Tema 2. Naturaleza de La Infección

8/16/2019 Tema 2. Naturaleza de La Infección

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MARACAIBO, MARZO DE 2015.

Lcda. Liliana Gómez Gamboa

REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELAUNIVERSIDAD DEL ZULIAFACULTAD DE MEDICINAESCUELA DE MEDICINA

UNIDAD CURRICULAR: BACTERIOLOGÍA Y VIROLOGÍA

Profesor Agregado de la Cátedra de MicrobiUnC Bacteriología y Virología. Escuela de Medic


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1. Los microorganismos y las enfermedadesinfecciosas.

2. El crecimiento microbiano y su control

3. Control de las infecciones asociadas a losservicios de salud (IAAS)

4. Principios del Diagnóstico de las enfermedadesinfecciosas por el laboratorio

5. Emergencia y contagio global de las infecciones


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La ciencia de la microbiología médica data de los estudpioneros de Pasteur y Koch, quienes aislaron agentes específicocomprobaron a través del método experimental que podían cauenfermedades.

Dichos esfuerzos, combinados con el trabajo comenzado pSemmelweis y Lister, quienes mostraron los modos propagación de la enfermedad, condujeron a los grandes avancen salud pública que dieron inicio al descenso en la enfermedamuerte.


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Infección

OportunistaEfecto deexclusión

Preparacióndel sistemainmunitario

Muchas especies de floranormal pueden ocasionar

infecciones cuando llegan encantidad suficiente a áreasestériles del organismo. Ejm:E. coli e infección urinaria,perforación de colon, caries

Existe la tendencia de la floranormal a producir condicionesque compiten con patógenosexternos y que reducen su

capacidad para establecer unnicho en el huésped. Ejm: flora

en colon

Flora normal y competencia inmunitaria. Lanimales estériles tienen poca inmunidad hac

la infección microbiana.


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En el caso de cualquier patógeno, los aspectos

básicos de cómo interactúa con el huésped paraproducir enfermedad pueden expresarse enfunción de su:

Es el “quién, qué, cuándo y dónde” de las enfermedadesinfecciosas.

EPIDEMIOLOGÍA

PATOGÉNESIS

INMUNIDAD


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La importancia de la epidemiología como ciencia lo demoinicialmente Semmelweis, quien a través del análisis cuidadoso dedatos, determinó cómo se transmite la fiebre puerperal causada Streptococcus; incluso estableció un medio para prevenir ltransmisión (el lavado de las manos) décadas antes de que descubriera el organismo en sí.

La desnutrición, las condiciones socioeconómicaspobres, los desastres naturales y las situacionesdonde existe higiene inadecuada facilitan lapropagación de epidemias y enfermedades.BIOTERRORISMO

Disciplina que estudia la distribución de losdeterminantes de enfermedad y daño en lapoblación humana e incluye enfermedadestanto infecciosas como no infecciosas.


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SINOPSIS DE LA INFECCIÓN: se muestran las fuentes y sitios potenciales de infección.infección puede ser endógena, debida a la flora interna normal o exógena, provenifuentes del exterior.

Tomado de: Ryan Kenneth y Ray George. Sherris Microbiología Médica. Quinta Edición. 2011.


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Una vez que el patógeno potencial alcanza a suhuésped, las características del organismodeterminan si ocurrirá o no una enfermedad.

LA PATOGENICIDAD ES MULTIFACTORIAL.

VISTA CELULAR DE LA INFECCIÓN: Un virus se enlaza con la superficie celular, pero sólo puede reproducirse en ede la célula. Una célula bacteriana se une a la superficie, invade y se propaga al torrente sanguíneo a travésUna célula bacteriana se une a la célula e inyecta proteínas dentro de ella. La célula se altera mientras que permanece en la superficie.



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Uno de los atributos más importantes de lavirulencia que puede tener cualquier patógeno

es su capacidad para evadir la respuestainmunitaria.

MANIFESTACIONES

DIAGNÓSTICO

TRATAMIENTO

PREVENCIÓN


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La fiebre, el dolor y la inflamación son signos universales dinfección. Los signos y síntomas de la enfermedad dependen de los órganoespecíficos implicados y la velocidad del proceso; las decisioneclínicas dependen del sistema o sistemas corporales implicados.

Muchos signos y síntomas se superponen en forma considerable Los médicos utilizan su conocimiento para deducir el patógensospechoso y realizar un diagnóstico específico y así atender a

paciente. La comprensión de cómo funcionan las enfermedades constituyuna notable ventaja para tomar las decisiones correctas.


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El producto del estudio científico de cualquier enfermedad es su prevención.

En el caso de las enfermedadesInfecciosas, esto incluye:

Medidas desalud pública

Inmunización(organismos

vivos odesactivados)

Las medidas de salud públicarequieren del conocimiento delos mecanismos detransmisión y de cómointerferir con ellos.


