Sintesis para la sintesis de Licopeno

9
ESTUDIO DE MEDIOS DE CULTIVO PARA LA SÍNTESIS DE LICOPENO A PARTIR DE Clavibacter michiganensis sub. michiganensis CULTURE MEDIA FOR LYCOPENE SYNTHESIS FROM Clavibacter michiganensis sub. michiganensis Ana M. TORRES L. 1 , Luisa F. ROJAS H. 1 , Juan C. MAZO R. 1 , Catalina SAMPEDRO. 1 , Stella RESTREPO G. 1 , Lucia ATEHORTÚA G. 1 , Carlos D. ÁLVAREZ M. 1 y Rigoberto RÍOS E. 1 * RESUMEN El licopeno es un carotenoide de elevado poder antioxidante que se obtiene a partir de fuentes naturales especialmente frutas y vegetales; también puede ser producido mediante el cultivo de microoganismos. En el presente artículo se estudia la síntesis de licopeno a partir del cultivo sumer- gido de Clavibacter michiganensis sub. michiganensis. Se considera el diseño de medios de cultivo y la separación, cuantificación y caracterización del carotenoide. Con el fin de establecer los niveles más apropiados para los factores de estudio (fuente de carbono, fuente de nitrógeno y sales), se programa un diseño de factor único; para el estudio de optimización se emplea un diseño central compuesto (3 3 ), cuya variable respuesta es la concentración de producto. El ajuste estadístico de los resultados experi- mentales muestra valores de fuente de carbono (glucosa: 7.5 g/L), nitrógeno (peptona: 10g/L y extracto de levadura: 10 g/L) y sales (cloruro de sodio: 10 g/L y fosfato dipotásico: 1 g/L), como constituyentes del medio de cultivo para lograr la mayor concentración de pigmento (2.85 mg carotenos/mL). El producto obtenido se caracteriza como licopeno a partir de técnicas de Infrarrojo y Resonancia Magnética Nuclear de Protones. Palabras Clave: Clavibacter michiganensis, licopeno, medios de cultivo, antioxidante ABSTRACT Lycopene is a carotenoid with high antioxidant characteristics that is being obtained from natural sources such as fruits and vegetables; and can also be produced by microorganisms. In this research, we study the synthesis of lycopene by the submerged culture of Clavibacter michiganensis sub. michiganensis; among others, it is considered the design of culture media for the carotenoid production and its separation, quantification and characterization. With the purpose of establishing the most appropriate levels for factors such as carbon and nitrogen sources, and salts, a unique factor experimental design is programmed; an optimization study is made from the results of a central (3 3 ) combined experi- mental design. The statistical adjustment of the experimental results gives values of carbon source (glucose: 7.5 g/L), nitrogen (peptone: 10g/L and yeast extract: 10 g/L) and salts (sodium chloride: 10 g/ L and di-potassium phosphate: 1 g/L), as constituent of the culture media to achieve the largest concentration of lycopene (approximately 2.85 mg carotenoid/mL). The carotenoid produced by sumerged culture is characterized as lycopene by using Infrared and Proton Nuclear Magnetic Resonance techniques. Keywords: Clavibacter michiganensis, lycopene, culture media, antioxidant 1 Grupo de Biotecnología Universidad de Antioquia A.A. 1226 Medellín Colombia * Autor a quien se debe dirigir la correspondencia: [email protected] VITAE, REVISTA DE LA FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA ISSN 0121-4004 Volumen 10 número 2, año 2003. Universidad de Antioquia, Medellín - Colombia. págs. 37-45

description

estudios del licopeno

Transcript of Sintesis para la sintesis de Licopeno

Page 1: Sintesis para la sintesis de Licopeno

��������������������� ����������������������������������

���������� ����������������� �����������

������� ���� ��������������������������������� ������������ ����� �����������

������������ ��������������������������������� �!�������������� "!!���������#�����$���������%�#�����&!'���(� ������)��*'+"& '�������,

�������

�! !�$'-"�' "��� $�&' "�'�."." "!"/�.'-'."& �� �'0�.�� "1�" �" '+ �"�" � -�& �& ." 2�"� "��� �&�!"� "�-"$��!3"� " 2&� �� ) /"*" �!"�4 �3+�5� -�"." �"& -&'.�$�.'3".��� " "! $�! �/' ."3�$&''*����3'����"!-&"�"� "�& 6$�!'�""� �.�� !��6� "���." !�$'-"�'�-�& �&."! $�! �/'��3"&7*�.'."���������� ������������ ����� ������������ �" $'���."&� "! .��"8'."3".�'�." $�! �/' ) !��"-�&�$�9�� $��� �2�$�$�9�) $�&�$ "&�:�$�9�."! $�&' "�'�."� �'�"! 2��.""� �+!"$"& !'���/"!"�3;��-&'-��.'�-�&�!'�2�$ '&"�.""� �.�'<2�"� "."$�&+'�'�2�"� "."�� &9*"�')��!"�=��"-&'*&�3���.��"8'." 2�$ '&>��$'4 -�&�"! "� �.�'."'- �3�:�$�9��""3-!"���.��"8'$"� &�! $'3-�"� ' <??=�$�)�/�&��+!" &"�-�"� �"� !� $'�$"� &�$�9�."-&'.�$ '��! �@�� ""� �.6� �$'." !'� &"��! �.'�"0-"&�73"� �!"�3�"� &�/�!'&"�."2�"� "."$�&+'�'<*!�$'��AB�C*D�=��� &9*"�'<-"- '��A�E*D�)"0 &�$ '."!"/�.�&�A�E*D�=)��!"�<$!'&�&'."�'.�'A�E*D�)2'�2� '.�-' ;��$'A�*D�=�$'3'$'�� � �)"� "�."!3".�'."$�! �/'-�&� !'*&�& !�3�)'&$'�$"� &�$�9�."-�*3"� '<F�GC3*$�&' "�'�D3�=�

�!-&'.�$ ''+ "��.'�"$�&�$ "&�:�$'3' !�$'-"�'�-�& �&." 5$��$��." ��2&�&&'@')�"�'���$���*�5 �$���$!"�&."�&' '�"����� ���������������� ������������� !�$'-"�'�3".�'�." $�! �/'� �� �'0�.�� "

