Se inicia alteración genética o epigenética que le ... · Progresa mediante la acumulación...
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Progresa mediante la acumulación progresiva de diferentes combinaciones de alteraciones genéticas/epigenéticas en un contexto medio-ambiental apropiado. Se inicia cuando una célula experimenta una alteración genética o epigenética que le confiere ventajas selectivas para crecer y multiplicarse. Se disemina subvirtiendo mecanismos que restringen la invasión y colonización de territorios normalmente reservados para otras células.
Transcript of Se inicia alteración genética o epigenética que le ... · Progresa mediante la acumulación...
Progresa mediante la acumulación progresiva de diferentes combinaciones de
alteraciones genéticas/epigenéticas en un contexto medio-ambiental apropiado.
Se inicia cuando una célula experimenta una alteración genética o
epigenética que le confiere ventajas selectivas para crecer y multiplicarse.
Se disemina subvirtiendo mecanismos que restringen la invasión y
colonización de territorios normalmente reservados para otras células.
The body of an animal operates as a society or ecosystem. The individual members are cells that
reproduce by cell division and organize into collaborative assemblies called tissues. This society is very
peculiar, however, because self-limitation – as opposed to survival of the fittest- is the rule. Ultimately, all
of the somatic cell lineages in animals are committed to die: they leave no progeny and instead dedicate
their existence to support of the germ cells, which alone have a chance of continued survival. There is no
mystery in this, for the body is a clone derived from a fertilized egg, and the genome of the somatic cells
is the same as that of the germ cell lineage that gives rise to sperm or eggs. By their self-limitation for the
sake of the germ cells, the somatic cells help to propagate copies of their own genes. Thus, unlike free-
living cells such as bacteria, which compete to survive, the cells of a multicellular organism are committed
to cooperation. To coordinate their behavior, the cells send, receive, and interpret an elaborate set of
extracellular signals that serve as social controls, directing cells how to act. As a result, each cell grow,
migrate, divide, differentiate, or die as needed for the good of the organism. Molecular disturbances that
upset this harmony mean trouble for a multicellular society. In a human body with more than 1014 cells,
billions of cells experience mutations every day, potentially disrupting the social controls. Most
dangerously, a mutation may give one cell a selective advantage, allowing it to grow and divide more
vigorously than its neighbors and to become founder of a growing mutant clone. A mutation that promotes
such a selfish behavior by individual members of the cooperative will jeopardize the future of the whole
enterprise. Over time, repeated rounds of mutation, competition, and natural selection operating within the
population of somatic cells are the basic ingredients of cancer: it is a disease in which a clone of mutant
cells begins by prospering at the expense of their neighbors, but in the end the descendants of this clone
can destroy the whole cellular society and die. The development of human cancer, as a microevolutionary
process, occurs on a time scale of years or decades, in a subpopulation of cells in the body. But the final
result depends on the same principles of mutation and natural selection that driven the evolution of all
living organisms for billions of years.
Alberts et al MBC 2015
número de
célulasproliferación apoptosis
diferenciación
celular
proliferación apoptosis
diferenciación
celular
tejido normal (homeostasis)
tumor (pérdida de la homeostasis)
metástasis
número de
células
tumor o
neoplasma
Benigno. No invasivo. Ejemplos: Adenomas, angiomas, lipomas, etc
Maligno = cáncer. Invasivo. Ejemplos: Carcinomas, Sarcomas, etc
metástasis: Refiere a la diseminación de las células tumorales y generación de tumores
secundarios, que crecen separados espacialmente del tumor primario.
Crecimiento y diseminación
El cáncer es producto de un proceso microevolutivo(“multi-hit model”)
Evan & Vousden, Nature 2001
El cáncer evoluciona a partir de sucesivas rondas de
mutación, amplificación y selección en los tumores,
acumulando alteraciones en oncogenes y en genes
supresores de tumores. Proyectos de secuenciación a
gran escala identificaron ~ 500 genes causales de cáncer.
El proceso microevolutivo revela la heterogeneidad genética de diversos subclones del tumor
Kuipers et al, BBA 2017
dimensión
temporal
dimensión espacial
(a) Esquema de la diversificación y expansión clonal
observada en el tumor (b). Los colores representan
a los diferentes subclones. Las pequeñas estrellas
representan la ocurrencia de mutaciones.
En el tumor, las células de los subclones pueden
formar poblaciones unidas y compactas, o estar
entremezcladas con células de otros subclones.
Los subclones exhiben mutaciones conductoras o
causales del proceso de oncogénesis (“driver
mutations”), que les confieren una ventaja de
crecimiento selectiva, y muchas otras mutaciones
que son neutras y no afectan negativamente la
evolución del cáncer (“passenger mutations”).
Los oncogenes y genes supresores de tumores son
ejemplos de “driver mutations”.
Consistente con un proceso microevolutivo, la incidenciadel cáncer incrementa marcadamente con la edad
Colon cáncer
colon normal
“polyposis colon”
colon con pólipos
~83%
~45%
~70%
>50%
El cáncer de colon revela una secuencia de mutaciones relativamente predecible que se correlacionan con la histopatología
Estudios en ratones transgénicos revelan que la acción cooperativa de varias mutaciones aceleran el desarrollo de tumores
ratones que solo
sobreexpresan myc
ratones que solo
sobreexpresan ras
constitutivamente activo
ratones que
sobreexpresan
myc y ras activo
Microfotografías de células de cuello uterino obtenidas por raspado (Papanicolaou). Las células normales (A) son
grandes, planas, con abundante citoplasma y núcleos áltamente condensados. Las células pre-cancerosas (B) y de
carcinoma invasivo (C) exhiben núcleos mas prominentes, escaso citoplasma y crecimiento irregular.
Las células cancerosas exhiben rasgos morfológicosque pueden distinguirse al microscopio
Clasificación morfológica del desarrollo de cáncer de cuello de útero
El cuello del útero es tapizado por un epitelio escamoso estratificado. En condiciones normales la proliferación está restringida
a la capa basal en contacto con la membrana basal. Distintos grados de neoplasia revelan proliferación en estratos superiores
y pérdida de la diferenciación. El carcinoma revela crecimiento invasivo del tejido conectivo subyacente.
Los tumores presentan diversas alteraciones genéticas
Los tumores manifiestan todo tipo de alteraciones genéticas, mutaciones puntuales, amplificaciones, deleciones,
translocaciones y número aberrante de cromosomas (aneuploidía). También involucran períodos de crisis con
masivas rupturas y reordenamientos cromosómicos (“chromothripsis”) e hipermutación localizada (“kataegis”).