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La eliminación de los microbios antes de que lleguen a los pacieha sido una de las principales estrategias para prevenir la infecció Ignaz Semmelweis aplicó con éxito los principios de la desinfecdecenios antes de que se aislara la primera bacteria.

Muerte y destrucción significanla pérdida de la capacidad paramultiplicarse en cualquier

conjunto conocido decondiciones.

La ausencia de crecimiento dorganismos no necesariament

indica esterilidad.


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Esterilización, desinfección y asepsia

La esterilización consiste en ladestrucción o eliminación completa detodos los microorganismos vivos en unsitio o materia particular, incluidas lasformas resistentes como esporasbacterianas, virus sin envoltura yhongos.Técnica utilizada para eliminar losorganismos viables de una superficie oproducto, incluidas las esporas

bacterianas.

FÍSICA

GASEOSA

QUÍMICA


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Esterilización, desinfección y antisepsia

Esterilización Física

El método más simple de esterilización consiste enexponer directamente al fuego la superficie a esterilizar,como se hace con el asa de alambre que se emplea en los

laboratorios de microbiología. Es posible utilizar estemétodo de manera igualmente eficaz para laesterilización urgente de una aguja (incineración).


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Calor húmedo y calor seco:métodos de esterilizaciónutilizados más a menudo en los

hospitales y están indicados parala mayoría de los materiales, conexcepción de los termosensibles olos que poseen componentesquímicos tóxicos o volátiles.


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Esterilización Física

Rayos ultravioleta o radiación ionizante (p. ej.,microondas o rayos gamma). Limitación de rayos U.V.radica en la necesidad de una exposición directa delmaterial a esterilizar.


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Óxido de etileno (inflamable, explosiva y cancerígena)

Formaldehído gaseoso (carcinógeno).

Peróxido de hidrógeno (esterilización de instrumentos)

AlcoholHalógenos (yodo, cloro)Peróxido de hidrógeno

Compuestos con actividad superficial(surfactantes, amonio cuaternario)Fenoles (hexaclorofeno, clorhexidina)Glutaraldehido y formaldehído


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Es la destrucción de microorganismos patógenos mediante procesos que noalcanzan los criterios de la esterilización.Reducción del número de microorganismos viables o carga biológica, en unproducto o superficie hasta obtener una concentración que se consideraadecuada para su uso o aplicación ulterior. Los desinfectantes no sonnecesariamente esporicidas, pero son esporostáticos (inhiben lagerminación o la proliferación).

Filtración

PasteurizaciónMicroondas

MÉTODOSFÍSICOS Alcohol

Halógenos (yodo, cloro)Peróxido de hidrógeno

Compuestos con actividadsuperficial (amoniocuaternario)Fenoles (fenol,Exaclorofeno, Clorhexidina)Glutaraldehído y

formaldehído

MÉTODOSQUÍMICOS


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Filtración: método útil para eliminar lasbacterias y los hongos de las soluciones o elaire (filtros de partículas de alta eficiencia[HEPA]). No obstante, estos filtros noconsiguen eliminar los virus ni algunasbacterias de pequeño tamaño.

Tomado de: Microbiology an Introduction.

Tortora y col, 2010

Es el uso del calor a una temperatura suficiente para desactivar losorganismos patógenos importantes en líquidos como agua o leche, pero auna temperatura inferior a la que se necesita para garantizar laesterilización (55-75ºC).• Elimina bacterias pero no esporas.• Se utiliza para alimentos y equipo médico frágil.


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GRADO ALTO

GRADOINTERMEDIO

GRADO BAJO

La desinfección de alto grado poseeuna eficacia semejante a la de la

esterilización, mientras que lasesporas pueden sobrevivir tras unadesinfección de grado intermedio;asimismo, numerososmicroorganismos pueden seguirsiendo viables después de unadesinfección de bajo grado.


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Los DESINFECTANTES DE ALTO GRADO se utilizan para objetos empleados enprocedimientos invasivos que no pueden soportar los métodos de esterilización(ej. ciertos tipos de endoscopios, instrumentos quirúrgicos de plástico). Ladesinfección de estos y otros objetos tiene una eficacia máxima cuando eltratamiento se precede de una limpieza de su superficie con el objeto deeliminar la materia orgánica.

Calor húmedoGlutaraldehídoPeróxido de hidrógenoÁcido paraacético y compuestos clorados.

Los DESINFECTANTES DE GRADO MEDIO (p. ej., alcoholes,compuestos yodados, compuestos fenólicos) limpieza desuperficies o instrumentos en los que es poco probable lacontaminación por esporas bacterianas o microorganismoscon un alto grado de resistencia («instrumentos y dispositivossemicríticos» como endoscopios fibroópticos flexibles, loslaringoscopios, los espéculos vaginales y los circuitosrespiratorios usados en anestesia).


