Un nuevo standard en el diagnóstico de alergias.Traducción Dr. Mario Soto Aguilera

Gerente ITR Consultores – Chile- Abril 2012

Historia

– Este es el tercer avance que ha realizado Spectrum en su historia, para el diagnóstico de las alergias:

1. Test de Radio alergeno absorbancia (RAST).2. SPOT TEST – Test ELISA Modificado.3. SPOT PLATINUM Test a contar del 2012 .

Test Radio Alergeno Absorbancia (RAST Testing)

– Se consideró como el estandard de oro tanto en medicina humana como

veterinaria a comienzos de los años 80.

– Problemas: Costo e intensidad del trabajo.• Test requería un alergeno por cada tubo.• Metodología muy cara.

Test de Elisa • Desarrollado a finales de 1980 y adoptado por Spectrum en 1998.

– Problemas: – Falsos Negativos.- Alergenos no siempre se adherían en forma electroestática al pocillo

de la placa de poliestireno. - Cada alergeno al tener diferentes características físicas hacía que la

unión a la placa fuese un proceso engorroso y caro.

- Mediciones imprecisas : Alergenos podían ser eliminados de la placa por el proceso de

lavado, lo cual se traducía en Resultados falsos

negativos.

Test de Elisa Modificado –SPOT TEST

• Desarrollado a finales de 1980’s, adoptado por Spectrum en 1998.

– Resultado:– Spectrum superó el inconveniente del Test Elisa tradicional,

mejorando la unión de los alergenos a la placa de poliestireno, mediante el empleo de un producto en base a látex.

• Sin embargo, nuevas investigaciones y nuevos reactivos han aparecido en el mercado durante los últimos 18 meses, y ello nos ha motivado a revisar el SPOT TEST.

• Realizamos una completa re- ingeniería del SPOT TEST, lo cual ha dado origen al SPOT PLATINUM, el cual continuará ofreciendo:

• Servicio de atención al cliente de alta calidad.• Continuidad en la atención a clientes y médicos veterinarios.• Apoyo en el proceso diagnóstico y en los tratamientos. • Mantención de la posición de avanzada en la industria.

Ventajas del SPOT Platinum

1) Nueva especificidad de los extractos de alergenos.2) Maxima absorción del alergeno mediante el empleo de un nuevo buffer conjugado.3) Estabilización de la estructura terciaria de los alergenos para maximizar la unión a la

placa.4) Amplificación de las señales IgE específicas / Empleo de una solución bloqueadora

libre de proteínas.5) Limitación de la interferencia de los anticuerpos competitivos.6) Empleo de diluyente de suero para minimizar la unión IgG no específica.7) Ajuste en la estandarización de cada uno de los cientos de alergenos que empleamos.

1. Nueva especificidad de los extractos alergénicos  •No colocamos la proteína total en la placa de poliestireno, sino que detectamos el HAPTENO, ya que la secuencia de aminoácidos de esta parte de la proteína es la más activa. •Identificamos la concentración óptima en la cual el HAPTENO se une con la placa de poliestireno.

•El anticuerpo IgE, más que buscar la proteína total, ahora identifica al HAPTENO responsable de la respuesta alérgica. •Esto hace que el test sea significativamente más específico.

•Esto es posible ahora, ya que la tecnología ha estado disponible en fecha reciente.

•Esto nos posiciona a la vanguardia de esta nueva tecnología.

2. El nuevo buffer conjugado maximiza la absorción del alergeno

 •Hemos desarrollado un nuevo buffer conjugado, el cual permite aumentar la habilidad del alergeno para unirse a la placa de testeo.

•Este buffer maximiza la absorción del alergeno.

•Los reactivos presentes en el buffer aumentan la unión de la proteÍna al pocillo de poliestireno.

3. Estabilización de la estructura terciaria del alergeno para maximizar la unión.

• El alergeno se presenta al anticuerpo IgE específico con su estructura terciaria INTACTA, tal como ocurre en el organismo.

• Mas que enfrentar a una proteína en dos dimensiones o que puede estar deteriorada, IDENTIFICAMOS UN HAPTENO ALERGENO ESPECIFICO el cual cuenta con su estructura terciaria intacta.

• Esto se traduce en una unión más segura, a diferencia del test de Elisa convencional, en el cual los alergenos se pierden debido

al proceso de lavado.

4. Amplificación de las señales IgE específicas / Empleo de Soluciones sintéticas libres de proteínas

•Otro problema asociado al diagnóstico de alergias, se refiere al bajo nivel plasmático de IgE en relación con los anticuerpos IgG.