Nik-Zainal et al, Cell 2012; Alberts et al, MBC 2015
Análisis genómico de un tumor de mama.
El foco de hipermutación ocurre en una
región de 14 Mb del cromosoma 6 e
involucra substituciones C T.
foco de hipermutación localizada
N° de mutaciones en todo el genoma (cromosoma 123)
Dis
tan
cia
en
tre
mu
tacio
nes (
bp
)
chr1 chr2
Visualización de cromosomas de metafase
de un tumor de mama. La imagen de la
derecha representa cada cromosoma con
un color distinto. Observe el gran número
de translocaciones.
Los genes que controlan el crecimiento tumoral se agrupan en dos categorías: oncogenes y genes supresores de tumores
Proto-oncogen es un gen normal
que por mutación se convierte en
un oncogen. Los oncogenes
codifican para proteínas
hiperactivas que estimulan la
supervivencia, el crecimiento y la
proliferación celular. Mutaciones
dominantes “gain of function”
Genes supresores de tumores.
Genes cuyas mutaciones inactivan
la función de proteínas que
normalmente inhiben el crecimiento
y la proliferación celular.
Mutaciones recesivas
Circuitos afectados por mutaciones que promueven cáncer
Lodish MCB 2004
La progresión de tumores no solo involucra alteraciones genéticas sino también cambios epigenéticos
Epigenética refiere a cambios heredables en la expresión de los genes que no involucran modificaciones en la secuencia del
ADN. Las células tumorales presentan mutaciones en proteínas reguladoras del empaquetamiento de la cromatina, en el
patrón de metilación del ADN y de modificación de histonas. Mecanismos epigenéticos pueden inactivar genes supresores de
tumores como genes que promueven diferenciación, senescencia, reparación del ADN, etc.
Principales capacidades adquiridas por las células tumorales
Hanahan & Weinberg Cell 2011
Genome instability
metabolism
reprogramming
Las células tumorales adquieren autosuficiencia para crecer y proliferar
Alberts et al, MBC 2015
(IR, ILGFR, etc)
Las células tumorales expresan transportadores de glucosa y enzimas
glicolíticas en mayor proporción que las células normales.
El complejo mTOR constituye un nodo esencial en la señalización que promueve el metabolismo anabólico
Dibble et al Nature Rev NCB2013
El complejo mTORC está compuesto por 3 subunidades principales,
mTOR (Ser/Thr kinasa), mLST8 (activador) y Raptor (proteína “scaffold”)
(RTK, Ras, Raf, PI3K, Akt)
(PTEN, TSC1/2, p53)
La activación oncogénica de mTOR promueve diversos procesos que estimulan la progresión tumoral,
como por ej. el crecimiento, proliferación y sobrevivencia de las células.
Alberts et al, MBC 2015
Las células tumorales exhiben un metabolismo de la glucosa alterado
Las células tumorales
incrementan la la producción de
lactato, aun en condiciones
normales de oxígeno (effecto
Warburg). El lactato es secretado
lactato al medio extracelular.
La glicólisis aeróbica favorece el progreso tumoral en los siguientes aspectos:
1) prioriza la acumulación de biomasa en lugar de almacenamiento de energía
en forma de ATP,
2) reduce la apoptosis inducida por radicales libres producidos por la
fosforilación oxidativa en mitocondrias,
3) produce lactato el cual estimula la angiogénesis e invasión.
Tomografía de emisión de positrones (PET)
revela la presencia de tumores (T). Inyección
de fluorodeoxiglucosa (FDG). (K= kidney)
(↑biomasa)
LDH
(36 mol ATP/mol glucosa) (2mol ATP/mol gluc)
Los tumores consumen gran cantidad de glucosa
Romero Garcia et al., Front Immunol 2016
El lactato acidifica el microambiente, estimula angiogénesisy suprime la respuesta inmune
En condiciones aeróbicas, las células tumorales
importan el lactato y lo convierten en piruvato,
para luego metabolizarlo en el ciclo de Krebs.
estimulación
autócrina
estimulación
paracrina
célula del
microambiente
tumoralcélula
tumoral
hiperactividad
de oncogenes
estimulación
paracrina
Las células tumorales desarrollan autosuficiencia para crecer y proliferar mediante diferentes mecanismos
inactivación de
supresores
de tumores
Cdks
La capacidad de señalización sostenida para la proliferación en las células tumorales puede resultar
de una estimulación autócrina, o indirectamente a través de la estimulación de células del estroma
asociadas, a secretar factores de crecimiento y mitogénicos.
Mutaciones activantes en
un solo alelo son
suficientes para que se
manifieste el fenotipo.
EGFR/PDGFR
Ras, Raf
Src, Abl
Crk
myc
etc...
oncogenes: genes mutados que
codifican proteínas capaces de
transformar células en cultivo o
inducir cáncer en animales
proto-oncogen: contraparte
normal del oncogen
Ras: GTPasa; mutaciones puntuales activadoras, ej. bloquean la hidrólisis del GTP
Raf: Ser/Thr kinasa; mutaciones puntuales activadoras de la catálisis
Abl: tirosina-quinasa; translocación cromosómica genera la proteína
de fusión bcr-Abl constitutivamente activa
Crk: proteína adaptadora que promueve motilidad; sobreexpresada en cáncer
Myc: factor de transcripción que promueve proliferación; translocaciones cromosómicas
causan la sobre-expresión de myc.
oncogén célula normaltransfección
célula transformadaalteraciones
La expresión de oncogenes transforman células in vitro, induciendo alteraciones fenotípicas similares a las encontradas en tumores in vivo
- morfología fusiforme
- pérdida de la inhibición por contacto
- pérdida de la dependencia del anclaje al substrato
- menor dependencia a factores de crecimiento
- pérdida de adhesiones focales y fibras de estrés
Microscopía electrónica de barrido de fibroblastos normales (A) y transformados con el oncogen v-src (B)
Las células transformadas son fusiformes, con frecuente producción de microvellosidades.
El apilamiento de las células resulta de la pérdida de la inhibición por contacto.
