FITOPATOLOGIA

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO

LABORATORIO FITOPATOLOGIA

GRUPO: QB7DEQUIPO: 6

REPORTE GLOBAL 1

Navarro Morales Jael DonajíVilchis Rodríguez Victor Manuel

FITOPATOLOGIA

México, D. F. Septiembre 2010.

I.P.N. ENCB. Laboratorio de Fitopatología.

Conocer como se expresan los síntomas al presentarse enfermedades del tejido parenquimatico como lo son los tizones y manchas foliares. Aprenderemos a aislar de estos síntomas las bacterias fitopatogenas y se intentara identificar, asi mismo demostraremos su patogenecidad mediante la prueba de hipersensibilidad en plantas de frijol.

Atizonamiento del tejido parenquimatoso Diferentes tipos de síntomas en hojas

P

OBJETIVO

TIZONES Y MANCHAS FOLIARES BACTERIANAS

IIMAGENES DEL DESARROLLO.

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Tizón común: Presenta lesiones necróticas rodeadas por una clorosis de color amarillo limón

Tizón del halo: Presenta lesiones necróticas rodeadas por una clorosis de amarillo tenue

1. ESCRIBA EL NOMBRE VULGAR Y CIENTIFICO DE LOS EJEMPLARES VEGETALES EN ESTUDIO.

2. DESCRIBIR LOS ÍNTOMAS Y/O SIGNOS OBSERVADOS EN EL MATERIAL BIOLÓGICO PROPORCIONADO.

3. DESCRIBA LOS POSTULADOS DE KOCH, APLICADOS A LA DETERMINACIÓN DE LA ETIOLOGÍA BACTERIANA EN PLANTAS.

El agente patógeno debe estar presente en cada caso de la enfermedad en las condiciones apropiadas y ausente en las personas sanas.

El agente no debe aparecer en otra enfermedad de manera fortuita o saprófita. El agente debe ser aislado del cuerpo en un cultivo puro a partir de las lesiones

de la enfermedad. El agente debe provocar la enfermedad en un animal susceptible al ser

inoculado. El agente debe ser aislado de nuevo de las lesiones producidas en los animales

de experimentación.

REPORTE

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4. ESCRIBA LOS COMPONENTES DEL MEDIO B DE KING Y EXPLIQUE EL PORQUE DE SU USO EN ESTA PRÁCTICA.

Sirve para el aislamiento de Pseudomonas ,contiene: Proteosa peptona o peptona de carne Glicerina Fosfato dipotasico Sulfato de magnesio

Es un medio selectivo por que el fosfato dipotasico estimula la producción de colorantes que producen propiamente el género de Pseudomonas como la flouresceína.

5. DESCRIBA LA MORFOLOGÍA COLONIAL DE LAS BACTERIAS AISLADAS.

Xanthomonas phaseoli: colonias amarllias de crecimiento lento.

Pseudomonas phaseolicola: colonias blancas ligeramente cremosas de crecimiento rápido con un pigmento fluorescente difusible.

6. QUE RESULTADOS OBTUVO CON LA TINCION DE GRAM.

GRAM NEGATIVA

7. QUE COLONIAS UTILIZÓ PARA LA INOCULACIÓN EN PLANTAS DE FRIJOL?

Pseudomonas phaseolicola

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8. EXPLIQUE COMO QUEDO ESTABLECIDO SU EXPERIMENTO Y POR Q INOCULÓ EN EL ENVES DE LA HOJA

Por que en envés de la hoja se encuentran ubicados los estomas y la entrada de la bacteria es exactamamente esta zona para que se inice la infección.

9. ES POSIBLE DISTINGUIR UNA BACTERIA PATÓGENA DE UNA NO PATÓGENA A TRAVES DE LA REACCIÓN DE HIOERSENSIBILIDAD? INDIQUE 5 ESPECIES QUE DAN HIPERSENSIBILIDAD POSITIVA

Si es posible distinguir por que la hipersensibilidad se pondrá de manifiesto solo en la zona donde se inoculo, es decir en una zona muy delimitado.

Aprenderemos a diferenciar la pudrición que causan diferentes microorganismos, promoveremos la pudrición para observar la presencia de las enzimas que causan esta pudrición de tejidos blandos.De igual manera buscaremos la presencia de flagelos en las colonias que podamos aislar e identificar como Erwinia carotovora.