��������

�)$'-"�"���$�&' "�'�.H� II�*I�� �'0�.�� $I�&�$ "&�� �$� I� ��+"��*'+ ���".2&'3�� �&�!�'�&$"���$I��2&�� ���./"*" �+!"�4��.$���!�'+"-&'.�$".+)3�$&''&*����3���� I��&"�"�&$I�H"� �.) I"�)� I"���'2!)$'-"�"+) I"��+3"&*".$�! �&"'2���������� ����������������� �����������4�3'�*' I"&�� � �� $'���."&". I" ."��*� '2 $�! �&"3".�� 2'& I" $�&' "�'�. -&'.�$ �'� ��. � ��"-�&� �'��1��� �2�$� �'���.$I�&�$ "&�:� �'��J� I I"-�&-'�"'2"� �+!��I��* I"3'� �--&'-&�� "!"/"!� 2'& 2�$ '&� ��$I��$�&+'���.�� &'*"��'�&$"�� ��.��! �� ����1�" 2�$ '&"0-"&�3"� �!."��*���-&'*&�33".4 ��'- �3�:� �'� � �.) ��3�." 2&'3 I" &"��! �'2 � $"� &�! <??= $'3+��"."0-"&�73"� �! ."��*���I" � � �� �$�! �.@�� 3"� '2 I" "0-"&�3"� �! &"��! � *�/"� /�!�"�'2 $�&+'� �'�&$"<*!�$'�"AB�C*D�=��� &'*"�<-"- '�"A�E*D���.)"�� "0 &�$ A�E*D�=��.��! �<�'.��3$I!'&�."A�E*D� ��. .�7-' �����3-I'�-I� "A � *D�=� �� $'�� � �"� '2 I" $�! �&"3".�� ' �$I�"/" I" !�&*"� $'�$"� &� �'� '2 !)$'-"�" <�--&'0�3� "!) F�GC3* $�&' "�'�.D3�=��I" $�&' "�'�. -&'.�$". +)��3"&*".$�! �&"��$I�&�$ "&�:".��!)$'-"�"+)����*��2&�&".��.�&' '���$!"�&�*�" �$�"�'���$" "$I��1�"��������� ������������ ������������� !)$'-"�"� $�! �&"3".��� �� �'0�.��

� #&�-' ."K�' "$�'!'*6����/"&��.�.."�� �'1������� �FFL "."!!6�M�'!'3+��

, �� '& � 1��"� �"."+".�&�*�& !� $'&&"�-'�."�$��A &&�'�N�."��".��$'

VITAE, REVISTA DE LA FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICAISSN 0121-4004 Volumen 10 número 2, año 2003.Universidad de Antioquia, Medellín - Colombia. págs. 37-45

Page 2: Sintesis para la sintesis de Licopeno

�� �����

����� ����!�

�! !�$'-"�' <�OE�CL= �"'+ �"�" 2��.�3"� �!73"� "�-�& �&."2�"� "��� �&�!"��"�-"$��!3"�7 "2&� ��)/"*" �!"���"$�"� "�"� �.�'�I��&"!�7$�'��.'." 2'&3�.�&"$ � "! !�$'-"�'$'� !�-&"7/"�$�9�." $�"& ' �-'." $;�$"& "� "! I'3+&"�"�-"$��!3"� " "! $;�$"& ." -&9� � �"#$� ��6 $'3'$'����3"�'&��$�."�$��."�2"$$�'�"�$'&'��&���$'3'!��& "&�'�$!"&'������'�"I��." "&3���.'-!"��3"� " !��+��"�+�'!9*�$���� 2���$'1�63�$��." "� ��-&'-�".�."�� -"&'-�&"$"�.�&"$ �3"� "&"!�$�'��.��$'�"!P"!"/�.'-'."&�� �'0�.�� "."!!�$'-"�'�"!$��!�$ >�$'3'�"� &�!�:�.'&."&�7.�$�!"� !�+&"� <'0�.' ) -"&90�.'= � "����.' !'�.�8'� '0�.� �/'� �'+&" !'� "@�.'�4 "! -'."&�� �'0�.�� "."��$'-"�' "�3�) ��-"&�'& �! ."' &'� $�&' "�'� ) �� �'0�.�� "��� �&�!"�%&�� '�I�!!�:*'� @�� �2�$��"!*&�� �� "&5�$'3"&$��!."�7-"& �.'-'&"!��$'-"�'�"� !'�>! �3'� �"3-'��

��$'-"�' �3+�5�-�"."�"&'+ "��.'�-�& �&."!$�! �/'."3�$&''&*����3'�<I'�*'�)+�$ "7&���=� �� +�$ "&������������ ������������ ��� �����������-&'.�$"��-�*3"� '�3�&�!!'�$'��7 � ��.'-&��$�-�!3"� "-'&�� �-'." $�&' "�'�"!!�$'-"�'����6� "���."!�$'-"�'�"/"�2"$ �.�-'& !� /"!'$�.�.." $&"$�3�"� '."!3�$&''&*�7���3'� !� ".�. ."! $�! �/' ) !�� $'�.�$�'�"�2���$'1�63�$��)."!3".�'."$�! �/''��0�� "���>3"&' !�3� �.' ." &"-'& "� +�+!�'*&;2�$'� �'7+&" 3".�'� ." $�! �/' ) &"1�"&�3�"� '��� &�$�'��!"�-�&� "� � ��+"�-"$�"4." '.'� "!!'��"."� �$� "! &�+�@'."#&�3'� Q#&�3'� (�

�! !�$'-"�'-&"�"� � !�� ��*��"� "� -&'-�".�7."�26��$��A-�� '."2���9�A�BER���'!�+!""�$!'7&'2'&3'2&6')$�!�"� ")"�+"�$"�'$�!�"� "4 !�7*"&�3"� " �'!�+!" "�+"�$"�' 2&6' )-'$' �'!�7+!""�" ��'! 2&6')$�!�"� "�)"�3" ��'!��� !�!� "&� �&� �" $� �� �!*��'� �'!/"� "����.'�-�&�!�"0 &�$$�9�." !�$'-"�'��! �*��!1�"�!*����."��� -&'-�".�."� "�-"$ &�!"�� �+�'&$�9�3;0�3�<�3="�.���!2�&'."$�&+'�'�!'�*� �."�."'�.�."COG�CEB�C�OBB4"�$!'&'2'&3'AC�B�OGE�OC?4"�" ��'!ACE?�OBF�OO?� "� &"' &'�)� �'� ��� "73�� ." "0 &�$$�9� ." !�$'-"�' �'� $'� '�'�� !'1�" ����.' � ��� $�&�$ "&6� �$��."+�@� "� �+�!�7.�.!�3� ����-!�$�$�9�"�' &'��"$ '&"�$'3'"!." $'!'&�� "��� �&�!"��

�������*���+��,�� ��

�-.����/0- 1�

�� +�$ "&�� ���������� ������������ ��� ������������2�".'��.�-'&!�S������������������� �������� ��������/"&��.�.." �!"�$�����-�8�4!�$"-�2�"3�� "��.�"�$�@��."-" &�$'� "��"�7.'3".�'�K� <"� *D�A $�!.'�� &� �/'A G� "07 &�$ '." !"/�.�&�A F� 2'�2� ' ;$�.'."-' ���'A F�2'�2� '.�;$�.'."-' ���'AE�C��*�&A�C��'!�$�9�."CE3��!�ET."*!�$'��)�3�."��!2� '."3�*�"��'I"- �I�.&� �.'AC=

���-� �����23-��

��&�"!"� �.�'."3".�'�."$�! �/'�""/�!��7&'��� ' �!."LU3".�'�.�2"&"� "�� ��$!�)"�.'3".�'� $'3"&$��!"� ) 2'&3�!�.'�� �-�& �&."���&&"*!' "0-"&�3"� �! ."! �-' $"� &�! $'3-�"� '&' �$�'��!��'3' 2�"� "�." $�&+'�' �" "� �.��7&'�A *!�$'��� ��$�&'��� $�&+'�� '." $�!$�'� !�$'&."3�6:2"&3"� �.'�*"!� ����"�.�2"&"� "���/"7!"��"*>�"!�&&"*!'"0-"&�3"� �!� �'3'2�"� "�."�� &9*"�' �" "� �.��&'�A .�*"&�.' &6- �$'."$��"6��7-"- '��� "0 &�$ '." !"/�.�&��-"- '��� �.�2"&"� "���/"!"���'3''!�*'"!"3"� '�A2'�2� '.�-' ;��$'� $!'&�&'." �'.�'� �.�2"&"� "���/"!"���'�3".�'�."$�! �/'$'3"&$��!"�"� �.��.'�2�"7&'�A�K���*�&$I'$'!� "<"�*D�A"0 &�$ '."$�&7�"A?�-"- '��AC�*!�$'��A�E�$!'&�&'."�'.�'AC��*�&A�C=4�*�&���*&"<"�*D�A"0 &�$ '."$�&�"A?�-"- '��AC�$!'&�&'."�'.�'AG��*�&A�C=4�&�- �$���<3".�' !61��.' "� *D�A .�*"&�.' $��"6��-��$&"; �$��B�.�*"&�.'-�-�6��$'."�')�A?�."07 &'��AF�C�$!'&�&'."�'.�'AC� 2'�2� '.�-' ;��$'AF�C=

�-043-.�����23-��&

�" "� �.��&'� $��5 �$��." $�! �/'."?� C ) B.6��4".�.."!��9$�!'A?�O�C�L�B�G�U��E�����F��?��OI'&��4$'�$"� &�$�9�."!��9$�!'A��F�O�L�G)�ET."!/'!�3"�."3".�'4 �*� �$�9�A�FE)�CE&-3��'�2'&3"�!��$'�.�$�'�"�&"-'& �.��"�!�!� "&� �&�$'3'�."$��.��-�&�"!$�! �/'.""� �+�$ "&����""� �+!"$�9!� "3-"&� �&�"�FGR��-����$��!."!3".�'."$�! �/'�@�� �.'�B�?��!3".�'."$�! �/'���.'2�"<*D�=A.�*"&�.' &6- �$'."$��"6��-"- '���E�"0 &�$ '."!"/�.�&�C�*!�7$'��C)���!C�

Page 3: Sintesis para la sintesis de Licopeno

�5

�4.0-. ��063-.

������������������� ���

�� $��� �2�$�$�9� ." +�'3��� �" I�:' -'&��-"$ &'2' '3" &6�� ��-"$ &'2' 93" &'�"&3'�-"$ &'��$�"!�'� M�!2��

����������� ���������������

�'3' �'!/"� "� ." "0 &�$$�9� �" "� �.��&'���'!/"� "� -'!�&"� <3" ��'!� �$" '��=� �'!/"� "��'-'!�&"�<5 "&�+"�$"�')I"0��'=� �! 5&3��'."! -&'$"�' 2"&3"� � �/'� �" '3�&'�3�"� &��."�3�."$�! �/')�"!!"/�&'�� �+'�"--"�.'&24-'� "&�'&3"� "�"$"� &�2�*�&'��CEEE&-3.�7&�� "?E3��� '��$'�"!2��."�"-�&�&!��$5!�!��."!3".�'."$�! �/'�

���/": $"� &�2�*�.'�� �" &" �&9)."�"$I9"!�'+&"��.�� "� ) !�� $5!�!�� �" $'��"&/�&'� -�&�"0 &�$$�9�4!�"0 &�$$�9��"I�:'�.�$�'���.'�3!."�'!/"� ")$"� &�2�*��.'��"/�3"� ".�&�� "�C3��� '� � CEEE &-3��� " -&'$"�' �" &"-� �9I�� �!'*&�&&" �&�&!�3�)'&$�� �.�.."-�*3"�7 '-'��+!"��� �'!�$�9� �'!/"� "7-�*3"� ' �" &"7$'!"$ 9)�" '39���3�"� &�-�&�&"�!�:�&!�!"$7 �&�."�+�'&+��$���OCE�3���.�"���)'.""07 &�$$�9� �" I�:' $'� ��� <�= &5-!�$�� ��$��� �2�$�$�9� �"I�:'-�&� $�&' "�'� ' �!"�4 ��6�!�$'�$"� &�$�9�."$�&' "�'��"$�!$�!9 "��"�.'"� $�"� �1�"E�FC���.�."�." �+�'&+��$�� $'7&&"�-'�."���3*."$�&' "�'�D3� �

