Bioquimica, la celula y su importancia

Por qu y para qu se solicita un anlisis. Confirmar una impresin clnica (descubrir enfermedades subclnicas) Descartar, establecer y/o ratificar un Dx. Reconocer la respuesta teraputica. Controlar un tratamiento Realizar exploracin selectiva o deteccin de una enfermedad. Obtener informacin pronstico de una enfermedad. Precisar factores de riesgo.

Control Pre- AnalticoCada medicin de una magnitud bioqumica debera responder a una pregunta que el clnico ha planteado acerca del paciente.Solicitud de anlisis y mediciones (test): Orden del mdico para un anlisis por escrito; Indicaciones al paciente, Identificacin del paciente correctamente (nombre, sexo, edad, FDN, fecha de admisin y de los anlisis, cdigo etc). Preparacin del paciente: minimizar los factores relacionados con las actividades que pueden influir en la resolucin del laboratorio (ritmo circadiano, ejercicio, dieta, ayuno, bebidas ricas en cafena, tabaco, postura etc).

Control Pre- Analtico3. Antes de la recogida de la muestra: Incluir el mayor nmero de detalles posibles para ayudar al personal del laboratorio y al clnico en la interpretacin de los resultados.Obtener valores del estado general del paciente y/o sus discracias.Ejemplo :K+ srico Ex. pacientes prescritos con diurticos.Sangre Enzimas, Hb, Hto, Protrombina, fibringeno etcLCR Meningitis, inflamaciones etc. Orina glucosa, urea, fsforo, protenas etc.Recogida de la Muestra:ExtraccinPara poder realizar las mediciones bioqumicas es necesario que el laboratorio disponga de la muestra correcta para la medicin solicitada y de la informacin que permite que se realice la medicin adecuada y que el resultado llegue al clnico con el mnimo retraso.

Muestras para las mediciones bioqumicas:Muestras de sangre: suero o plasma Muestra de orina: con un conservante (inhibe el crecimiento bacteriano) o un cido para estabilizar metabolitos. Orina de 24 h.Muestra de cavidades especiales: garganta, nasofarngeos, esputo, contenido gstrico, del ID, del IG, vaginales o cervicales, heces, etc.Otro tipos de muestras: lquidos corporales o tejidos especficos.Muestras peligrosas: con infecciones deberan ser etiquetadas con un adhesivo amarillo en el que se lee muestra peligrosa

Materiales para la toma de muestra sanguneaAlgodn o gasaSolucin antisptica: alcohol al 70% y yodado al 1%Ligadura o torniquete hecha con tubo de goma 2-5 mm de calibreAgujas estriles descartable N 18 o 20 X 1 pulgadaJeringas estriles con capacidad para 2,5; 10 o 20 ml.Viales o tubos de ensayo.Soluciones anticoagulantes necesarias.Rtulos para los frascos o tubos, segn el examen correspDepsito para eliminar el material utilizado.Gafas protectorasRecogida de la muestra y procesamientoLa sangre es el fluido corporal que se utiliza con ms frecuencia para fines analticos.Hay tres procedimientos generales para obtener sangre y son:1) la venipuntura, 2) la puncin arterial y 3) la puncin cutnea.La tcnica que se utilice para obtener muestras de sangre es vital para mantener su integridad.La sangre arterial es esencialmente uniforme en su composicin en todo el cuerpo.La composicin de la sangre venosa vara y depende de la actividad metablica de los rganos y tejidos baados por ella.El sitio de la extraccin puede afecta la composicin venosa.La sangre de una puncin drmica contiene fluidos intersticiales e intracelulares.

Se debe tomar en cuenta lo siguiente: Tcnica de la puncin venosa:Verificar que las etiquetas impresas por el ordenador estn de acuerdo con la solicitud.Comprobar la identificacin del paciente.Dirigirse al paciente para informarle lo que se va a ser, y preparar psicolgicamente al paciente.Posicin del paciente: (sentado o echado, nunca de pie) y un adecuado reposo.Reunir el material, equipo y el instrumental.

Puncin venosaPuncin venosaLa zona de extraccin debe estar extendida y bien expuesta, seleccionar la vena, solicitar al paciente que cierre el puo, desinfectar, aplicar el torniquete, sujetar la vena con firmeza,ejecutar la venipuntura, quitar el torniquete una vez extrado la sangre, indicar al paciente que abra el puo, mezclar e invertir el tubo con anticoagulante, comprobar el estado del paciente, deshacerse del material contaminado, y etiquetar con las iniciales del paciente,Anotar fecha, hora y lugar.

