DR. BERLY MANRIQUE ORRILLO MEDICO- PATLOGO

La enfermedad es la respuesta a una injuria

La histologa, al igual que otras ciencias morfolgicas, pertenece a la categora de las ciencias fundamentales.Desde su surgimiento sus xitos cientficos estn relacionados con el desarrollo de los mtodos de la microscopa .

Histologa es la ciencia que estudia la estructura microscpica de las clulas, tejidos y rganos, estableciendo la relacin con la actividad vital.

Mtodo de estudio histolgico: el microscpico

Objeto de estudio: imgenes de los preparados de tejidos fijados y coloreados.

Desde el siglo IV hasta la mitad del siglo XVII. Andrs Vesalio (1514-1564) fundador de la Histologa Cientfica

Nociones generales sobre los tejidos del organismo (semejanza exterior )

Primer periodo: Premicroscpico

Segundo perodo: microscpicoR.Hooke (1665 perfeccion el microscopio).Permiti observar la estructura fina de los tejidos celdas o clulas (del Lat.Cellula). Malpighi (1671), el botnico Grez (1671) y el ptico Leenwenhoek, A fines del siglo XVIII y principios del XIX :teoras generales de la estructura de los organismos y de su desarrollo. descripciones no autenticas o tenan un carcter especulativo o ApriorsticoTeora de la estructura fibrosa y granular de los organismos.-Teora de la preformacin, Teora de la epignesis,

Marcello Malpighi (1628-1694)

Anton van Leeuwenhoek (1632-1723)

Segundo perodo: microscpicoCulminacin de este periodo: T.Schwann: Teora celular (1838-1839) los seres vivos estn constituidos por clulas y productos celulares.Influy sobre la Biologa y la Medicina .Fundamento principal para el desarrollo de la Embriologa, Histologa y Fisiologa. Aument las bases para la comprensin materialista de la vida, la aclaracin de la correlacin evolutiva de los organismos y la comprensin del desarrollo individual.

Tercer perodo:microscopia electrnica.Se caracteriza por que desarrollo de la histologa se relaciona con el desarrollo de los mtodos ms nuevos de las investigaciones histolgicas ,ante todo de los mtodos microscpicos electrnicos: Microscopia electrnica de transmisin y exploracin as como histoqumica electrnica.Microscopia electrnica : ultraestructura de las clulas, tejidos y rganos. Los organelos celulares y su biognesis. El concepto sobre membrana biolgica.Microscopia electrnica de exploracin y el uso del mtodo de corte por congelacin : Estudio de las estructuras submicroscopicas en tres dimensiones, procedimientos de unin de las clulas, separacin de las secreciones, etc.

CONCLUSIONES1.- Formar la concepcin materialista cientfica del mundo sobre el equilibrio vital del organismo humano en estado normal.

2.-Relacin con otras ciencias biomdicas: como la anatoma es necesario para la comprensin de los cambios que tienen lugar en el individuo enfermo fisiologa, Patologa, Inmunologa, Gentica, disciplinas relacionadas con la Clnica.

3.- Sus mtodos y tcnicas son diariamente utilizadas en l diagnostico de muchas enfermedades por citlogos, patlogos,

LA HISTOLOGA ES EL ESTUDIO DE LOS TEJIDOS Y SU FUNCIN

LA FINALIDAD DEL CURSO ES GUIAR AL ALUMNO SOBRE EL CONOCIMIENTODE LA MICROANATOMA DE LOS TEJIDOS , RGANOS Y A CORRELACIONAR LA ESTRUCTURA CON LA FUNCIN.

UTILIZAMOS LA MICROSCOPA PTICA PARA NUESTRO ESTUDIO DE PREPARADOS HISTOLGICOS DE DIFERENTES TEJIDOS Y RGANOS, PERO PARA COMPRENDER LA NATURALEZA DE LA IMAGEN BIDIMENSIONAL DE LOS CORTES HISTOLGICOS Y COMO SE RELACIONA CON LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LA CUAL PROVIENE ,SE DEBE CONOCER LAS TCNICAS QUE SE UTILIZAN PARA OBTENER NUESTRAS LMINAS .