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Los DESINFECTANTES DE GRADO BAJO (ej., compuestos de amoniocuaternario ) se utilizan para tratar instrumentos y dispositivos que norevisten una gran importancia, como los manguitos de los aparatos

empleados para tomar la tensión arterial, los electrodos delelectrocardiograma y los estetoscopios (entran en contacto con los pacientespero no atraviesan mucosas ni tejidos estériles).


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Procesos diseñado para prevenir que los microorganismosalcancen un ambiente protegido. Se aplica en muchos de losprocedimientos que se utilizan en el quirófano, en lapreparación de agentes terapéuticos y para lasmanipulaciones técnicas en laboratorios de microbiología.

COMPONENTE ESENCIAL DE LAS TÉCNICAS DE ASEPSI esterilización de todo el material y equipo utilizados.


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ALCOHOLES

COMPUESTOSYODADOS

CLORHEXIDINA

PARACLOROMETA

XILENOLTRICLOSAN

Es el empleo de medicamentos o

sustancias químicas (antisépticos) parareducir el número de microorganismospresentes en la superficie cutánea,mucosas y tejidos vivos. Estoscompuestos se seleccionan en funciónde su seguridad y su eficacia.


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• En todos los ambientes de atención a la salud existe ciertoriesgo de infección.

• Los pacientes hospitalizados son particularmentevulnerables y los entornos hospitalarios son complejos.

• Intrahospitalario es un término médico que se aplica atodo aquello que se asocia con los hospitales.

• Las infecciones intrahospitalarias son las complicacionesque surgen durante las hospitalizaciones.

• El propósito del control de la infección en los hospitales esla prevención de infecciones intrahospitalarias por mediode la aplicación de los conceptos y métodos de laepidemiología.


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• Ejemplo supremo de la importancia fundamental de laepidemiología para la detección y control de las IAAS trabajo de Ignaz Semmelweis (1844 Viena, Austria).

•

La Endometritis puerperal (fiebre puerperal),principalmente causada por S. pyogenes ocasionabaentre 600-800 muertes maternas por año.

• Entre 1846 y 1849, Semmelweis mostró que la tasa demortalidad en una de las dos divisiones del hospital era 10veces mayor que en la otra. La división I, que tenía mayortasa de mortalidad, era la unidad de enseñanza en la quetodos los partos eran atendidos por obstetras y alumnos.


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• En la división II, la atención de todos los partos estaba enmanos de parteras.

• Semmelweis postuló que la diferencia esencial entre las

divisiones I y II era la participación de médicos yestudiantes en las autopsias. A diario se realizaba ladisección de uno o más cadáveres, algunos provenientes delos casos de fiebre puerperal y de otras infecciones.

• El lavado de las manos era superficial. Como contramedida,en 1847 se demandó el lavado de manos con una soluciónde cloro hasta que las manos se sintieran resbalosas yhubiese desaparecido el olor a cadáver.


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• El efecto completo del lavado con cloro se observó alcomparar las tasas de mortalidad en las dos divisiones en1846 y 1848. La tasa de mortalidad en la división I seredujo al mismo nivel que en la división II y ambas fueronmenores al 2%.


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3. CONTROL DE LAS

INFECCIONES ASOCIADASA LOS SERVICIOS DE

SALUD (IAAS)


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• Las infecciones que ocurren durante cualquier hospitalización y se adquieren ya sea en lacomunidad o dentro del nosocomio.

•

INFECCIONES ADQUIRIDAS EN LA COMUNIDAD:son aquellas presentes o que se están incubando almomento del ingreso. Ocurren antes del ingreso.Todas las demás se consideran IAAS .

•

Los peligros infecciosos son inherentes alambiente de los hospitales; es allí donde se albergaa los pacientes con infecciones más graves y queson más susceptibles, y donde con frecuencia les

atiende el mismo personal.


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•

Los agentes infecciosos responsables de las IAASprovienen de diversas fuentes, incluyendo la propiaflora normal de los pacientes (infeccionesendógenas).

• Es posible que la hospitalización conlleve riesgosadicionales por tratamientos que atraviesan lasbarreras defensivas normales.

•

La Cirugía, uso de catéteres urinarios ointravenosos y los procedimientos diagnósticosinvasivos pueden hacer que la flora normaltenga acceso a sitios que en general son estériles.


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•

Los médicos, enfermeras, estudiantes, terapeutas ycualquier otra persona que entre en contacto con elpaciente puede transmitir una infección.

•

La transmisión de un paciente a otro se denominainfección cruzada.

• VEHÍCULO DE TRANSMISIÓN MÁS FRECUENTE falta del lavado de las manos. Otra fuente es elpersonal infectado.

• TRANSMISIÓN contacto directo, aunque tambiénpuede ocurrir transmisión aérea.


