Saul Casas Alarcon

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL FACULTAD DE ODONTOLOGA

EFICACIA EN LA CICATRIZACIN DEL APSITO CON ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (mua) VERSUS EL APSITO QUIRRGICO CONVENCIONAL EN

GINGIVECTOMIAS EN ORYCTOLAGUS CUNICULUS (conejos)

TESIS

PARA OBTENER EL TTULO PROFESIONAL DE

CIRUJANO DENTISTA

Presentada por El Bachiller:

CASAS ALARCN, SAL

LIMA PER

2011

EFICACIA EN LA CICATRIZACIN DEL APSITO CON ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (mua) VERSUS EL APSITO QUIRRGICO CONVENCIONAL EN

GINGIVECTOMIAS EN ORYCTOLAGUS CUNICULUS (conejos)

MIEMBROS DEL JURADO

Mg. C.D. PEDRO ROMERO CARLOS: PRESIDENTE

C.D. LUIS GONZLES GONZLES: SECRETARIO

Mg. C.D. MARIA ELENA MOSCOSO SNCHEZ: VOCAL

Mg. C.D. NEME PORTAL BUSTAMANTE: MIEMBRO DEL JURADO

C.D. ORISON PARDO MATOS: SUPLENTE

AGRADECIMIENTO

Al Dr. Cachay, al Dr. Chuna, al Dr. Mallma y al

Dr. Montes por su gran ayuda en la realizacin

del presente trabajo de investigacin, que me

brindaron su total y completo apoyo de una

manera desinteresada e incondicional.

A mis amigas Mara Isabel y Milagros Felicia

por su colaboracin y compaa constante, y

sobre todo por su demostracin de amistad y

confianza.

A mis jurados por las sugerencias y aportes

brindados.

A todos los que me ayudaron de alguna u otra

manera el la realizacin del presente trabajo

de investigacin.

DEDICATORIA

A Dios por cuidarme y guiarme

en todo momento, a mis padres

Alberto y Dolores, y a mis hermanos, y muy en

especial a mi hermana Romy por brindarme

su apoyo y confianza incondicional a lo

largo de toda mi vida.

NDICE

TTULO

RESUMEN

ABSTRACT

Pg.

I. INTRODUCCIN 1

II. HIPTESIS. 27

III. OBJETIVOS 28

IV. MATERIALES Y MTODOS 29

V. RESULTADOS.. 37

VI. DISCUSIN 44

VII. CONCLUSIONES. 47

VIII. RECOMENDACIONES 49

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.. 5o

X. ANEXOS. 54

RESUMEN

El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el efecto del apsito con

aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) en comparacin con el

apsito quirrgico convencional en gingivectomias de conejos

(Oryctolagus cuniculus). Siendo un estudio de tipo longitudinal,

prospectivo, comparativo y experimental. Se utilizaron 18 conejos

(Oryctolagus cunculus) sometidos a gingivectomias divididos en tres

grupos: Grupo A tratados con apsito con aceite esencial de

Minthostachys mollis (mua). Grupo B con apsito quirrgico

convencional y el grupo C control. Las gingivectomias se realizaron en la

regin anterior maxilar y mandibular por cada conejo aproximadamente

de 3 por 2 mm de longitud. Los resultados obtenidos indican que el grupo

tratado con el apsito con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua)

despus de las gingivectomias presentaron menor grado de clulas PMN

(polimorfonucleares neutrfilos) en comparacin con el grupo que se

trato con apsito quirrgico convencional y el control. A los 3 das y 7

das el grupo tratado con el apsito con aceite esencial de Minthostachys

mollis (mua) despus de las gingivectomias presenta menor grado de

linfocitos y macrfagos; como tambin mayor grado de fibroblastos en

comparacin con el grupo que se trato con apsito quirrgico

convencional y el control. A la vez el grupo tratado con el apsito con

aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) presenta mayor grado de

epitelizacin en comparacin con el grupo que se trato con apsito

quirrgico convencional y el control.

Con este estudio se ha demostrado la mayor eficacia del apsito con el


apsito quirrgico convencional en la cicatrizacin de gingivectomias.

Palabras clave: cicatrizacin, Minthostachys mollis (mua), flavonoides.

ABSTRACT

The aimed of this study was to evaluate the effect of essential oil dressing

Minthostachys mollis (mua) compared with conventional surgical

gingivectomy dressing in rabbits (Oryctolagus cuniculus). It is a

longitudinal, prospective and experimental study. We used 18 rabbits

underwent gingivectomy divided into three groups: Group A treated with

essential oil dressing Minthostachys mollis (mua). Group B with

conventional surgical dressing and the group C control. The gingivectomy

was performed in the anterior maxilla and mandible of each rabbit in about

3 to 2 mm in length. The results indicate that the group treated with the

essential oil dressing Minthostachys mollis (mua) after gingivectomy cells

had lower level of PMN (polymorphonuclear cells - neutrophils) compared

with the group that was treated with conventional surgical dressing and

also at y the control group . By the day 3 and 7, the group treated with

essential oil dressing Minthostachys mollis (mua) after gingivectomy

showed low levels of lymphocytes , macrophages, and fibroblasts.

Furthermore, greater results compared with the group that was treated

with dressing conventional surgical and control. While the group treated

with essential oil dressing Minthostachys mollis (Mua) has better degrees

of epithelialization compared with the group that was treated with

conventional surgical dressing and control.

This study has demonstrated the greater effectiveness of the dressing with

the essential oil of Minthostachys mollis (Mua) compared with

conventional surgical dressing in the healing of gingivectomy.

Key words: healing, Minthostachys mollis (Muna), flavonoids.

1

I. INTRODUCCIN

El retraso de la cicatrizacin de heridas de la mucosa bucal y la evolucin

lenta y complicada de la misma son un gran problema para el cirujano

dentista muchos son los agentes que determinan que este proceso resulte

lento como los agentes locales y los generales. La inflamacin lleva

tambin a un retraso en la cicatrizacin y cierre de la misma.

Varias investigaciones se han realizado en bsqueda de mejores

resultados ya sea a travs de mejores sustancias o tcnicas en el manejo

de las heridas quirrgicas o infectadas a nivel de la mucosa bucal.

En estos casos el manejo teraputico de rutina es asistir al uso adecuado

de antiinflamatorios qumicos. Pero lo importante seria realizar una

tcnica que nos lleve a observar mejores resultados en pacientes con

complicaciones.

Muchas han sido las tcnicas que se han intentado y que se siguen

intentando, tales como rayos lser, la sangre de grado, ua de gato,

corticoides, etc.

La yodopovidona al 5 % constituye tambin un medicamento cicatrizante

y antisptico quirrgico muy utilizado en heridas de cavidad bucal. (31)

Dentro de los factores que influyen, podemos mencionar los factores

generales como, enfermedades sistmicas (diabetes, hipertensin,

anemia, etc.) y los factores locales que son los que ms intervienen, como

los procesos infecciosos, pero a nivel local existen componentes; como el

tejido conectivo en especial por las fibras colgenas que se pueden

estimular para mejorar la cicatrizacin.

2

Desde la antigedad las enfermedades bucales han hecho sufrir al

hombre, y como prueba de ello se sabe que la Odontologa fue practicada

en las culturas Egipcia, Mesopotmica, Incaica y Maya. Incluso, se

conoce que los indios Norteamericanos tenan muy en alto el concepto de

una boca limpia, y con ese propsito masticaban gomas, resinas y ciertas

races de plantas para, de esa manera, mantener limpios sus dientes y

prevenir la caries.

El Minthostachys mollis o mua, es importante estudiarla ya que existen

estudios que han demostrado su propiedad bactericida y fungicida de

manera directa, y al ser preparados con otros compuestos estas

propiedades podran variar.

La Minthostachys mollis (mua) contiene flavonoides; la mayora de los

detectados responden a estructuras de flavonoles 3- 4 dihidroxilados en

el anillo B, glicosilados en posicin C3. Los flavonoides retiran oxgeno

reactivo especialmente en forma de aniones superxidos, radicales

hidroxilos, perxidos lipdicos o hidroperxidos. De esta manera bloquean

la accin deletrea de dichas sustancias sobre las clulas. Sus efectos

citoprotectores son, por ejemplo, bien potentes en fibroblastos de la piel

humana, queratinocitos, clulas endoteliales y ganglios sensoriales

cultivados en presencia de sulfoxina-butionina, un inhibidor irreversible de

la glutatin sintetasa. (1)

Por este motivo nos hemos planteado realizar un estudio para evaluar la

eficacia en la cicatrizacin del apsito con aceite esencial Minthostachys

mollis o mua, en comparacin con el apsito quirrgico convencional

(oxido de zinc ms eugenol) en gingivectomias realizadas en conejos

3

(Oryctolagus cuniculus). Por tal motivo nos planteamos la siguiente

pregunta:

Cul es la eficacia en la cicatrizacin del apsito con aceite esencial de

Minthostachys mollis o mua, en comparacin con el apsito quirrgico

convencional en gingivectomias realizadas en conejos (Oryctolagus

cuniculus)?

