UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

QUMICA CLNICA

PRCTICA I

PRCTICA No. 1: EXAMEN GENERAL DE ORINA (EGO)MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.

Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. En la prctica se realiz el Examen General de Orina (EGO) a varios pacientes, primeramente como un examen de rutina y segundo con la finalidad de determinar la existencia de una posible enfermedad en los riones y el tracto urinario. Primeramente se realiz el Examen Fsico para determinar el aspecto, color, olor, etc.; en segundo trmino se realiz el Examen Qumico, para lo que se utiliz un refractmetro y/o urinmetro para leer las tiras reactivas a las que se les agreg la orina de cada paciente (Adn Cano Cano y Germn Ayala Sandoval), este proceso tambin se realiz de forma manual, comparando los cambios de color con las referencias del contenedor de tiras reactivas, asi se pudieron confirmar resultados; como tercer punto se realiz un frotis con la orina, donde se le agreg el colorante Sternheimer-Malbin, este frotis en fresco se observ en el microscopio con la finalidad de determinar alguna anormalidad en la orina o si se encuentra bien de salud, adems de que se comprueban algunos resultados positivos que se obtuvieron en una de las muestras. INTRODUCCIN. La orina es un lquido muy complejo formado por 95% de agua y 5% de slidos, constituye el producto final realizado por millones de clulas del sistema renal y urinario del metabolismo y tiene un gasto promedio de 1-1.5 litros de orina por da, que depende de la ingestin de lquidos. A travs de la orina se excreta gran variedad de productos metablicos de desecho. La orina contiene miles de sustancias disueltas, aunque las 3 principales son agua, urea y cloruro de sodio. Se excretan mas slidos a travs de la orina que por cualquier otra va, la composicin de la orina depende en gran parte de la calidad y cantidad de material excretado. Algunos componentes de la sangre, como la glucosa, tienen un umbral renal, esto es, que deben alcanzar un nivel en la sangre antes de que cada sustancia sea excretada en la orina. El examen general de orina es una prueba muy importante en los individuos que ingresan al hospital y muchas veces forman un estudio integral del paciente. Es uno de los indicadores ms tiles de salud o enfermedad. Este anlisis tiene dos propsitos: El primero es detectar anormalidades en el que el rin funciona normalmente pero excreta cantidades anormales de productos metablicos especficos para determinar enfermedad. El segundo propsito es detectar alteraciones que modifiquen el funcionamiento de los riones o del aparato urinario. Los riones enfermos no funcionan normalmente para regular el volumen y la composicin de los lquidos del organismo ni para mantener la homeostasis. El examen general de orina es muy til para diagnosticar nefrosis (degeneracin del rin sin inflamacin), nefritis (inflamacin del rin), pielonefritis (infeccin bacteriana) o glomerulonefritis (sin infeccin) y cistitis.

La realizacin cuidadosa del examen de orina, por parte del laboratorio, ayuda al diagnstico diferencial de numerosas enfermedades del sistema urinario. Usualmente, los datos de laboratorio obtenidos por medio de este anlisis, se logran sin dolor, dao o tensin para el paciente. Esta es la razn por la cual, la realizacin e interpretacin correcta del anlisis de orina, por parte del laboratorio permanecer siempre como una herramienta esencial ms no definitiva de la prctica clnica. El anlisis de orina se compone de dos partes: 1) Un anlisis macroscpico, en el cual se determinan las caractersticas fisicoqumicas (apariencia, gravedad especfica y la medicin de los constituyentes qumicos por medio de la tira). 2) Un examen microscpico del sedimento, en campo claro o contraste de fases, para verificar hematuria, piuria, cilindruria, cristaluria, y otros signos. Por medio de este simple examen de orina, un uromicroscopista experimentado puede detectar y monitorear muchas entidades que afectan al rin y al tracto urinario inferior. Los resultados obtenidos proporcionan informacin referente al metabolismo de carbohidratos, funcin heptica y renal, balance cido-base e infecciones del tracto urinario. En el examen general de orina es necesario tomar en cuenta lo siguiente: Extraccin a chorro de la muestra de orina: Preferentemente la mejor muestra es la de la maana, porque es la orina que tiene por toda la noche la vejiga, es una muestra fidedigna, pero si se levantan a las 5 de maana, lo ms recomendable es guardarla en la refrigeradora a 4C para que se conserve porque las caractersticas no cambian o cambian muy poco, pero si dejan la orina afuera (temperatura ambiente) por ms de 40 minutos las caractersticas de la orina cambian (he ah la importancia de llevar la muestra lo ms pronto posible al laboratorio de preferencia inmediatamente): el pH aumenta, se hace ms alcalina, el nmero de bacterias aumenta, los leucocitos se lisan, la densidad de la orina cambia y si es un buen laboratorista va a encontrar una condicin de orina que no es la del paciente. El examen de orina debe ser elaborado no ms de una hora despus de ser emitido, de preferencia inmediatamente despus de ser emitido. Coleccin de la muestra: la mujer hay que explicar que debe sentarse en una silla o bao con una mano abrirse los labios mayores y con la otra tomar el frasco con que va a tomar la muestra, previamente debe lavarse de adelante hacia atrs (las mujeres siempre deben lavarse o limpiarse de adelante hacia atrs nunca de atrs hacia delante porque las bacterias las llevara hacia la vagina o la uretra), luego dejar que escape la primera parte de la orina, adems esta es la parte que est ms concentrada y tiene ms cosas que se asientan durante la noche, y cuando sientan que van a la mitad tomen la muestra, no la contaminen con nada, cierre el frasco y la lleva al laboratorio. Se llama chorro espontneo a orinar y poner el frasco. El 99.99% de las veces se toma por este mtodo, pero es el 100% de las veces la peor forma de tomarla. La mejor forma de tomar la orina es a travs puncin suprapbica. La desventaja con la muestra a chorro espontneo es que arrastra bacterias en su camino, pasa a travs de los genitales y por las piernas, por eso es el peor mtodo de recoleccin.