•De modo que uno de los problemas que hemos enfrentado ha sido como medir los bajos niveles de IgE.

•No podíamos amplificar dichas señales, porque mientras más pequeña es la señal,mayor es la variabilidad entre los ensayos.

•Con los test previos no podiamos amplificar la señal ya que al hacerlo también amplificabamos el ruido proveniente de otrosanticuerpos (background noise).

•De modo que obteníamos background noise yuniones no específicas.

4. Amplificación señales IgE específicas / Empleo de Soluciones sintéticas libres de proteínas

•Ahora, empleamos una nueva solución sintética antibloqueadora - la cual no contiene proteina - con lo cual se previene cualquier reacción cruzada entre la solución, el alergeno y el complejo anticuerpo.

•Con lo cual se identifica la verdadera IgE, más que una reaccióncon proteínas múltiples.

•De esta manera, se observa una caida muy importante de la interferencia, cercana a la eliminación total.

5. Limitación de la Interferencia con anticuerpos competidores.

• Debido a la baja concentración de IgE y alta concentración de IgG a nivel plasmático, en el diagnóstico serólogico de alergias se debe considerar la interferencia con anticuerpos, especialmente IgG.

• El nuevo diluyente de suero que empleamos, MINIMIZA la unión IgG no específica porque:

Hace que la IgG se mantenga inactiva y por lo tanto incapaz de unirse al alergeno en la placa de poliestireno y

Permite la unión del alergeno a la IgE y no a la IgG

6. Empleo de diluyente de suero para minimizar la unión IgG no específica.

• Cuando agregamos a nuestro conjugado,la enzima anti IgE se produce una reacción colorímetrica basada en una reacción enzimática.

• El conjugado contiene un estabilizante el cual reduce en forma significativa la unión IgG no específica.

• Tanto el diluyente de suero como el conjugado ayudan a reducir las uniones no específicas, de modo que disponemos de una solución bloqueadora libre de proteinas, con lo cual tenemos mayor capacidad para identificar la unión del alergeno.

Reporte de los Resultados

•El informe de los resultados es absolutamente diferente a lo conocido hasta ahora.

•En el pasado debido a la interferencia y a las señales muy débiles, los resultados se reportaban en base al control negativo:

• 0 - 149% del control negativo : Negativo.• 150 – 199% del control negativo: Borderline.• Mayor que 200 % del control negativo: Positivo.

•SPOT PLATINUM con la amplificación de la señal y y la eliminación de la interferencia, no requierecompensar dichos factores.

Reporte de los Resultados

•Ahora estamos en condiciones de convertir el valor de la absorción leido directamente desde la microplaca, en un número que llamamos UNIDADES DE REACCION ALERGICA (URA).

•Más que expresar los resultados en base al control negativo, los resultados se expresan en una escala 1 – 5.000.

7. Ajuste en la estandarización de cada uno de los cientos de alergenos.

•Hemos ajustado las estandarización de cada uno de los cientos de alergenos que empleamos contra los resultados negativos.

• Es así como, los alergenos que reaccionan en forma negativa en relación con el control negativo y en base a la estandarización realizada para cada uno de ellos, se ubican bajo 100 URA.

•Los casos positivos son aquellos que reaccionan siempre entre 101 y 5.000 URA.

Tratamiento de Hiposensibilización

•Nuestra recomendación es tratar al paciente para todos los alergenos a los cuales es positivo parar llevarlo bajo su umbral.

•Anticipamos una moderada disminución en el caso de reacciones positivas, debido a que hemos eliminado el background noise.

Resumen - Summary

•El propósito de esta tercera modificación fue aumentar de manera importante:

•La especificidad.• La sensibilidad.• La reproducibilidad de cada test .

•A través de estas siete mejorías- con la incorporación de nuevos reactivos desarrollados por Spectrum o adquiridos en el mercado - hemos alcanzado los tres objetivos.

Información y Servicios

•Dr. Mario Soto AguileraMédico Veterinario U. de ChileGerente ITR ConsultoresRomán Díaz 720, oficina 504, providenciaMario.soto@itrconsultores.clFono: 56-2- 8137868 - Celular 09 499 2316

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•Dr. Mario Soto AguileraMédico Veterinario U. de ChileGerente ITR ConsultoresRomán Díaz 720, oficina 504, providenciaMario.soto@itrconsultores.clFono: 56-2- 8137868 - Celular 09 499 2316