El Per presenta una riqueza y mega diversidad de plantas

medicinales nativas, que es uno de los pilares de la

etnofarmacologa y la medicina tradicional, desde la poca del

Incanato hasta la actualidad. Siendo estas utilizadas en forma

emprica por sus bondades teraputicas en el cuidado y restauracin de la

salud. (12)

Dentro de este contexto, los aceites esenciales (AE) son productos

naturales de gran valor e importancia econmica. (25)

La bioactividad de los AE se investiga a partir de los efectos

farmacolgicos que son producidos por sus metabolitos, los cuales

son obtenidos por diferentes tcnicas fisicoqumicas a partir de las hojas.

(25)

Son pocas las plantas peruanas que han validado su uso tradicional,

una de estas es la Minthostachys mollis, conocida popularmente como

mua, la cual es usada para el tratamiento de dolencias de las vas

respiratorias y digestivas. (6)

La mua habita en los diferentes pisos ecolgicos de nuestra serrana

crece entre 2500 y 3500 msnm, donde existe en abundancia. (29)

Es una planta hemicriptfila que durante el invierno (fro y seco)

4

desaparecen sus hojas para brotar nuevamente con las primeras lluvias

de la primavera. (21)

Diversos estudios han mostrado su efecto antibacteriano e insecticida ,

otros han explorado qu metabolitos estn presentes en su aceite

esencial. (9)

Antes de considerar los procesos de reparacin tisular, es importante

tener presente que la cicatrizacin, es el resultado de la regeneracin de

los tejidos y del cierre de una herida; la cicatrizacin no es un fenmeno

aislado y su evolucin est condicionada por una serie de factores

bioqumicos a nivel de la solucin de continuidad que representa la lesin,

por unos cambios en las estructuras tisulares y por una serie de procesos

que determinan la formacin de la cicatriz. (7)

El epitelio lesionado tiene una habilidad para regenerarse y restablecer la

integridad a travs de un proceso de migracin epitelial conocido con el

nombre de "inhibicin por contacto". En general un borde libre de epitelio

contina migrando (por proliferacin de clulas germinales que empujan

el borde libre hacia delante) y se detiene en su migracin al hacer

contacto con otro borde libre de epitelio. Este proceso se regula por la

actividad histoqumica de las clulas epiteliales que han perdido contacto

con otras clulas epiteliales a su alrededor. (8)

En aquellas heridas en las que nicamente se ha afectado la superficie

del epitelio (abrasiones), ocurre una migracin del epitelio a travs de una

matriz base de tejido conectivo. En heridas en las que el epitelio ha sido

lesionado en profundidad, ste migra si existe una base de tejido

conjuntivo, permaneciendo debajo de la superficie del coagulo de sangre

5

que esta desecado (la costra) hasta alcanzar el otro margen epitelial. Una

vez que la herida est totalmente epitelializada, la costra se afloja y se

desprende fcilmente. (4)

Un ejemplo clsico del proceso de inhibicin por contacto ocurre cuando

se produce una apertura accidental hacia el seno maxilar. Si el epitelio de

la pared del seno como el de la mucosa bucal, son lesionados, comienza

una migracin en ambas partes hasta hacer contacto entre s, creando un

tracto epitelizado entre la cavidad bucal y el seno maxilar que se conoce

como fstula bucosinusal. (4)

Cicatrizacin

La cicatrizacin es un proceso natural que posee el cuerpo para

regenerar los tejidos de la dermis y epidermis en respuesta a una lesin,

siendo el resultado la regeneracin de los tejidos y el cierre de una

herida. Su evolucin esta a nivel de la solucin de continuidad que

presenta la lesin, por unos cambios en las estructuras tisulares y por una

serie de procesos a nivel celular, que termina en la formacin de cicatriz.

(3)

Tipos de cicatrizacin, segn la unin de los bordes Los cirujanos usan los trminos cicatrizacin por primera intencin,

segunda intencin y tercera intencin para describir tres procesos

bsicos en la cicatrizacin de las heridas. (5)

Cicatrizacin por primera intencin

Los mrgenes de la herida estn en contacto (2), es decir, tiene los

planos cerrados, estando suturada o no, por lo tanto los bordes de la

6

herida en la cual no ha ocurrido prdida de tejido son colocados en la

posicin anatmica exacta en que se encontraban antes de la lesin. La

herida se repara con una mnima formacin de cicatriz. Estrictamente

hablando la cicatrizacin por primera intencin es nicamente una teora

ideal, imposible de alcanzar clnicamente; no obstante, el trmino es

generalmente usado para sealar que los bordes de una herida son

reaproximados. Esta es la forma de cicatrizacin que se podra esperar

despus de la extirpacin de una lesin en una parte de la cavidad bucal

donde la flexibilidad de los tejidos es tal que la herida se puede unir o

suturar. (15). Este proceso de cicatrizacin requiere de una menor

epitelizacin, depsito de colgeno, contraccin y remodelacin. Por lo

tanto, la cicatrizacin ocurre mucho ms rpido, con un bajo riesgo de

infeccin y con una menor formacin de cicatriz que en las heridas que lo

hacen por segunda intencin. Ejemplos de este tipo de reparacin son:

reduccin adecuada de fracturas de hueso, reposicin de laceraciones,

colgajos y reanastmosis anatmica de los nervios. (5)

Cicatrizacin por segunda intencin

La cicatrizacin por segunda intencin ocurre cuando los bordes de la

herida no han sido afrontados, o bien cuando se ha producido despus

de la sutura una dehiscencia de la misma dejando que se produzca un

cierre espontneo. Aparece en este caso un tejido de granulacin que no

es ms que la proliferacin conjuntiva y vascular. En este proceso la

epitelizacin se efecta de una manera ms lenta a travs de dos vas:

centrpeto es decir, de los bordes de la herida hacia el centro partiendo de

7

los islotes epiteliales, y centrfugo de los islotes hacia la periferia. (15)

En contraste, la cicatrizacin por segunda intencin significa que existe

prdida de tejido por lo que hay una brecha entre los bordes de la herida,

esta cicatrizacin se da regularmente en tejidos poco flexibles, cuyos

bordes no se pueden aproximar, en este caso se requiere de la migracin

de gran cantidad de epitelio, deposicin de colgeno, contraccin y

remodelacin. Su evolucin es muy lenta y genera una cicatriz de mayor

tamao que en el caso de la cicatrizacin por primera intencin existiendo

un mayor riesgo de infeccin en la herida, se habla de la cicatrizacin de

este tipo en el cual la herida se granula hacia adentro ya que el material

que llena el defecto se llama tejido de granulacin. (15)

Este tipo de herida es el resultado de la biopsia de una lesin en una zona

de la cavidad bucal en la cual los tejidos no son flexibles y cuyos bordes

no se pueden aproximar. Es bsicamente idntico al de la cicatrizacin

por primera intencin a excepcin de que los fibroblastos y los capilares

tienen una mayor distancia para migrar, se forma ms tejidos de

granulacin y la necesidad de curacin es lenta. (13,15)

Otros ejemplos de este tipo de cicatrizacin son la del alvolo dentario

posterior a una exodoncia, fracturas pobremente reducidas y lesiones

muy aparatosas con prdida de tejido. (5)

Cicatrizacin de tercera intencin

Cuando la aproximacin de los bordes se realiza varios das despus que

se produjo la solucin de continuidad, o la cicatrizacin ocurre cuando se

cierra una herida mediante una sutura despus de un perodo de

8

cicatrizacin por segunda intencin. El cierre se hace cuando se est

seguro de que se ha superado el riesgo de infeccin. (5)

Esta forma de cierre se efecta sobre todo en las heridas contaminadas

en la que no es conveniente suturar de inmediato porque se propicia la

infeccin, cuando se considere que la contaminacin est controlada y es

remota la probabilidad de infeccin es en este el momento indicado para

la realizacin de la sutura. (5)

En sntesis, independientemente de la aproximacin o no de los bordes, el

proceso de reparacin es igual, se puede resumir como la formacin y

maduracin del tejido de granulacin con migracin de los bordes

epiteliales, la diferencia radica en que por primera intencin se acelera el

proceso en cuanto al tiempo de curacin, al ser menor el espacio entre los

mrgenes de la herida. (5)

La curacin de una herida esta, en gran parte, influida por el estado

nutricional del enfermo, ya sea por desnutricin o por falta de asimilacin.