OBJETIVOS. Practicar los diferentes mtodos para realizar un Examen General de Orina. Determinar y diagnosticar a tiempo la presencia de alguna enfermedad en el rin, en el tracto urinario, de hgado o algn desorden metablico. Monitorear la efectividad de un tratamiento. Dar seguimiento de una enfermedad renal no infecciosa, primaria o secundaria a enfermedad crnica. Dar seguimiento a pacientes con diabetes, estados metablicos, etc. MATERIALES Y MTODOS. Materiales. Recipiente transparente, de plstico o de algn material inerte a los componentes de la orina, de rosca fcil y debe sellar hermticamente. Tubo cnico. Pipetas Pasteur. Portaobjetos. Cubreobjetos. Tiras reactivas (Combur10 Test).

Mtodos. Metodologa para Refractmetro URILUXS: 1) Se sumerge la tira reactiva en la orina y se deja dentro de la muestra un lapso de 1-2 segundos. 2) Se retira la tira reactiva de la muestra de orina por el borde de la boca del tubo cnico (rosando la boca del tubo). 3) Quitar el exceso de orina de la parte posterior y las partes laterales de la tira reactiva; esto se realiza secando estas partes en una sanita. 4) Introducir la tira reactiva en el refractmetro (atorando la tira reactiva en la cejita del refractmetro). 5) Presionar botn de inicio de la prueba y esperar el tiempo que dure la prueba (por lo regular dura alrededor de 1 como mximo). 6) Una vez leda la tira reactiva se retira del refractmetro. 7) Se arranca la hoja con los resultados obtenidos. NOTA: Si se utilizara el mtodo manual es simplemente sumergir la tira reactiva y leer los cambios en la coloracin de cada celdilla de la tira y compararlos con los valores de referencia que se encuentran en el contenedor de tiras reactivas COMBUR TEST M. Metodologa para realizar frotis en fresco: 1) Tomar una pequea muestra de orina del recipiente donde se contiene la muestra del paciente a analizar.

2) 3) 4) 5)

Se centrifuga la muestra de orina a 1500 RPM por 5 minutos. Tomar 1 ml del sobrenadante y el resto decantar en el recipiente de la orina del paciente. Decantar el mililitro en el tubo de fondo cnico. Adicionar 2 gotas del colorante Sternheimer-Malbin y mezclar suavemente hasta una completa disolucin. 6) Tomar y colocar una gota en un portaobjetos. 7) Observar al microscopio. RESULTADOS E INTERPRETACIN. NOMBRE: Germn Ayala Sandoval. EXAMEN FSICO: Aspecto: Transparente. Color: Amarillo paja. Olor: Sui Generis.

EXAMEN QUMICO:

En los resultados obtenidos en el refractmetro se encontr que el urobilingeno y la bilirrubina se encontraban elevadas, ambas con 1 mg/dL: Pruebas Urobilingeno Bilirrubina Valores obtenidos 1 mg/dL 1 mg/dL Valores de Referencia 0-0.2mg/100ml 0.5- 140 y < 200: Intolerancia a la glucosa. > 200: Diabetes

CONCLUSIN. Ambos pacientes se encuentran dentro de los valores de referencia, por lo que no presentan alguna patologa en el metabolismo de los carbohidratos. En cuanto a la glucosa posprandial, el paciente Germn Ayala se encuentra dentro de los valores de referencia, indicando esto que no tiene una patologa en el metabolismo de los carbohidratos, en cambio el paciente Oscar Castaeda present una disminucin en la glucosa a las dos horas despus, por lo que debi aumentar, esto se debe a que no respet el paciente las indicaciones de la toma de muestra a las dos horas despus, por lo que su organismo ya comenzaba a entrar en una etapa de ayuno, pero aun as el paciente se encuentra dentro del rango normal. BIBLIOGRAFA. 1. Fuentes X., Castieiras M. y Queralt J. Bioqumica clnica y patologa molecular. Volumen II, Segunda edicin. Barcelona, Espaa. 1998. Editorial Revert. pp. 653-668. 2. Bishop M. Qumica Clnica, principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edicin. Editorial MacGraw-Hill.

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PRCTICA III

PRCTICA No. 3: UREA Y CIDO RICOMAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.

Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. Para la determinacin de la urea en sangre se tomo una muestra de sangre venosa del paciente en un tubo rojo (sin anticoagulante) y se centrifug, para obtener el suero. Posteriormente se tomaron 5 tubos de ensaye y se etiquetaron como muestra, blanco, estndar, control normal y control patolgico, con la subsecuente adicin a cada uno de los volmenes y reactivos especificados y se llevaron a incubacin por 3 minutos a 37oC. Posteriormente se realiz la curva de calibracin con los controles normal y patolgico para cumplir con el control de calidad y finalmente se ley la muestra a 340nm en el espectrofotmetro Gnesis 8. INTRODUCCIN. Las protenas son biomolculas esenciales necesarias para la formacin de estructuras celulares, como funcin hormonal, funcin enzimtica, de transporte, entre otras muchas funciones que son vitales para un ptimo funcionamiento del metabolismo en nuestro organismo. Por esta razn, nuestro organismo siempre va a requerir de un aporte proteico que se va a realizar de dos maneras: la primera a travs de una biosntesis de protenas, que estas no son esenciales para el organismo porque provienen de la biosntesis, y la segunda a travs de su ingestin en la dieta las llamadas protenas esenciales, que nuestro organismo no puede sintetizar. Esas protenas son absorbidas a lo largo del intestino delgado en forma de aminocidos y son transportados al hgado para ser metabolizados de diferentes maneras como por ejemplo en la produccin de glucosa, de protenas, en la formacin de la urea, entre otras funciones. Ese metabolismo en el hgado y en los tejidos se realiza en tres pasos: 1. Transaminacin.- Reubicacin del grupo -amino (NH3+) de un aminocido en el grupo oxo de un cetocido (-cetoglutarato) para transformarlo en el L-glutamato. 2. Desaminacin oxidativa del glutamato.- El glutamato es transformado de nuevo en el cetoglutarato por la accin de la enzima glutamato deshidrogenasa, dejando libre al grupo amino (NH3+). 3. Transportadores de los grupos amino.- El amonio es transportado en plasma en forma de alanina y glutamina, hasta llegar al hgado para introducirse en el ciclo de la urea, que es la va metablica utilizada para eliminar los desechos nitrogenados del organismo que resultan del metabolismo de las protenas. La urea producida es transportada hacia el rin donde es eliminada a travs de la orina. En ocasiones, pueden existir patologas que estn involucradas en el ciclo de la urea que conllevan a una elevacin en la concentracin de la urea en sangre. Esas enfermedades que pueden presentarse son: a) Azoemia prerrenal.- Causada por una insuficiencia cardica, hemorrgia, deshidratacin, catabolismo de protenas incrementado y la terapia de corticosterorides. b) Uremia renal.- Originada por una insuficiencia renal aguda y crnica y una nefritis glomerular. c) Azoemia posrenal.- Realizada por una obstruccion del tracto urinario.