�!*���� /�&��� "� � "� "-&'$"�' �"."�$&�+"��$'� ����$�9�������������������� �!"�# ���$���� �������%

&��� " "���)'$'���."&9���" �-� �.�$�'��! ��7 "�." !� "0 &�$$�9�4."�-�5�." $"� &�2�*�&� � !�+�'3��� &"��! �� " �" !" �.�$�'��&'� C3� ."�'!�$�9�."����$'�"!2��."-"&3"�+�!�:�&!�3"3+&���$"!�!�&���3":$!���'!�$�9�."����)-�*3"� '��"!!"/9�"+�!!�$�9�!"� �3"� "I��7 �!'*&�&�"1�".�.��$'3-!" ���$'� ����$�9��"�.�$�'��&'�C3�."�'!/"� "<5 "&=)�"$'� ���9$'�"! -&'$".�3�"� '-&"/��3"� "."�$&� '�������������������'��������������� �������%

&����/":1�" !�� $5!�!�� 2�"&'�$"� &�2�*�.����"."�"$I9 "! �'+&"��.�� "4 !� -�&". $"!�!�& 2�"-"&3"�+�!�:�.� -&"/�� �.�$�9� ." � 3� ."3" ��'!���"/�3"� " �" $"� &�2�*9-'&�C3����CEEE&-3��"&"$'!"$ 9!��'!�$�9�3" ��'!7-�*73"� ') "� "-&'$".�3�"� ' �" &"-� �9I�� � !'7

*&�&+�'3����'-�*3"� �.���!��'!�$�9�&"��!7 �� "� �" !" �.�$�'��&'�C3�."+"�$"�')O3�." �*��� �" �*� 9 -'& �E3��� '�� !�3":$!� �" &���2�&�9���"3+�.'."�"-�&�$�9�)�"."@9"�&"-'�'�+��$��.''+ "�"& 2��"����� �$�'�� <-'7!�&=)���'&*;��$�<�'-'!�&=4"�.""�-"&�&1�""!$�&' "�'"� 5 �'!�+�!�:�.'"� !� 2��"�'-'!�&�-'&!' �� '�"."$�� 9!�2��"�$�'��."!"3+�.')�"!�/9$'�+"�$"�'-�&�"0 &�"&!'�-'��+!"�$�&' "�'��&&�� &�.'���" &" �&9 !�"-�2��" <�'!�$�'�"� 2���!"�." +"�$"�'= -'� "&�'&3"� " �" .�!�)"&'� "�+"�$"�')�"&"�!�:9!�!"$ �&�."�+�'&+��$���OCE�3���$'�$"� &�$�9�."$�&' "�'� �" "� �39 ��7+�"�.'1�"E�FC���.�."�." �+�'&+��$�� $'&&"�7-'�."���3*."$�&' "�'D3��������������������� ��������������� �������&

�!-&'$".�3�"� ' "3-!"�.'"� ��3�!�& �! &"�!�:�7.' "� "! "���)' �� "&�'&� �'!' 1�" "� !�*�& ."+"�$"�' �"� �!�:9I"0��'�

������� ���������(�����

��&� "! ��;!���� ." $�&�$ "&�:�$�9� �" "3-!"�7&'� 5$��$��."��-"$ &'�$'-��."��2&�&&'@'<�����-"$ &'3" "&������CEEE= ) �"�'���$���*�5 �$� ��$!"�& ." -&' '�"� <��K���V���W?EE=

����*�� ���+� ������!�

� 32�-�����1��-� ���� .23-��

��&�!��$ �/�$�9�."���������� ��������������� ������������ �" "3-!"9 !�3" '.'!'*6�." &"$�7-"&�$�9�."$�! �/'!�'2�!�:�.'��&"$'3"�.�.�-'&!��'!"$$�9���-�8'!�."$�! �/'� �-'����/"&��7.�.." �!"�$��7��-�8����+�$ "&��2�"�"3+&�7.� "� !'�3".�'��K�� �*�& $I'$'!� "� �*�& ���7*&" )�&�- �$�����" 5� '�� "!3".�'�K�-&"7�"� 9 !'� &"��! �.'�3;� 2�/'&�+!"� "� $��� ' �$&"$�3�"� ')-�*3"� �$�9�� ��"�.' �"!"$$�'��.'-�&� "!3�� "��3�"� '."!�$"-��

��&� !�-&'.�$$�9�."!-�*3"� ' �""/�!��&'�.�2"&"� "�3".�'�."$�! �/'��!*��'�.""!!'�&"7-'& �.'� "� !� !� "&� �&� $'3'�."$��.'�-�&� "!$&"$�3�"� ') !� �6� "���."!-�*3"� '-&'.�$�.'-'&���������� ������������ ���� ������������ �'�."3;�3".�'� 2�"&'� 2'&3�!�.'��I�$�"�.'/�7&��$�'�"� � !'� $� �.'� "� !�+�+!�'*&�26�' ��$!�7)"�.'' &'��� &�"� "� "$'�93�$'� $'3>�3"�7 "���.'�"�"!$�! �/'."+�$ "&����

��������������������� ���������������������������

Page 4: Sintesis para la sintesis de Licopeno

%7 �����

�$'� ����$�9��"-&"�"� � !�$'3-'��$�9�."!'�3".�'� "/�!��.'� <"�*D�=� /"& �+!��4 '.'�!'�"���)'��"I�$�"&'�$'����<�=&5-!�$��!�.�7

2"&"�$��"� &"���/�!'&"����$�2�"3�)'&�!�ET��'��'3+&"�." !'�.�2"&"� "�3".�'��"���*���."�$�"&.'�!�&"2"&"�$��+�+!�'*&;2�$�'���$'37-'��$�9��

���"& ".�'�."$�! �/'"/�!��.'�)��$'3-'��$�9��

MEDIO DE CULTIVO FUENTE DE C

(g/L) FUENTE DE N

(g/L) OLIGOELEMENTOS

(g/L)