La cicatrizacin es el resultado de la regeneracin de los tejidos y del

cierre de una herida. Su evolucin esta a nivel de la solucin de

continuidad que presenta la lesin, por unos cambios en las estructuras

tisulares y por una serie de procesos a nivel tisular, que determina la

formacin de la cicatriz. (23)

La rotura local de la relacin intercelular y la prdida del contacto suele

ser el primer efecto de una lesin a partir del cual se inicia el proceso de

curacin siendo la respuesta inflamatoria la primera fase de todo proceso.

(15). Se sabe que las clulas inflamatorias regulan la separacin de la

matriz del tejido conjuntivo. En los rganos y tejidos humanos que han

9

perdido la capacidad de regenerar sus propias clulas, la cicatrizacin se

hace gran parte por sntesis de tejido conectivo para suplir defectos o unir

bordes de la herida. Este proceso comienza con la formacin de tejido de

granulacin donde los fibroblastos forman el elemento celular ms

importante hasta que la cicatrizacin se complete, junto con un lecho

capilar para un buen aporte sanguneo. (26)

En toda lesin tisular sin importar su naturaleza sea incisiones de origen

traumtico, por quemaduras, heridas limpias o infectadas la respuesta

tiene un mismo esquema fundamental, pero con variantes particulares

inherentes al tipo de traumatismo y al tipo de tejido lesionado. (4)

Etapas en la cicatrizacin de las heridas

Independientemente de la causa que origin la lesin, en la herida se

inicia un proceso, el cual tiene como fin ltimo trabajar para devolver la

integridad al tejido afectado. Como se indic anteriormente, este proceso

se llama cicatrizacin el cual se divide tpicamente en tres fases:

inflamatoria, proliferativa y de remodelacin. Las plaquetas con su

liberacin de citoquinas y factores de crecimiento son esenciales en cada

fase. (7)

Etapa de inflamacin o del sustrato

La inflamacin comienza inmediatamente despus de que el tejido es

lesionado y en ausencia de factores que la prolonguen, dura

aproximadamente de 3 a 5 das. Existen dos fases en la inflamacin:

vascular y celular. La fase vascular ocurre cuando empieza la inflamacin,

10

inicialmente con una vasoconstriccin debido a la ruptura celular, con la

finalidad de disminuir la prdida de sangre en el rea de la lesin, y a su

vez promover la coagulacin sangunea. Pocos minutos despus, la

histamina y las prostaglandinas E1 y E2, elaboradas por los leucocitos

causan vasodilatacin y aumento de la permeabilidad al crear pequeas

aberturas entre las clulas endoteliales, lo cual permite el escape de

plasma y leucocitos que migran hacia los espacios intersticiales,

facilitando la dilucin de los contaminantes y generando una coleccin de

fluidos que es conocido como edema. (8)

Los signos propios de la inflamacin son eritema, edema, dolor, calor (30

a.C 38 d.C) y prdida de la funcin. El calor y el eritema son causados

por la vasodilatacin; el edema es producido por la trasudacin de

lquidos; el dolor y la prdida de la funcin son causadas por la histamina,

quininas y prostaglandinas liberadas por los leucocitos, as como por la

presin del edema. (5)

La fase celular de la inflamacin es disparada por la activacin del

sistema de complemento, un grupo de enzimas plasmticas. Existen

diversos tipos de enzimas pero las ms importantes son el C3 y C5, las

cuales actan como factores qumicos, haciendo que los leucocitos

polimorfonucleares (neutrfilos) se agrupen y modifiquen en el lado de la

lesin (marginacin) y luego migren a travs de las paredes de las clulas

endoteliales (diapdesis). De la misma manera, ayudan a la opsonizacin

de las bacterias facilitando su fagocitosis y provocando su lisis al insertar

perforinas formadoras de poros en las membranas de bacterias y clulas

extraas. (4,18)

11

Una vez en contacto con el material extrao (por ejemplo una bacteria) los

neutrfilos liberan el contenido de sus lisosomas (degranulacin). Las

enzimas lisosmicas (formadas fundamentalmente por proteasas y

protenas antimicrobianas llamadas defensinas) trabajan para destruir las

bacterias y otros materiales extraos y para digerir tejido necrtico. Este

proceso es tambin ayudado por los monocitos, quienes de la sangre

penetran en los tejidos transformndose en macrfagos tisulares, los

cuales fagocitan cuerpos extraos y tejidos necrticos. (5,19)

Con el tiempo aparecen dos grupos de linfocitos: B y T. Los linfocitos B

son responsables de la inmunidad humoral. Se encargan, adems, de

reconocer el material antignico y producir anticuerpos a partir de las

clulas plasmticas. Participan en la formacin de clulas de memoria

para identificar materiales extraos e interactan con el complemento

para lisar clulas invasoras. Por su parte, los linfocitos T aparecen en tres

grupos: los T ayudadores los cuales estimulan a las clulas B para su

proliferacin y diferenciacin; los T supresores que trabajan para regular a

los T ayudadores en su funcin; y los T citotxicos, que lisan clulas que

se presentan como extraas. Durante la inflamacin, pequeas

cantidades de fibrina son depositadas para permitir a la herida resistir

ciertas fuerzas de tensin. (23) Debido a los cambios bioqumicos y

celulares que abarca esta fase se puede dividir en tres sub fases:

humoral, enzimtica y celular, as como tambin en respuesta vascular,

respuesta hemosttica y respuesta celular. (23)

En el transcurso del primer da despus de afrontar los bordes de la

herida, es decir, despus de 24 horas, los fenmenos de la inflamacin se

12

producen por una serie de mediadores que pueden ser de origen

exgeno, por ejemplo: los productos liberados por grmenes que pueden

aumentar la permeabilidad capilar y atraer los leucocitos en la zona

lesionada, o de origen endgeno sea provenientes del plasma. (23)

Al mismo tiempo los primeros cambios celulares que se producen son

depsitos de elementos formes de la sangre y del plasma en la superficie

de seccin de la herida con formacin de cogulos; la fibrina y las

plaquetas se separan de los elementos formes emigrando estas ltimas

hacia las paredes de la herida, para adherirse a los capilares lesionados y

propiciar la formacin de microtrombos. El sistema de coagulacin que es

la reaccin ms temprana y que interviene en esta fase inicial constituye

un estimulador rpido de la herida, de la conversin de fibringeno a

fibrina que proporciona un elemento estimulante a los macrfagos y de los

pequeos ppticos que son sustancias quimiotcticas de los leucocitos,

los cuales se liberan durante la polimerizacin de la fibrina. (23)

La respuesta inflamatoria est condicionada por una serie de mediadores

qumicos como la histamina y serotonina y una diversidad de enzimas

hidrolticas liberadas por linfocitos, macrfagos y monocitos, solo ejercen

sus efectos cuando ocurre una lesin que los libera al liquido tisular

convirtindolos en los primeros mediadores cuyo efecto es transitorio, la

histamina produce una breve fase de constriccin arteriolar, y luego una

vasodilatacin local y un aumento de la permeabilidad capilar. La

serotonina contribuye al aumento de la permeabilidad capilar, es liberada

en el momento de la adhesin plaquetaria a la pared vascular lesionada

esto contribuye a la vasoconstriccin y a la formacin de microtrombos

13

destinado a producir una hemostasia local. (23)

Por otro lado las enzimas intracelulares como el monofosfato cclico de

adenosina y el monofosfato cclico de guanosina participan en la

liberacin de mediadores como la histamina. El monofosfato cclico de

adenosina tambin favorece la liberacin de enzimas lisosomicas

especficas que ayudan en la reparacin de las heridas. A travs del

monofosfato cclico de guanosina hay una vinculacin entre los agentes

vasoactivos que provocan los cambios en la permeabilidad muscular, y

las enzimas que producen los cambios tisulares y los procesos de

reparacin. (23)

La respuesta celular comienza despus de 12 a 16 horas de que la herida

se produjo, las primeras clulas inflamatorias que aparecen son los

leucocitos polimorfonucleares, sin los cuales no hay un control eficaz de la

sepsis de la herida. Los leucocitos contienen grnulos citoplasmticos que

quizs constituyan una fuente de enzimas y, adems, participan en la

fagocitosis, aunque no es su principal actividad; sin embargo, la actividad

fibrinoltica est relacionada directamente con la desintegracin de los

granulocitos. (15)

Luego aparecen los linfocitos los cuales son productores de anticuerpos

especficos. Los linfocitos T segregan linfoquina capaces de regular el

crecimiento y la actividad de los fibroblastos y la sntesis de colgeno.