La gota, una de las enfermedades ms antiguas en los registros histricos mdicos, es un trastorno hereditario del metabolismo de las purinas (componentes de ciertas protenas, las nucleoprotenas), por el cual se acumulan concentraciones anormales de cido rico en la sangre. El cido rico es el resultado final del metabolismo de las purinas (partes de DNA y RNA). La conversin de purinas en cido rico se efecta principalmente en el hgado. Casi todo el cido rico en el plasma se encuentra en forma de urato monosdico. La mayor parte del cido rico se excreta por el rin, y algo por el sistema intestinal. Cuando aumenta la destruccin de los tejidos (como en diversos tipos de cncer) el cido rico aparece elevado en sangre, aunque la causa ms comn de su elevacin es la gota. Como consecuencia, se forman unas sales (uratos de sodio) que pueden depositarse en articulaciones pequeas y tejidos vecinos (tofos). Estos depsitos a su vez pueden daar las articulaciones y dar lugar a una artritis crnica. La enfermedad, que suele ocurrir despus de los 35 aos, se caracteriza por dolor artrtico por lo general localizado en un ataque sbito que se inicia en el dedo gordo del pie y que contina hacia arriba por la pierna. Puede presentarse de forma aislada o acompaarse, en algn momento de la evolucin, de litiasis renal rica y/o de la llamada nefropata gotosa. La gota es causada por un defecto en el metabolismo que provoca una sobreproduccin de cido rico o lleva a una reduccin de la capacidad del rin para eliminarlo. La causa exacta de este defecto metablico se desconoce. El riesgo aumenta en los hombres, mujeres posmenopusicas y personas que sufren de hipertensin. Asimismo, el consumo excesivo de alcohol, diabetes, obesidad, anemia de clulas falciformes y enfermedad renal aumentan el riesgo, como tambin la falta de medidas preventivas en aquellas personas que han experimentado episodios previos. Esta condicin tambin se puede desarrollar en personas que toman medicamentos que interfieren con la excrecin del cido rico. Las pruebas bioqumicas que exploran la funcin renal incluyen la determinacin de urea y creatinina que son indicadoras de la capacidad renal de filtracin. Evaluaciones repetidas de ambas, son tiles para comprobar la eficacia del tratamiento y la progresin de la enfermedad.

OBJETIVOS. Detectar una anormalidad en la concentracin de la urea Y cido rico en sangre por el mtodo cintico cuantitativo decreciente para diagnosticar una patologa relacionada al ciclo de la urea. MATERIALES Y MTODOS. Materiales. Tubo para muestra sangunea de tapn rojo (sin anticoagulante). Torundas (impregnadas con alcohol etlico). Barril con aguja (Para tomar la muestra de sangre venosa). Torniquete. Micropipetas. Puntas para micropipetas. Gradilla. Tubos de ensaye. Guantes de ltex. Cubre bocas. Lentes de seguridad. Recipiente RPBI. Equipo. Espectrofotmetro GNESIS 8. Incubadora a bao mara. Centrifugadora. Reactivos. Buffer. 5:1 (Reactivo de trabajo) Enzimas. Estndar a concentracin de 30mg/dl. Control Normal. Control Patolgico. Metodologa. Mtodo cintico cuantitativo decreciente. 1. Tomar una muestra de sangre venosa en un tubo con tapn de color rojo, homogeneizar lentamente en posicin invertida y dejar reposar la muestra hasta la formacin del coagulo. Se deber etiquetar el tubo con los datos del paciente. 2. Centrifugar la muestra a 3600 rpm durante 5 minutos. 3. En 5 tubos de ensaye marcados como muestra, estndar, control normal, control patolgico y blanco, los siguientes reactivos:

TUBO MARCADO Muestra Estndar Control normal Control patolgico

Reactivo de trabajo 2ml 2ml 2ml 2ml

Suero 20l ----------------------------

REACTIVOS Estndar ---------20l -------------------

Control normal ------------------20l ----------

Control patolgico ---------------------------20l

NOTA: El blanco es un tubo con agua destilada. 4. Mezclar e incubar durante 3 minutos a 37oC. 5. Leer la absorbancia del estndar, control normal, control patolgico y la muestra, ajustando a cero el espectrofotmetro con el blanco, a una longitud de onda de 340nm. La primera absorbancia se leer a los 30 segundos y la segunda absorbancia a los 90 segundos. Primero se deber leer el blanco, luego el estndar, posteriormente los controles y finalmente la muestra. 6. Calcular la concentracin del BUN (Nitrgeno Ureico en Sangre) con el empleo de la siguiente frmula: [BUN] = (Absorbancia 1 muestra Absorbancia 2 muestra) ([Estndar]) (Absorbancia 1 estndar Absorbancia 2 estndar) 7. Con la siguiente frmula, calcular la concentracin de urea con la siguiente frmula: [Urea en sangre] = (BUN) (2.14) NOTA: Las concentraciones de los controles deben de quedar dentro del siguiente rango: para el control normal de 37.5-50.5 mg/dl y para el control patolgico de 118 a 148mg/dl, para cumplir con la curva de calibracin como una medida de control de calidad.

