Rosy+SUELO

7/23/2019 Rosy+SUELO

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M I C R O B I O L O G A A M B I E N T A L U T L Pgina 1/16

REA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADMICO DE QUMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL

GRUPO

QU-304

MATERIA

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TITULO

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS

DE LA MATRIZ AMBIENTAL: _____Suelo_________

ASESORA

Dr. ROSA RICO MATA

DATOS DE IDENTIFICACIN DE LOS ANALISTAS

Fecha de inicio del anlisis: 1 de Julio del 2015

Fecha de trmino: 9 de Julio de 2015Nombre Cargo

Salas Padilla Mara Guadalupe Regina Responsable

Pia Cardona Vctor Manuel Guadalupe Administrador

Ramrez Snchez Andrs Laboratorista 1

Pedroza Daz No Miguel ngel Laboratorista 2

Rentera Aldana Jorge Laboratorista 3

GENERACIN: 2014-2016


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DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO

1.- Breve descripcin del estatus ambiental del sitio de estudio:Hace ms de once aos, dio inicio uno de los proyectos ms emblemticos de la Universidad Tecnolgica de Len (UTL). Su nombreoriginal:Campaa Universitaria de Proteccin al Ambiente (CUPA), ha sido heredado a travs de las generaciones de alumnos que hanestudiado dentro de la Universidad, ha sobrellevado los cambios organizacionales (tres rectores), ha sobrevivido al crecimiento de lainfraestructura, matrcula y profesores; al tiempo y a la falta de recursos (humanos, econmicos, entre otros). Ha crecido de ser unproyecto llevado solamente por los alumnos de tecnologa ambiental a ser un proyecto que toda la Comunidad Universitaria empieza aconocer y a adoptar como propio

SITIO DEMUESTREO

Nombre Ubicacin/coordenadas GPS

Imagen de mapa satelital

CUPA, UniversidadTecnolgica de Len

21.064583,-101.582469

2. Evidencia fotogrfica del sitioFecha:30 de Junio del 2015

Hora:10:30 a.m.

Fecha:30 de Junio del 2015

Hora:10:35 a.m.

DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR1. Identificacin

Matriz ambiental:suelo Hora de toma de muestra:10:30 a.m. Hora de siembra:11:00 a.m.

Punto de Muestreo (ubicacin /coordenadas GPS):21.064583, -101.582469

Tiempo de exposicin (aplica solo para muestra de aire)

Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra:PiaCardona Vctor Manuel

Nombre del/ los analistas que sembr la muestra:RamrezSnchez Andrs

2.Parmetros FisicoqumicosColor:Caf Temperatura (oC) ambiental: 27 oC pH:5Olor:Tierra hmeda Describir condiciones climatolgicas:Cielo despejado,

poca concentracin de nubes pero hmedo el suelo

3. Evidencia fotogrfica del sitio de toma de muestra


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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

1. Justificacin del proceso para la identificacin bacterianaCada gnero de bacteria, de hongo, protozoo, etc., inclusive su especie, tienen diferentes reacciones cuando se lesenfrentan diferentes pruebas, esto se hace a partir de un cultivo puro, en este caso un hongo. Con estas pruebaspodremos decir casi con exactitud que gnero y que especie de hongo es.Para la identificacin bacteriana en el laboratorio es importante sus caractersticas morfolgicas, la reaccin a la tincin de

Gram, agrupacin, morfologa colonial, reacciones metablicas como presencia de actividades enzimticas o reaccionesoxido-reduccin.Debido a la interaccinmicrobiana se tienen una estabilidad ambiental, en este caso, trichoderma harzianumacta comofungicida de hongos parsitos y provee de nutrientes a otros microorganismos con una simbiosis.

2. Dos medios de siembra (Nombre y Receta)

Agar dextrosa papa

Agar 15 g

Dextrosa 20 g

Infusin de papa 4 g

Agar Sabouraud

Glucosa 40 gPluripeptona 10 g

Agar 15 g

Clorafenicol 0.05 g

Morfologa Colonial (Medio 1) Morfologa Colonial (Medio 2)

DescripcinEs unhongo que posee estructuras del tipo deconidiashialinas uniceluladas, ovoide en conidioforo hialinolargo no verticilado, nace en centros pequeos. Tienela capacidad de producir clamidosporas en sustratos

naturales, estructuras de vital importancia para lasobrevivencia del gnero en elsuelo bajo condicionesadversas. Es saprofito del suelo y de lamadera y elcrecimiento en el suelo es muy rpido.