53 glucosa: 10 digerido tríptico caseína-peptona: 10extracto de levadura: 5

cloruro de sodio: 5

53-a glucosa: 10 digerido tríptico caseína-peptona: 10licor de Maíz: 5

cloruro de sodio: 5

53-b glucosa: 10 extracto de levadura: 5 licor de Maíz: 5 cloruro de sodio: 5

53-c licor de maíz: 5 digerido tríptico caseína-peptona: 10extracto de levadura: 5

cloruro de sodio: 5

583*sacarosa: 10 carbonato de calcio: 20 extracto de levadura: 5 - - -

583-a sacarosa: 10 carbonato de calcio: 6.71 extracto de levadura: 5 - - -

YDC** glucosa: 10 carbonato de calcio: 20 extracto de levadura: 10 - - -

YDC-a glucosa: 10 carbonato de calcio: 6.71 extracto de levadura: 10 - - -

Triptisim glucosa: 2.5 peptona: 20 cloruro de sodio: 5 fosfato dipotásico: 2.5

GEL-PEP gelatina: 20 peptona: 20 cloruro de sodio: 5 fosfato dipotásico: 2.5

LICO-PEP licor de maíz: 15 peptona: 10 - - -

, ".�'� &"$'3"�.�.'�-'&��� <HHH�.�3:�."D�-"$�"�D�-FEEOLF�I 3!=

,, ".�' &"$'3"�.�.'-'&#&�3'� Q#&�3'� ( &

�" !'�3".�'�"/�!��.'�� "!3".�'C? &"��! 9�"&"!3;�2�/'&�+!"-�&�!'*&�&+�"�$&"$�3�"� ')�6� "���."-&'.�$ '��'�"! 3".�'C?7+ �37+�5� �" �!$��:� $&"$�3�"� '� <3".�.' -'&��-"$ &'2' '3" &6�=� ) �6� "��� ."! -�*3"� '��''+� �� "�"�3"�'�2�/'&�+!")"���-&"-�&�$�9��"-&"�"� ��.�2�$�! �."�$'�!��'!�+�!�.�.."!!�7$'&."3�6:�

�'�3".�'� $'� "��"�.' $�&+'�� '." $�!$�'"�L�B�3*D��/�!'&1�"$'&&"�-'�."�! !63� "."�'!�+�!�.�.."!$�&+'�� '$'3'$�!$� ���'-"&3�7 "�"!$&"$�3�"� '."!�+�$ "&�����-&"�"�$��"�"!3".�'."���$'�$"� &�$�9�."$�&+'�� '3�7$I'3�)'& <FE *D�=� 2�/'&"$" "! $&"$�3�"� ' )-"&3� " !� �6� "��� ."! -�*3"� '� $'� *&�� $'�7$"� &�$�9�." �9!�.'� ���-"�.�.'� <$�&+'�� '."$�!$�'3;�+�'3���=�-&"�"� ��.' ��$'�/"��"� "�.�&�� " !� " �-� ." �"-�&�$�9� ." !� +�'3���-�*3"� �.���""� �3��"&��!'�3".�'�CG?�CG?7�����)���7� 2�"&'� ."�$�& �.'���'�3"7

.�'��&�- ���3�#��7���)����7����'2�/'7&"$"�"!$&"$�3�"� '."!�+�$ "&���-'&!'1�" �37+�5� �"."�$�& �&'��

��0�-.-�0� ��8��3-� �8�� � 603� - ���-.�8�0�

�.�$�'��!3"� "�""� �.��&'�' &��/�&��+!"�."!-&'$"�'."�6� "���"3-!"��.'$'3'3".�'."$�!7 �/'+��""!3".�'C?�"!3"@'&."!'�3".�'�"/�7!��.'�����/�&��+!"�"� �.��.�� 2�"&'� !�".�.."$�! �/'� !�/"!'$�.�.."�*� �$�9�) !�".�.)$'�7$"� &�$�9�."��9$�!'�"�!'���/"!"�)�."2���.'��

�'� &"��! �.'� '+ "��.'�3�"� &�� 1�" ���$��5 �$�."$�! �/'."C.6��-"&3� "!'*&�&"!3;��! '&"�.�3�"� '."+�'3���)-&'.�$ '4����*�7 �$�9�."�CE&-3"��."$��.�-�&�"/� �& !� 2'&73�$�9� ." �*&"*�.'� $"!�!�&"� ) *�&�� �:�& !�I'3'*"��:�$�9�."!$�! �/'4$'�����9$�!'$�! �7/�.'.�&�� "LI'&��"�-'��+!"*�&�� �:�&1�" !�+�$ "&��I��!$��:�.'!�2��""0-'�"�$��!."$&"$�7

Page 5: Sintesis para la sintesis de Licopeno

%"

3�"� ')-'&!' �� '�""�$�"� &�"�"!3'3"�7 '�."$��.'-�&���$�! �/'"�3� &�:�����!3"�7 "� �� /'!�3"�." ��9$�!'." E�F3�� "! �T."/'!�3"�."3".�'."$�! �/'�3'� &9�"&"!3;�2�/'&�+!"-�&�!'*&�&���+�"��$'�$"� &�$�9�."-&'.�$ '�

���/":."2���.�� !�� $'�.�$�'�"�'-"&� �/����" &"�!�:�&'� "���)'� $'� "! -&'-9�� ' ." ��� �7 ��& "! .�*"&�.' &6- �$'." $��"6��7-"- '���-&"7�"� ""�"!".�'C?�-'&-"- '��"�-&"�"�$��'�'."2'�2� '.�;$�.'."-' ���')���3�)'&$'�7$"� &�$�9�."!�2�"� "."$�&+'�'4!����"/��$'37

-'��$�'�"� -�&� "! 3".�'C? �"-&"�"� ��"� !� �+!�F�

��&�"/�!��&"� '�3".�'��""3-!"9���$"-�$&"$�.� "� �*�&+!��.'� !� $��! 2�" &���2"&�.� �$�@�-" &�$'� "��"�.'".�'C?<�9!�.'=4�"3��7 �/'� "3-"&� �&��3+�"� ")."�-�5�."?.6����"��9 "� !� -&"-�&�$�9�."! ��9$�!'4 "! ��9$�!'2�"-&"-�&�.' $'�3".�'C? <!61��.'=.�&�� "LI'&�� ��"*�&��.'1�""! $�! �/' �!$��:�&� !� 2��""0-'�"�$��! ." $&"$�3�"� '� �! /'!�3"� ."��9$�!' 2�"�T"1��/�!"� " � E�F3���'.'� !'�"���)'��"I�$�"&'�$'����<�=&5-!�$�) !�.�2"7&"�$��"� &"���/�!'&"��'"0$".�9"!�ET