Se colocaron en un tubo de ensaye 20L de suero y 1ml de los reactivos de trabajo, el cual se etiquet con la letra M de muestra. Luego se mezcl y se incub a 37C por un tiempo de 5 minutos, despus de los cuales se llev a leer la absorbancia de la muestra contra el blanco a una longitud de onda de 520nm. Cabe mencionar que la calibracin del equipo Humalyzer con los controles positivo y negativo, as como la preparacin del blanco fue realizada por otro equipo. En la siguiente tabla se muestra como quedaron los volmenes de cada uno de los tubos empleados en esta prctica:

M STD CN CP BLANCO Suero 20L STD 20L CN/CP 20L 20L Reactivos de Trabajo 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml

cido rico Mtodo: Peroxidasa Equipo: Humalyzer 2,000 Reactivos: 1.- Buffer Reactivos de Trabajo 2.- Enzimas 3.- Estndar (STD) con una concentracin de 8mg/dl 4.- Control Negativo (CN) 5.- Control Positivo (CP) Primero se tomaron las muestras correspondientes de sangre venosa para obtener el suero y realizar el anlisis correspondiente. Se colocaron en un tubo de ensaye 20L de suero y 1ml de los reactivos de trabajo, el cual se etiquet con la letra M de muestra. Luego se mezcl y se incub a 37C por un tiempo de 5 minutos, despus de los cuales se llev a leer la absorbancia de la muestra contra el blanco a una longitud de onda de 520nm. Cabe mencionar que la calibracin del equipo Humalyzer con los controles positivo y negativo, as como la preparacin del blanco fue realizada por otro equipo. En la siguiente tabla se muestra como quedaron los volmenes de cada uno de los tubos empleados en esta prctica:

M STD CN CP BLANCO Suero 20L STD 20L CN/CP 20L 20L Reactivos de Trabajo 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml

RESULTADOS. UREA: Paciente: Germn Ayala Sandoval. [BUN] = (1.455 1.431) (30mg/dl) = 7.6mg/dl (1.084 0.990) [Urea en sangre] = (7.6mg/dl) (2.14) = 16.264mg/dl Paciente: Oscar Hiram Castaeda Contreras. [BUN] = (1.450 1.434) (30mg/dl) = 5.1mg/dl (1.084 0.990) [Urea en sangre] = (5.1mg/dl) (2.14) = 10.914mg/dl Paciente: Germn Ayala Sandoval. [BUN] = (1.464 1.451) (30mg/dl) = 4.4mg/dl (1.084 0.990) [Urea en sangre] = (4.4mg/dl) (2.14) = 8.878mg/dl PACIENTE ABSORBANCIA 1 (MUESTRA) 1.455 ABSORBANCIA 2 (MUESTRA) 1.431 BUN (mg/dl) 7.6 UREA EN SANGRE (mg/dl) 16.264 VALORES DE REFERENCIA (mg/dl)

Germn Ayala Sandoval Oscar Hiram Castaeda Contreras Adn Cano Cano

17 49 (Urea) 1.450 1.434 5.1 10.914 8 23 (BUN) 1.464 1.451 4.4 8.878

Tabla de datos obtenidos en el equipo Humalyzer 2,000(cido rico)Paciente Germn Ayala Sandoval Adn Cano Cano Oscar Hiram Castaeda Contreras Concentracin (mg/dl) 5.2 4.8 5.9 Absorbancia 0.09 0.085 0.110 Intervalo de referencia Hombres: 3.4 7.0 mg/dl

CONCLUSIONES. Los valores de la urea salieron bajos porque los pacientes estn consumiendo solo las protenas necesarias para su metabolismo. En lo que respecta al cido rico la tabla de datos obtenidos se muestra de manera notoria que todos los resultados de los pacientes analizados se encuentran dentro del intervalo de referencia, en este caso para hombres, por lo cual no se hizo observacin alguna sobre estos datos, ya que no nos indican o no representan un proceso patolgico en dichas muestras analizadas. BIBLIOGRAFA. 1. Fuentes X., Castieiras M. y Queralt J. Bioqumica clnica y patologa molecular. Volumen II, Segunda edicin. Barcelona, Espaa. 1998. Editorial Revert. 2. Bishop M. Qumica Clnica, principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edicin. Editorial MacGraw-Hill.

APNDICEDETERMINACIN DE CIDO RICO PRINCIPIO: El cido rico es oxidado por la uricasa a alantona y perxido de hidrgeno, el cual, en presencia de peroxidasa y un derivado del fenol oxida el cromgeno 4-aminoantipirina (4-AAP), dando una coloracin roja cuya intensidad es monitoreada a 520 nm. uricasa cido rico + 2 H2O + O2 --------------- Alantona + CO2 + H2O2 peroxidasa DHBS + 4-AAP + 2 H2O2 ------------------ Cromgeno + 4 H2O La absorbancia de la muestra es directamente proporcional a la concentracin de cido rico que contenga. DETERMINACIN DE UREA PRINCIPIO: La urea se hidroliza en presencia de ureasa en amoniaco y dixido de carbono. El amoniaco producido en esta reaccin se combina con alfa-cetoglutarato y NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) para producir glutamato y NAD. uricasa Urea + H2O ----------------- 2 NH3 + CO2 GLDH NH3 + alfacetoglutarato + NADH + H+ -------------L-glutamato + NAD+ + H+ La oxidacin de NADH causa una disminucin en la absorbancia a 340 nm, la cual es proporcional a la concentracin de urea en la muestra.