1. MENCIONE EL NOMBRE CIENTIFICO Y EL NOMBRE VULGAR DE LA MUESTRA VEGETAL QUE SE UTILIZÓ EN ESTA PRÁCTICA

Solanum tuberosum subsp. Tuberosum

2. DIBUJE O ESQUEMATICE LOS SÍNTOMAS Y/O SIGNOS PRODUCIDOS POR LAS BACTERIAS CAUSANTES DE PUDRICIÓN BLANDA.

P

OBJETIVO

BACTERIAS QUE PRODUCEN PUDRICIÓN BLANDA

REPORTE

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Pudrición landa en papa con destrucción y necrosamiento de tejido

3. DESCRIBA LA MORFOLOGÍA COLONIAL Y MICROSCOPICA DEL AGENTE ETIOLOGICO AISLADO.

Colonias blancas son de crecimiento rápido las colonias presentas en su superficie una red o rejilla. Gram negativa

4. COMO RECONOCIÓ LAS COLONIAS DE ERWINIA EN EL LABORATORIO

Por el tipo de superficie que tiene una rejilla o red

5. QUE ENZIMAS INTERVIENEN EN LA DEGRADACIÓN DE LOS TEJIDOS DE LAS PLANTAS CON PUDRICÓN BLANDA.PECTINOLITICAS

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6. COMO SE DEMUESTRA LA PRODUCCION DE ENZIMAS PECTINOLÍTICAPor que se producen exudados tipo mucoides

7. DIBUJE O ESQUEMATICE LOS RESULTADOS OBTENIDOS AL APLICAR EL MÉTODODE PEPPLER

8. QUE DIFERENCIAS HAY ENTRE UNA PUDRICIÓN PRODUCIDA POR Erwinia Y UNA PRODUCIDA POR Bacillus?

las colonias producidas por erwinia son mucoides en cambio las producidas por bacillus son rugosas en su superficie

9. A QUE SE DEBE EL OLOR DESAGRADABLE EN LA PRUEBA DE PUDRICIÓN DE PAPA?

a la infección por bacterias secundarias

10.EN QUE FAMILIA SE ENCUENTRA EL GENERO Erwinia?

Enterobacteriaceae

Identificar una enfermedad bacteriana de tipo hiperplasico e hipertrófico de gran importancia en viveros y huertos.

Aplicar los métodos de aislamiento e identificación de bacterias fitopatogenas a partir de tejidos enfermos.

Reproducir el tercer postulado de koch en plantas de jitomate sanas

1. MENCIONE EL NOMBRE VULGAR Y CIENTIFICO DE LA MUESTRA VEGETAL QUE SE UTILIZÓ EN ESTA PRÁCTICA?

Dólar – Pilea nummulariifolia

P

OBJETIVOS

AGALLA DE LA CORONA INDUCIDA POR BACTERIAS

REPORTE

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2. DIBUJE O ESQUEMATICE EL MATERIAL BIOLÓGICO PROPORCIONADO PARA EL AISLAMIENTO DE Agrobacterium tumefaciens

TUMOR

3. QUE MEDIOS SON RECOMENDADOS PARA EL AISLAMIENTO DE Agrobacterium tumefaciens Y QUE VENTAJAS TIENE SU USO?D1M es especifica para Agrobacterium tumefaciens inhibe el crecimiento de otras bacterias y hongos

4. CUAL ES LA MORFOLOGÍA COLONIAL Y MICROSCOPICA EN MEDIO DE CULTIVO PDA Y D1M QUE TIENEN LAS BACTERIAS QUE INDUCEN LA AGALLA DE LA CORONA?

Colonias mucoides de crecimiento rápido con colo verdeBacilo gran negativo no esporulado no flagelado

5. EXPLIQUE EL METODO UTILIZADO PARA INOCULAR Agrobacterium tumefaciens EN LAS PLANTAS DE PRUEBA?Se hace una herida en la base del tallo y se inocula directamente la bacteria en esta zona.

6. CUAL ES EL CUIDADO QUE SE DEBE TENER PARA TENER ÉXITO EN LA PRUEBA Mantener condiciones asepticas para evitar contaminación por hongos y/o bacterias

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Distinguir signos y síntomas de los mildius.

Identificar los principales generos de hongos causantes de mildius

Imágenes del desarrollo:

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OBJETIVO

MILDIUS

REPORTE

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1. ESCRIBA EL NOMBRE DE VULGAR Y EL NOMBRE CIENTIFICO DE LA MUESTRAS A PROCESAR EN ESTA PRÁCTICA.Alfalfa – Medicago sativa

Calabacita - Cucurbita pepoLechuga - Lactiva longifolia

2. QUE SIGNOS Y QUE SÍNTOMAS LOGRÓ OBSERVAR EN LAS MUESTRAS QUE SE LE PROPORCIONARON?

Manchas de color blanco gris o violeta de aspecto algodonoso generalmente en el envés de la hoja

3. POR QUE LOS HONGOS CAUSANBTES DE MILDUIS NO SE AISLAN EN MEDIOS DE CULTIVO Por que son parasitos obligados por lo tanto no pueden crecer sin su hospedero debido a su dependencia metabolica.