A B
la conversión de un proto-oncogen en un oncogen
involucra mutaciones de ganancia de función.
mecanismos mutaciones puntuales/deleciones
amplificación génica
translocaciones cromosómicas
Diferentes mecanismos moleculares pueden convertir un proto-oncogén en un oncogén
ej. bcr-abl,
Trk-tropomiosina
ej. c-myc en
linfoma
de Burkitt
Ej. Ras, Raf, EGFR Ej. MycEj. Myc
Prior et al Cancer Res 2012
Las mutaciones oncogénicas más frecuentes de ras ocurren en los residuos G12, G13 y Q61 de la proteína.
Las mutaciones inhiben la capacidad intrínseca para hidrolizar el GTP unido y también la interacción con
GAPs, y por lo tanto generan una forma constitutivamente activa. La incidencia promedio de variantes
oncogénicas de ras en cáncer es de ~16%, pero puede superar el 60% en ciertos tumores (ej. páncreas).
El dominio que interacciona con el efector se
muestra en verde, la localización de los residuos
G12, G13 y Q61 se muestran en amarillo.
Mutaciones puntuales activadoras de la GTPasa RAS
Sitio activo de Ras en complejo con RasGAP. La cadena
lateral de arginina (“Arginine finger”, en amarillo) estabiliza
el estado de transición de la reacción de hidrólisis.
Q61
GAP en amarillo,
Ras en verde,
GDP en naranja,
AIF3, análogo del
fosfato
KRAS, NRAS, HRAS
Wan et al, Cell 2004; Cell Signaling 2015
(inhibited)
En ausencia de estímulo la quinasa BRAF se encuentra inhibida.
Más de 30 mutaciones puntuales asociadas con cáncer ocurren
en el dominio catalítico (“N y C lobe”), y facilitan la unión del
ATP y la fosfotransferencia al substrato. Las mutaciones alteran
la estructura y favorecen la conformación activa. Una de las más
comunes, es el reemplazo de V599 por E lo cual incrementa la
actividad de raf ~ 500 veces. Raf es mutado frecuentemente en
melanoma y en otros tipos de cánceres humanos.
Mutaciones puntuales activadoras de la quinasa RAF
DFG loop
D593
K482
D575
G500
K574T598
Sitio activo de las quinasas
V599
P loop
Varios oncogenes virales, ej. v-src, tienen su
contraparte celular no oncogénico (proto-oncogén), ej.
c-src. En las células no estimuladas la actividad c-Src
está normalmente reprimida por fosforilación de Tyr527.
Mutantes de v-Src codificadas por el virus RSV poseen
deleciones del terminal carboxilo que eliminan a la tirosina
Y527, o mutaciones puntuales que cambian Y527 por F.
Por lo tanto estas mutantes no pueden ser autoinhibidas
eficientemente y son constitutivamente activas.
En la configuración inactiva, la Y527 de c-Src es
constitutivamente fosforilada por otra quinasa. La
pY527 interacciona con el dominio SH2 de la misma
molécula, estabilizando la conformación inactiva del
dominio catalítico.
Dentro de las células infectadas los retrovirus utilizan su transcriptasa reversa para sintetizar ADN. El ADN viral se inserta
en el genoma huésped. Eventos de recombinación permiten la incorporación de genes del huésped en el genoma viral.
Ejemplos de virus que transducen oncogenes son: RSV v-src; Harvey sarcoma virus (HSV) v-ras, etc.
Proto-oncogenes celulares pueden mutar y convertirse en oncogenes dentro de virus
Secuencias reguladoras virales pueden convertir un proto-oncogén celular en un oncogén incrementando su expresión
Retrovirus que producen linfomas en aves usualmente se insertan en regiones adyacentes al gen c-myc
en dos posibles orientaciones. En ambos casos, secuencias promotoras o potenciadoras virales inducen
un incremento significativo en los niveles de transcripción de c-myc.
LTR: Long terminal repeats. Pueden funcionar como reguladores de la transcripción
Ciertas proteínas virales son oncoproteínasque mimetizan factores de crecimiento celulares
SFFV (Spleen Focus Forming Virus) es un retrovirus que produce eritroleucemia en ratones. El SFFV
codifica la proteína gp55, que estimula al receptor de eritropoietina en eritroblastos e induce su proliferación.
la unión del ligando
natural eritropoietina (Epo)
dimeriza el receptor y activa
la quinasa JAK asociada
la unión de gp55 mimetiza
el ligando natural y también
dimeriza y activa las quinasas JAK
Otro ejemplo es el gen v-sis del virus SSV (Simian Sarcoma Virus) codifica para una proteína homóloga a
PDGFβ. SSV induce sarcomas, activando la proliferación de fibroblastos que expresan el receptor de PDGF.
Jak2 Jak2 Jak2 Jak2
ligando natural
Deleciones y mutaciones puntuales generan variantes oncogénicas de receptores (ej. EGFR)
Ambas mutaciones promueven la activación
constitutiva del dominio tirosina-quinasa,
independiente de la presencia del ligando.
Otras mutaciones ocurren en el dominio
citosólico, p. ej. deleciones que eliminan
señales de endocitosis contribuyen a la
actividad sostenida del receptor.
Miembros de la familia del EGFR se encuentran sobre-
expresados o están mutados en varios tipos de cáncer.
La mutación puntual de Val Gln en la región de
transmembrana favorece la dimerización y convierte el
receptor Her2 en su forma oncogénica (Neu).
Deleciones del dominio extracelular del EGFR también
producen variantes oncogénicas (hiperactivas).
Lodish, MCB 2004
EGFR/HER/ErbB son denominaciones del mismo gen
Neu: Descripto en tumores del Neuroectodermo
Translocaciones cromosómicas generan quimeras oncogénicas (ej. TPM-Trk)
El mecanismo más común de activación oncogénica del receptor tirosina quinasa Trk es consecuencia de translocaciones
cromosómicas que generan proteínas quiméricas. Por ejemplo, una translocación cromosómica reemplaza la región
extracelular de Trk por el dominio “coiled coil” de la tropomiosina (TPM) involucrado en dimerización. La dimerización
constitutiva de la quimera TPM-Trk provoca una hiperactividad del dominio quinasa independiente de ligando.