���$& �/�!��$�9�."-"- '��$'3'��� � � '."!.�*"&�.'."$��"6��7-"- '��"�"!3".�'C?<$'�$"� &�$�'�"�"�*D�=

MEDIO GLUCOSA PEPTONA EXTRACTO LEVADURA

NaCl K2HPO4 mg*

caroteno/mL

1 10 10 5 5 0 1.156 2 10 10 5 5 2.5 1.308 3 12.5 20 5 5 0 1.212 4 12.5 20 5 5 2.5 1.988

,�� '� &"��! �.'� $'&&"�-'�."� ��� /�!'& -&'3".�' "� &" "0-"&�3"� ' )��� <�= &5-!�$�� !� .�2"&"�$�� "� &" "� '�/�!'&"��'2�"3�)'&�!�ET

��� '-�&�"!��9$�!'$'3'-�&�"!$�! �/'."!�+�$ "&��"�3� &�:."�EE3���""3-!"�&'�!��$'�.�$�'�"�)� "� �+!"$�.�� $'3'�."$��.��-�&�!'*&�&$&"$�3�"� ')�6� "���."-&'.�$ '�"� '"��XFGR��-����$��!."!3".�'."$�! �/'�@�� �7.'�B�?��*� �$�9��CE&-3���+�$ "&��2�"$�! �7/�.� .�&�� "C.6�� $'�-'� "&�'& "0 &�$$�9�)$��� �2�$�$�9�."!-�*3"� '�

�>� $���.' '.'� !'�3".�'� -&"�"� �&'�$&"$�3�"� ' ) �6� "��� ." -&'.�$ '� "!3".�' O2�""!3;� 2�/'&�+!"��� " "0-"&�3"� '."@9/"&!�-'��+�!�.�.."��� � �$�9�."!.�*"&�.'$'3"&7$��! ." $��"6��7-"- '��-'& -"- '�� "�-&"�"�7$��." 2'�2� '.�;$�.'."-' ���'��-�& �& ." ��$'3-'��$�9�� .�$I' 3".�' 2�" '3�.' $'3'+��" -�&� !� 2'&3�!�$�9� ." !�3� &�: 2���! .""0-"&�3"� '�

�! �&&"*!' "0-"&�3"� �! 2���! 2�"�����"8'�"� &�!�'3-�"� '� "� "! $��! $�.���'." !'�$'3-'�"� "� ."!3".�' O 2�" "/�!��.' "� &"���/"!"�.�2"&"� "���&&'@��.'�� ' �!."CE"0-"7&�3"� '�4 $'3'/�&��+!"."&"�-�"� ��" '39!�$'�$"� &�$�9�."$�&' "�'�<3*D�='+ "��.���'�

��/"!"��"� �.��& 2�"&'�<*D�=A*!�$'��AB�C��E)�F�C4-"- '��A�E��C)FE4"0 &�$ '."!"/�.�&�AE�C)�E4���!AE�C)�E4VF���OAE�F�C)C�

��31-�03�� � 3�6 3-.����� � � �� 23�� �98��-1�03� &

��&� "! &� �3�"� '"� �.6� �$'." !'� &"��! �7.'� "0-"&�3"� �!"�� �" � �!�:9 "! -&'*&�3�����#�7�W����� �'� &"��! �.'�3�"� &��$'3'"! "0 &�$ '." !"/�.�&�����! )VF���O��'�!��/�&��+!"�."3�)'&"2"$ '"�!�+�'�6� "���."!-&'.�$ '4 !�-&"�"�$��.""0 &�$ '." !"/�.�7&�� $'3' 2�"� "."�� &9*"�'"�-�& �$�!�&3"� "�3-'& �� "� #!�$'��)-"- '��."+"�"� �&-&"7�"� "� "� "!3".�'� -"&'-�"."�3�� "�"&�" "�"!��/"! ��2"&�'& "/�!��.'4." "� "3'.'��3"7.�' $'3-�"� '-'& *!�$'�� <*D�=A B�C� -"- '��A�E�"0 &�$ '." !"/�.�&�A�E�$!'&�&'."�'.�'A�E)2'�2� '.�-' ;��$'A��"��."$��.'-�&�!'*&�&���$'�$"� &�$�9�3;0�3�."-&'.�$ '."�-&'0�3�7.�3"� "F�GC3*$�&' "�'�D3��

�$'� ����$�9��"-&"�"� ��!'�&"��! �.'�."!��� �) "! "� �.�'."���������Y�

��������������������� ���������������������������

Page 6: Sintesis para la sintesis de Licopeno

%$ �����

�!3'."!'�"!"$$�'��.'2�"." �-'$��.&; �$'��!��;!����."/�&���:���.�$���-'&$"� �@"."�@��7 "."!B?�UT�$'�/�&��$�9�"�!�&"�-�"� �."+�.�� !'� 2�$ '&"��3�� �' �! "&&'& "0-"&�3"� �!� !'$��!�""/�."�$���!$'���."&�&���.�� &�+�$�9�."-&'+�+�!�.�.3"�'&�!E��T��!$'"2�$�"� "."$'7&&"!�$�9�2�"."!LB�OGT�

�'� 5&3��'� 1�" �2"$ �� "�3�)'& *&�.' !�&"�-�"� �."!��� "3��'�!�$'�$"� &�$�9�.""07 &�$ ' ." !"/�.�&�� !�� �� "&�$$�'�"� "0 &�$ ' ."!"/�.�&� 7 "0 &�$ '." !"/�.�&�� *!�$'��7"0 &�$ '." !"/�.�&�� -"- '��7"0 &�$ '." !"/�.�&��

�����

Response: Carotenos Transform: InverseFactor Name Units Type -1 Leve +1 LevelA Glucosa g/L Numeric 7.50 12.50B Peptona g/L Numeric 10.00 20.00C Ext. lev. g/L Numeric 0.000 10.00D NaCl g/L Numeric 0.000 10.00E K2HPO4 g/L Numeric 0.000 5.00

