UNIVERSIDAD NACIONAL SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIÓN DE MEDICINA VETERINARIA

INFORME: SUPEROVULACION MANIPULACION Y CLASIFICACIODE EMBRION

CURSO: BIOTECNOLOGIA VETERINARIA

SIGLA: MV-540

PROFESOR: Dr. M.Sc. ARTURO RODRÍGUEZ ZAMORA

ESTUDIANTES: MENDOZA CHAUCCA, MARIO

MENDOZA HUAMANI, ADNER

PALOMINO LUIS MIGUEL

HUAMANGA 2015 PERU

SUPEROVULACION MANIPULACIÓN Y CLASIFICACIÓN DE EMBRIONES

(I).-INTRODUCCIÓN

El desarrollo embrionario en mamíferos se inicia en el momento en que el gameto masculino y el gameto femenino se fusionan. Durante este proceso, llamado fecundación, el espermatozoide penetra progresivamente en el ovoplasma y forma el pronúcleo masculino, que posteriormente se unirá al pronúcleo femenino para reconstruir la dotación diploide. La fecundación es seguida por una serie de mitosis en las que el zigoto se segmenta en blastómeros cada vez más pequeños, a medida que se suceden las divisiones (Figura 1). Entre los estadios de 16 y 32 células los blastómeros se ordenan y se redistribuyen, dando lugar al fenómeno de la compactación. De esta manera, se establecen ciertas uniones entre las células que generan una estructura compacta que recibe el nombre de mórula. Aún en estos estadios se conserva la capacidad de desarrollar cualquiera de las células embrionarias (trofoblasto o embrioblasto), pero no la capacidad de desarrollar un embrión completo. La formación del blastocisto se produce cuando las células de la mórula se reordenan en torno a una cavidad central, denominada blastocele. En el blastocisto se distinguen dos grupos de células que difieren entre sí tanto morfológicamente como funcionalmente. El tipo celular interno, denominado masa celular interna o embrioblastema, conserva su carácter pluripotente para poder generar cualquier tejido del embrión, mientras que el otro tipo celular situado en la capa externa, el trofoblastema, perderá su pluripotencialidad para adherirse al endometrio materno. Esta divergencia entre células del trofoblasto y células de la masa celular interna constituye el primer evento de diferenciación del desarrollo de los mamíferos.

(II).- OBJETIVOS

Adiestrar en el manejo del protocolo de sincronización y superovulación ovárica

Adiestrar en la recuperación de embriones post mortem

Determinar el desarrollo y transporte embrionario en el tracto reproductivo de la coneja

Reconocer partes del embrión de coneja y estado de desarrollo

Adiestrar en la evaluación y clasificación de embriones según calidad y estado de desarrollo

(III).- MARCO TEÓRICO

Método Nro 1

Metodología

Las conejas superestimuladas con ECG folligon con el siguiente procedimiento.

4 3 2 1 0 1 2 3 4 5

inyec. eCG

Servicio 68hrs+GnRH

72 hrs recuperación de embriones

Los observados en el microscopio

Observando las mórulas de buena y mala calidad de embrión de coneja

Programa de sincronización

Conejo 1 Conejo 2 Conejo 3 conejo 4Aplic. eCG 50 UI (i.m.)

23/04 pm 22/04 pm 01/05 pm 30/04 pm

Monta natural (2 serv) + Aplic. 0.2 ml GnRH (Conceptal)

26/04 (am) 25/04 (am) 04/05 (am) 03/05 (am)

Recuperación de embriones

28/04 (am) 28/04 (am) 7/05 (pm) 7/05 (pm9

Los embriones serán recuperados por lavado del oviducto y útero de hembras sacrificadas con estro sincronizado a 72 horas post inseminación. Se utilizará como medio de lavado 40 ml de solución Ringer suplementada con 5% suero bovino que será vertida por el infundíbulo con una jeringa de 20 cc y aguja punta roma 18G de 1 ½”. Una placa petri en la parte baja de la unión útero-cervix será el depósito utilizado para recuperar el colectado, siguiendo al procedimiento realizado por Adams.