DESINFECTE Y APLIQUE EL TORNIQUETEMEZCLE SUAVEMENTESUELTE EL TORNIQUETE Y TOME LOS DEMS TUBOS EN EL ORDEN INDICADOREALICE LA VENIPUNCINDESECHEOBTENCIN DE LA MUESTRA SANGUINEAOBTENCIN DE LA MUESTRA SANGUINEA

VENA COLAPSADA EL BISEL DE LA AGUJA NO HA ENTRADO EN LA VENALA AGUJA TRASPASALA PARED POSTERIOR

CAUSAS DE CESE DE FLUJO DE SANGRE DURANTE LA VENIPUNCINPTIMOPuncin arterialLa sangre arterial se utiliza para medir la tensin de CO2 y del O2, y para medir el pH (gases en sangre arterial (GSA)).Estas mediciones de gas en sangre son vitales en la valoracin de los problemas de oxigenacin que se ven en pacientes con pneumona, neumonitis y embolia pulmonar. Tcnica de recogida de sangre arterial y preparacin del paciente.Las arterial radial y braquial son los vasos preferidos, la arteria femoral es ms fcil para su puncin pero tiende a sangrar mucho ms.

Puncin arterialSe identifica la arteria por sus pulsaciones y se limpia con una solucin isopropanol acuoso al 70% y a continuacin con yodo.A veces se utiliza anestesia locial.Preparar la jeringa ABG (calibre 18-20) se perfora en un ngulo de 45 y a 60C en la radial y en 90 en la femoral.Las pulsaciones de la arteria permite llenar la jeringa.Despus de recoger la muestra utilizando el extractor de agujas y se pone una caperuza de cierre hermticoHacer puncin con una gasa en el lugar de extraccin.

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Puncin cutneaEs utilizado en pacientes peditricos.Es til en adultos con obesidad extrema, quemaduras graves y tendencia a la trombosis.Se emplea: para hemogramas, recuentes glbulos, grupos sanguneos (ABO), micromtodos.No es aconsejable para el Rcto de plaquetas.La Tcnica consiste en:Puncin cutnea del pulpejo del dedo, del borde libre del lbulo de la oreja y en nios del pulpejo del dedo gordo o del taln del pie. Seleccionar el sitio adecuado para la puncin.Calentar el sitio de la puncin con una toalla humeda y caliente que no sobrepase los 42 C, para aumentar el flujo sanguneo.Desinfectar, esperar que seque y punzar rpida con una lanceta descartable.Eliminar la I gota y recolectar la sangre.

SUJETE CON FIRMEZA Y REALICE LA PUNCIN.

ELIMINE LA PRIMERA GOTA DE SANGRE. COLOQUE EL TUBO Y CANALICE LA SANGRE.TOMAR MUESTRA CON CAPILAR HEPARINIZADO Y LLENAR 70% - 80% DEL CAPILAR.LLENE EL TUBO DE EDTA ENTRE 250 Y 500 UL.EMPUJE EL TAPN DE CIERRE. INMEDIATAMENTE MEZCLE LA MUESTRA INVIRTIENDO EL TUBO 10 VECES. NO AGITE

Puncin YugularSe realiza en nios cuando las venas antecubitales son muy pequeas o estn muy laceradas.La Tcnica consiste en:Coloca al nio en el filo de la camilla permitiendo que su cabeza caiga por debajo de los hombros, lateralizndolo un poco para que se observe la yugular.Asegurarse que el nio este bien sujetado.Hacer la puncin directa y se recomienda el uso de jeringa.

Toma de muestra de orinaMateriales Torundas de algodn o gasaJabn o sol. antispticaRecolector de orina o Frasco esterilizadoRtulos para los frascosDepsito para eliminar el material utilizado.Importancia Funcin renal.Screening y detectar el uso de sustancias txicas (dopaje).

Toma de muestra: secreciones

Control de la manipulacin: ProcesamientoCuando la peticin y la muestra llegan a la recepcin del laboratorio, se identifican con un nico nmero de identificacin o un cdigo de barras.Las muestras se procesan en el laboratorio segn diagrama.Todos los procedimientos de medida son sometidos a control de calidad y el laboratorio procura su fiabilidad.Cuando se dispone de los resultados, se validan y se emite un informe de laboratorio clnico, que permitir el Dx, Px y/o Tto de una enfermedad.Diagrama del circuito del proceso de la Bioqumica clnicaPregunta clnicaPeticin con datos clnicosObtencin de la muestra del pacienteTransporte al laboratorioRecepcin e informatizacinMedicinControl de CalidadValidacinInterpretacinInformeRespuesta bioqumica