DISPOSICIN DE RPBI

EQUIPO DE SEGURIDAD

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PRCTICA IV

PRCTICA No. 4: CREATININAMAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. En la prctica se realiz la medicin de creatinina tanto en orina como en suero, para determinar si un paciente (Germn Ayala Sandoval) podra tener niveles anormales de este compuesto. Primeramente se le pidi al paciente que trajera una muestra de orina de 24 hrs, adems de que se le tom una muestra de sangre; ya con ambas muestras por medio del mtodo de Jaff se midieron los niveles de creatinina, obteniendo en orina 4.1 mg/dL y en suero 1mg/dL. INTRODUCCIN. La creatinina es un compuesto orgnico generado a partir de la degradacin de la creatina (que es un nutriente til para los msculos). Es un producto de desecho del metabolismo normal de los msculos que usualmente es producida por el cuerpo en una tasa muy constante (dependiendo de la masa de los msculos), y normalmente filtrada por los riones y excretada en la orina. La medicin de la creatinina es la manera ms simple de monitorizar la correcta funcin de los riones. Fisiologa Principalmente es filtrada por el rin, aunque una cantidad pequea es activamente secretada. Hay una cierta reabsorcin tubular de la creatinina, pero sta es compensada por un grado ms o menos equivalente de la secrecin tubular. Si el filtrado del rin es deficiente, los niveles en la sangre se elevan. Este efecto es usado como indicador de la funcin renal. Sin embargo, en los casos de disfuncin renal severa, la tasa de separacin de la creatinina ser sobrestimada porque la secrecin activa de la creatinina explicar una fraccin ms grande de la creatinina total despejada. Una creatinina y un BUN ms altos de lo normal tambin pueden ser indicativos de deshidratacin cuando el cociente de BUN a creatinina es anormal, con niveles de BUN elevndose ms alto que los niveles de creatinina. Los hombres tienden a tener niveles ms altos de creatinina porque tienen msculos esquelticos ms grandes que los de las mujeres. Uso en diagnstico Medir la creatinina del suero es una prueba simple y es el indicador ms comn de la funcin renal. Una subida en los niveles de creatinina de la sangre solamente es observada cuando hay un marcado dao en los nefrones(RC). Por lo tanto esta prueba no es conveniente para detectar estados tempranos de enfermedad del rin. Una mejor valoracin de la funcin del rin es dada por la prueba de aclaramiento de creatinina. La separacin de creatinina puede ser calculada con precisin usando la concentracin de la creatinina del suero y alguna o todas las variables siguientes: sexo, edad, peso, y raza segn lo sugerido por la National Diabetes Association con una recoleccin de orina de menos de 24 horas. Algunos laboratorios calcularn el ClCr si est escrito en la forma de solicitud de la patologa; y, la edad, el sexo, y el peso necesarios son incluidas en la informacin del paciente. INTERVALOS DE REFERENCIA PARA CREATININA EN PLASMA O SUERO mg/dl (mol/L) POBLACIN JAFFE ENZIMTICO Adulto Mujer 0.6-1.1 (53-97) 0.5-0.8 (44-71) Varn 0.9-1.3 (80-115) 0.6-1.1 (53-97) Nio 0.3-0.7 (27-62) 0-0.6 (0-53)

OBJETIVOS. Realizar la determinacin de los niveles de creatinina sangunea y conocer su participacin en el diagnstico de la funcin renal y enfermedades a nivel muscular. MATERIALES Y MTODOS. MATERIAL Torniquete Tubo seco o con gel para la toma de sangre Barril para venopuncin Jeringa Torundas con alcohol Centrfuga Pipetas de transferencia Tubos de ensaye Pipetas pistn de 10 y 1000 Puntillas para las pipetas REACTIVOS Reactivo de Trabajo: solucin 1:1 de cido pcrico e hidrxido de sodio. Estndar con concentracin de 2 mg/dl Control Normal Control Patolgico Muestra de suero sanguneo Orina recolectada durante 24 horas. EQUIPO

Gradilla Bao mara a 37 C Equipo Humalyzer 2000

MTODOS: MTODO DE JAFF: 1) Teniendo al paciente en ayunas, realizar la toma de muestra, por venopuncin, en tubo para obtener el suero. 2) Mediante la centrifugacin, separar el suero de los dems componentes sanguneos. 3) Etiquetar seis tubos de ensaye como: REACTIVOS TUBO Muestra Muestra Estndar Control Control Blanco MARCADO suero orina negativo positivo Suero 100 l ---------------------------------------------Orina ---------100l ------------------------------------Estndar ------------------100 l ---------------------------CN/CP ---------10l ---------100 l 100 l ---------Reactivo de 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml trabajo

4) En el primer tubo depositar 100 l del suero sanguneo. 5) En el segundo tubo depositar 100 l de la muestra de orina, con una dilucin previa 1:50. 6) En el tercer tubo colocar 100 l del estndar. 7) El cuarto tubo contendr 100 l del control normal. En el quinto tubo se adicionan 100 l del control positivo. Agregar a cada uno de los cinco tubos 1 ml del reactivo enzimtico. El sexto tubo ser un blanco con agua destilada. Transcurrido este tiempo, realizar las lecturas de sus absorbancias en el Equipo HUMALIZER 2000 con una longitud de onda de 492 nm, teniendo por secuencia el blanco, el estndar, los controles y finalmente las muestras, a los tiempos de 30 y 90. 12) Reportar los valores obtenidos para la creatinina, y obtener el valor total de la depuracin de creatinina. 8) 9) 10) 11) RESULTADOS E INTERPRETACIN. PACIENTE: EDAD: PESO: ESTATURA: SUPERFICIE CORPORAL: VOLUMEN DE ORINA DE 24 HRS:

Germn Ayala Sandoval 21 aos 83 Kg 1.80 mts 2.02 mts2 850 ml

Resultados obtenidos del Equipo HUMALIZER 2000, comparados con los valores de referencia: PACIENTE CREATININA CREATININA VALORES DE REFERENCIA (mg/dL) EN SUERO EN ORINA (mg/dL) (mg/dL) Germn 1 mg/dL 4.1 mg/dL Creatinina en Suero: 0.5-1.4 mg/dL Ayala Creatinina en Orina (Hombre): 0.8-1.8mg/dl Sandoval Depuracin de Creatinina: Dcr= [140-Edad] X peso (kg) = ml/min 72 X Cr. en suero (mg/dL) Dcr= [140-21] X 83Kg = 137.1805 ml/min 72 X 1 mg/dL Interpretacin: En la muestra en suero el valor obtenido (1 mg/dL) nos indica que los niveles sricos son normales ya que estn dentro de los valores de referencia. En la muestra de orina el valor obtenido (4.1 mg/dL9 nos dice que estn elevados los niveles de creatinina en orina, estos nivleles elevados fueron ocasionados debido a que el paciente presentaba una lesin muscular.

La depuracin de creatinina se encuentra normal, ya que si el aclaramiento de creatinina cayera por debajo de 62.5 ml/min se podra considerar que el paciente tendra una alteracin en la funcin renal.

CONCLUSIONES. Las pruebas para determinar la concentracin de creatinina en suero y su depuracin renal, son parmetros confiables de la funcin normal del rin, es decir que cuando los niveles de creatinina en suero se encuentran elevados por un descenso en el aclaramiento o depuracin renal, indican que la funcin renal se encuentra muy deteriorada. BIBLIOGRAFA. 1) Baynes W. John (et all), Bioqumica Mdica, 2da. Edicin, Editorial Elsevier Mosby, Espaa (2006) 2) http://es.wikipedia.org/wiki/Creatinina 3) http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003475.htm 4) http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/druginfo/natural/patient-creatine.html 5) http://www.umm.edu/esp_ency/article/003610.htm 6) http://www.labtestsonline.es/tests/Creatinine.html?lnk=3 7) http://images.google.com.mx/imgres?imgurl=http://www.ureacycle.com/images/cell.gif& imgrefurl=http://www.ureacycle.com/about_ureacycle.asp&usg=__vLjnaFZOq6XPTglbvJP4mhKJck=&h=386&w=500&sz=62&hl=es&start=18&tbnid=7vwjO2O _Gly1JM:&tbnh=100&tbnw=130&prev=/images%3Fq%3Durea%26gbv%3D2%26hl%3Des% 26sa%3DG 8) http://es.wikipedia.org/wiki/Aminotransferasa APNDICE DETERMINACIN DE CREATININA PRINCIPIO: La creatinina reacciona con cido pcrico en condiciones alcalinas para formar un compuesto de color rojo-anaranjado. La proporcin de incremento de absorbancia a 510 nm por la formacin de color (o formacin del complejo creatinina-picrato), es directamente proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra. Medio alcalino Creatinina + picrato de sodio --------------------- complejo creatinina-picrato

DISPOSICIN DE RPBI

EQUIPO DE SEGURIDAD

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS QUMICA CLNICA

PRCTICA V

PRCTICA No. 5: PERFIL DE LPIDOSMAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN En esta prctica se llev a cabo la determinacin de lpidos el cual se llev a cabo por medio de dos procedimientos, el primero de ellos por medio de la determinacin slo del Colesterol Total, Colesterol HDL y Triglicridos. El segundo fue lo que se denomina como Perfil de Lpidos Completo, en el cual se determin la concentracin srica tanto de Colesterol Total, Colesterol HDL, Triglicridos y adems Glucosa, todo esto por el mtodo automatizado. Cabe mencionar que con estos datos se determinaron tambin por medio de frmulas los valores de Colesterol LDL, Colesterol VLDL y el ndice Arterognico (IA). Por ltimo se realizaron las observaciones correspondientes de acuerdo a los valores obtenidos de las personas a las cuales se les tom la muestra sangunea. INTRODUCCIN Perfil de lpidos El perfil de lpidos consiste en la determinacin y cuantificacin de los diferentes componentes grasos que existen en la sangre. En general, las pruebas son capaces de determinar la cantidad de grasas totales, as como la cantidad de colesterol y triglicridos. Adems, se reporta la cantidad de colesterol de baja densidad (LDL) y la cantidad de colesterol de alta densidad (HDL). Finalmente, tomando en cuenta las proporciones de los diversos lpidos de la sangre, se sugiere un ndice aterognico (ndice o propensin que tiene la persona de desarrollar arterioesclerosis en base a sus niveles de lpidos): Colesterol Total HDL Colesterol (Bueno) LDL Colesterol (Malo) VLDL Colesterol Triglicridos Riesgo Cardiaco COLESTEROL El colesterol es el principal esterol del organismo humano y precursor de todos los dems esteroides corporales. Se encuentra formando parte de membranas celulares, lipoprotenas, cidos biliares y hormonas esteroideas. El colesterol es un importante constituyente de los clculos biliares, pero su principal funcin patolgica, lo constituye la produccin de aterosclerosis de arterias vitales, causando enfermedad coronaria, cerebrovascular y vascular perifrica. El origen del colesterol en el organismo tiene dos fuentes, la externa y el que produce el propio organismo. Debido a que el organismo puede producir su propio colesterol, existe la posibilidad que personas que no consuman colesterol, tengan niveles sanguneos elevados por tener algn desorden gentico-metablico que conlleva a dicha elevacin. Estos desordenes son ms comn de lo que se cree y son la principal causa de ateroma y de enfermedades vasculares, entre ellas el infarto agudo al miocardio. Por esto la importancia de determinar en forma precoz los niveles elevados de colesterol en los pacientes. Los alimentos derivados de animales son ricos en colesterol especialmente huevos, lcteos y las carnes. La mayora de este est en forma esterificada. El organismo absorbe aproximadamente la