4. CUALES SON LAS ESTRUCTURASN FÚNGICAS QUE INICIAN LA INFECCIÓN EN LOS HOSPEDEROS SUSCEPTIBLES?Las oosporas y zoosporas

5. QUE MÉTODOS DE CONTROL SE UITLIZAN PARA ESTE TIPO DE ENFERMEDAD?Usar hibridos que presentan algún grado de resistencia a la enfermedad, el uso de fungicidas , evitar desarrollar cultivos en zonas humedas y evitar la irrigación

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6. QUE ESTRUCTURAS SE UTILIZAN PARA IDENTIFICACION DE LOS MILDIUS A NIVEL DE GENERO?Los esporangioforos

7. EN CUAL DE LOS GENEROS NO HAY PRESENCIA DE ZOOSPORAS?

Peronospora

Conocer y describir los signos y síntomas de la enfermedad conocida como “roya blanca”

Identificar las estructuras reproductivas del hongo

1. ESCRIIBA EL NOMBRE COMUN Y CIENTIFICO DE LAS MUESTRAS VEGETALES EN ESTUDIO

Gloria de la mañana- convolvulus arvensis2. DIBUJE O ESQUEMATICE LAS LESIONES QUE PRESENTAN LOS

EJEMPLARES VEGETALES, DESCRIBIENDO LOS SÍNTOMAS Y/O SIGNOS

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OBJETIVO

ROYA BLANCA

REPORTE

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Formación de lesiones blanquecinas , pustulas en el haz de la hoja defoliación.

3. QUE FAMILIA BOTANICA ES LA MAS SUSCEPTIBLE DE SER ATACADA POR Albulgo?Crucifereae

4. QUE ESTRUCTURAS FÚNGICAS PERMITEN LA UBICACIÓN TAXONOMICA DEL AGENTE ETIOLOGICO DENTRO DEL GRUPO DE LOS OOMICETOS ¿oosporas

5. COMO RECONOCERÍA ESTA ENFERMEDAD EN EL CAMPO?El follaje de las plantas se veria blanquecino grisáceo con un aspecto pulvurulento

6. QUE METODOLOGÍA SUGERIRÍA PARA OBERVAR LOS HAUSTORIOS?Realizar cortes transversales muy finos de las hojas donde se presentan las lesiones.

7. PARA ESTOS FITOPATOGENOS ¿QUE REACTIVOS SE RECOMIENDAN PARA REALIZAR PREPARACIONES TEMPORALES Y PARA PREPARACIONES SEMIPERMANENTES?Lactofenol, agua y KOH

8. ADEMAS DE LO OBSERVADO EN LAS MUESTRAS ¿QUE OTRAS PARTES DE LA PLANTA PUEDEN ESR AFECTADAS POR ESTE HONGO?

Tallos e inflorescencias

9. QUE OTROS SÍNTOMAS PUEDEN PRESENTARSE EN LAS PLANTAS HOSPEDERAS?Distorsión e hinchamiento principalmente en inflorescencias de las cuales llegan a engrosarse hasta 12 -15 veces su tamaño .

DISCUSIONES Y CONCLUSIONES

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En la práctica 1 de tizones y manchas foliares determinamos las diferencias entre las lesiones en las hojas causadas por X. phaseoli y P. phasieolicola, la cual se basa en la observación de las necrosis y clorosis, en el caso de X. phaseoli, la necrosis se encuentra rodeada por una clorosis amarillo limón a diferencia de P. phaseolicola en la cual la clorosis es de un amarillo menos intenso, en cuanto a la morfología colonial también hayamos diferencias muy marcadas, ya que X. phaseolli produce colonias pequeñas lo cual nos indica un lento crecimiento son de color amarillo, en el caso de P. phaseolicola, las colonias son de rápido crecimiento (colonias grandes) y de color crema, además presentan un pigmento difusible en el medio, en ocasiones se pueden confundir las colonias de X. phaseoli con las colonias de Pantea ya que ambas son de color amarillo, sin embargo las colonias de Pantea presentan en el centro los llamados cuerpos biconvexos que vistas al microscopio son estructuras alargadas denominadas simplasmatas, las cuales son agregados bacterianos que se agrupan en torno a polisacáridos, además reconocimos la diferencias entre las lesiones causadas por hongos y bacterias, ya que los hongos causan lesiones circulares concéntricas a diferencia de las bacterias las cuales se caracterizan por presentar lesiones confinadas entre las nervaduras de la hoja y de aspecto acuanoso. Por otra parte determinamos que en el ciclo biológico de P. phaseolicola la entrada del patógeno es a través de heridas en la hoja o por los estomas de la misma, dicho patógeno es transportado por el agua de lluvia de una planta a otra iniciando el ciclo biológico y la infección, dando lugar a plantas aparentemente sanas que con el paso del tiempo desarrollan la enfermedad y la transmiten a otras planta cercanas.