Estabilidad y Conservacin de Muestras Recuentos Celulares y Grupos Sanguneos:Preservante : solucin anticoagulante EDTA dipotsicaCantidad: 5 ml. Duracin : 12 h, en refrigeracin 24 h.Pruebas de AglutinacionesSin anticoagulante, separar el suero (cc. 5 ml)Duracin: 12 h, en refrigeracin hasta 7 das.3. Tiempo de protrombinaPreservante: 0,5 ml de citrato trisdico ( cc. 4,5 ml)Duracin: 2 h4. Anlisis de GlucosaPreservante: 5 mg de fluoruro sdico ( cc. 5 ml)Duracin: 2 h ( si se separa suero o plasma hasta 24 h)Estabilidad y Conservacin de Muestras 5. Otros ensayos bioqumicos: colesterol, protenas, creatinina, rea etc. Sin Preservante separar el suero ( cc. 5 ml)Duracin : 24 h, en refrigeracin hasta 3 das.6. Determinacin de bilirrubinaSemejante al anterior, pero debe guardarse protegido de la luz en frasco oscuro. 7. Determinacin de la actividad enzimticaSin Preservante separar el suero ( cc. 5 ml)Duracin: 2 h en refrigeracin hasta 24 horas.8. Cultivos de SangreFrasco estril con medio caldo de cultivo especial a 37Cantidad : 5 mlDuracin: 24 h

TransporteDeben ser transportados en el menor tiempo posible.Los tubos deben mantenerse en posicin vertical para promover la formacin del coagulo y minimizar la agitacin del liquido, lo cual reduce la posibilidad de hemlisis. El tubo tapado elimina la posibilidad de contaminacin exgena de la muestra, evaporacin, posibilidad de derrame y la produccin de aerosoles al momento de la centrifugacin. Muestras para determinar estado cido-base se transportar en hielo a 4c.El manejo suave evita la hemlisis y no se vern afectadas las enzimas. Debe evitarse la exposicin a la luz especialmente porque se afectaran las vitaminas A y B6, beta-carotenos, porfirinas y bilirrubina.Debe usarse un recipiente estril y la muestra debe inocularse tan pronto como sea posible (ex. Microbiolgicos)La cadena de custodiaEs el procedimiento de control que se emplea las mediciones clnicas de las muestras obtenidas, su valoracin y expresin de los resultados.Tiene como finalidad garantizar que el procedimiento empleado ha sido exitoso, desde la recoleccin de la muestra, conservacin, transporte, proceso, valoracin e informe del laboratorio.

Variacin de los resultados:Depende de:Caractersticas metrolgicas en el laboratorio:- Precisin y exactitud- Sensibilidad y especificidad-Garanta de Calidad- Intervalos de referencia

Caractersticas metrolgicas en el laboratorio:Precisin: es la reproducibilidad de un mtodo analticoExactitud define que tan cerca est el valor determinado del valorLmite de deteccin: informa del valor ms pequeo de la magnitud que pueda medir dicho procedimiento.Control de calidad: para confirmar que el procedimiento de medida se est aplicando de forma correcta con las muestras de los pacientes.Intervalos de referencia: Falso positivo: paciente con un resultado fuera del IR en el que no se encuentran signos de enfermedadFalso negativo: paciente que presenta la enfermedad, pero con un resultado del IR positivoCaractersticas metrolgicas en el laboratorio:Control de calidad: para confirmar que el procedimiento de medida se est aplicando de forma correcta con las muestras de los pacientes.Sensibilidad : es la capacidad del test para detectar la enfermedad, es el % resultados (+) en pacientes enfermos.Especificidad : capacidad para detectar a los sanos, % resultados (-) en pacientes sanosPrevalencia : Frecuencia al interior de la poblacin

Variabilidad ligada a la sistemtica post extraccin: Validez de una prueba dxCuando se estudia una muestra de pacientes, los datos obtenidos permiten clasificar a los sujetos en cuatro grupos segn una tabla 2x2Tabla 1. Relacin entre el resultado de una prueba diagnstica y la presencia o ausencia de una enfermedad.Resultado de la pruebaVerdadero diagnsticoEnfermoSanoPositivoVerdaderos Positivos(VP)Falsos Positivos(FP)NegativoFalsos Negativos(FN)Verdaderos Negativos(VN)La validez de una prueba diagnsticaPrueba dicotmica: clasifica a cada paciente como sano o enfermo en funcin de que el resultado de la prueba sea positivo o negativo. R(+) presencia enfermedadR (-) ausencia de la mismaSensibilidad (Fraccin VP): Capacidad para detectar la enfermedad. S=VP/VP+FNEspecificidad (Fraccin VN): la probabilidad de que para un sujeto sano se obtenga un resultado negativo. E=VN/VN+FPEs la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo enfermo, y se obtenga en la prueba un resultado positivo. La sensibilidad es, por lo tanto, la capacidad del test para detectar la enfermedad como la proporcin de pacientes enfermos que obtuvieron un resultado positivo en la prueba dx.La sensibilidad (S) de una prueba diagnstica es la probabilidad que tiene un enfermo de dar un resultado positivo en dicha prueba.S = Verdaderos positivos (Vp) Vp + Falsos negativos (Fn)Es decir: de ah que tambin la sensibilidad se conozca como fraccin de verdaderos positivos (FVP).