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•

El aire, las paredes, pisos, ropa blanca y cosas similaresen los hospitales no son estériles, y en consecuencia,pueden ser fuente de organismos que provocaninfecciones intrahospitalarias, pero en general se haexagerado la importancia de esta vía.

Personalinfectado uotra personaque entre encontacto con elpaciente

Paciente-Paciente

Personalportador sano(S. aureus, S. pyogenes)


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• Con excepción de la cercanía inmediata de unindividuo infectado o de un portador, latransmisión por aire o fomites es mucho menos

importante que la causada por el personal o elequipo.

• Excepciones: ambientes contaminados con M.tuberculosis o suministro de agua conLegionel la pn eumo phila .


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Catéteres urinarios Catéteres

vasculares

Respiradores Sangre y productosde la sangre

CONTROL DE INFECCIONES

ASEPSIAPROCEDIMIENTOSDE AISLAMIENTO

ORGANIZACIÓN YPREVENCIÓN

• Quirófano• Pabellones

hospitalarios• Clínica para pacientes

ambulatorios

• Medidas universales• Medidas basadas en la

transmisión

Comité de control deinfecciones (Programas decontrol de infecciones)

Servicio de epidemiología Actividades educativas Vigilancia e investigación de

brotes

CONTROL DE INFECCIONES


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CONTROL DE INFECCIONESMEDIDAS PARA LA PREVENCIÓN DE INFECCIONES INTRAHOSPITA

MEDIDAHABITACIÓN LAVADO DE

MANOSa GUANTES BATAS MASCARILLAb

ENFERMEDADES

TÍPICASUniversal Luego deretirar losguantes, entrepacientes

Sangre, contactocon líquidos, luegode tocar la piel

Sangre, contactocon líquidos,duranteprocedimientos

Duranteprocedimientos

Todas

Basada en la transmisiónAérea Privada,

presiónnegativac

Luego de retirarlos guantes, entrepacientes

Ingreso a lahabitación

Ingreso a lahabitación

Ingreso a lahabitación orespiradord

Sarampión, varicela,tuberculosisd

Por gotas Privadae Luego de retirarlos guantes, entrepacientes

Sangre, contactocon líquidos

Sangre, contactocon líquidos

A 1 metro dedistancia delpaciente

Meningitis, tosferina,peste, influenza

Por

contacto

Privadae Luego de retirar

los guantes, entrepacientes

Ingreso a la

habitación

Contacto con

paciente

____ Diarrea infecciosaf ,

heridas infectadasporS. aureusa Uso de jabón desinfectante.b Mascarilla quirúrgica estándar, gafas protectoras.c La presión de la habitación debe ser negativa en relación con el área circundante y la circulación debe extraerse a la parte eedificio.d Para pacientes con diagnóstico o sospecha de tuberculosis, debe portarse un respirador/mascarilla con filtro especial.e Es posible dejar abierta la puerta, y los pacientes con el mismo organismo pueden compartir habitación.f En particular Clostridium diffcile, Escherichia coli O:157, Shigella, pacientes con incontinencia que elimina rotavirus o hepatitis A por heces.


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4. Principios del diagnóstico de lasenfermedades infecciosas por el

laboratorio


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Paz y col. Manual de recolección y transporte de muestras para cultivo bacteriológico. PPBacteriolo ía. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 2013.


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Boleta de peticiónObtención de la muestra

Recogida de la misma y transporte

Toda boleta de petición u orden de laboratorio deberá poseer las cinco ársiguientes:1. Filiación y datos administrativos, donde se deben especificar el

nombres y apellidos, sexo y edad del paciente, el médico solicitante centro, servicio, o consulta al que pertenezca, así como cualquier otro de identificación, como el número de cama, de historia clínica, etc.

2. Datos clínicos, como fecha del comienzo de la enfermedad, diagnóstico c

de presunción, estado inmunitario del paciente, etc. Todos estos datos son interés para orientar las técnicas que hay que seguir.3. Datos de la muestra, como fecha de la obtención y, en algunos casos, la honaturaleza del producto y exacta localización de la toma, así comprocedimiento de extracción, o si se ha seguido alguna técnica especial (p

transtraqueal, vesical, etc.)

Boleta de petición


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Boleta de peticiónObtención de la muestraRecogida de la misma y transporte

4. Terapéutica seguida: antibióticos, que se han administrado y tiempo desde última toma o inyección. El ideal es que todas las muestras se recolecten de empezar un tratamiento antibiótico.5. Área para la solicitud, indicando claramente el tipo o tipos de determinacionque se desean, y en caso de que se desee la búsqueda de un microorganisdeterminado, se reseñará éste (M. tuberculosis, Mycoplasma,etc.). Muchoslaboratorios añaden una sexta área, en la que se hace constar la fecha y horentrada de la muestra en el laboratorio, hecho que ha de tenerse en cueespecialmente en las peticiones de urgencia, que en muchos centros poseenboleta de distinto color (p.ej. rojo) al de los normales.