TCNICAS HISTOLGICAS DE MICROSCOPIA OPTICA

Las tcnicas histolgicas nos permite estudiar una capa muy delgada de tejido (algunos micrones) ,susceptible de ser estudiada por transparencia en el microscopio, conservando adems de la forma , lo mas exacta posible la estructura de las clulas y los tejidos , es decir , su agrupacin y disposicin recprocas.

ETAPASOBTENCIN DE LA MUESTRA FIJACIN CONFECCIN DE LOS CORTES COLORACIN CONSERVACIN

OBTENCION DE LA MUESTRA

Constituye la primera etapa de todo estudio histolgico.Descripcin macroscpica de espcimen. El examinador debe instalarse adecuadamente bajo una buena luz , donde dispondr de un equipo de ciruga menor , regla , guante estriles , una bandeja de plstico o madera . Adems para su proteccin utiliza adems delantales de de material lavable. Lentes para tiles para salpicaduras .

OBTENCION DE LA MUESTRATener muy cerca agua corriente, y un frasco de boca ancha para la colocacion de las muestras a obtener Se procede a tomar un fragmento del tejido ,que se obtiene de especimenes de animales o humanos .Los fragmentos convienen que sean adems tan amplios y finos como sea posible a fin de permitir un buen estudio topogrfico y una fijacin satisfactoriaEl grosor de la muestra obtenida no debe pasar de 5mm

OBTENCION DE LA MUESTRA

FIJACIN

Est destinada a inmovilizar las estructuras celulares y tisulares en un estado lo ms prximo posible al estado vivo. La fijacin tiene como objeto asegurar una coagulacin todo lo homognea posible de los geles proteicos mejora los ndices de refraccin y endurecimientos de los tejidos(favorece el corte y la observacin microscpica).Los fijadores ms comunes es el formol, el alcohol, las sales de metales pesados, cido pcricos y cido actico ..

FIJACION DE LA MUESTRA

Reglas Generales :La fijacin debe ser lo ms precoz posible La fijacin debe ser rpidaEl lquido fijador debe ser abundanteLa duracin de la fijacinEl lavado de las piezas

FIJACION DE LA MUESTRA

CONFECCION DE LOS CORTES-Consta de las siguientes etapasA.- Inclusin

B,. Preparacin del Bloque

C.- Corte en Micrtomo

D .- Montaje de los cortes

A.- INCLUSIONPara confeccionar estos cortes debemos preparar el tejido endureciendose y esto se consigue mediante la inclusin .Consiste en hacer penetrar lo mas posible en el tejido una sustancia homognea solidificable .

La ms usada parafina,. como consecuencia de la adherencia entre si de los bordes de los cortes sucesivos de los bloques de parafina.A esto se llama inclusin y consta de la siguientes etapas 1.- Deshidratacion 2.-Aclaramiento o impregnacion por un solvente intermedio de la parafina3.- Inclusion en parafina

INCLUSION

1.- DESHIDRATACION:

Los baos sucesivos de alcohol etlico de menor a mayor concentracin (70, 80,90,100%)Una deshidratacin insuficiente es siempre nociva, pues las vuelve frgiles.

DESHIDRATACION

2.- IMPREGNACION POR UN SOLVENTE INTERMEDIO DE LA PARAFINA:El ms usado es el Xilol , la inmersin del xilol durante un mximo de 12 horas expulsa el alcohol , disuelve las grasas y deja la pieza transparente (ACLARAMIENTO)

3.-INCLUSION EN PARAFINA :

La parafina son mezclas de carburos procedentes de la destilacin del petrleo, su consistencia depende del punto de fusin (45 -70). En la prctica 56-57 .Se Practica 3 baos sucesivos .