ANOVA for Response Surface Reduced Quadratic Model

Sum of Mean FSource Squares DF Square Value Prob > FModel 1.99 17 0.12 10.01 < 0.0001Residual 0.96 82 0.012Lack of Fit 0.88 25 0.035 26.10 < 0.0001Pure Error 0.077 57 1.351E-03Cor Total 2.95 99

Root MSE 0.11 R-Squared 0.6748Dep Mean 0.62 Adj R-Squared 0.6073C.V. 17.48 Pred R-Squared 0.4687PRESS 1.57 Adeq Precision 17.767 Desire > 4

������:���!�����,����

�"!���'!�$�'�"�'+ "��.���"'+�"&/�1�"!'���/"!"�-�&� !'�.�� �� '� 2�$ '&"�-"&3��"$�"&'��-&'0�3�.�3"� " $'�� �� "�� ��"�.' "!VF���O

"!1�"-&"�"� 9���/�&��$�9�3�)'&3�� "��5�7.'�"."� &'." �����/"!"�3".�'7+�@'�

�-�& �&." !�� ��-"&2�$�"�." &"�-�"� �� 2�*�&���)F� �"'+�"&/�$'3'-�&��! ��$'�$"� &�$�'�"�.""0 &�$ '." !"/�.�&�-&"�"� "�"�"!3".�'."$�! �/'� !�-&'.�$$�9�." !�$'-"�' �" ��$&"3"� �$'�"!��3"� ''.��3���$�9�."!�$'�$"� &�$�9�."���!)VF���O� &"�-"$ �/�3"� "�

Page 7: Sintesis para la sintesis de Licopeno

%�

;-/2��"���-"&2�$�"."&"�-�"� �?�����!

;-/2��$&��-"&2�$�"."&"�-�"� �?��VF���O

ENSAYO SOLVENTE OBSERVACIÓN (λ=450nm) mg. carotenos

mL

1 Lisis: NaOH 1N Solvente: Éter

Buen nivel de extracción de carotenos

0.191 0.76

2 Metanol Buen rendimiento de extracción, sin lisis previa.

0.092 0.73

3 Metanol-Acetona (1:1)

Bajo rendimiento extracción.

0.057 0.45

4 Benceno No es apropiado como solvente de extracción

____ ______

5 Lisis: Metanol Solvente: Benceno

Formación de una emulsión blanca.

______ ______

6 Hexano No es apropiado como solvente de extracción

______ _____

7 Lisis: Metanol Solvente: Hexano

Formación de emulsión. No se observa extracción.

______ _____

��������������������� ���������������������������

�0 �� �����93�..-<0

�� !� �+!� ? �"3�"� &�� !'� �'!/"� "� "/�7!��.'� "� $�.� "���)' ) !'� &"��! �.'� ."�+�'&+��$�� ) $'�$"� &�$�9�." -&'.�$ ' '+ "7��.'�4$�.���'.""!!'�$'&&"�-'�."���/�!'&-&'3".�' "� &" "0-"&�3"� ' ) &5-!�$�4 "����7

*>�$��'"� '�/�!'&"�.�2�"&"�"�3;�."���ET��'&!��$�&�$ "&6� �$��."!-&'$"�')"!&"�.�3�"�7 ' ." "0 &�$$�9�� !� �"-�&�$�9� ) $��� �2�$�$�9�." !�$'-"�' �" I�:'����.'3" ��'! $'3' �'!7/"� " ." "0 &�$$�9��

����&��/�!��$�9�."�'!/"� "�-�&�!�"0 &�$$�9�."$�&' "�'�

Page 8: Sintesis para la sintesis de Licopeno

%% �����

�0=- - � ����.3��->.-<0���� �����2.3�

�!-&'.�$ ''+ "��.'."!$�! �/'."��������� ������������ ��� ������������ �' !'*&9-�&�2�$�&�"$'3-!" �3"� " � -�& �& ." !�� 5$��$�� "3-!"�7

.����'� ��;!���� &"�!�:�.'� �'!'-"&3� �"&'�."7 "$ �& !�-&"�"�$��." !�$'-"�' �-�& �&." !�� �"78�!"� $�&�$ "&6� �$�� ) "�-"$ &'� -� &9� -&'-�'�."��"� &�$ �&�1�63�$��</"&2�*�&�?=�

;-/2���&�� &�$ �&�1�63�$�."��$'-"�'

� 8�.3������ -0?����@�

�! ��;!���� �" &"�!�:9 ."�-�5� ."! -&'$"�' .""0 &�$$�9�)-�&�2�$�$�9��-�&� !'$��! �""3-!"93" ��'!$'3'�'!/"� "� �� !� 2�*�&�O�"3�"�7 &� "! "�-"$ ' ��2&�&&'@'4 "�5! �" �-&"$��� !�� �"78�!"� $�&�$ "&6� �$��."A7 " ��'!A�??�?$37����+��.���$I� 6-�$�

."!*&�-'��<�"8�!�=)"��E�O$37��"�-&"7$�� !� "���9��7� 6-�$�." �!$'I'!"�-&�3�7

&�'�<�"8�!B=���-&"�"�$��."!*&�-'M���?

�""/�."�$���FGFE$37�<�"8�!?=7 ��$'-"�'A��FU?F$37��-�&"$"�!�� "���'�"�

��35 &�$�� ) ���35 &�$�� �7��!�2; �$' <�"8�!F=��!�*��!1�"!��2!"0�'�"���F���?"��OEE)�O?L$37�<�"8�!C=)<�"8�!L=4!��2!"0�'�"�2�"7&�."!-!��'X�7��"/"��GEE$37�<�"8�!G=)"��LC�$37��"'+�"&/�!� "���9��X�<�"8�!O=�����"8�!"��� "&�'&"�-"&3� "��2�&3�&1�""!-�*3"� '���!�:�.'"� !�$'-"�'

;-/2��%���-"$ &'."��."!-�*3"� '�3�&�!!'"�3" ��'!