mitad del colesterol contenido en la dieta. Los esteroles vegetales son escasamente absorbidos por el organismo. El colesterol es sintetizado prcticamente por todas las clulas nucleadas del organismo. El hgado es el principal rgano productor (10 % del total), siendo otros rganos importantes en la produccin el intestino, corteza suprarrenal, testes y ovario. La sntesis del colesterol se halla regulada sobre todo por la ingesta de colesterol en la dieta. El colesterol por ser una grasa es poco soluble en agua, por lo que si se transportara libre por la sangre sera en forma de gotas de colesterol y se vera en nuestra sangre como gotas de grasa. Pero el caso, es que la naturaleza ha ideado una manera de hacer soluble en agua al colesterol y transportarlo por la sangre y esto es por medio de lipoprotenas. Las lipoprotenas son complejos lipoproteicos mediante los cuales el colesterol, steres de colesterol, los triglicridos y fosfolpidos son transportados a travs de la sangre. El colesterol asociado a las lipoprotenas de baja densidad se le denomina LDL-colesterol, y se le conoce como "colesterol malo", ya que es la principal lipoprotena que lleva el colesterol del hgado al resto del organismo. Al colesterol asociado a la lipoprotena HDL se le denomina HDLcolesterol, y se le conoce como "colesterol bueno" ya que su principal funcin es recoger el colesterol de los tejidos, y llevarlo al hgado. El aumento del LDL-colesterol a nivel sanguneo lleva a un conjunto de proceso que desembocan en la formacin de placas inestables en las paredes de los vasos sanguneos, conocidos como ateromas. Estas placas reducen la luz de las arterias y venas, y si una de estas placas se desprende puede producir ya sea un infarto agudo al miocardio o en el cerebro un derrame. Niveles del colesterol sanguneo y su relacin con el infarto agudo al miocardio. La medicin de solamente el colesterol srico total tiene valor limitado. Sin embargo cuando se mide en conjunto con las diferentes lipoprotenas sobre todo las LDL y las HDL ofrece un panorama ms amplio sobre la probabilidad de produccin de ateroma y por lo tanto de riesgo de coronariopatas. Los niveles normales sricos de colesterol varan con la poblacin y suelen aumentar con la edad. Dichos niveles a diferencia de los niveles normales de otros metabolitos sricos carecen de relevancia. Esto en el sentido que los valores normales indican los rangos medios en los que se encuentra una poblacin, sin decirnos si esos niveles son de riesgo o no de formacin de ateroma. Por eso, aunque en lpidos se puede hablar de niveles normales es mejor utilizar los niveles recomendables ya que estos s nos indican riesgo de formacin de ateroma. Como se mencion existen varios tipos de hiperlipidemias que son importantes de diagnosticar, sobre todo en nios y jvenes, pues sus niveles de colesterol circulantes son muy altos y por lo tanto los riesgos son elevados, sobre todo en las tipo II y III. Adems, existen muchos factores ambientales como la dieta, y el fumado que tambin inciden en aumento de los niveles de lpidos sanguneos.

Colesterol total (mg/dl) Niveles segn riesgo de coronariopatas: Nivel deseable < 200 Lmite alto 200-239 Alto > 240 LDL-Colesterol (mg/dl) Niveles segn riesgo de coronariopatas: En general lo deseable es menos de 130 pero depende de factores de riesgo. Ms adelante se detallan dichos factores de riesgo. Con base en los diferentes factores de riesgo que presente el paciente as como la presencia o ausencia de enfermedad coronaria, los niveles de LDL deseables van a cambiar, pues con un paciente con enfermedad coronaria declarada se va a querer tener el LDL an ms bajo. Perfil del paciente Ausencia de enfermedad coronaria y menos de 2 factores de riesgo Ausencia de enfermedad coronaria y ms de 2 factores de riesgo Presencia de enfermedad coronaria Nivel LDL-objetivo Mximo 160 mg/dl Mximo 130 mg/dl Mximo 100 mg/dl

Factores de riesgo de enfermedad coronaria 1. Edad: Hombre > 45 aos Mujer > 55 aos o menopusica sin tratamiento de reemplazo hormonal 2. Fumador 3. Diabetes mellitus 4. Historia familiar de enfermedad coronaria 5. Hipertensin > 140/90 o tratamiento con anti-hipertensivos 6. HDL-colesterol < 35 mg/dl La diabetes mellitus es un factor tan importante que algunos autores sugieren tomarlo en cuenta como un factor aislado y por lo tanto se recomienda para pacientes diabticos intentar mantener los valores de LDL de ser posible bajo de 100 mg/dl. HDL-Colesterol (mg/dl) Niveles segn riesgo de coronariopatas Alto < 35 Nivel deseable > 35 Mnimo > 60 En el caso del HDL colesterol se puede ser ms especfico con respecto al riesgo coronario asociado a los diferentes niveles como lo muestra la siguiente tabla.