INCLUSION EN PARAFINA

B.- PREPARACION DE LOS BLOQUES

Se realiza en moldes de metal con fondo plano y bordes ensanchados que se untan previamente con glicerina .Se va endureciendo la parafina con bloques de hielo .Luego se espera que se solidifique y se procede a los corte de los tejidos. Luego son puestos sobre bloques de madera o plstico.

MOLDE PARA BLOQUES DE PARAFINA

MONTAJE DE LOS BLOQUES EN SUJETADORES DE PLASTICO

C.- CORTE EN MICROTOMO

Se realizan cortes seriados de un espesor de 5 a 10 um. cortando con el Micrtomo.

PREPARACION DE LOS CORTES

CORTES EN MICROTOMO MINOT

D.-MONTAJE DE LOS CORTESSe siguen 3 pasos : extendido, adherencia y secado

COLORACION:

El ms usado es la coloracin de Hematoxilina Eosina La mayor parte de los colorantes histolgicos se emplean en solucin acuosa .

El corte de tejido est incluido en parafina , debe desparafinarse y luego rehidratarse concentraciones decrecientes de alcohol etlico ).

La H-E colorea el ncleo de azul violeta y el citoplasma de color rosado

Fundamentos de la Coloracin :

La eosina (colorante acido), lleva una carga neta negativa en su porcin coloreada .La Hematoxilina (colorante bsico) como lleva una carga neta positiva en su porcin coloreada .

LOS COLORANTES BSICOS REACCIONAN CON LOS COMPONENTES ANIONICOS DE LAS CELULAS Y DE LOS TEJIDOS, MIENTRAS QUE LOS COLORANTES ACIDOS REACCIONAN CON LOS GRUPOS CATIONICOS DE LAS CELULAS Y TEJIDOS, EN PARTICULAR LOS GRUPOS AMINO IONIZADOS DE LAS PROTEINAS.

SET DE COLORACION H & E

BASOFILIA Y ACIDOFILIA

BASOFILIA :la heterocromatina y los nucleolos del ncleo, componentes citoplasmticos. Sustancias extracelulares .

Los componentes texturales que se tien con colorantes cidos se denominan ACIDOFILOS , Clulas musculares , la mayor parte de los componentes membranosos intracelulares y la mayora de las fibras extracelulares.

METACROMASIA

Algunos colorantes bsicos reaccionan como componentes texturales de manera tal que su color normal vara de azul a rojo prpura .A este cambio de absorbancia sedenomina METACROMASIA

CONSERVACION DE LA MUESTRA

Luego de la coloracin por lo general se realiza una deshidratacin y aclaramiento tras lo cual se procede al montaje , es decir , se cubre el corte con una gota de lquido de montaje (Blsamo de Canad o Merkoglass),luego se cubre con un laminilla cubreobjeto obtenindose una superficie uniforme que no crea reflejos molestos al observarse con el microscopio .Los medios de montaje no son miscibles en agua por lo que es necesaria la deshidratacin previa.

TECNICAS DE 0BSERVACINSabemos que nuestro objeto de estudio es el preparado histolgico.En el momento de las observaciones es imprtante entender como se efectuan los corte a incluir.Esto con la finalidad de interpretar las observaciones realizadas.

Un tejido es un conjunto o asociacin de clulas y sustancia intercelular o matriz extracelular elaborada por ellas mismas, que durante el proceso de diferenciacin embrionaria, presenta un, mismo origen. La forma celular y la funcin biolgica a cumplir, son semejantes.

CLASIFICACIN DE LOS TEJIDOS: GENERALIDADES DE LOS TEJIDOS

1.-Caracterstica morfofuncional:

Tejido epitelial: clulas ubicadas una al lado de otra (en yuxtaposicin), con escasa sustancia intercelular.

Tejidos conectivo: escasa cantidad de clulas, separadas por abundante matriz extracelular: Tejido conectivo o conjuntivo, tejido cartilaginoso, tejido seo y sangre (clulas sanguneas y plasma).