En la practica 2 de bacterias que producen pudrición blanda, determinamos la acción de las enzimas pectinoliticas la cual demostramos a través de la inoculación directa del patógeno en el tubérculo de la papa, la cual desarrollo síntomas visibles, como es el reblandecimiento en el tejido, y en algunas ocasiones la producción exudados bacterianos de aspecto acuanoso, determinamos que la bacteria presente era Erwinia atroseptica por su sintomatología y tipo de pudrición, ya que en la zona donde fue colocado el inoculo presento un halo de color café oscuro caracteristico de esta bacteria, ya que erwinia carotovora presenta el mismo halo pero de color café claro, en el testigo de nuestro ensayo el cual no debía presentar ningún tipo de pudrición, identificamos contaminación por bacterias del genero bacillus, ya que presentaba zonas de pudrición de tipo rugoso y de color blanquesino, en la papa proporcionada por los profesores de la cual logramos aislar a erwinia atroseptica notamos un olor fétido muy penetrante, el cual es causado por infecciones secundarias por bacterias de otros géneros, las cuales descomponen los tejidos y generan este olor fétido, al realizar los frotes y hacer la

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tinción por el método de Peppler, distinguimos que la bacteria es un gram (-) con p0resencia de múltiples flagelos y no encontramos formas esporuladas.

En la Practica 3 determinamos el ciclo de vida de la bacteria Agrobacterium tumefaciens, el cual genera la llamada agalla de la corona inducida por bacterias, verificamos que la infección se da de primera instancia por una lesión en la base del tallo de las plantas, en esta herida entran las bacterias y comienza la infección, posteriormente se presentan los primeros síntomas los cuales se caracterizan por la formación de tumores de forma y tamaño variable en el cuello de la planta, determinamos por medio de preparaciones de los aislamientos que la bacteria es unja Gram (-) no observamos formas esporuladas pero si había flagelos, por otra parte en la practica 4 de hongos fitopatogenos determinamos a que especie correspondían, de acuerdo a sus características microscópicas, específicamente a la forma y disposición de los esporangioforos los cuales nos permitieron distinguir entre Bremia la cual parasita a la hoja de lechuga, presenta formas características en forma de dedos o manos en la part5e superior del esporangioforo en donde se encuentran los esporangios, a diferencia de Peronospora la cual en la punta de sus esporangioforos se divide en 2 en un ángulo aproximado de 45º, este hongo parasita las hojas de alfalfa, formando lesiones algodonosas de color blanquecino, en las hoja de calabaza, encontramos al hongo fitopatogeno Plasmopara vitícola, el cual se caracteriza por el arreglo de sus esporangioforos los cuales se ramifican formando ángulos de 90º entre si, por ultimo en la práctica de Roya blanca determinamos que el hongo Albugo es el causante de esta enfermedad el cual causa lesiones algodonosas en el envés de la hoja, lamentablemente no logramos hacer observaciones microscópicas de las estructuras del Hongo, ya que al tratar de recolectar de la hoja los esporangios y esporangioforo estos se rompían o dañaban y que no contábamos con una aguja de insulina o algo similar para hacer la extracción, por tal motivo no logramos ver la morfología de las zoosporas sin embargo determinamos en cortes transversales de las pústulas que los esporangioforos se proyectan a través de los estomas del envés de las hojas y forman aglomerados que a simple vista se semejan pequeñas pústulas blanquecinas o de color grisáceo, en el haz de la hoja se manifiesta la lesión como un abultamiento rodeado de una clorosis marcada.

Conclusiones.

Observamos y describimos algunas de las enfermedades causadas a las plantas por agentes patógenos diversos como Hongos y Bacterias.

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Aplicamos las técnicas de aislamiento para obtener cultivos puros de las cepas usadas durante el bloque de prácticas.

Identificamos la morfología microscópica de las bacterias y hongos usadas en el bloque de prácticas.

Dilucidamos los ciclos de vida de cada uno de los agentes patógenos causantes de enfermedades de las plantas usados en el bloque de prácticas.