La fosforilación y
activación de los
dímeros ocurre sin
necesidad de unir
al ligando natural.
dominio extracelular
oncoproteína quimera TPM-Trk
Translocación cromosómica en leucemia mieloide crónica (chronic myelogenous leukemia o CML). La translocación puede
detectarse por bandeo cromosómico (A) o por FISH (B). La translocación produce una oncoproteína quimera, Bcr-Abl, que exhibe
una actividad desregulada de la tirosina quinasa Abl, inducida por la dimerización que produce la región “coiled-coil” de Bcr.
c-Abl
Bcr-Abl
activación
de Abl
FISH: Fluorescence in situ hibridizationA B
BCR: Breakpoint Cluster Region
FISH: Fluorescence In Situ Hybridization
Translocaciones cromosómicas generan quimeras oncogénicas (ej. Bcr-Abl)
InTechOpen
substrate substrate
Bcr-Abl potencia la señalización de la PI3K y MAPK
promoviendo la proliferación e inhibiendo la apoptosis
Translocación cromosómica en linfomas de Burkitt que
posiciona al gen de c-myc en la región adyacente a
activadores o “enhancers” de genes de inmunoglobulinas.
Sobreexpresión
de c-myc!!
Amplificación de c-myc (FISH)
Otras translocaciones posicionan los activadores o “enhancers”
de los genes de inmunoglobulinas adyacentes al gen que
codifica para ciclinas D o al gen anti-apoptótico Bcl-2.
Translocaciones cromosómicas alteran la expresión de factores de transcripción (ej. c-myc)
Myc regula la expresión de genes que promueven la transición G1 S
Expresión diferencial de genes blanco. Aprox 1200 de 6633 genes
cambian su expresión después de 4 h de activación de myc.
niveles de expresión
respecto del control
<2 0 >2
mRNAs colectados de células beta del
páncreas y de queratinocitos, fueron
marcados con biotina e hibridizados a un
microarreglo de DNA (GeneChip, Affymetrix)
Robson et al, Genomics, 2011
Ambos alelos de los genes supresores de
tumores deben inactivarse para abolir la
función supresora del crecimiento tumoral.
CKIs
pRb
p53
TGFb
APC
PTEN
ATM/ATR
etc…
categorías de genes supresores de tumores:- proteínas de checkpoint, ej. p53, Bub, Mad
- proteínas inhibidoras de la proliferación, ej. CKIs, Rb, APC, TGFβ
- proteínas pro-apoptóticas, ej. PTEN
- proteínas reparadoras del DNA, ej. ATM/ATR, Chk1/2, BRC1 y 2
- Scaffolds (APC, axina)
La inactivación puede ocurrir por mutación (puntual, deleción),
pérdida de alelo, y silenciamiento (alteraciones epigenéticas)
TGFb inhibe el crecimiento tumoral a través de la regulación de la expresión de numerosos genes
TGFb
↑ PAI-1(plasminogen
activator
inhibitor-1)
plasminogen
activator
plasminogen
plasmin
degradación
de la ECM
TGFb
↑ p15 CKI
↑ p21 CKI
Rb
E2F
síntesis
de DNA
Cdk4/cicl D
Mutaciones inactivantes de Smads en la vía de TGF-b R son comunes en cáncer de colon y páncreas.
proliferación invasión
c-myc
efe
cto
cit
ostá
tico
efe
cto
cit
ostá
tico
APC y Axina restringen la función transcripcional de b-catenina
Mutaciones de APC, Axina y b-catenina se observan en varios tipos de cáncer incluído el colorectal. Beta
catenina se acumula y se transloca al núcleo donde forma complejos con los factores de transcripción
Tcf/Lcf y activa la transcripción de genes que promueven proliferación (ej. myc, ciclina D, E2F, etc).
PI-3k
Akt
caspasa 8/9
Bad
p53
citoc C/APAF
cascada de
activación de
caspasas
PTEN
deleciónPTEN defosforila PIP3
y contraresta la
función de PI-3K.
deleción /
inactivación
en rojo se señalan alteraciones
observadas en cáncer
que confieren resistencia
a la apoptosis y crecimiento.
RPTKs receptores que transducen
señales anti-apoptóticas
familia de proteínas Bcl-2:
proapoptóticas (Bax, Bak),
BH-only (Bad, Noxa, Puma)
antiapoptóticas (Bcl-2, Bcl-XL)
integrinas
Bcl-2
Bax
sobre-expresión
PTEN antagoniza señales de supervivencia y crecimiento
pérdida de
función
NOXA,
PUMA
mTOR
Ras
MdM2
• amplificación génica de ciclinas D
• deleciones de inhibidores de Cdk4/6, p16
• mutaciones inactivantes de Rb
Rb e inhibidores de Cdks como p16 son supresores de tumores; las ciclinas D y Cdk4 son proto-
oncogenes. Mutaciones de estos genes son comunes en cáncer. La ganancia de función de un solo proto-
oncogen de esta vía, o la inactivación bi-alélica de los supresores de tumores promueven tumorigénesis.
Retinoblastoma inhibe la transición G1/S
tipos de mutaciones descriptas en cáncer
p16
Rb
Virus de DNA, como el papiloma humano (HPV) y Simian Virus 40 (SV40) producen proteínas que
se unen e inactivan a las proteínas p53 y Rb. El HPV es causante del cáncer de cuello de útero.
Rb y p53 pueden inactivarse por oncoproteínas virales
E2F
Rb
E2F
HPVE7: inactiva Rb
E6: inactiva p53
E5: activa el PDGFR
Rb
E2F
verruga causada por HPV
La pérdida de heterocigosis de genes supresores de tumores puede ocurrir por diferentes mecanismos
La pérdida de función de Rb es causante de retinoblastoma y de otros tipos de cáncer.
El silenciamiento de genes supresores de tumores puede ocurrir por hipermetilación de promotores
Alberts et al BMC 2015; Baylin & Jones, CSHPB 2016
La metilación de los promotores ocurre en islas de CG en el ADN, las cuales no están metiladas en tejidos normales. En
contraste, se encuentran hipermetiladas en tumores. Otra marca represiva de la transcripción es la metilación de histonas, como
H3K9me3. La metilación puede ser inducida por factores ambientales, procesos inflamatorios crónicos, la edad, entre otros.
H3K9me3
H3K9me3: Histona 3, K9 (lisina en posición 9), me3 (Nro de grupos metilos)
Ratones knockout para p53 desarrollan tumores tempranamente
P53 contraresta diversas alteraciones asociadas al progreso tumoral
ANGIOGENESIS
La hiperactividad de oncogenes incrementa la expresión de p19ARFy la activación de p53
↑ ras La transcripción de p19ARF (ARF).
ARF inhibe Mdm2, lo cual estabiliza
p53 y promueve su actividad
transcripcional.