DescripcinLa mayora de las colonias de Trichoderma en suinicio tienencolorblanco, que se tornanaverde oscuro o amarillento, con esporulacindensa. El micelio es raro en su mayora, y visto

almicroscopio es fino, losconidiforos sonramificados, parecen unrbol pequeo. Los mismosse presentan como penachos compactados queforman anillos con un sistema de ramas irregular demanera piramidal.

Imagen Imagen
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3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y receta)

Agar dextrosa papa

Agar 15 gDextrosa 20 g

Infusin de papa 4 g

Agar rosa bengalaDextrosa 10 g

Peptona 5 g

Fosfato de potasio 1 g

Sulfato de magnesio 0.5 gCloranfenicol 0.1 g

Rosa bengala 0.05 g

Agar bacteriolgico 15 g

Morfologa Colonial (Medio 1) Morfologa Colonial (Medio 2)

Descripcin

Las colonias se muestran rizoides, pulvinada yfilamentosas color verde rodeadas de un halo colorblanco.

Descripcin

Colonia ampliamente distribuida por el medio,filamentosa color blanco-marrn y con halosdetectables parecidos a un espiral.

ImagenImagen


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4. Procedimiento de Aislamiento(describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)

Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizarMateriales y equipo:

1 parrilla de calentamiento1 agitador de vidrio

2 matraces Erlenmeyer 250 mL2 vasos de precipitado 250 mL2 cajas Petri

Medios de cultivo y reactivosAgar dextrosa papacido tartrico

Preparacin de medios de cultivo:Se pesan 2.77 g de medio agar dextrosa papa en 70 mL de agua destilada en un matraz Erlenmeyer de 250 mLhasta una dilucin considerable. Se calienta en la parrilla y se deja hervir por un minuto. Se hace un tapn para

el matraz y se esteriliza por 15 minutos a una presin de 15 psi. Despus, el contenido se vierte a dos cajas Petrien cantidades de 35 mL en cada una (aproximadamente) y se agrega 1 mL al agar ya servido en las cajas. Se dejasolidificar.

Para cido tartrico:Pesar 0.98 g de cido tartrico y disolver en 70 mL de agua desionizada. Esterilizar por 15 min a una presin de15 psi

Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, seleccin de la colonia y resiembra):

Siembra:La muestra se recolect se le introduce el asa, previamente esterilizada en el mechero, al centro. La muestra enel asa se distribuy en uno de los 2 medios en siembra por estriado, identificando la mitad del medio.se incubaa una temperatura de 37 5 de 2 a 5 das.

Seleccin de la colonia:Despus de ver crecimiento en la placa, se selecciona una colonia con las caractersticas previstas (coloniasverdes con un halo blanco a su alrededor).

Resiembra:Con el asa, previamente esterilizada en mechero, se toma una fraccin de la colonia identificada. En la otra caja

con medio se realiza la siembra por estriado nuevamente para la aislacinde las colonias despus de laincubacin. Se incuba a una temperatura de 37 5 de 2 a 5 das y se observa el crecimiento despus de estetiempo.

2 charolas de pesado

1 esptula

Equipo para esterilizacin

Agua destilada


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5. Esquema del Perfil bioqumico (metablico )para la identificacin del microorganismo seleccionado

HONGO A IDENTIFICAR

casena

+ -

hidrlisis de almidn

+ -

prueba de indol

+ -

prueba de movilidad

+ -

catalasa

+

citrasa

+ -

tincin de Gram

+

cpsula

+ -

produccin de gas, CO2

+ -

produccin de H2S

+ -

-

-


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RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN

1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)

2. MORFOLOGA COLONIAL OBSERVADATipo de colonia 1: Descripcin

Colonia sealada en la imagen. Una colonia negruzca, filamentosay muy uniforme en su desplazamiento en el medio.

FOTO 1

Tipo de colonia 2: DescripcinLa segunda era una colonia puntiforme color amarillo claro, muyseparada a las dems. Plana y de desplazamiento tardado

FOTO 2

Tipo de colonia 3: DescripcinLa tercera era una colonia color verde claro, difuminada,filamentosa y rizoide. Este hongoes el indicado para el aislamiento.