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Recogida de la muestra.

Cada tipo de muestra requiere un material estéril para la recogida eincluso transporte de la misma.

Transporte.Todas las muestras deberán ser enviadas lo másrápidamente posible al laboratorio.La mayoría de las bacterias resisten bien lastemperaturas bajas, por lo que los productos puedenmantenerse en la nevera unas horas, pero el LCR (elmeningococo es muy sensible al frío), exudados, heces

y muestras de anaerobios no deben ser refrigerados(2º-8ºC). En todos los casos, el envío de la muestradebe evitar la salida (y posible contaminación) delcontenido, por lo que el recipiente debe de cerrarse conseguridad.


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Cuando la viabilidad de las bacterias es muy escasa o la posibidesecación de la muestra es grande (favoreciéndose la destrucción bacla toma no puede realizarse en el mismo laboratorio, se usarán mtransporte (Cary & Blair, Stuart o Amies), que no son nutritivospreservan las bacterias existentes, sobre todo si son escasas, a la v

impiden el crecimiento exagerado de otra flora bacteriana no deseada.Mención especial requiere cualquier tipo de muestras obtenidas aenfermos con presumible o demostrada hepatitis vírica o SIDA, por seno sólo el suero, sino todas las secreciones. Las muestras serán debi

señalizadas para prevenir la posibilidad de contagio del personal, pamuchos laboratorios se utilizan etiquetas de color amarillo o rojo, cohacer más visible su procedencia.


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Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010


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MATERIAL NECESARIO.· Frascos de hemocultivo.· Compresas de goma.· Jeringas y agujas de punción IV.· Gasas estériles.· Guantes de goma estériles.· Alcohol etílico o isopropílico al 70%.

· Solución Yodada.

OBTENCION DE LA MUESTRA.• Retirar los tapones externos de los frascos.• Desinfectar los tapones de goma con alcohol iodado o con iodóforo, dejánal menos un minuto.• Localizar por palpación la vena que se va a puncionar. Debe utilizarse distinta para cada extracción. Desinfectar con alcohol una zona de piel de ude diámetro. Se comenzará por el centro y se irán haciendo círculos concéntel exterior.


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OBTENCION DE LA MUESTRA.

• Repetir el paso anterior pero con el alcoholiodado, dejándolo secar durante un minuto.• Extraer la sangre sin tocar en ningún momentoel campo desinfectado. Si fuera necesario palpar nuevamente la vena se utilizarán guantes de

goma estériles o se desinfectarán los dedos dela misma manera que la piel del paciente.

VOLUMEN DE LA MUESTRA.La cantidad de sangre a introducir en cada frasco viene determinada por eutilizado en cada hospital, entre 15-20 ml por toma en adultos y 1-3 ml en ninorma general es adecuado que la sangre mantenga una proporción 1:10 conde cultivo. Es decir, para un frasco de 100 ml, introducir 10 ml. de sangre. Eneonatos y niños pequeños en que no se pueden obtener volúmenes gransangre es suficiente una cantidad de 1-5 ml, que se introduce en un solo frasc


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NÚMERO DE MUESTRAS.

Tres hemocultivos por paciente, previos al tratamiento antimicrobiano. Eentre las extracciones debe ser superior a una hora cuando sea posible, peroexista una gran urgencia en iniciar el tratamiento, este intervalo puede acort15 minutos. En caso de sepsis y endocarditis subaguda las extracciones se re24 horas y en caso de que sean los hemocultivos negativos, obtener tres mmás al día siguiente.

TRANSPORTE.Deben enviarse al laboratorio. Hasta su envíomantener a 35-37ºC; cuando esto no sea posible,mantener a temperatura ambiente. Nunca deberefrigerarse ni congelarse.


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OBTENCION DEL PRODUCTO.La muestra idónea es la primera micción de la mañana, ya que permite la mude bacterias durante la noche.Técnicas para mujeres.

La paciente debe quitarse la ropa interior.

Se lavará las manos cuidadosamente con agua y jabón, las enjuagará con asecará con una toalla limpia.Se separarán los labios mayores y menores, y los mantendrá separados

momento hasta que se haya recogido la orina.Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasándola de delante hacia

repetirá el proceso un total de 4 veces. Enjuagar cuidadosamente con agua heeliminar los restos de jabón.

Se indicará a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitcual y sin interrumpir la micción, se recogerá el resto de la orina en el recipien

El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con pierna, vulva opaciente. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie interior.