Estos linfocitos pueden inhibir la migracin de los fibroblastos y la sntesis

de las protenas por la va de los mediadores solubles. Asimismo debe

existir un equilibrio en la regulacin de las linfoquinas, el que puede llevar

a una cicatrizacin dbil o, a la inversa, a una fibrosis excesiva (15)

14

Los macrfagos y sus lisosomas contienen grandes cantidades de

enzimas hidrolticas, las cuales son esenciales en la digestin, transporte

del material de desbridamiento de la herida, as como liberadores de

citocinas o factores de crecimiento que participan en la regulacin de la

fibrosis, la cicatrizacin de las heridas crnicas y en las injurias cutneas,

la angiogenia y la osteogenia, estimulan la mitosis y la migracin de

clulas hacia la herida e influyen en la fibroplasia.

Finalmente las clulas plasmticas producen anticuerpos especficos

contra bacterias y antgenos provenientes de cuerpos extraos. (15)

Los macrfagos que migran y se establecen al final de la fase inflamatoria

parecen desempear un papel muy importante al estimular la actividad de

sntesis de los fibroblastos. (15)

Etapa fibroblstica o proliferativa

Los fibroblastos comienzan con el depsito de grandes cantidades de

fibrina y tropocolgeno, as como otras sustancias iniciando la fase

fibroblstica en la reparacin de la herida. Las sustancias consisten en

diversos polisacridos, los cuales actan como fijadores de las fibras de

colgeno. La fibrina forma una red que permite a los nuevos capilares

atravesar la herida de un borde a otro. Los fibroblastos se originan

localmente y a travs de las clulas mesenquimticas pluripotenciales,

stas comienzan con la produccin de tropocolgeno al tercer o cuarto

da despus de la lesin. Los fibroblastos tambin secretan fibronectina,

una protena a la cual se le han encontrado diversas funciones, entre

estas se encuentran ayudar a estabilizar la fibrina; permite el

15

reconocimiento del material extrao que debe ser removido por el sistema

inmunolgico; participar como factor quimiotctico de los fibroblastos, y

ayudar a guiar a los macrfagos en su actividad fagocitara a lo largo de la

red de fibrina. La etapa fibroblstica contina con el incremento y el

aumento de nuevas clulas. La fibrinlisis ocurre causada por la plasmina,

que aparece en los nuevos capilares y remueve la red de fibrina

innecesariamente elaborada. (5)

Los fibroblastos depositan el tropocolgeno, precursor del colgeno

comenzando por debajo y atravesando la herida. Inicialmente el colgeno

es producido en exceso y puesto de una manera poco organizada, esta

sobreabundancia de colgeno es necesaria para darle cierta fuerza al

rea de la herida. Debido a la deficiente orientacin de las fibras de

colgeno la herida no es capaz de resistir fuerzas de tensin durante esta

fase, la cual dura de 2 a 3 semanas. Si la herida es sometida a alguna

tensin al comienzo de la fase fibroblstica, se tiende a maltratar la lnea

de la lesin. No obstante, si es sometida a una tensin cerca del final de

esta etapa, ocurre una unin entre el viejo colgeno y el nuevo colgeno

formado a nivel de la lesin. Clnicamente al final de este perodo la

herida se presenta dura, debido al excesivo acumulo de colgeno y

eritematosa por el alto grado de vascularizacin. La herida alcanza entre

70% y 80% de la resistencia a la tensin respecto al tejido antes de ser

lesionado. (4)

En el depsito de tejido conjuntivo participa de manera predominante el

fibroblasto, clula de aparicin repentina en el sitio de la lesin y que

16

sintetiza colgeno responsable de la resistencia en el tejido cicatrizal,

secreta mucopolisacridos que contribuye a la orientacin de las fibras

colgenas, a la remodelacin de la herida al transformarse en colgeno

maduro y desaparecer como clula. Despus de su secrecin por la

clula, las fibras colgenas se alinean inmediatamente y de manera

adyacente a los mrgenes de la clula. La colgena entrecruzada

proporciona mejor resistencia que la que est sometida a un continuo

proceso de sntesis y lisis. (5)

Los aminocidos se incorporan a las protenas por diferentes vas para

formar precursores de colgeno que participan en la cicatrizacin. La fase

proliferativa comprende del quinto al vigsimo da del proceso de

cicatrizacin, y se caracteriza por una rpida fibroplastia que sustentan el

fibroblasto y el colgeno.

Aproximadamente hacia el quinto da, el espacio incisional, rico en

botones capilares provenientes de ambos lados de la herida, est lleno de

tejido conectivo con fibroblastos para crear conductos vasculares

continuos, es este estadio de cicatrizacin de la herida la vascularizacin

es mxima.

En la segunda semana de la cicatrizacin hay acumulo continuo de

colgeno y proliferacin de fibroblastos en el tejido conectivo escindido, el

infiltrado leucocitario y el edema que se incrementaron disminuye

progresivamente. En este momento palidece la cicatrizacin al parecer

por una creciente acumulacin de colgeno acompaada por una lenta

desaparicin de los conductos vasculares. (4)

El incremento de colgeno intensifica la presin mecnica sobre los

17

conductos vasculares, despus de algunos das puede observarse que

disminuye la vascularizacin. (4)

Etapa de remodelacin o regenerativa

La remodelacin constituye la etapa final del proceso de cicatrizacin, es

tambin conocida con el trmino de "maduracin de la herida". Durante

esta fase muchas fibras de colgeno que fueron depositadas de manera

desordenada son destruidas y remplazadas por nuevas fibras, las cuales

se orientan de una manera ms efectiva para soportar las fuerzas de

tensin en el rea de la herida. Entretanto, la resistencia de la herida

aumenta lentamente, pero no en la magnitud en que se produjo durante la

fase fibroblstica. La fuerza de la herida nunca alcanza el 80% u 85% de

la resistencia que el tejido tenia previa a la lesin. Algunas fibras de

colgeno son removidas para dar suavidad a la cicatriz. Como el

metabolismo de la lesin se reduce, la vascularidad tambin disminuye y

por ende el enrojecimiento de la herida. La elasticidad en ciertos tejidos

como la piel y ligamentos no se recuperan durante la cicatrizacin, lo que

genera prdida de flexibilidad a lo largo de la cicatriz. (4)

Por ltimo, cerca del final de la etapa fibroblstica y al inicio de la

remodelacin la herida se contrae. En muchos casos, la contraccin juega

un papel importante en la reparacin de la herida. Durante este perodo,

los bordes migran hacia el centro. En una herida en la cual sus bordes no

fueron colocados adecuadamente, la contraccin disminuye el tamao de

la misma, beneficiando al tejido. (5)

No obstante la contraccin puede causar problemas, tal es el caso de las

18

quemaduras cutneas de tercer grado, en las que se produce deformidad

y se debilita la piel. Otra desventaja de la contraccin se ve en individuos

que sufren cortes curvos en su piel, en estos frecuentemente se produce

una eversin al ser aproximados los bordes. (4)

La epitelizacin aporta cierto grado de resistencia a la cicatriz, pero su

propsito es cubrir en forma hermtica la superficie de la herida, puede

observarse la migracin de clulas epiteliales a partir de los bordes para

unirse en la lnea media y formar un puente; por lo general, ello coincide

en el tiempo con la aparicin del tejido de granulacin y entre ambos

procesos cubren el defecto en perfecta concordancia. (5)

La sangre y los lquidos corporales contienen fibronectina y vitronectina

que favorecen la migracin de clulas epiteliales, ms an diversos

factores de crecimiento (citocinas) estimulan la migracin y mitosis de

queratinocitos para recubrir la prdida de espesor parcial en mucosa. (14)

Debe hacerse mencin de los miofibroblastos, clulas de tipo fibroblasto

que poseen componentes de msculo liso en el citoplasma, estos

miofibroblastos reaccionan ante agonistas y antagonistas farmacolgicos

del msculo liso y su influencia parece ser importante en esta etapa de la

cicatrizacin. (13)

Hacia el final de la primera semana la herida est cubierta de una

epidermis de espesor casi normal y la hendidura subepitelial est llena de

tejido conectivo vascularizado, que empieza a depositar fibras de

colgeno. (13)