En condiciones normales
la E3 ubiquitina ligasa
Mdm2 ubiquitina a p53 y
promueve su degradación
en proteosomas.
↑ b-catenina
ARF: Alternative Reading Frame, es un producto de “splicing alternativo” del locus INK4a que codifica para P15INK4a, p16INK4a.
(No confundir con la GTPasa ARF que recluta proteinas de cubierta COPI!)
↑ proteínas pro-apoptóticas:
Bax, Puma, noxa,
receptores de Fas, etc
↑ myc
MDM2: Mouse Double Minute 2
p14/ARF humano es equivalente to p19/ARF in ratón
Rb: Retinoblastoma
El gen supresor de tumores CDKN2a es un regulador de senescencia frecuentemente silenciado en tumores
Zhao et al, EBioMedicine, 2016
DNA
RNA
p14/19/ARF p16/INK4A
CDK4/6 cyclin D Rb
E2Fs
MDM2
p53 p21
S phase
Oncogenes y supresores de tumores integran redes de señalización, su efecto depende del tipo celular y el contexto funcional
Lowe et al Nature 2004Senescencia: estado no replicativo permanente e irreversible
p19
telomer shortening
Ras activa p53 y promueve
senescencia mientras inhibe
apoptosis.
La inactivación de p19ARF
promueve la proliferación e
inhibe la senecencia y apoptosis.
Myc activa p53 y promueve
apoptosis mientras inhibe
senescencia.
Orígenes de las mutaciones y cáncer
Tomasetti et al, Science 2017
Tres causas explican la mayoría de
las mutaciones en las células de los
organismos pluricelulares:
hereditarias, relacionadas con la
replicación del ADN y ambientales.
Análisis de correlación de incidencia
de distintos tipos de cáncer y Nro de
divisiones de células madre sugieren
que las alteraciones en la duplicación
del ADN son causas preponderantes
en el desarrollo del cáncer.
inestabilidad genómica
fallas en reguladores
de "checkpoint“ mitóticos
fallas en mecanismos de
detección y reparación
del ADN
fallas en el mantenimiento
de los telómeros
Inestabilidad genómica
arresto del
ciclo celular
apoptosis
Las células normales desarrollaron
mecanismos que restringen la inestabilidad
genómica induciendo arresto del ciclo
celular, senescencia o apoptosis.
senescencia
Actividad oncogénica,
estrés de la replicación
La inestabilidad genómica es una característica del cáncer. Involucra una elevada tasa de
alteraciones genéticas y cromosómicas que causan heterogeneidad y diversidad genética.
Ocurre por diferentes mecanismos.
fallas en citoquinesis,
duplicación de centrosomas
(B) Se presume que un nivel de
inestabilidad genómica óptimo en los
tumores genera la suficiente
diversidad fenotípica para evolucionar
y superar las barreras selectivas
impuestas por el organismo.
apoptosis
(A) Las células normales
restringen la inestabilidad
genómica lo cual impide la
generación de variantes que
superen las barreras selectivas
impuestas durante la etapa
reproductiva del organismo.
(C) Existe un umbral de
inestabilidad genómica
compatible con la vida celular,
que cuando es superado activa
la apoptosis o senescencia.
La inestabilidad genómica es un mecanismo que genera diversidad genética
Diversos sistemas reparan daños en el ADN y restringen la inestabilidad genómica
Alberts et al, MBC 2008
dímero de timina
deaminación
de citosina
En cada ronda de duplicación de la molécula de ADN un fragmento del extremo 3´ no puede ser copiado
telómero
Un complejo de proteínas unidas a los telómeros
normales inhiben el mecanismo sensor de daño
del DNA mediado por ATM/ATR.
loss of RNA
primer in
lagging
strand
loss of RNA
primer in
lagging
strand
La telomerasa extiende el extremo 3´
El acortamiento o mal funcionamiento de los telómeros contribuyen a la inestabilidad genómica
O´Sullivan & Karlseder,
Nature Rev MCB 2010
Las proteínas RAP1, TRF2 y POT1 son
componentes de un complejo (shelterin) que
se une y protege a los telómeros del ataque
de nucleasas y de la activación de sistemas
de detección de daños al ADN (MRN).
Cuando esta protección falla, se activan los
sistemas de detección de doble corte del
ADN y de reparación (ej. NHEJ).
NHEJ: Non Homologous End Joining
NHEJ
detección de
doble corte
Células mutadas en p53 y Rb
favorecen este proceso de fusión
de telómeros de cromosomas.
La disfunción de los telómeros y/o la ruptura de cromosomas conducen a ciclos de ruptura y fusión que aumentan la inestabilidad genómica
inactivaciones de checkpoints,
ej. mutación de ATM/ATR
Los ciclos de ruptura y fusión de cromosomas inducen alteraciones masivas en la estructura de los cromosomas
(translocaciones, deleciones, cromosomas acéntricos y dicéntricos, etc) que se denominan genéricamente
Inestabilidad cromosómica estructural. En células normales este proceso induce apoptosis mediado por p53.
NHEJ
La re-expresión de la telomerasa limita la inestabilidad genómica y contribuye a la inmortalización de las células tumorales
a) La senescencia replicativa de una célula normal es inducida por la pérdida de los telómeros.
b) La re-expresión de la telomerasa en las células cancerosas le permiten escapar a la senescencia replicativa.
Los extremos de los cromosomas de vertebrados poseen numerosas copias de la secuencia TTAGGG (5-20 Kb),
agregadas por la enzima telomerasa. La telomerasa deja de expresarse en la mayoria de las células somáticas.
Aproximadamente el 80-90% de los cánceres muestran una reactivación de la expresión de la telomerasa.
telomerase telomerase
acortamiento de
los telómeros
telomerasa
3’5’
Odago & Gerson, 2003
telomerase
inhibitiontelomerase
re-expression
El acortamiento de los telómeros induce la senescencia replicativa
Dos barreras distintas limitan la proliferación de la mayoría de las células normales: la senescencia
replicativa y la apoptosis. Ambas dependen de p53. Señales mitogénicas mediadas por oncogenes
también inducen senescencia mediada por p53 y p16. Mutaciones de p53 en las células cancerosas
eliminan estos sistemas de resguardo a la proliferación ilimitada.
Sultana et al, AJOG 2017
p53 es un sensor de la inestabilidad cromosómica estructural y promueve apoptosis
BFB = "Breakage-Fusion-Breakage" (ciclos de ruptura y fusión)
La inactivación de p53 favorece la inestabilidad genómica
estructural y los ciclos de ruptura y fusión de cromosomas.