FOTO 3


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3. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO PURO ( RESIEMBRA)FOTO 1

Medio de cultivo Agar dextrosa papa

Colonia que se seleccion para resiembra

FOTO 2Medio de cultivo Agar dextrosa papa

Colonia resembrada

4. MORFOLOGIA COLONIAL OBSERVADA

Descripcin

La resiembra se realiz en el agar de dextrosa

papa y se observ que el crecimiento fuefavorable para el hongo a la temperatura de37C.La propagacin del hongo fue acorde al estriadomostrndose colonias blancas con una levetonalidad verde en el centro de la lnea quedenotaba la presencia del hongo que sebuscaba.Aun no estaba en una etapa mayor, as que sevolvi a incubar a la temperatura yamencionada para que creciese un poco ms.

FOTO 1

FOTO 2

FOTO 3


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5. EVIDENCIA FOTOGRFICA DEL RESULTADO DEL PERFIL BIOQUMICO

Nombre de laprueba

Medio de cultivoutilizado

Resultado obtenido(positivo/negativo) Evidencia fotogrfica

1.-Prueba de

casena

Agar lechedescremada

Negativo (-)

Fundamento de la pruebaLas proteasas son excretadas al medio para la degradacin de protenas, la casena es la protena de la leche que le

da el color blanco, cuando la casena es hidrolizada por las proteasas o enzimas que degradan esta protena, desaparecerel color blanco alrededor del crecimiento bacteriano.

C43H64N10O12+ CASEINASAAMINOACIDOS + PEPTIDOS + CO2+ H20

2.-Hidrlisis dealmidn

Agar mtodosestndar yalmidn

Negativo (-)

Fundamento de la pruebaEl almidn se constituye principalmente por amilosa y amilopectina. Diversas enzimas amiolticas hidrolizan almidn y susproductos. El lugol con el almidn forman un complejo color caf-prpura que desaparece cuando el almidn ha sidodegradado


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3.-prueba de indolAgua peptonada Negativo (-)

Fundamento de la pruebaEs una prueba realizada en microorganismos para determinar la habilidad de romper el indol del aminocidotriptfano. Es realizado por la enzima que se llama con frecuencia triptofanasa. Los resultados positivos semuestran por la presencia de un color rojo en la superficie de la capa de alcohol en el cultivo despus deagregar el reactivo de kovac.Se genera el indol por unadesaminacin reductiva del triptfano via la molcula intermediaria cidoindolpirvico. Las triptofanasas catalizan la reaccin de desaminacin, durante el cual se remueve elgrupoamino (NH2) de la molcula de triptfano. Los productos finales de la reaccin son el indol, cidopirvico,amonaco (NH3) yenerga.Comocoenzima de la reaccin se requiere alfosfato de piridoxal.

4.-Prueba demovilidad

Medio SIM Negativo (-)

Fundamento de la prueba

El medio de cultivo tiene consistencia semislida por lo que la movilidad se observa por el crecimiento delmicroorganismo en todo el tubo, ms all de la zona de inoculacin se detectara por la presencia de turbidezalrededor del punto de inoculacin (picadura). Los microorganismos inmviles solo crecern en la zonainoculada, mientras que los organismos con la capacidad de motilidad se recorrern en el medio.

La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde ms all de la lneade inoculacin. Esto se debe a la presencia de flagelos que le permiten desplazarse por el medio en busca dealimento. Puede ser en medio aerbico o anaerbico.
https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Desaminaci%C3%B3n&action=edit&redlink=1https://es.wikipedia.org/wiki/Aminohttps://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_pir%C3%BAvicohttps://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_pir%C3%BAvicohttps://es.wikipedia.org/wiki/Amon%C3%ADacohttps://es.wikipedia.org/wiki/Energ%C3%ADahttps://es.wikipedia.org/wiki/Coenzimahttps://es.wikipedia.org/wiki/Fosfato_de_piridoxalhttps://es.wikipedia.org/wiki/Fosfato_de_piridoxalhttps://es.wikipedia.org/wiki/Fosfato_de_piridoxalhttps://es.wikipedia.org/wiki/Coenzimahttps://es.wikipedia.org/wiki/Energ%C3%ADahttps://es.wikipedia.org/wiki/Amon%C3%ADacohttps://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_pir%C3%BAvicohttps://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_pir%C3%BAvicohttps://es.wikipedia.org/wiki/Aminohttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Desaminaci%C3%B3n&action=edit&redlink=1