Factores que interfieren en la cicatrizacin

El cirujano bucal puede crear las condiciones que favorezcan o no el

19

proceso normal de cicatrizacin. Adhirindose a los principios quirrgicos

de restablecer la continuidad de los tejidos, minimizando el tamao de la

herida y restaurando posteriormente la funcin, se facilita el proceso de

cicatrizacin. Se debe recordar que las heridas de piel, msculos,

ligamentos y mucosa bucal nunca sanan sin dejar cicatriz. El cirujano

debe dirigir sus esfuerzos a reducir la prdida de la funcin y a lograr, en

la medida de lo posible, una mnima cicatriz. (7). Los factores que

interfieren en el normal proceso de cicatrizacin de las heridas pueden ser

clasificados en dos categoras: factores locales, los cuales son fcilmente

controlables por el cirujano bucal, y factores generales, ms complejos y

difciles de reconocer, ya que muchas veces pueden actuar de una forma

desconocida. A continuacin se definen cada uno de ellos:

Factores Locales

Entre los factores locales podemos sealar los siguientes:

Cuerpos extraos

Es cualquier entidad que el organismo detecte como extrao, o el sistema

inmunolgico del husped lo vea como ajeno, tal es el caso de bacterias y

el hilo de sutura. Los cuerpos extraos pueden provocar tres problemas:

primero facilita la proliferacin de las bacterias, causando infeccin y

daos en el husped; en segundo lugar elementos no bacterianos pueden

interferir en la respuesta de defensa del husped y permitir la infeccin; el

tercer problema es que actan como antgenos generando respuestas

Inmunolgicas que provocan una prolongada inflamacin. (8,14)

Tejido necrtico

El tejido necrtico puede causar dos problemas. En primer lugar, sirve de

20

barrera que interfiere en la accin reparativa de las clulas. La inflamacin

aumenta debido a que los leucocitos deben eliminar los restos de tejido

mediante un proceso de fagocitosis y lisis. El segundo problema que

puede generar es que el tejido necrtico constituye un nicho importante

para la proliferacin de bacterias. Este puede contener sangre que se

acumula en la herida (hematoma) por lo que constituye una excelente

fuente de nutrientes para el crecimiento de las bacterias. (7, 20, 22)

Isquemia.

La isquemia de la herida interfiere en su cicatrizacin por diversas causas.

La isquemia de los tejidos promueve la necrosis. sta tambin provoca

una reduccin en la migracin de los anticuerpos, leucocitos, antibiticos,

entre otros, incrementando las probabilidades de una infeccin, as mismo

reduce el aporte de oxgeno y los nutrientes necesarios para la reparacin

de la herida. Entre las posibles causas de isquemia podemos indicar:

diseo incorrecto del colgajo, presin externa sobre la herida, presin

interna sobre la herida (hematoma), anemias, ubicacin incorrecta de las

suturas, entre otros. (3, 22)

Tensin

La tensin sobre una herida es un factor que impide su cicatrizacin. Si la

sutura es colocada con una excesiva tensin, va a estrangular los tejidos,

produciendo isquemia. Si la sutura es removida antes de tiempo, existe el

riesgo de la reapertura de la herida lo que producira una cicatriz mucho

mayor. Si la sutura es removida tardamente se corre el riesgo de dejar

marcas desfigurativas cuando la epitelializacin sigue la va de las sutura.

(8)

21

Tambin podemos tomar en consideracin como factores locales que

interfieren en la cicatrizacin los siguientes: infecciones, irradiacin previa

sobre la piel, mala orientacin y manipulacin brusca de los bordes de la

herida, entre otros. (7)

Factores Generales

Entre los factores generales que pueden interferir en el proceso normal de

cicatrizacin, tenemos los siguientes:

Dficit proteico y vitamnico, los cuales pueden obstaculizar la sntesis de colgeno y de fibroblastos.

Radiacin teraputica, en estos casos existe alteracin del riego sanguneo de los maxilares y por ende reduccin del potencial

seo para la reparacin.

Vejez, con la edad la respuesta del organismo se reduce producto de alteraciones en la actividad celular y capacidad regeneradora.

Trastornos metablicos (diabetes, hipercalcemia), se relaciona con la cicatrizacin tisular deficiente y con la disminucin en su

respuesta a la infeccin. (8)

Trastornos medicamentosos (antimetablicos, inmunosupresores) y hormonales.

Adems de los factores que acabamos de sealar, la localizacin de la

herida y el tamao de sta juegan un papel importante debido a que, en

un rea con mayor aporte vascular el proceso de cicatrizacin ser mucho

ms efectivo, de la misma forma una herida amplia tarda ms en

recuperarse que una de menor tamao. (5)

22

La Minthostachys mollis (mua) es una planta nativa usada por los

pobladores de las diferentes localidades de la serrana como saborizantes

de los alimentos, propiedades medicinales digestivas, eliminacin de la

flema del pecho y curacin de tumores etc. (21)

El aceite esencial de este gnero tiene accin parasiticida y acaricida

debido a algunos principios qumicos activos como pulegona, mentona,

celo, existentes en la planta. (28)

En cuanto a su composicin qumica los aceites esenciales estn

constituidos por compuestos predominantemente hidrocarbonatos

llamados terpenos y sesqui terpenos y actan como soporte de los

compuestos oxigenados, como alcoholes, aldehdos, cetonas y steres a

los cuales se debe preponderantemente su aroma. (24)

Estudios estn demostrando el increble poder curativo de los aceites

esenciales, debido a que crean un ambiente en el que no pueden vivir las

bacterias, hongos y virus. (25)

En el Per se han evaluado la actividad antimicrobiana del aceite esencial

de la Minthostachys mollis (mua) utilizando la metodologa de

incorporacin en agar, copos de algodn, excavacin en placas de agar y

por discos de papel. El aceite esencial obtenido por destilacin de arrastre

a vapor fue evaluado sobre tres bacterias enteropatgenas: Escherichia

coli, Salmonella entrica, ser tiphy shiguella dysentereae concluyendo que

el mtodo de incorporacin en agar es el ms adecuado y que los tres

microorganismos fueron sensibles al aceite esencial. (24)

Ahora bien, es extremadamente difcil mantener en el tiempo, por

mtodos mecnicos, el estndar apropiado de placa dental.

23

Consecuentemente y debido a las limitaciones individuales para su

remocin, se han agregado agentes antimicrobianos a los enjuagues

bucales con la finalidad de hacer ms efectivos los modos de limpieza

tradicional. (16,31)

Al respecto, se ha evaluado el efecto de antibiticos tpicos, compuestos

oxigenados, compuestos cuaternarios de amonaco, compuestos

fenlicos, extractos de plantas, bis-bisguanidas, flor y combinaciones

antimicrobianas. (25)

Salmn en 1994 estudi los aspectos fitoqumicos, toxicolgicos,

antimicrobianos y bromatolgicos de Minthostachys mollis (mua). No

obtuvo halos de inhibicin a ninguna concentracin y en ninguna cepa.

(Cndida albicans ATCC 10231, Eschenchia coli ATCC 8739 y

Staphylococus aureus ATCC 6538) por lo que no pudo determinar

fehacientemente su actividad antimicrobiana.

Poblete, E. en 1998 demostr que el aceite esencial de mua tiene efecto

contra Phytophtora infestans, Fusarium solanaceum y Erwinea carotovora

que son patgenos de la papa.

Inga & Guerra en 2000, demostraron mediante un estudio las

propiedades bactericidas / bacteriostticas del aceite esencial de

Minthostachys mollis frente a Staphylococus aureus ATCC 25923, B.

cereus MC, Salmonella typhi, S. sonnei MC, Escherichia coli ATCC.

25922 y K. pneumoniae ATCC 10031. Adems de la accin fungisttico /

fungicida para Fusarium moniliforme y Aspergius nge.

24

En el estudio de Primo & col en 2001 se estudia, a Minthostachys

verticillata "Peperina", observndose buena actividad antibacteriana

contra S. aureus, B. cereus, E. coli, P. Mirabillis y antiviral contra el virus

Herpes Simplex Tipo 1 y el virus de la Pseudorrabia, aunque con escasa

actividad contra P. aeruginosa.

Salmon (1994) & Ornachea (1979) demostraron que la Minthostachys

mollis contiene flavonoides y la mayora de los detectados responden a

estructuras de flavonoles 3-4 dihidroxilados en el anillo B, glicosilados en

posicin C3. Los antecedentes de flavonoides del gnero informan ya

sobre este tipo de derivados en otras especies aunque tambin lo hacen

sobre derivados glicosilados de la misma aglicona, pero en posicin C7,

detectados en menor proporcin en esta oportunidad, en lo que a flavonas

se refiere, se detect y en escasa concentracin, una sola de ellas, la

diosmetina.