(p21, Bax, Puma)
p53
p53
Zivotovsky & Kroemer, Nature Rev Mol Cel Biol 2004
En células normales la inestabilidad de los telómeros y la exposición de extremos de la doble hebra del ADN
inducen la apoptosis por medio de la activación de proteínas de checkpoint (ATM, ATR, Chk1/2 y p53). La
mutación de p53 y la re-expresión de la telomerasa favorece el desarrollo tumoral.
La poliploidía y aneuploidía es común en cáncer. Puede resultar por defectos en la mitosis, fusión celular y
endomitosis. Estas alteraciones activan apoptosis mediada por p53. En células cancerosas la apoptosis
puede ser inhibida por inactivación de p53 y/o la sobre-expresión de miembros de la familia de Bcl-2.
p53 es un sensor de la inestabilidad cromosómica numérica
Zivotovsky & Kroemer, Nature Rev Mol Cel Biol 2004
(multiplicación
del número
haploide >2n)
(multiplicación
incompleta del
número haploide)
estabilización
y localización
nuclear
p21CIP Cdk2
degradación en
el proteosoma
proteínas pro-apoptóticas (Bax,BID,
PUMA, noxa, receptores de Fas)
G1/S
Cdc25 G2/MCdk1
Cdk4/6 Rb E2F
Resumen de funciones de p53
ATM/ATR
Chk1/2
p53
inactivación de proteínas anti-apoptóticas (Bcl2, Bcl-xl)
activación de proteínas pro-apoptóticas (BAX y BAK)
efectos
independientes
de transcripción
transcripción
estrés oncogénico
ras, myc, E2F
p19
ARF
inestabilidad
genómica
Daño al DNA
El contexto y el genotipo celular influyen sobre
las vías activadas por p53
contexto celular (señalización)
- factores de crecimiento, citoquinas, etc
- integrinas
- caderinas adhesión
↑ p53
arresto temporario
apoptosis
genotipo (alteraciones en genes reguladores del ciclo celular y la apoptosis)
hiperactividad
oncogénica
inestabilidad
cromosómica
daño del DNA,
acortamiento de
telómeros
senescencia
a. Los tumores secretan VEGF, un potente factor
que induce la angiogénesis a partir de capilares
pre-existentes.
b. Un evento temprano de la angiogénesis es la
disociación de los pericitos y la dilatación de la
pared capilar.
c. Las células endoteliales degradan la membrana
basal e invaden el estroma.
d. Estimuladas por factores del estroma, las
células endoteliales migran y proliferan.
e. Las células endoteliales se adhieren entre sí,
generan una membrana basal y reclutan pericitos
que se asocian a la pared del nuevo capilar
formado.
Berger & Benjamin, Nature Cancer Rev 2003
La capacidad de inducir angiogénesis es esencial para elcrecimiento y propagación de los tumores sólidos
pericito
Angiogénesis es el proceso de formación de vasos a partir de capilares pre-existentes.
nuevos capilares
Los tumores sólidos benignos crecen como nódulos avasculares. En la mayoría de los casos se estabilizan en un estado
de latencia ("dormancy") en el cual el tumor permanece estable (a). Eventualmente, dependiendo del tipo de tumor y
del micro ambiente, la masa celular puede incrementar drásticamente si adquiere la capacidad de inducir la angiogénesis
("switch" angiogénico). Los vasos nuevos inducidos por los tumores son frágiles, irregulares y tortuosos produciendo
hemorragias e inflamación.
Berger & Benjamin, Nature Cancer Rev 2003
El "switch" angiogénico depende de un balance entre numerosos factores pro-angiogénicos y anti-angiogénicos
Berger & Benjamin, Nature Cancer Rev 2003
TGF-b
Thrombospondin-1 MMP9 VEGF VEGFRendothelial cell proliferation
and migration
RPTP
ECM
TGF-b
ECM
degradation
products
plasminogen
fragment
Que dispara
el "switch"
angiogénico?
hipoxia
p53
acumulación del factor
de transcripción HIF-1
(hypoxia-inducible factor-1)
↑ factores pro-angiogénicos (VEGF)
↑ genes pro-invasivos (receptor met)
↓ factores pro-angiogénicos
↑ factores anti-angiogénicos
normoxia
↑HIF-1
HIF-1 proteosoma
OHVHL
En condiciones de oxígeno normal el factor de transcripción HIF-1 es hidroxilado en prolinas y ubiquitinado por
la proteína supresora de tumores VHL (von Hippel-Lindau), siendo continuamente degradado en proteosomas.
En condiciones de hipoxia y/o inactivación de VHL, HIF-1 se acumula y activa transcripción de factores pro-
angiogénicos. Se activa p53 la cual inhibe angiogénesis, reprime la expresión de VEGF y HIF-1, y promueve la
expresión de Trombospondin-1 y otros factores anti-angiogénicos, por lo tanto mutaciones que inactivan a p53
también facilitan que se dispare la angiogénesis.
HGF/SF
met (RTK)
↑ migración
mutación
inactivante
regulación
transcripcional
HIF-1
regulación
post-traducciónMDM2
Metástasis refiere a la capacidad de las células
tumorales de colonizar tejidos distantes al tumor
primario y generar tumores secundarios.
Involucra varias etapas:
1) invasión local del estroma
2) intravasación
3) circulación
4) arresto y extravasación
5) colonización
tumor
estroma
invasión, intravasación
nodos
linfáticos
Steeg, Nature Med 2006
La colonización depende de
interacciones recíprocas entre
las células tumorales y diversas
células en el microambiente de
tejido distante.
extravasación, colonización
El comportamiento invasivo (maligno) de las células involucra:
cambios en la adhesión (caderinas, integrinas)
proteólisis local (proteasas de la matriz)
migración (señalización, reguladores del citoesqueleto, etc)
Ensayos in vitro para evaluar la invasión
células de carcinoma
de colon humano
implante
ortotópico
(intestino)
implante
heterotópico
(músculo)
metástasis
Estudios in vivo: Implantes en modelos animales
El implante heterotópico puede inhibir el crecimiento en
el órgano huésped mientras que el implante ortotópico
puede recrear el patrón de metástasis observado en el
tumor original.
El implante ortotópico ocurre
en el mismo tejido que las
células del implante
Las células del estroma,
factores de crecimiento y matriz
extracelular son diferentes a las
del tejido de origen.