Riesgo de enfermedad coronaria asociado con el HDL-Colesterol Concentracin-HDL (mg/dl) < 25 25-34 35-44 45-54 55-74 > 75 Riesgo coronario Nivel peligroso Riesgo elevado Riesgo moderado Riesgo promedio Riesgo bajo Longevidad

TRIGLICRIDOS Su funcin prioritaria es proveer de energa a las clulas. Constituyen alrededor de un 25 % del peso del tejido adiposo y son la forma principal de almacenamiento de lpidos en el hombre. Los triglicridos son transportados en el plasma, en su mayor parte en forma de quilomicrones y VLDL, pero estn tambin presentes en cantidades menores en LDL y HDL. La concentracin de triglicridos en el plasma en un determinado tiempo es un balance entre la velocidad de entrada en el plasma y su tasa de remocin. Los triglicridos del plasma derivan de dos fuentes, intestinal y heptica. Los triglicridos intestinales son sintetizados a partir de la grasa de la dieta. La entrada hacia la sangre desde el hgado depende mucho del estado nutricional. VALORES DE REFERENCIA DE LPIDOS LPIDOS TOTALES 450 1000 mg / dl TRIGLICRIDOS HOMBRES : 40 160 mg / dl MUJERES: 35 135 mg / dl COLESTEROL Edad riesgo moderado riesgo alto 20-29 mayor de 200 mayor de 200 30-39 mayor de 220 mayor de 240 40 o ms mayor de 240 mayor de 250 LIPOPROTEINAS Se identifican 4 tipos principales basndose en: Tamao, composicin qumica, caractersticas fisicoqumicas y de flotacin, movilidad electrofortica, constituyen un medio de transporte y reservorio circulante para los lpidos, la estructura general de las partculas es similar, pero difieren en tamao, con posicin de lpidos y contenido de apolipoprotenas.

MATERIALES Y EQUIPOS Micropipetas de 10 y 1,000l Pipetas de trasferencia Tubos de ensayo de vidrio Humalyzer 2,000 Incubadora Gradilla Equipo Automatizado Prestige 24i MTODOS Se tom la muestra de sangre al paciente Adn Cano Cano para posteriormente llevara a centrifugarla para separar el suero. Triglicridos: Mtodo: GPO-PAP Equipo: Humalyzer 2,000 Reactivos: 1.- Buffer Reactivos de Trabajo

2.- Enzimas 3.- Estndar (STD) con una concentracin de 200mg/dl 4.- Control Negativo (CN) 5.- Control Positivo (CP) Triglicridos: Se colocaron en un tubo de ensaye 10L de suero y 1ml de los reactivos de trabajo, el cual se etiquet con la letra M de muestra. Luego se mezcl y se incub a 37C por un tiempo de 5 minutos, despus de los cuales se llev a leer la absorbancia de la muestra contra el blanco a una longitud de onda de 505nm. Cabe mencionar que la calibracin del equipo Humalyzer con los controles positivo y negativo, as como la preparacin del blanco fue realizada por otro equipo. En la siguiente tabla se muestra como quedaron los volmenes de cada uno de los tubos empleados en esta prctica: M STD CN CP BLANCO Suero 10L STD 10L CN/CP 10L 10L Reactivos de Trabajo 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml Colesterol total: Mtodo: CHOD-PAP Equipo: Humalyzer 2,000 Reactivos: 1.- Reactivo de colesterol total 2.- Estndar (STD) 3.- Control Negativo (CN) 4.- Control Positivo (CP) Colesterol total: La metodologa empleada para la determinacin del colesterol total fue la misma que la que se utiliz para los triglicridos slo, claros est, que con los reactivos pertinentes para ello. Colesterol HDL: Mtodo: Precipitacin Equipo: Humalyzer 2,000 Reactivos: 1.- Reactivo precipitante 2.- Reactivo de colesterol total

Colesterol HDL: En un tubo de ensaye se vaciaron250L de suero y 25L de reactivo precipitante. Luego se incub a temperatura ambiente durante 10 minutos, despus de los cuales se centrifug por 15 minutos a 4,000rpm. Una vez hecho esto el tubo de ensaye se mir de la siguiente forma: Quedando un sobrenadante sobre un pequeo precipitado. Este sobrenadante fue con el que se sigui trabajando ya que se verti sobre otro tubo de ensaye al cual se le adicionaron 10L de suero y 1ml del reactivo del colesterol total (que fue el mismo que se emple en la determinacin del colesterol total. Despus de Sobrenadante prosigui a mezclar e incubar el tubo por 5 minutos a 37C, y por ltimo se llev al equipo Humalyzer 2,000 para leer la absorbancia a una longitud de onda de 505nm. Perfil de lpidos automatizado: Para eta determinacin solo hizo basta utilizar el equipo Prestige 24i en el cual se vaciaron en las celdillas que este contiene una cantidad de suero (hasta la lnea indicativa) para poder determinar glucosa, colesterol total, triglicridos y HDL. Cabe mencionar que esto se llev a cabo al da siguiente de la primera determinacin con el equipo Humalyzer donde se determin colesterol HDL, colesterol total y triglicridos. RESULTADOS Clculos: Frmulas empleadas: [HDL] = Abs M X 320 = mg/dl Frmula de Friedwald: LDL = colesterol total colesterol HDL (Triglicridos/5) VLDL = Triglicridos/5 I.A. (ndice Arterognico) = colesterol total/HDL [HDL] = 0.120 X 320 = 38.4mg/dl Frmula de Friedwald: LDL = 132.7mg/dl - 38.4mg/dl (124.6mg/dl / 5) = 69.38mg/dl VLDL = 124.6mg/dl / 5 = 24.92mg/dl I.A = 132.7mg/dl / 38.4mg/dl = 3.4557mg/dl Tabla de datos obtenidos en el equipo Humalyzer 2,000 Paciente: Adn Cano Cano Concentracin (mg/dl) Absorbancia Colesterol total 132.7 0.254 Triglicridos 124.6 0.110 HDL 0.120

Resumen datos calculados y obtenidos en el Equipo Prestige 24i Paciente: Adn Cano Cano Resultado del paciente Intervalos de referencia (en el hombre) Riesgo bajo: 200mg/dl Riesgo alto: >200mg/dl Triglicridos 124.6mg/dl Riesgo bajo: 55mg/dl HDL 38.4mg/dl Riesgo normal = 35-55mg/dl Riesgo elevado =