Martnez (2002). Demostr que adems combaten la inflamacin y las

alergias y aumentan la efectividad de las clulas natural killer del sistema

inmunolgico. De hecho, se ha demostrado que los flavonoides

pertenecientes a plantas medicinales de Tafi del Valle, Tucumn

(Argentina), tienen actividad antimicrobiana. Muchos de estos efectos

antiinflamatorios y antialrgicos podran explicarse a travs de su accin

inhibidora sobre el factor de transcripcin nuclear kappa B, activador de

muchas citocinas proinflamatorias. Tambin ejerceran su accin

antiinflamatoria al inhibir las actividades enzimticas del metabolismo del

cido araquidnico por la va de la 5-lipooxigenasa, as como por su

25

actividad antiproteoltica al inhibir algunas proteasas de la matriz. (17)

As, la gensteina bloquea el desarrollo de tumores al prevenir la

formacin de nuevos vasos impidiendo con ello la llegada del oxgeno y

nutrientes a las clulas neotumorales. (30)

Accin antioxidante de los flavonoides. La capacidad de los polifenoles

vegetales para actuar como antioxidantes en los sistemas biolgicos fue

ya reconocida en los aos treinta; sin embargo, el mecanismo

antioxidante fue ignorado en gran medida hasta hace poco tiempo. El

creciente inters en los flavonoides se debe a la apreciacin de su amplia

actividad farmacolgica. Pueden unirse a los polmeros biolgicos, tales

como enzimas, transportadores de hormonas, y ADN; quelar iones

metlicos transitorios, tales como Fe2+, Cu2+ , Zn2+, catalizar el

transporte de electrones, y depurar radicales libres . Debido a este hecho

se han descrito efectos protectores en patologas tales como diabetes

mellitus, cncer, cardiopatas, infecciones vricas, lcera estomacal y

duodenal, e inflamaciones. Otras actividades que merecen ser

destacadas son sus acciones antivirales y antialrgicas, as como sus

propiedades antitrombtica y antiinflamatorias. Siguiendo estos criterios,

el flavonoide quercitina es el que mejor rene los requisitos para ejercer

una efectiva funcin antioxidante. Su capacidad antioxidante medida

como es de 4,7 mM, lo que resulta 5 veces mayor al demostrado por las

vitaminas E y C y tiene una hidrosolubilidad similar a la de la vitamina E.

La funcin antioxidante de la quercitina muestra efectos sinrgicos con la

vitamina C.

26

Los flavonoides retiran oxgeno reactivo especialmente en forma de

aniones superxidos, radicales hidroxilos, perxidos lipdicos o

hidroperxidos. De esta manera bloquean la accin deletrea de dichas

sustancias sobre las clulas. Sus efectos citoprotectores son, por ejemplo,

bien potentes en fibroblastos de la piel humana, queratinocitos, clulas

endoteliales y ganglios sensoriales cultivados en presencia de sulfoxina-

butionina, un inhibidor irreversible de la glutatin sintetasa. (10,30)

27

II. HIPTESIS

Sabiendo que el Minthostachys mollis (mua) tiene propiedades

antiinflamatorias, antibacterianas y antifngicas por tener los principios

activos de flavonoides; es probable que el efecto cicatrizal del aceite

esencial de Minthostachys mollis sea ms eficaz que el del apsito

quirrgico convencional en gingivectomias realizadas en conejos

(Oryctolagus cuniculus).

28

III. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

Evaluar el efecto del apsito con aceite esencial de Minthostachys

mollis (mua) en comparacin con el apsito quirrgico convencional

(oxido de zinc ms eugenol) en la cicatrizacin de gingivectomias

realizadas en conejos (Oryctolagus cuniculus).

3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Evaluar el efecto cicatrizal (a nivel celular, fibroso y de epitelizacin) del apsito con aceite esencial de Minthostachys

mollis (mua), en gingivectomias realizadas en conejos

(Oryctolagus cuniculus) a 1,3 y 7 das.

Evaluar el efecto cicatrizal (a nivel celular, fibroso y de epitelizacin) del apsito quirrgico convencional (oxido de zinc

ms eugenol) en gingivectomias realizadas en conejos

(Oryctolagus cuniculus) a 1,3 y 7 das.

Comparar los resultados en los grupos de estudio.

29

IV. MATERIALES Y MTODOS

4.1 TIPO DE ESTUDIO

Longitudinal, prospectivo, comparativo, experimental.

4.2 POBLACIN

Conejos (Oryctolagus cuniculus) sometidos a gingivectomias.

4.3 CRITERIO DE INCLUSIN

- Conejos sanos.

- De ambos sexos.

- de 3 a 4 meses de edad.

4.4 MUESTRA

TAMAO: El tamao de la muestra se determino mediante el criterio No

probabilstico. Por conveniencia. Por ser un trabajo experimental. Se

utilizaron 18 conejos (Oryctolagus cuniculus) los cuales fueron divididos

de la siguiente manera:

1.-Grupo experimental (con mua)

Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con aceite esencial de

Minthostachys mollis (mua), se trabajaron 6 conejos dos gingivectomias

por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7 das.

2.-Grupo con apsito convencional

Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con apsito quirrgico

convencional (oxido de zinc ms eugenol) se trabajaron 6 conejos dos

gingivectomias por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7

das.

30

3.-Grupo control

Estuvo conformado por las gingivectomias no tratadas con ninguna

sustancia, se trabajaron 6 conejos dos gingivectomias por cada conejo y

se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7 das.

4.5 VARIABLES

Variable Independiente:

o Apsito con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua).

o Apsito quirrgico convencional (eugenol mas oxido de zinc).

Variable dependiente:

o Efecto cicatrizal (a nivel celular, fibroso y epitelizacin).

4.6 OPERACIONALIZACIN DE LAS VARIABLES

Dimensin Indicador Escala Valor

Respuesta

Histopatolgica.

- Clulas :PMN

linfocitos,

macrfagos,

Fibroblastos,

epitelializacin.

Ordinal

0: ausente.

1: pocos.

2: regular.

3: aumentados.

31

4.7 PROCEDIMIENTO

1.- OBTENCIN DEL ACEITE ESENCIAL DE Minthostachys mollis

(mua).

-RECOLECCIN: Se realiz en el casero de HUANCHAY, ubicada en la

provincia de HUARAZ entre los 78 39 30 longitud oeste y los 7 4030

latitud sur, a 2800 msnm en el departamento de ANCASH; recolectndose

15 Kg de hojas jvenes y en buen estado de plantas que se hallan en las

riveras de los ros y de las acequias ya que son plantas silvestres que

crecen en zonas donde hay permanente humedad.

-LIMPIEZA: Una vez recolectadas las hojas se procedi a lavarlas

dejando caer chorros de agua repetidas veces. Separando las hojas que

se hallan en mal estado para su posterior eliminacin y dejando solo las

que se hallan en buen estado. Se secan e introducen en sobres de papel

y fueron llevadas al consultor para su clasificacin taxonmica y

certificacin botnica.

-SECADO: Las hojas se almacenaron en un ambiente oscuro

impidiendo la exposicin directa a los rayos solares, colocando las

hojas dispersas para disminuir la humedad gradualmente por 7 das.

-OBTENCION DEL ACEITE ESENCIAL: Se realiz en el laboratorio de

farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la UNMSM.

Utilizando el Mtodo de destilacin de Arrastre a Vapor, ya que es el

mtodo ms preciso para la obtencin de aceites esenciales y que tiene

por finalidad separar los principios voltiles contenidas en una mezcla

32

compleja de compuestos no voltiles, este mtodo es el ms utilizado por

que los aceites esenciales son insolubles o poco solubles en agua y es

ms fcil la separacin ya que se realiza por diferencia de densidades y a

la vez tambin el costo de operacin es bajo.

Para la obtencin del aceite esencial se realizaron los siguientes pasos:

- Se colocaron las hojas en un lugar bajo sombra con una adecuada

ventilacin por un lapso de 4 das con buena ventilacin libre de

humedad y de contaminacin.

- Las hojas y tallos se cortaron manualmente con la finalidad de que la

parte cortada se exponga mayormente al contacto con el vapor

durante el proceso de destilacin.

- El procedimiento en si se realiz colocando los 15 kilos de la planta en

la pera de decantacin en dos tiempos en el baln se coloc dos litros

de agua, posteriormente se calent el agua hasta que hierva y el vapor

atraviese las hojas de la planta que se hallan en la pera y finalmente

se pudo apreciar el paso del vapor de agua con el aceite a travs del

refrigerante siendo recolectado en un vaso de precipitacin.

- En el vaso de precipitacin por diferencia de densidades el aceite

pudo ser separado con una bureta.

- Finalmente para su conservacin se coloc en un frasco color mbar y

en refrigeracin a 4 C.