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Técnica para hombres.o Lavado de las manos con agua y jabón.o Retraer completamente el prepucio, que se mantendrá así en todo momenque se haya recogido la orina.o Limpiar el glande con jabón neutro.o Eliminar los restos de jabón enjuagándolo con agua hervida.o Se pedirá al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitrosinterrumpir la micción, recogerse el resto de la orina en el recipiente estéril.Técnica para niños.o En niños y niñas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos.o En niños y niñas más pequeños, la orina se recogerá en colectores o bolsas especialmente diseñadas para ellos de la siguiente forma:• Lavado cuidadoso de los genitales y área perineal igual que en los adultos.• Colocar la bolsa de plástico o el colector.• Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el niño haya orinadretirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento.• Si la micción no se ha realizado en una hora, se repite la operación colocnueva bolsa


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VOLUMEN MINIMO DE LA MUESTRA.Es suficiente un volumen de orina de 5-10 ml.

TRANSPORTE.La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora. Cuando estono sea posible debe refrigerarse a 4ºC durante un tiempo máximo de 24horas. El laboratorio debe controlar el transporte, garantizándo que lasmuestras hayan sido refrigeradas desde el momento de su toma,

siendo admisible, si no puede garantizarse el transporte correcto, lautilización de algún conservante (ácido bórico al 2% o el sistemacomercial con bórico-formiato).


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OBTENCIÓN DE LA MUESTRA.- Si son formadas o pastosas se toma una porción delrecipiente donde hayan sido emitidas y se transfieren alsistema elegido para el envío al laboratorio. Seseleccionan zonas donde haya sangre, moco o pus. Noson válidas las muestras contaminadas con orina. Nodebe utilizarse para la recogida papel higiénico, porquesuelen tener sales de bario que inhiben algunas bacteriasenteropatógenas.

VOLUMEN MÍNIMO.Heces formadas o pastosas: al menos 1 ó 2 gr. para virología, añadir 2 a 4 gr. más. Muestras del tamaño de una nuez son muy adecuadapues permiten realizar la mayoría de las investigaciones posibleHeces líquidas: entre 5 y 10 ml.


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TRANSPORTE.Para el estudio bacteriológico es suficiente enviar la muestra en un recipie

se va a procesar en el plazo de 1 ó 2 horas después de su emisión. En caso cremite en un sistema de transporte para bacterias. En ambos casos se marefrigeración hasta el procesamiento, para evitar el sobrecrecimiento de la florpuede enmascarar o destruir a los enteropatógenos. El frío puede afectar la vShigella spp.

Para el estudio de toxinas de C. difficile, la muestra se puede mantener hasta 48 hoen refrigeración, congelada a -20ºC se puede mantener indefinidamente. Emuestra, preferiblemente sin medio de transporte, es indispensable para el fresco, el ensayo de las toxinas de C. difficile, detección por concentración de huevparásitos y estudios virológicos (cultivos, inmunoelectromicroscopía, ELISArotavirus).


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TRANSPORTE.

Es preferible enviar las muestras para estudio virológico sin medio de cultiv

diluye las partículas virales disminuyendo la sensibilidad. Si su envío se retra

necesario utilizar un medio de transporte. Se enviarán en recipientes colocad

Para el estudio de parásitos es útil además, enviar una muestra pequeña en

fijador. Una parte en dos de fijador de alcohol polivinílico.


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OBSERVACIONES.Las muestras para coprocultivo, deberán tomarse antes de la adminisantimicrobianos o agentes antidiarreicos. Es conveniente también evitar, sob

estudios parasitológicos la utilización previa de antiácidos y laxantes oleoso, ascompuestos habitualmente utilizados para estudios radiológicos digestivos (baIndicar siempre el juicio diagnóstico de presunción y si el paciente es menor de

Solicitar las investigaciones especiales explícitamente (C. difficile, C. perfringens, S.aureus, etc.).Si con la primera muestra no se detecta la presencia de enteropatógenos, es

enviar en los días siguientes, dos tomas adicionales. En general, para loparasitológicos, se deben enviar tres muestras tomadas en diferentes días.

MUESTRAS INADECUADAS.Heces emitidas anteriores a dos horas y que

no hayan sido refrigeradas.Las tres tomas realizadas el mismo día.


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FARINGO-AMIGDALINO.

TÉCNICA.Bajo visión directa, con la ayuda de undepresor lingual, se tocará con la torunda entodas las partes con exudado, membranas oinflamación. Se deben frotar las criptas

tonsilares y la faringe posterior. No tocar nuncala mucosa oral, lengua o úvula.

OBSERVACIONES.

Se investigará rutinariamente la presencia de Streptococcusbeta-hemolítico del grupo A (S. pyogenes).En las sospechas de difteria deberán mandarse porciones demembrana, una torunda faríngea y una torunda nasofaríngeapor vía pernasal.


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NASOFARINGE.Es la muestra indicada para la investigación de Bordetella pertussis.A. MATERIAL NECESARIO.- Torundas flexibles de alginato cálcico.- Para aspirados: Tubo aspirador de Teflón o jeringa y catéter.