� 8�.3��� ���� �� �00.-�1/043-.�02.�����8��3�0�

�� "��;!�����"&"�!�:9!�"*'."'+ "�"&"!-�*73"� '.�!��.'"�3" ��'!$'3"&$��!� ��3":$!�-�*3"� '73" ��'! 2�" "/�-'&�.�-�&�'+ "�"& "!-�*3"� ' $'3-!" �3"� " �"$'� "� " 2�" .�!��.'"�$!'&'2'&3'."� "&�.'-�&� $'&&"& "! "�-"$ &'�

�� !� 2�*�&� C �"3�"� &�� �"8�!"� $'&&"�7-'�.�"� "� � !� "� &�$ �&�."! !�$'-"�' '3��7.'$'3'&"2"&"�$��"!"�-"$ &'."&"�'���$��3�*7�5 �$���$!"�&."!$'3-�"� '��3�!�.'$'������+�

�� &"C)C�C--3<�"8�!F=�"'+�"&/� !��"8�!*"�"&�.�-'& "!I�.&9*"�'." !'� "�!�$"�.'+!"�X�7�7." !� "� &�$ �&�� ��-&"�"�$��." !'�I�7.&9*"�'�."!��F �"�-&"$���!&".".'&."O--3<�"8�!?=)"�F--3�"-�"."�/"&!���"8�!"�*"7�"&�.��-'&!'�I�.&9*"�'�."!'�*&�-'���? "&73���!"��<�"8�!O=����"8�!��"."+"�!�'!/"� "�

�>�$���.'!���2'&3�$�9�'+ "��.��'"���72�$�"� "-�&���+"&"�1�5-&'-'&$�9��""�$�"�7 &�"!!�$'-"�'"�"!-&'.�$ '���!�:�.'�!���"8�7!"� $�&�$ "&6� �$��'+�"&/�.��-"&3� "� ��2"&�& �'7+&" ��-&"�"�$���

Page 9: Sintesis para la sintesis de Licopeno

%'

����*�������

�"!'�3".�'�."$�! �/'"/�!��.'�-�&�!��6�7 "���."!�$'-"�'�-�& �&."!$�! �/'."��������� ���������������� ������������"!3".�'$'3-�"� '-'& <*D�=A *!�$'��A B�C� -"- '��A �E� "0 &�$ '."!"/�.�&�A �E� $!'&�&' ." �'.�'A �E ) 2'�2� '.�-' ;��$'A �� -"&3� �9 '+ "�"& !�3;� �! � $'�7$"� &�$�9�."-&'.�$ '��-&'0�3�.�3"� "F�GC3*$�&' "�'�D3���"!'��'!/"� "�"� �.��.'�"!3;�2�/'&�+!" 2�"3" ��'!�'+ "��5�.'�"+�"�&"�.�73�"� '.""0 &�$$�9����!����-&"/��."!3�$&''&7*����3'�

�"�*��!2'&3��!��$'�.�$�'�"�'-"&� �/��3;��-&'-��.�� -�&� !� �6� "��� ." !�$'-"�' 2�"&'�A".�.."! ��9$�!'A LI'&��� /'!�3"�." ��9$�!'AE�F3���*� �$�9�A�CE&-3� "3-"&� �&�FGR��-����$��!�@�� �.'�B�?�$��5 �$�."$�! �/'AC.6���

�A�� ����������

�� "-&')"$ '2�"-�&$��!3"� "2����$��.'-'&"!�'3� 5." ��/"� �*�$�'�"�����." !����7/"&��.�.."�� �'1���� &"2"&"�$��.' $'� $9.�*'�EEM�7�U� ��'��� '&"��*&�."$"�"!�-')')$'!�+'&�$�9�."!-"&�'��!."! !�+'&� '&�'."�7$&'+�'!'*6�."!���$�! �.."".�$���."!����7/"&��.�.."�� �'1���

��������������������� ���������������������������

;-/2��'&��-"$ &'."��."!-�*3"� '�3�&�!!'"�$!'&'2'&3'

��;������������*��A�B;����

�� #�'/����$$���������$I"&�'������33���K��P� �3-2"&������'!.� :�#����J�!!" �J����<�UUC=S�� �Z"'2$�&' "�'�.���.&" ��'! ��&"!� �'� '&��Z'2-&'� � "$��$"&�[ �'�&��!�� �'��!���$"&��� � � "�GB<F?=A�BLB7�BBL

F� �I�'����VI�$I�Z������$I�"� ����'I"���� <�UUG=S�)$'-"�"�- �Z" ��. ����".��-'�� �'� ��3�!" ��. 2"3�!" &� �[ �&'$��'$��0-�K�'!�".�F�G<F=A�EU7��O�

?� K'+"Z���� �:.������&'3�.'/���� <�UUG=� S�I" "22"$ '2.&�". '3� '� *&�-" ��. �--!" -'3�$" '� I" $I'!"� "&'!3" �+'!��3 ��. �� �'0�.� �/" "�:)3� �$ �)� "3 �� &� �H� II)-"&$I'!"� "&'!"3��[ ��I&��*7�''.OF<C= A?�B7?FE

O� �'�������� �$I�!$I�J���&��$' ���#� <�UU�=� S�I"���*!" '0)*"� ��. $�&' "�'�. �� "&�$ �'�[ ���I' '$I"3��I' '+�'!���AO��OB

C� ��-"&� "������ �&&�����.��!2�� ���� <�UCO=��! "&� �'�� ��$�&' "�'�.�)� I"����$$'3-��)��*3� � �'� ������������� ���������� �'�&��!'2#"�"&�!�$&'+�'!'*)� �E A GC7UF�

L� #&�3'� ��4#&�3'� �� <�UGO=�#"��� �'&)�"+�$ "&��3�K"&*")\�����! '2 �)� "3� �$ +�$ "&�'!'*)�K�! �3'&"� <�.=�����V&�"*�J�!!��3���.J�!Z����F�--�FL�7�FGF

B� V�&&"&��4��$Z"&��<�UCE=���&' "�'�.������ �����+!��I��*�'3-��) ��$��'!��.�� ?GO�

G� K��"&�2"��.����<�UG�=���&' "�'�.���$'!'&�� ���. � �3��� -&"$�&�'&�A �"$I�'!'*�$�! ��. �� &� �'��! �--!�$� �'����$�."3�$-&"���������� U?G�

)������*����&�+�� ���#,���-../)������0�������&�!�����#1���-../