-PARTE QUIRRGICA

SELECCIN Y DISTRIBUCIN DE LOS CONEJOS: Los especmenes de

experimentacin correspondieron a 18 conejos todos fueron evaluados

clnicamente por un mdico veterinario, controlando el peso y tamao

33

para determinar su estado de salud. Los animales se distribuyeron en

jaulas de 1x1m siendo cada grupo de 6 conejos (lagomorfos) .Su

alimentacin fue a base de conejina (aproximadamente 200 gr por conejo

al da) y agua.

Los animales de laboratorio a utilizar fueron 18 conejos de raza California,

hembras y machos de 3 meses de edad aproximadamente, con un peso

promedio que oscilo entre 2.0 Kg mas menos 200 gr, se dividieron en 3

grupos de 6 especmenes cada grupo en forma aleatoria simple. Estos

grupos correspondieron a los tiempos de estudio de 1 da, 3 das y 7 das,

respectivamente.

Se elaboro una hoja de datos donde se indico el peso, la dosis de cada

una de las drogas usadas, la va y las observaciones; adems de una

hoja de datos para el rea quirrgica donde se realiz las gingivectomias

y el tipo de grupo al que pertenece.

Protocolo Quirrgico

El procedimiento quirrgico se realiz en la Unidad de Ciruga

Experimental de la UPSJB.

- Se peso a los animales, se calculo la dosis de acuerdo al peso, lo

sedamos y luego los anestesiamos.

- Se les realiz una marca, para luego proceder a realizar la ciruga

despus de ello se procedi al llenado de la hoja de datos y

finalmente se les ubic a los animales dentro de sus respectivas

jaulas.

- Las gingivectomias se realizaron en la regin anterior maxilar y

34

mandibular por cada conejo de aproximadamente 3 por 2 mm.

- Se coloc el apsito de acuerdo al grupo al que perteneca.

Secuencia completa

Los animales fueron pesados, para luego anestesiar a los especmenes

por va intraperitoneal. Se les administro 0,2 ml de Promazil, 0,6 ml de

Xilacina y 0,8 ml de Ketamina con jeringa de tuberculina.

Se les diferencio escribiendo su nmero en el dorso de ambas orejas con

plumn indeleble. Se realiz el lavado del rea adyacente a la zona

quirrgica, primero con jabn lquido, luego con yodopovidona y por ultimo

con suero fisiolgico. Previamente se coloco una gasa estril de comisura

a comisura para evitar alguna aspiracin.

1. Grupo experimental (con mua)

Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con apsito de aceite

esencial de Minthostachys mollis (mua), se trabajaron 6 conejos dos


das.

2.-Grupo con apsito convencional

Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con apsito quirrgico

convencional (oxido de zinc ms eugenol) se trabajaron 6 conejos dos


das.

3.-Grupo control

Estuvo conformado por las gingivectomias no tratadas con ninguna

sustancia se trabajaron 6 conejos dos gingivectomias por cada conejo y

35

se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7 das.

Tcnica Histolgica

Todas las muestras fueron sometidas a los mismos procedimientos,

primero se fijaron con formol neutro al 10%, luego se descalcifico con

cido ntrico durante 5 das, se efectu la deshidratacin con alcoholes en

diferentes concentraciones de menor a mayor de 75% a 95%. Luego se

realiz el clareamiento en xilol para luego realizar el bao de parafina. Se

realiz la microtomia (3 um por lmina). Las lminas histolgicas se

realizaron con coloracin de Hematoxilina eosina y hematoxilina frrica.

La evaluacin microscpica

Se obtuvieron 36 cortes histolgicos, 12 por cada uno de los grupos de

evaluacin.

Seguidamente se efectu la lectura de las lminas histolgicas en el

Laboratorio de Histologa de la Facultad de Odontologa de la Universidad

Nacional Federico Villareal.

Se realiz el estudio de los cortes con un microscopio de luz (Olympus) a

10x y 40x de aumento para todas las lecturas, basadas en el proceso de

cicatrizacin de acuerdo a los objetivos de estudio.

Se realizaron las microfotografas de las lminas histolgicas con una

cmara digital en el laboratorio de Histologa.

La evaluacin del proceso de cicatrizacin fue realizada por un patlogo

utilizando el mtodo ciego para las lecturas de las muestras.

4.8 PROCESAMIENTO DE DATOS

Los datos fueron recopilados en una ficha de tabulacin y despus

36

analizados, y presentados en tablas y figuras del programa Microsoft

Office Excel 2007.

4.9 PLAN DE ANLISIS

Obtenida la informacin ordenada, se analizaron mediante la prueba de

Kruskal Wallis para determinar la relacin del grado de presencia de

cada una de las clulas que participan en la cicatrizacin en relacin al

tiempo y al tipo de tratamiento.

37

V. RESULTADOS

1.- En la tabla y figura No 1; se observa el promedio del grado de clulas

PMN (polimorfonucleares neutrfilos) de acuerdo al tratamiento a 1da;

el grupo tratado con el apsito de aceite esencial de Minthostachys

mollis (mua) presenta un grado de 1.8; el grupo tratado con apsito

quirrgico convencional de 2.8 y el grupo control de 3. Al utilizar la

prueba de Kruskal Wallis con la cual se obtuvo un resultado

estadsticamente significativo (p

38

grado de 1.3; el grupo tratado con apsito quirrgico convencional de 2.3

y el grupo control de 2.8. Al utilizar la prueba de Kruskal Wallis se obtuvo

un resultado el cual es estadsticamente significativo a los 3 y 7 das

(p0.05).

5.- En la tabla y figura No 5; se observa el promedio del grado de

epitelizacin de acuerdo al tratamiento a los 7 das el grupo tratado con el

apsito de aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) presenta un

grado de 1.3; el grupo tratado con apsito quirrgico convencional de 0.8

y el grupo control de 0.3. Al utilizar la prueba de Kruskal Wallis se obtuvo

un resultado el cual es estadsticamente significativo a los 7 das

(p

39

TABLA No1

PROMEDIO DEL GRADO DE PMN DE ACUERDO AL TRATAMIENTO A LAS 24 HORAS.

GRUPO No Media Mediana Rango

Minthostachys mollis 4 1,8 2 3,8

Apsito Qx. Convencional 4 2,8 3 8,7

Control 4 3 3 11,5

P=0,022

FIGURA No 1.

40

TABLA No 2

PROMEDIO DEL GRADO DE LINFOCITOS EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.


3 das


Apsito Qx. convencional 4 2,3 2 8,7

Control 4 2,8 3 11,1

7 das



Control 4 3 3 11,5

p=0,047 p= 0,017

FIGURA No 2

41

TABLA No 3

PROMEDIO DEL GRADO DE MACRFAGOS EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.


3 das



Control 4 2,3 2 12,4

7 das



Control 4 2,8 3 11,9

p=0,011 p= 0,011

FIGURA No 3

42

TABLA No 4

PROMEDIO DEL GRADO DE FIBROBLASTOS EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.


3 das

Minthostachys mollis 4 2 2 10,5

Apsito Qx. convencional 4 1,8 2 9

Control 4 1,3 1 4,5

7 das


Apsito Qx. convencional 4 2 2 6,4

Control 4 2 2 6

p=0,087 p= 0,087

FIGURA No4

43

TABLA No 5

PROMEDIO DEL GRADO DE EPITELIZACIN EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.


7 das



Control 4 0,3 0 4,8

p=0,044

FIGURA No 5

44

VI. DISCUSIN

El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el efecto del apsito con


apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms eugenol) en

gingivectomias realizadas en conejos (Oryctolagus cuniculus).

Los resultados demostraron una mejora en la cicatrizacin, en especial al

provocar menor reaccin inflamatoria debido a los flavonoides que es el

principio activo presenta en el aceite esencial de Minthostachys mollis

(mua) y que han sido validados por muchos estudios. Se observa menor

presencia de clulas PMN (polimorfonucleares neutrfilos), macrfagos

y linfocitos en comparacin con el apsito quirrgico convencional (oxido

de zinc ms eugenol) de manera estadsticamente significativa .Esto se

debe a la presencia de flavonoides as como lo demuestra el estudio de

Primo (2001).

A su vez otro estudio tambin menciona el efecto antibacteriano del

Minthostachys mollis como el trabajo de Inga y Guerra en el 2000,

quienes demostraron mediante un estudio las propiedades bactericidas /

bacteriostticas del aceite esencial de Minthostachys mollis frente a

Staphylococus aureus ATCC 25923, B. cereus MC, Salmonella typhi, S.

sonnei MC, Escherichia coli ATCC. 25922 y K. pneumoniae ATCC 10031.