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5.-prueba decatalasa

Portaobjetos yagua oxigenada

Positivo (+)

Fundamento de la pruebaLa catalasa es una enzima que poseen la mayora de las bacterias aerobias y en algunos casos, los hongos. Descompone elperxido de hidrgeno en agua y oxgeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxgeno indica que la pruebaes positiva.

H2O2+ catalasa -------------------H2O + O2

6.-Prueba decitrasa

Agar citrato deSimmons

Negativo (-)


Se determina la utilizacin del citrato como nica fuente de carbono y energa. El citrato permeasa permite eltransporte de citrato al interior de las clulas y la enzima Citrasa convierte el citrato en acidooxalacetico y acetato,productos que son convertidos enzimticamente en cido pirvico y CO2. El CO2 liberado se combina con el sodio y agua yforman carbonato de sodio que es alcalino cambiando el bromotimol de verde a azul intenso.

C6H5O7-3 + Citrasa C4H5O5 + C2H30 C3H4O3+ CO2

CO2 + H2O + Na CO3-2


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7.-tincin de GramPositivo (+)

Fundamento de la pruebaEs un tipo de tincin diferencial empleado en la microbiologa para la visualizacin de microorganismos y su morfologa. Elcristal violeta (colorante catinico) penetras en todas las clulas bacterianas (tanto Gram negativas como positivas) atravs de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por Yodo en equilibrio con yoduro de potasio y aguadestilada los cuales estn presentes para solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fijecon mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El yodo entra en las clulas y forman un complejo insoluble ensolucin acuosa con el cristal violeta. El alcohol decolora el complejo, las Gram positivas no se decoloran. Ya que tododepende de su pared celular, si esta es sana ser Gram positivo.

8.-prueba decpsula

Tinta china ohenna

Negativo (-)


La cpsula es una cubierta de grosor vartiable formada habitualmente por unidades de polisacridos, protenaso ambos. Si est bien estructurada y se encuentra bien adherida a la clula, se le denomina cpsula; si por elcontrario, tiene estructura mal definida y su adhesin es dbil, se le conoce como glicoclix. De acuerdo a suestructura qumica, puede ser flexible o rgida. La rigidez le confiere la caracterstica de una matrizimpermeable. Determina la adhesin a superficies (biopelculas), constituye una barrera de proteccin contra la

fagocitosis y los anticuerpos e impide la desecacin y la accin de otros agentes.


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9.-Pruebaproduccin de gas

Caldo lactosado Negativo (-)

Fundamento de la pruebaEl extracto de carne y la peptona son la fuente de carbono y nitrgeno mientras que la lactosa es el hidrato de carbono afermentable. Por la fermentacin de la lactosa se produce cido y gases (H2,CH4 y CO2 loscuales se evidencian al utilizarcampanas Durham).

C6H12O6 C3H4O3+ NADH + H+ C3H3O3+ CO2

10.-pruebaproduccin decido sulfhdrico

Agar triple azcarhierro (TSI)

Negativo (-)


En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona aportan los nutrientes adecuadas para eldesarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato desodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sustrato de hierro y amonio, es lafuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfato de hierro, color negro.Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de lassales dehierro), se presentar un ennegrecimiento deltubo. La produccin de sulfhdrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentacin de laglucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.

SO4 2+ ATP + 2H+ ----APS + PpiAPS + 2e- + 2H+ -------> HSO3 - + AMP

HSO3 - + 6e- + 2H+ ----HS- + H2OATP sulfurilasa
https://es.wikipedia.org/wiki/Salhttps://es.wikipedia.org/wiki/Hierrohttps://es.wikipedia.org/wiki/Hierrohttps://es.wikipedia.org/wiki/Sal


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IDENTIFICACIN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: _________________suelo______________________

1.- Nombre cientfico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los resultadosdel perfil bioqumico planteado ( gnero y especie)

