.4), mientras que para la sangre coloreada fue en promedio 391.7 plaquetas(con una desviación estándar de 157).

DISCUSIÓN

La mayoría de referencias consideran como cifra normal de plaquetas para la poblaciónadulta la comprendida entre 150 - 450 x 109/L, sin embargo nosotros encontramos valoressuperiores a este rango. La estudiante Zegarra Zegarra obtuvo el mayor puntaje con unacámara de Neubauer, mientras que la estudiante Vargas Machuca obtuvo el mayor númerode plaquetas con el campo coloreado con tinción Wright, nosotros consideramos que losvalores de la estudiante Zegarra Zegarra pueden probablemente errados, en razón de que elmétodo que usó es más específico, pero está sujeto a mayor error (en dilución, en técnica,entre otros). Por su parte los resultados de la estudiante Vargas Machuca tiene una probabilidad de error, ya que los resultados de todos los estudiantes suman una desviaciónestándar muy elevada. Por su parte el estudiante Socorro Gamboa obtuvo un bajo númerode plaquetas con el método de cámara de Neubauer.

Teniendo en cuenta lo anterior, en nuestro estudio el 80 % obtuvieron resultados normalescon el método de cámara de Neubauer; mientras que el 73.3% obtuvieron resultadosnormales con la coloración de sangre venosa con tinción Wright.

Particularmente en nuestra experiencia, mediante la cámara de Neubauer se obtuvo en promedio 13.08 plaquetas por cuadrado; mientras que fue de 9.53 plaquetas por campo ensangre coloreado con tinción Wright.

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100

200

300

400

500

600

PROMEDIO

N Ú M E R O D E P L A Q U E T A S

CÁMARA DE NEUBAUER

COLOREADO




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CONCLUSIONES

Los valores obtenidos en el estudio se encuentran normales con respecto a los valores dereferencia. El promedio fue de 391 700 plaquetas mediante un conteo de 20 campos de

sangre coloreada con tinción Wright, mientras que fue de 313 800 plaquetas usando lacámara de Neubauer.

REFERENCIAS

(1) Zamora-González Y. Pruebas del coagulograma y componentes de la hemostasia.Utilidad para diagnosticar las diátesis hemorrágicas. Rev Cubana Hematol InmunolHemoter. 2012; 28(2): 141-150.

(2) Agustino AM., Piqueras R., Pérez M., García de Rojas P., Jaqueti J., Navarro F..

Recuento de plaquetas y volumen plaquetario medio en una población sana. Rev DiagnBiol [Internet]. 2002 Jun [citado 2016 Abr 26] ; 51( 2 ): 51-53. Disponible en:http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-79732002000200002&lng=es.

(3) Qbhematologia. Coloración de Wright y Giemsa. c2013. [Internet]. [Actualizado 19marzo 2013; Acceso 21 de marzo 2016]. Disponible en:https://qbhematologia.files.wordpress.com/2011/08/prc3a1ctica-3.pdf




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ANEXO 1. Fotografías.

1. Materiales usados en la práctica de laboratorio

2. Campo observado con una cámara de

Neubauer

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