Adems de la accin fungisttico / fungicida para Fusarium moniliforme y

Aspergius nge.

El efecto antibacteriano tambin es sobre bacterias facultativas as lo

demuestra el estudio de Primo & col en 2001 que estudia, a

45

Minthostachys verticillata "Peperina", observndose buena actividad

antibacteriana contra S. aureus, B. cereus, E. coli P. Mirabillis y antiviral

contra el virus Herpes Simplex Tipo 1 y el virus de la Pseudorrabia,

aunque con escasa actividad contra P. aeruginosa.

La epitelizacin tambin fue favorable al utilizar el aceite esencia de mua

esto por el efecto citoprotector que nos brindan los flavonoides presentes

en el aceite esto tambin es demostrados con el estudio realizado por

Martnez (2002), quien menciona que los flavonoides retiran oxgeno

reactivo especialmente en forma de aniones superxidos, radicales

hidroxilos, perxidos lipdicos o hidroperxidos. De esta manera bloquean

la accin deletrea de dichas sustancias sobre las clulas. Sus efectos

citoprotectores son, por ejemplo, bien potentes en fibroblastos de la piel

humana, queratinocitos, clulas endoteliales y ganglios sensoriales

cultivados en presencia de sulfoxina-butionina, un inhibidor irreversible de

la glutatin sintetasa. (10, 17)

El aceite esencial inactiva a las bacterias presentes en la primera fase de

la cicatrizacin de tal manera que el efecto antibacteriano fue eficaz esto

esta demostrado con nuestros resultados en la cual hay menos cantidad

de clulas PMN (polimorfonucleares) ,linfocitos y macrfagos ;estos datos

estn contrastados tambin con Martnez (2002) quien menciona que los

flavonoides adems combaten la inflamacin y las alergias y aumentan la

efectividad de las clulas natural killer del sistema inmunolgico. De

hecho, se ha demostrado que los flavonoides pertenecientes a plantas

medicinales de Tafi del Valle, Tucumn (Argentina), tienen actividad

antimicrobiana. Muchos de estos efectos antiinflamatorios y antialrgicos

46

podran explicarse a travs de su accin inhibidora sobre el factor de

transcripcin nuclear kappa B, activador de muchas citocinas

proinflamatorias. Tambin ejerceran su accin antiinflamatoria al inhibir

las actividades enzimticas del metabolismo del cido araquidnico por la

va de la 5-lipooxigenasa, as como por su actividad antiproteoltica al

inhibir algunas proteasas de la matriz.

Algunos estudios estn dando mayor fuerza al uso de aceites esenciales

mucho ms aquellos en los que el principal principio activo son los

flavonoides as como el estudio de Salmon (1994) & Ornachea(1979)

despus de realizar sus estudios sobre Minthostachys mollis (mua) en

cuanto a su composicin qumica encontraron que los aceites esenciales

estn constituidos por compuestos predominantemente hidrocarbonatos

llamados terpenos y sesqui terpenos y actan como soporte de los

compuestos oxigenados, como alcoholes, aldehdos, cetonas y esteres a

los cuales se debe preponderantemente su aroma .Estudios estn

demostrando el increble poder curativo de los aceites esenciales, debido

a que crean un ambiente en el que no pueden vivir las bacterias, hongos y

virus, ya que contiene flavonoides y la mayora de los detectados

responden a estructuras de flavonoles 3-4 dihidroxilados en el anillo B,

glicosilados en posicin C3.

47

VII. CONCLUSIONES

Al primer da el grupo tratado con apsito, con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) despus de las gingivectomias presenta

menor grado de clulas PMN (polimorfonucleares - neutrfilos) en

comparacin con el grupo que se trato con apsito quirrgico

convencional (oxido de zinc ms eugenol) y el control.

A los 3 das y 7 das el grupo tratado con apsito, con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) despus de las gingivectomias

presenta menor grado de linfocitos en comparacin con el grupo que

se trato con apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms

eugenol) y el control.


presenta menor grado de macrfagos en comparacin con el grupo

que se trato con apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms



presenta mayor grado de fibroblastos en comparacin con el grupo

que se trato con apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms


A los 7 das el grupo tratado con apsito, con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) despus de las gingivectomias presenta

mayor grado de epitelizacin en comparacin con el grupo que se

48

trato con apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms eugenol)

y el control.

49

VIII. RECOMENDACIONES

Realizar estudios experimentales en la que se utilice el aceite esencial de Minthostachys Mollis (mua) en cirugas mayores de la

cavidad bucal.

Evaluar el efecto antimictico del aceite esencial de Minthostachys Mollis (mua) en estomatitis subprotesis.

Aplicar el aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) en pacientes con gingivitis severa.

Recomendar tambin el uso de Minthostachys mollis (mua) como enjuagatorio diario en personas con gingivitis y que tengan

enfermedades sistmicas como la diabetes.

50

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.

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54

X. ANEXOS

55

ANEXO 1.

FICHA DE RECOLECCION DE DATOS.

GRUPO CON MINTHOSTACHYS MOLLIS

GRUPO CON APOSITO CONVENCIONAL

GRUPO CONTROL

Ficha de Identificacin.-

- Espcimen No.-......................................

- Peso.- .......................................

- Color.-........................................................

Fecha de intervencin............................Hora.............................

Fecha de Sacrificio...............................Hora..............................

Tiempo de duracin del trabajo Quirrgico:....................

Curso clnico Post operatorio:

Positivo.

Negativo.

Por qu?...................................................................

Herida PMN Linf. Macrfagos fibroblastos EPITELIZACIN

No 1

No2

56

FOTOGRAFIA No1.

Equipo de anestesia y sedacin

FOTOGRAFIA No 2.

Equipo de ciruga utilizado en el experimento

57

FOTOGRAFIA No 3.

Preparacin de la anestesia y sedante

FOTOGRAFIA No 4.

Anestesia intraperitoneal del conejo con ayuda del veterinario

58

FOTOGRAFIA No 5.

Localizacin de la zona de gingivectomia del maxilar superior e

inferior

FOTOGRAFIA No 6.

Realizacin de la gingivectomia en el maxilar superior

59

FOTOGRAFIA No 7.

Realizacin de la gingivectoma en el maxilar inferior

FOTOGRAFIA No 8.

Preparacin del apsito con aceite esencial de Minthostachys mollis

60

FOTOGRAFIA No 9.

Colocacin del apsito con aceite esencial de Minthostachys mollis

FOTOGRAFIA No 10.

Preparacin del apsito quirrgico convencional

61

FOTOGRAFIA No 11.

Colocacin del apsito quirrgico convencional

FOTOGRAFIA No 12.

Introduccin del bloque en formol

62

FOTOGRAFIA No 13.

Evaluacin del bloque para la preparacin de lminas

FOTOGRAFIA No 14.

Evaluacin de las lminas histolgicas

63

FOTOGRAFIA No 15.

Clasificacin de las lminas histolgicas por grupo

FOTOGRAFIA No 16.

Observacin de las lminas histolgicas

64

MICROFOTOGRAFIA No 1.

Presencia de PMN en el grupo de control a un aumento de 100x a las

24 horas.


Presencia de PMN en el grupo con Minthostachys mollis a un

aumento de 400x. a las 24 horas.

65


Presencia de PMN en el grupo con apsito quirrgico convencional a

un aumento de 100x a las 24 horas.


Presencia de linfocitos y macrfagos en el grupo de control a un

aumento de 400x a los 3 das.

66


Presencia de linfocitos y macrfagos en el grupo con apsito con

Minthostachys mollis a un aumento de 100x a los tres das.


Presencia de linfocitos y macrfagos en el grupo con cemento

quirrgico convencional a un aumento de 100x a los 7 das.

67


Presencia de fibroblastos en el grupo con cemento quirrgico

convencional a un aumento de 100x a los 7 das.


Presencia de fibroblastos en el grupo con Minthostachys mollis a un

aumento de 400x a los 7 das.

68


Presencia de fibroblastos y fibras colgenas en el grupo con

Minthostachys mollis a un aumento de 400x a los 7 das.


Presencia de epitelizacin en el grupo con Minthostachys mollis a

un aumento de 100x a los 7 das.

69


Presencia de fibras colgenas desordenadas a los 7 das en el

grupo de control a un aumento de 100x.


Presencia de fibroblastos en el grupo con apsito con

Minthostachys mollis a un aumento de 400x a los 7 das.

70


Presencia de epitelizacin en el grupo con Minthostachys mollis a

un aumento de 400x a los 7 das.

Saul Casas Alarcon

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