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Introducir la torunda unos 2 cm en la nariz, girar suavemente contra la mucosa de la superficie nasal yextraer.

NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.Las muestras deben procesarse antes de 2 horas.OBSERVACIONES.Los microorganismos encontrados en fosa nasal no tienenpor que ser los mismos que se aíslan en el seno en caso de

sinusitis, por lo que los cultivos de exudados nasales nosirven para el diagnóstico etiológicos de la sinusitis y nopueden sustituir nunca a la punción del seno.


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SENOS PARANASALES.Se realiza la punción-aspiración de los mismos, lo que suele requerir unespecialista en O.R.L. o personal especializado en dicha técnica.

CAVIDAD ORAL.Esta muestra se emplea habitualmente para el diagnóstico de candidiasis o dde Vincent (gingivitis ulcerativa).A. MATERIAL NECESARIO.

- Torundas de algodón sin medio de transporte.- Porta objetos limpios.TÉCNICA.- Se pedirá al paciente que se enjuague la boca con agua.- Tras enjuagar la boca, frotar o raspar las lesiones con una espátula o con unhacer una extensión sobre un porta.- Se repetirá la toma con una segunda torunda para cultivo (sólo para la inveCandida albicans).NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.1 extensión en porta + 1 torunda.TRANSPORTE Y CONSERVACION.No requiere medidas especiales para su transporte y conservación.


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TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR.1.Esputo, esputo inducido.2.Jugo gástrico.3.Aspirado traqueobronquial simple.4.Punción transtraqueal (P.T.T.).5.Muestras obtenidas a través de fibrobroncoscopia.6. Muestras obtenidas por abordaje percutáneo.7. Muestras extrapulmonares: Líquido pleural, Biopsia pleural,sangre venosa.

En las condiciones habituales de la clínica diaria, no es una murepresentativa de la situación existente en el tracto respiratorio inferior

mezcla con secreciones procedentes de todo el arbol traqueobronquial yflora saprófita de la orofaringe. No obstante es un método fácil y rápiutilidad o relación entre resultado obtenido y verdadera etiología depegran medida de su correcta obtención, control de calidad antes de iniprocesamiento, tipo de agente que se pretenda detectar y valoración ade

del resultado.


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TÉCNICA O METODOLOGÍA DE LA OBTENCIÓN PRODUCTO.

Enjuagar la boca con agua destilada estéril o solución salina.Obtener el esputo tras una expectoración profunda,

preferentemente matinal.De no producirse expectoración espontánea, puede inducirse

esputo con nebulizaciones de suero fisiológico estéril (15 ml dura10 minutos), siendo útil además realizar un drenaje posturalfisioterapia respiratoria.


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MUESTRAS DEL TRACTO GENITALFEMENINO.1. Exudados vaginales.2. Exudados cervicales.3. Exudados uretrales.4. Exudados rectales.5. Endometrios.

6. Culdocentesis.7. Trompas y ovarios.8. Vulva.9. Lesiones cutáneomucosas para campooscuro (chancros).

10. Ganglios linfáticos inguinales.11. Líquido amniótico.12. Productos de la concepción.

MUESTRAS DEL TRACTO GENITAMASCULINO.1. Exudados uretrales.2. Exudados rectales.3. Ganglios linfáticos inguinales.4. Lesiones de campo oscuro (chancros)5. Muestras para el estudio de la prostat


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Muestras no rotuladas o sin identificación. Discrepancia en la identificación del paciente y la muestra.

Envase inapropiado o medio de transporte inadecuado. Demora prolongada en enviar la muestra al laboratorio. Duplicación de muestra del mismo paciente dentro de 24h,excepto sangre.

No indicar tipo de muestra o procedencia. No indicar tipo de examen en la orden. Muestra derramada o rotura del envase. Hisopos secos.

Una sóla muestra con múltiples ordenes. Muestra para anaerobios en envase inapropiado. Cultivo por anaerobios de muestras con flora anaeróbicanormal

Frotis de Gram por N. go norrh oeae de mu estras de cérvix,vagina y cripta anal.

Cultivo por anaerobios de orina colectada por vaciado directo Volumen inadecuado. Contaminación obvia de la muestra.


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Tinción de tipo diferencial que debe su nombre al bacteriólodanés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884.

Coloración de Gram

Coloración de Gram


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Los colorantes básicos consisten de cationes teñidos con un anióincoloro (ej. Cloruro – de azul de metileno+); ocurre lo contrario con loscolorantes ácidos (ej. Eosinato- de sodio+). Las células bacterianas sonricas en ácidos nucleicos y portan cargas negativas en los grupos fÉsta se combina con las cargas positivas de los colorantes básicos.

Los colorantes ácidos no tiñen a lascélulas bacterianas y por tanto puedenutilizarse para teñir el material de fondo afin de proporcionar un contraste de color.