Método de lavado uterino para recuperar embriones (Adams, 1982) y Morfología de blastocisto de coneja. El líquido recuperado será revisado bajo un estereoscopio a 20X en búsqueda de embriones y luego evaluados morfológicamente a 40X. Los embriones serán clasificados de acuerdo a criterios establecidos por Lindner y Wrigth (1983) quienes consideran.

CUESTIONARIO

1. ¿completar el cuadro del informe y concluir?

Tabla: de recuperación de embriones de conejas

Coneja 4

Raza criolloEdad 9 meses de edadPartos ninguno

Peso vivo kg 4.5KgFecha de nacimiento abril

Numero de servicios 2 veces de servicio Fecha de recuperación 28/10/15Cuerpo lúteos OD Y OI

Folículos hemorrágicos OD Y OIOvas recuperadas

Estado de desarrollo ovas 2 células 4 células 8 células Mórula Blastocistotemprano Blastocisto Blastocisto tardío Blastocisto protuido

……9……..…3……….…………2…………………………………..……………….…1……………..…1………………..…………………..………2……………

Calidad de embrión Excelente Bueno

……………………….………………….

Regular pobre

…3……………..…roto de embrión

Parámetros Tasa de recuperación Tasa de fecundación Embriones transferibles

…………………………………………………….…………………….

Recomendaciones

2. ¿cuál es la teoría de la formación del blastocele?

El blastocele o cavidad de segmentación es la cavidad general primaria de los animales durante su desarrollo embrionario; general porque no está abierta al exterior, y primaria porque es la primera cavidad corporal que aparece en el embrión. El blastocele es la región central de la blástula (o blastósfera), que está llena de fluido. El blastocele se forma durante la embriogénesis cuando el cigoto (un ovocito fertilizado) sufre el proceso de segmentación, mediante el cual se divide repetidamente por mitosis en pequeñas células y origina una esfera maciza llamada mórula; ésta se ahueca y origina la blástula con la mencionada cavidad central.

En los animales triblásticos, el mesodermo invade el blastocele que virtualmente desaparece, pero en los pseudocelomados (como rotíferos y nematodos), el mesodermo es relativamente escaso, de manera que el blastocele persiste como cavidad general del adulto y recibe el nombre de pseudoceloma (limitado por electodermo, el endodermo y el mesodermo); por ese motivo, algunos autores, como Brusca y Brusca,1 prefieren llamar a estos animales blastocelomados.

Según algunos autores, en algunos grupos zoológicos, el blastocele da lugar al sistema vascular sanguíneo. Este punto de vista se contrapone al de otros autores, para quienes los sistemas vasculares sanguíneos no derivan del blastocele, sino que son neoformaciones en el seno de la matriz extracelular. Esto supone que el blastocele se oblitera totalmente.

3. ¿cuál es el tiempo del desarrollo embrionario temprano en ovino conejo, marrana, humano, ratón y alpaca?

El ovocito es ovulado en la segunda metafase y no completa la meiosis hasta la interacción con el espermatozoide. En el bovino la ovulación se da aproximadamente a 24 de iniciado el estro y la primera división se lleva a cabo a 48 h., después del estro. Este ovocito fecundado o no, es una célula de 150- 190 µm de diámetro, incluyendo la zona pelúcida ó membrana pelúcida (una capa glicoproteica) que tiene un grosor de 12 a 15 µm (Lindner and Wright, 1983). Las primeras tres divisiones del embrión se denomina desarrollo (cleavaje), tal es así que hasta 8 células se les denomina estados de desarrollo (cleavage), durante estas etapas el embrión decrece en peso (Seidel, 1991). Durante el estado de mórula, las células embrionarias cambian de formas esféricas a poligonales (este fenómeno se denomina compactación). Durante la compactación, uniones especializadas hacen que las células se pueden comunicar con otras. La compactación es un excelente signo de que los embriones están desarrollando normalmente; la perdida de