Tejido muscular: responden con contraccin a los estmulos. Tejido estriado esqueltico o voluntario, tejido estriado cardaco o involuntario y tejido liso involuntario.

Tejido nervioso: caracterstica fundamental (clulas ramificadas, altamente especializadas, las neuronas). Se distinguen 2 variedades: Neuronas y neurogla.

2 . Origen:

Ectodrmicos: tejido nervioso, piel y sus anexos, esmalte dentario.Mesodrmicos: epitelios del tracto genital y urinario, endotelios, tejidos con sustancia fundamental, msculos, aparato cardio-vascular.Endodrmicos: epitelio de revestimiento y glandular del aparato digestivo y respiratorio.

3. Grado de diferenciacin (clasificacin segn Bizzoziro):

Tejidos lbiles: son tejidos que presentan un bajo grado de diferenciacin tisular y una alta capacidad reparativa. Ejemplos: epitelios de revestimiento, tejidos conectivos no especializados.

Tejidos estables: son tejidos ms especializados y diferenciados. Su capacidad regenerativa es menor que en el caso anterior, pero se pueden regenerarse lentamente. Ejemplos: tejido seo, cartilaginoso, epitelio glandular.

Tejidos perennes: estos tejidos presentan un grado de diferenciacin y especializacin mayor que los anteriores, por lo que permanecen sin recambio durante toda la vida del individuo. Ejemplos: tejido nervioso y muscular liso y cardaco

4.-Grado de regeneracin:

El poder de regeneracin (autoplastia) de un tejido, es inversamente proporcional a su grado diferenciacin celular.

TEJIDOS AUTOPLSTICOS: Son aquellos que se reparan rpidamente, a partir de las propias clulas del tejido involucrado. Ejemplos: tejidos lbiles como epitelios de revestimiento y tejido conectivo no especializado.

TEJIDOS ANAPLSTICOS: son aquellos tejidos que reparan a travs de clulas menos diferenciadas que las propias, las que posteriormente se diferencian para adquirir la morfologa y funcin del tejido. Es el caso del tejido seo y cartilaginoso. Por ejemplo, un dao en cartlago origina una proliferacin del tejido conectivo fibroso perifrico, el pericondrio;posteriormente estas clulas proliferadas, se diferencian a condrocitos, es decir se .cartilaginizan. posteriormente.

TEJIDOS HETEROPLSTICOS son aquellos tejidos perennes, que poseen un alto grado de diferenciacin y cuya reparacin se realiza a partir de un tejido diferente y de menor grado de diferenciacin. Ejemplos: tejido nervioso y muscular liso y cardaco; si se daa una zona del tejido nervioso, esta ser reemplazada por un tejido afuncional de relleno, a partir de clulas gliales

B.- PROPIEDADES DE LOS TEJIDOS:

Capacidad de regeneracin, la cual vara segn su grado de diferenciacin tisular. A mayor diferenciacin, menor capacidad de reparacin.2. Capacidad de cultivo, ya sea in vitro (medios artificiales) o mediante injertos (medios biolgicos). A mayor diferenciacin, menor capacidad de cultivabilidad.3. Especificidad, que corresponde a la mantencin de la diferenciacin o especializacin dentro del organismo normal. Esta especificidad puede perderse frente a condiciones de anormalidad o experimentales.

C.- CRECIMIENTO TISULAR

Hiperplasia: es decir, crecimiento por aumento en el nmero de clulas y sus elementos intracelulares constituyentes.

Hipertrofia: es decir crecimiento por aumento en el tamao de las clulas

VARIACIONES A TRAVS DE LA VIDA DEL INDIVIDUOHipoplasia: corresponde al menor tamao de un tejido u rgano, como consecuencia de un menor nmero de clulas presentes en l.Hipotrofia: corresponde al menor tamao de tejidos u rganos, debido a la presencia de clulas constituyentes ms pequeas que lo normal.Agenesia: ausencia de un rgano o tejido, por ausencia del esbozo embrionario originario.

Metaplasia: transformacin de un tejido en otro diferente.

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