SensibilidadEs la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo sano, que en un sujeto sano se obtenga un resultado negativo.En otras palabras, se puede definir la especificidad como la capacidad para detectar a los sanos. La E de una prueba diagnstica es la probabilidad que tiene una persona sin la enfermedad de inters de dar un resultado negativo en dicha prueba.E= Verdaderos negativos (VN) (VN) + Falsos positivos (FP)De ah que tambin sea denominada fraccin de verdaderos negativos (FVN).

EspecificidadValores predictivos: depende de la frecuencia que sea la enfermedad a diagnosticar en la poblacin objeto de estudio. Cuando la prevalencia de la enfermedad es baja, un resultado negativo permitir descartar la enfermedad con mayor seguridad, siendo as el valor predictivo negativo mayor. Por el contrario, un resultado positivo no permitir confirmar el diagnstico, resultando en un bajo valor predictivo positivo.

La prevalenciaFactores biolgicos que afectan la interpretacin de los resultados La discriminacin entre resultados normales y anormales est afectado por diversos factores fisiolgicos que deben tenerse en cuenta cuando se interpretan y se dan los resultados. Que son:Sexo y edad del paciente: Estado nutricional: ayuno, dieta especial, postprandial.Hora de recogida de la muestra y tiempo de muestreo, adicin de preservantes y conservadores a la muestra, equipos etc.Factores biolgicos que afectan la interpretacin de los resultados Estrs y ansiedadPosicin del paciente: forma de obtencin de la muestra.Efectos del ejercicioHistoria clnicaEmbarazo, Ciclo menstrualHistoria farmacolgica: metabolitos pueden interferir en el anlisis.

Criterio de Rechazo: Errores en la obtencin de las muestras Identificacin inadecuadaTcnica de recogida de la sangreEstasis prolongada durante la venipunturaMuestra insuficienteErrores en el tiempoRecipiente incorrecto para la muestraLugar inadecuado de obtencin de la muestraAlmacenamiento inadecuado

Ventajas y Desventajas entre plasma y el sueroSuero: Sin factores de coagulacinNo es aconsejable desprender el coagulo del tubo con un aplicador, porque es una fuente potencial de hemlisis. Si el tiempo de coagulacin no es el adecuado, la formacin latente de fibrina puede causar un problema en las determinaciones que se efectan en equipos automticos, se puede acelerar la coagulacin utilizando un activador como trombina, o partculas de vidrio o slice.Plasma:Se utiliza un tubo que contiene un anticoagulante, el cual puede ser centrifugado inmediatamente.Los anticoagulantes usados son Citrato; EDTA; heparina sdica y heparina de litio.

Qu ventajas tiene el plasma sobre el suero?Economa de tiempo, se elimina la espera de la coagulacin de la sangre.Rendimiento mas alto, en sangre total, puede obtenerse de un 15 a 20 % mas de MuestraPuede ocurrir coagulacin en suero, post centrifugacinEl resultado del plasma es mas representativo del estado biolgicoRiesgo bajo de hemlisis y trombocitolisis, las plaquetas permanecen intactas, no hay seudohiperkalemiaCules son las desventajas del plasma sobre el suero?En electroforesis de protenas se altera. El fribingeno aparece como una banda en la regin de las gammaglobulinas.Interferencia mtodo-dependiente, los anticoagulantes pueden llevar a la Interferencia del mtodo.Interferencia del catin, cuando se usan heparina de litio o amonio.

Referencias bibliogrficasBERNAD HENRY J. (2005). El Laboratorio En El Diagnstico Clnico. Homenaje a Todd-Sanford & Davidsohn, 20a..Ed. Editorial Marban. S.L. Espaa. Pp 12-26.GAW A, COWAN RA, OREILLY D, STEWART MJ Y SHEPHERD J. (2006). Bioqumica Clnica. 2Ed. Editorial Harcourt - Elsevier, Espaa.44MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIN La razn responde a tres cuestiones esenciales: qu puedo conocer, qu debo hacer, qu me cabe esperar.(KANT)