EMT marca el inicio de la invasión de carcinomas
El proceso de EMT de las células epiteliales
involucra la pérdida de los contactos
intercelulares, la pérdida de la polaridad y la
adquisición de un fenotipo migratorio e invasivo.
EMT ocurre normalmente durante el desarrollo, por ej. durante gastrulación, delaminación de las células de la cresta neural,
etc. También ocurre EMT fisiológicamente como resultado a injuria de epitelios (cicatrización o “wound healing”).
Rowe & Weiss ARCDB 2009
La diseminación de células de carcinoma ocurre por dos
mecanismos: diseminación mediante células individuales o por
migración colectiva. En la migración colectiva un grupo de células
permanecen unidas por uniones adherentes (E-caderinas) y
estrechas (claudinas), mientras que otro grupo exhiben el fenotipo
de EMT, con gran motilidad y capacidad de degradación de la
matriz, liderando el movimiento durante el proceso invasivo.
El programa de EMT confiere las propiedades para la invasión y diseminación
EMT: Epithelial-Mesenchymal TransitionLambert et al, Cell 2016
Diversas señales extracelulares inducen EMT mediante la activación de factores de transcripción específicos
Kang & Masagué, Cell 2004
cytokines
Los factores de transcripción Twist, Snail, SIP1 y
otros reprimen la transcripción de la caderina-E y
activan la transcripción de proteínas pro-invasivas
como la caderina-N, fibronectina, vimentina, etc.
Las señales que inducen EMT son en gran parte secretadas por las células del microambiente tumoral
Liotta & Kohn, Nature 2001
El carcinoma invasivo es considerado una
patología de poblaciones celulares diversas
que habitan el microambiente del tumor.
La transición a un carcinoma invasivo es
precedida por la activación de fibroblastos,
células endoteliales y del sistema inmune
que liberan enzimas, citoquinas y factores
de crecimiento en una zona localizada
denominada "frente de invasión".
frente de
invasión
1) Los fibroblastos secretan HGF/SF que
estimulan la motilidad de las celulas tumorales
a través de los receptores c-Met.
2) Las células tumorales secretan VEGF y
bFGF, los cuales se unen a receptores en las
células endoteliales e inducen angiogénesis.
3) Los fibroblastos y las células endoteliales
producen enzimas latentes como MMPs y uPA,
que son activadas en contacto con el
invadopodio de la célula tumoral, y degradan
la ECM y los ectodominios de las caderinas,
promoviendo la invasión.
4) La degradación de la ECM libera factores
como el TGFb y el EGF los cuales promueven
EMT, angiogénesis y la proliferación de la célula
tumoral.
5) La degradación de la ECM expone sitios
RGD reconocidos por integrinas involucradas
en la motilidad.
6) Las vias activadas en la célula tumoral
generan señales de proliferacion, motilidad y
anti-apoptóticas. Por ejemplo, la activación
de los receptores Met, EGFR e integrinas
activan FAK, PI-3K, MLCK, GTPasas rho, etc.
Interacciones moleculares en el microambiente de invasión
Liotta & Kohn, Nature 2001
3
3
2
1
4
3
5
6
La invasión requiere de la degradación localizada de la matriz
Las células del microambiente tumoral secretan proteasas que degradan la matriz
y favorecen la invasividad. Las proteasas extracelulares se agrupan en dos familias:
(1) Metaloproteinasas
de la matriz (MMP)
colagenasas instersticiales degradan colágenos fibrilares
estromelisinas degradan fibronectina, proteoglicanos, col IV
gelatinasas (colagenasas tipo IV) degradan col IV, fibronectina, elastina
su actividad depende de iones zinc
o calcio
Las tres clases de metaloproteinasas poseen inhibidores endógenos (tissue inhibitors of metalloproteinasas = TIMPs)
(2) Serine
proteases Activadores del plasminógeno (PAs). Hay 2 tipos:
- laminina
- fibronectina
- colágeno IV
- vitronectina
uPA: urokinase-plasminogen activator asociada a receptores de superficie (uPAR)
tPA: tissue-type plasminogen activator secretada
las serpinas son inhibidores de las serine proteases
uPA o tPA plasminógeno plasmina activa la plasmina degrada
Las células invasivas manifiestan cambios en la expresión de moléculas de adhesión y proteasas
integrinas: Las células tumorales expresan integrinas promiscuas,
que reconocen diversas moléculas de la matriz extracelular, por ej.
a3b1, avb3 reconocen el motivo RGD en fibronectina, vitronectina, etc
caderinas: Un rasgo característico de carcinomas es la supresión de
la expresión de las caderinas-E. Esto facilita la migración de las
células tumorales. La re-expresión de caderina-E inhibe la invasividad
en algunos tumores. Las proteasas secretadas también clivan los
ectodominios de las caderinas y facilitan la movilidad e invasión.
La proteólisis pericelular controlada de la matriz expone sitios
crípticos RGD que son reconocidos por las integrinas a3b1 y avb3.
También libera factores de crecimiento como TGFβ, IGF, EGF, etc
a3b1 interacciona con laminina, fibronectina y colágeno.
avb3 interacciona con fibronectina, vitronectina, colágeno y trombospondina.
Friedl & Wolf, Nature Rev Can 2003
Las células se unen, traccionan y degradan de manera controlada, las bibras de la matriz
extracelular, diversos elementos de adhesión, del citoesqueleto y señalización actúan de
manera coordinada.
Eventos celulares y moleculares durante la invasión
Lambert et al, Cell 2016
Interacciones en el microambiente intravascular
Las células tumorales (CT) circulantes encuentran múltiples obstáculos, como carencia del anclaje a un substrato, flujo
hidrodinámico, y fuerzas de resistencia y cizallamiento. Además, son vulnerables al ataque del sistema inmune,
particularmente por las células “Natural Killer” (NK). Sin embargo, la interacción de las CT con plaquetas bloquea el ataque
de las NK, en parte debido a factores (TGFβ, PDGF) liberados por las plaquetas que inhiben a las NK. Las CT también
interaccionan con neutrófilos, monocitos y las células endoteliales, intercambiando diversas señales.
La extravasación de las CT (transendothelial migration, TEM)
es facilitada por plaquetas y macrófagos, que secretan
diversos factores (ATP, VEGF, metaloproteasas, etc) que
incrementan la permeabilidad de los capilares.