Trichoderma harzianum

2. Taxonoma del o los microorganismo identificadosReino: Fungi

Divisin: AscomycotaSubdivisin: Pezizomycotina

Clase: SordariomycetesOrden: Hypocreales

Familia: HypocreaceaeGnero: TrichodermaEspecie: T. harzianum

3. Caractersticas generales

La mayora de las Trichoderma no tienen un periodo sexual simplemente producen esporas asexuales. Sinembargo a unas pocas lneas de Trichoderma si se les conoce un periodo sexual pero no entre las lneas quese usan en el control biolgico.Mientras que las cepas silvestres son muy adaptables y pueden ser heterocariticas (contienen ncleosgenotipicamente distintos en un mismo organismo), las cepas usadas en control biolgico en agricultura son,o deben ser, homocariticas (todos los ncleos son genticamente similares o idnticos).

4. Ciclo(s) biogeoqumicos en el(los) que intervienen

Ciclo del NitrgenoCiclo del Carbono

5. La funcin que juegan en la transformacin de la materia orgnica a travs

de los ciclos biogeoqumicos

Segn Nalk et al, ayuda a la disminucin de agentes patgenos, ayudan a la fijacin de nitrgeno en plantas,estimulando el crecimiento en algunos tipos de plantas y rboles, como la vainilla, por ejemplo.Cada microorganismo cumple una funcin importante en los ciclos biogeoqumicos. Uno de ellos es el hongoTrichoderma harzianum, el cual est presente en suelos de cultivos, pastizales, etc.Se ha comprobado que no cumple con muchas funciones metablicas como la degradacin de casena,produccin de indol, incluso si poda vivir del citrato como nica fuente de carbono.La interaccin que realiza dentro de la matriz del suelo suele ser utilizada por agricultores en sus campospara la eliminacin de hongos, como eBotrytis,Fusariumy Penicilliumsp,que le sean dainos al cultivo quese tenga.
https://es.wikipedia.org/wiki/Botrytis_cinereahttps://es.wikipedia.org/wiki/Botrytis_cinereahttps://es.wikipedia.org/wiki/Botrytis_cinereahttps://es.wikipedia.org/wiki/Fusariumhttps://es.wikipedia.org/wiki/Fusariumhttps://es.wikipedia.org/wiki/Fusariumhttps://es.wikipedia.org/wiki/Fusariumhttps://es.wikipedia.org/wiki/Botrytis_cinerea


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6. Conclusin parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de lamicrobiologa en el rea ambiental

Como conclusin del presente proyecto ,conocimos que los microorganismos son los componentes msimportantes del suelo. Constituyen su parte viva y son los responsables de la dinmica de transformacin ydesarrollo. La diversidad de microorganismos que se encuentran en una fraccin de suelo cumplen funcionesdeterminantes en la transformacin de los componentes orgnicos e inorgnicos que se le incorporan. Estopermite comprender su importancia en la nutricin de las plantas al efectuar procesos de transformacinhasta elementos que pueden ser asimilados por sus races. La humificacin de la materia orgnica es unproceso netamente microbiolgico.Tambinal investigar y aislar elTrichodermaspp. aprendimos que son hongos los cuales estn presentes encasi todos los suelos. Normalmente son los hongos con mayor presencia en ellos.Trichodermacoloniza rpidamente las races de las plantas Trichodermaspp. tambin ataca, parasita y/o sealimenta de otros hongos.ste ha desarrollado numerosos mecanismos para atacar a otros hongos y a la vez mejorar el crecimiento delas races de las plantas. Sin embargo la mayora de las cepas son ms efectivas contra un hongo patgenoque otro y ser tambin no efectivos en un gran nmero de hongos.Gracias a loaprendido en el curso de microbiologa ambiental pudimos realizar varias de las pruebas

bioqumicas necesarias para la clasificacin del hongo en cuestin, al igual que identificar su funcin dentrode los ciclos biogeoqumicos que, tienen una gran importancia para el correcto funcionamiento delambiente.Adquirimos conocimientos acerca de los mtodos utilizados para las pruebas usadas en este trabajo quepueden ser aplicadas para el reconocimiento o el aislamiento en cualquier microorganismo o bien, si no sonlos mismos mtodos, se asemejan a los diferentes existentes y as facilitar el aprendizaje de nuevos mtodosy abrir espacio a conocimientos ms elaborados.

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