compactación a 6 días después del estro en vacunos indica desarrollo retardado (Seidel, 1991). La mórula en desarrollo, internamente forma un cavidad (blastocele) por gasto de energía al bombera liquido entre las células, La formación del blastocisto, también es indicativo de continuidad de desarrollo normal del embrión. La no formación de blastocele a 7-8 días después del estro, significa retardado desarrollo (Seidel, 1991). En el ratón y probablemente en el hombre la cavidad del blastocisto se inicia a formar cuando están presentes más de 20 a 30 células y el momento de la implantación se inicia cuando el blastocisto contiene más de 100 células. En coneja la formación de blastocisto se inicia cerca de tres divisiones más tarde que en el ratón, mientras que el blastocisto maduro contiene varios cientos de células y mide 3 a 4 mm de diámetro. El momento en el que la cavidad aparece no está relacionado con el tamaño del embrión.

VACA Y OVEJA El producto de concepción (embrión- membranas) secreta proteínas de origen trofoblástico (oTP-, bTP-1) que tiene una secuencia aminoacidica muy similar al interferon alfa II (oIFN-t, bIFN-t), que inhiben la síntesis de receptores endometriales de oxitocina y la producción uterina de pulsos de PGF.

Los días críticos son: Bovino - 16 a 17 y Ovino - 12 a 13

Figura 2: Diagrama de la luteolisis y establecimiento de la preñez en vacas y ovejas. Sin preñez, el estradiol de los folículos enlaza al receptor de estrógeno (ER) en el endometrio e induce la

expresión de receptor de oxitocina (OTR). La oxitocina secretada del cuerpo luteo enlaza a este receptor e inicia la síntesis de PGF2a, estimulando a la regresión del cuerpo luteo. En Preñez, el interferon IFN-t secretada por el embrión regula la expresión de ER y OTR y enlaza al tipo I de receptor IFN (IFN-R), Consecuentemente la síntesis de PGF2a es prevenido. La expresión de IFN-t desaparece cuando el concepto inicia el proceso de implantación en el endometrio.

MARRANA o El producto de la concepción a través de la producción de estrógenos y en conjunto con la prolactina inicia una serie de eventos que culminan en la redirección de la secreción de la PGF (hormona luteolítica de origen uterino) desde un patrón de secreción endocrino (vena uterina), hacia un patrón de secreción exocrina (cavidad uterina), redirección que impide la luteólisis

o Los días críticos son 11 a 12

Similar a otras especies, la PGF2a, es una señal luteolitica que induce la regresión del cuerpo luteo. En preñez, el concepto produce estrógenos como factor de reconocimiento de la preñez. Los estrógenos alteran la dirección de la secreción de la PGF2a del sistema de venas uterina (endocrino) hacia el lumen uterino (exocrino). Adicional el concepto produce PGE2, el cual tiene actividad luteotrófico y IFN-y puede estar involucrada en la inmunoregulación del útero.

PRIMATES (humanos) En humanos el embrión secreta Gonadotrofina coriónica (hCG), el cual tiene actividad de hormona luteinizante (LH) y mantiene la preñez antes de lúteo-placenta actue.

La hCG (Gonadotropina coriónica humana) producida tempranamente tiene actividad luteotrófico.

Los días críticos son de 8 a 12

Diagrama del reconocimiento de la preñez. A) ratones y B) Humanos

ROEDORE

El Lactógeno placentario de roedores (RPL), que se incrementa después del día 7 y tiene propiedades luteotróficas, protegiendo el CL de las prostaglandinas. La monta induce la liberación de prolactina, que mantiene el cuerpo luteo, provocando una pseudopreñez

En no preñadas, la prolactina decrece después del día 7, mientras que la prostaglandina incrementa al día 11 y retorna el estro al día 17 aproximadamente En el ratones, el estimulo cervical durante la monta induce la secreción de prolactina de la hipófisis y forma el cuerpo lúteo de la preñez. El lactógeno placentario soporta el mantenimiento de la preñez después de la implantación

4. ¿cómo es el método de recuperación de embrión en cabras?