Latencia o “dormancy” de las células tumorales diseminadas
La metástasis se origina por la diseminación de células del tumor primario (DTCs). Tumores como el de próstata y mama
tienen un alto porcentaje de recurrencia o reactivación de la progresión tumoral posteriores al tratamiento terapéutico,
usualmente con características más agresivas que en la fase previa. Esta recurrencia ocurre después de meses o años de
ausencia de síntomas clínicos, y se conoce como fase de latencia, pausa o “dormancy”. Esta fase puede ocurrir en el tumor
primario o en las células diseminadas (metastatic dormancy). La heterogeneidad de los tumores primarios origina células que
diseminan tempranamente (early DTCs) o tardíamente (late DTCs), con diferente impacto en el potencial metastásico.
Sosa et al, Nature Rev Cancer 2014
metástasisfase pre-invasiva fase invasiva
latencia
DTCs: Disseminated Tumor Cells
Aguirre-Ghiso, Nature Rev Cancer 2007; Linde et al., Adv. Cancer Res. 2016
Modelos de latencia o “dormancy”
La latencia o dormancy puede ocurrir por diferentes mecanismos. Células del microambiente pueden inducir la quiescencia
en células tumorales individuales (“cellular dormancy”). Alternativamente, la falta de vascularización puede mantener una
población de células tumorales estable por un balance de apoptosis y proliferación (“angiogenic dormancy”).
Señalización del microambiente que
induce quiescencia y el estado de
latencia celular (“cellular dormancy”)
mediante la expresión de inhibidores
de Cdk, p21 y p27.
BMP: Bone Morphogenetic Protein, pertenecen a la
superfamilia del TGF.
atRA; all trans Retinoic Acid, metabolito de la vitamina A
que estimula receptores nucleares (RARa/β)
Dado que el cáncer es en gran parte una enfermedad
genética debería ser posible su clasificación en base al
perfil de expresión específico del transcriptoma.
Los chips de DNA permiten analizar niveles de mRNA a
escala global (transcriptoma)
La tipificación del cáncer es importante para decidir la terapia a aplicar.
Hasta ahora dicha clasificación se basa en la historia clínica del paciente,
la histología del tumor y la expresión de marcadores bioquímicos.
La hibridización comparativa de mRNAs se emplea para detectarcambios en expresión de genes
El chip o microarreglo de DNA consiste en una matriz de
cDNAs u oligonucleótidos sintéticos pertenecientes a una
colección de genes, cuya posición en el arreglo es conocida.
Los chips se hibridizan con una mezcla de cDNAs de
muestras de referencia y experimentales marcadas con
fluorescentes diferentes. Los datos obtenidos se emplean
para construir perfiles de expresión en relación a una
determinada condición o tratamiento.
cDNA de muestra de referencia (ej. individuo sano)
cDNA de muestra experimental (ej. individuo enfermo)
++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++gen1 gen2 gen3 gen4 gen5
fijación de
oligonucleótidos
o cDNA
gen1 gen2 gen3 gen4 gen5
hibridización con
cDNA marcado
++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++
resultado
En este caso, los colores amarillos representan genes cuya expresión es similar en la
muestra experimental y referencia. Los colores verdes y rojos representan genes
sobreexpresados o subexpresados en las muestras experimentales, respectivamente.
MBC Alberts et al 4th ed, p378
Patrones de expresión génica en distintos tipos de cáncer
En este chip se analizan los niveles de expresión
de 1800 genes (ordenados en hileras horizontales)
en 142 tumores obtenidos de pacientes diferentes
y agrupados de acuerdo al órgano que afectan
(columnas verticales).
conclusión 1: el nivel de expresión de cada
gen varía en los distintos tumores (hilera de
barras ordenadas de izquierda a derecha).
conclusión 2: cada tipo de tumor expresa
un perfil de expresión génica característico.
Cada rectángulo (ver inserto) indica el nivel de
expresión de un gen particular en un tumor
determinado, el rojo indica que la expresión es
mayor que el promedio; el verde que es
inferior al promedio y el negro indica un
valor de expresión promedio.
Esta información puede ser empleada para
tipificar células cancerosas de origen
desconocido comparando sus transcriptomas
con el de tumores conocidos.
De un chip de 6817 genes humanos
se identificaron un grupo de 50 genes
que se expresan diferencialmente en
leucemia mieloide aguda (AML) y
leucemia linfoblástica aguda (ALL).
Golub TR et al, Science 286,1999
Este estudio demuestra que el perfil
genético basado en microarrays
puede ser aplicado para tipificar
distintos tumores.
genes:Perfiles transcripcionalesde dos tipos de leucemia (AML y ALL)
Alizadeh et al, Nature 2000
En este trabajo se construyó un “linfochip” con ~18.000
genes que se expresan en células linfoides. El linfochip
se empleó para caracterizar los genes de tres
principales tipos de linfomas: FL, CLL y DLBCL. Note la
expresión diferencial de genes que se expresan en
centros germinales de células B entre FL y CLL. Cada
columna vertical representa una muestra de RNAm y
cada hilera horizontal representa un gen. Niveles de
expresión inferiores o superiores al control se
representan en verde y rojo, respectivamente.
Perfiles transcripcionales de linfomas96 muestras de diferentes linfomas
~18
.000 g
enes
FL: Follicular lymphoma
CLL: Chronic Lymphocytic lymphoma
DLBCL: Diffuse Large B-Cell Lymphoma
expresión relativa a la muestra control
De un chip de ~25.000 genes humanos se identificaron ~5000 genes que se expresan diferencialmente en 98 tumores primarios
de mama. De estos se seleccionaron 70 genes cuya expresión (rojo indica sobreexpresión, verde indica subexpresión) se
emplea como un patrón para pronosticar metástasis en biopsias de 78 tumores de mama (hileras horizontales). Los genes
fueron ordenados de acuerdo a sus coeficientes de correlación en dos grupos: buen pronóstico o mal pronóstico. Genes
involucrados en el ciclo celular (ciclinas D, helicasa), señalización (FGF, Wnt, TGFβ), invasión y angiogénesis (metaloproteasas,
VEGF) están fuertemente sobreexpresados en el patrón de mal pronóstico.
van 't Veer et al Nature 2002
Perfiles transcripcionales asociados a metástasisCáncer de mama
genes (70)
buen pronóstico,
no metástasis
en >5 años
Mal pronóstico,
metástasis
en <5 añostu
mo
res (
78)