La coloración inicia con la aplicación de uncolorante básico, violeta de genciana.

Coloración de Gram


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A continuación se aplica una solución de yodo; todas las bacterias se ticolor azul en este punto del procedimiento. Luego la célula se trata con

Las células grampositivas que conservan el complejo de violeta de genciaadquieren un color morado y las células gramnegativas se decoloran por ccon la adición de alcohol. Como último paso se aplica otro colorante (comsafranina) de forma que las células gramnegativas decoloradas adquieran ucontraste; las células grampositivas adquieren un color violáceo.


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Medios de cultivo MEDIOS LÍQUIDOSMEDIOS SÓLIDOS (aislamiento de las bacteriasen colonias bacterianas)

G. Prats. Microbiología clínica. Editorial Panamericana. 2006.


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Medios de cultivo

• El componente nutritivo de un medio estádiseñado para satisfacer los requisitos decrecimiento del organismo a fin de permitirsu aislamiento y propagación.

MEDIOSNUTRITIVOS

• Se utilizan cuando se buscan organismospatogénicos específicos en sitios con unaflora normal extensa.

MEDIOSSELECTIVOS -

DIFERENCIALES•

Contienen sustancias diseñadas paramostrar las características bioquímicas oúnicas de otro tipo de patógenos o gruposde organismos (carbohidratos + indicador de pH )

MEDIOSINDICADORES



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Medios de cultivo

• Son medios usuales a los que se añadesuero, sangre o factores esencialesespecíficos, como vitaminas o cofactores,permitiendo el crecimiento de bacteriasexigentes.

MEDIOS

ENRIQUECIDOS

• Son medios líquidos que cumplen la mismafunción que los selectivos, permiten lamultiplicación de la bacteria buscada einhiben las otras

MEDIOS DE

ENRIQUECIMIENTO


Medios de cultivo


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Medios de cultivo


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Los complejos antígeno-anticuerpo se pueden detectar directamente por técnicasde precipitación o marcando el anticuerpo con una sonda radiactiva, fluorescente oenzimática, o indirectamente por la medición de una reacción frente al anticuerpo,como la fijación del complemento. La mayoría de los procedimientos de detección eidentificación de antígenos también se pueden utilizar para evaluar concentraciones de anticuerpos desde el punto de vista serológico.

INMUNOFLUORESCENCIA

ENZIMOINMUNOANÁLISIS(EIA)


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En la inmunofluorescencia directa una

molécula fluorescente se une de formacovalente al anticuerpo. En lainmunofluorescencia indirecta se utilizaun segundo anticuerpo fluorescenteespecífico para el anticuerpo primario con

el fin de detectar el anticuerpo antivíricoprimario y localizar el antígeno. En el EIA,una enzima como la peroxidasa de rábanopicante o la fosfatasa alcalina se conjugancon el anticuerpo y convierten un sustratoen un cromóforo para marcar el antígeno.

ELISA


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WESTERN

El ELISA utiliza un antígeno inmovilizado en una superficie, una bolita oun filtro de plástico con el objeto de capturar y separar un anticuerpoespecífico de otros anticuerpos presentes en el suero de un paciente.

El anticuerpo del paciente así fijado se detecta posteriormente pormedio de un anticuerpo antihumano unido por un enlace covalente auna enzima (p. ej., peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa).

Se cuantifica por espectrofotometría en función de la intensidad del

color producido como respuesta a la conversión de un sustratoadecuado por la enzima.Se puede determinar la concentración real del anticuerpo específico

por comparación con la reactividad de soluciones estándar deanticuerpos humanos.


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PRODUCTOS GENÉTICOS PRINCIPALES DE LOS HIV-1 Y HIV-2

Gen Descripción de losproductos genéticos

Productosgenéticos de

HIV-1 HIV-2

Core (gag)Precursor of Gag proteinCapsid proteinMatrix protein

P55P24P17

P53-55P26P16

Polymerase(pol)

RT componentRT componentEndonuclease component

P66P51P32

P68

P33

Envelope (env)

Precursor of Env glycoprotein

Outer Env glycoproteinTransmembrane Env glycoprotein

gp160

gp120gp41

gp125

gp105gp36

Tomado de: Versalovic J, Carroll K, JorgensenJ, Funke G, Landry ML and Warnock D.Manual of clinical microbiology. ASM Press.10 th edition. 2011.


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La respuesta inmunitaria humoral de un paciente proporciona unhistorial de sus infecciones. La serología se emplea con el fin de:

Identificar el agente responsable de la infección,Evaluar la evolución de una infección oDeterminar la naturaleza de la infección: infección primaria frente a

reinfección, aguda frente a crónica.

Los datos serológicos de unainfección se obtienen a partirdel tipo y el título de losanticuerpos y la identidad delas dianas antigénicas. Estaspruebas se usan paraidentificar virus y otrosagentes difíciles de aislar ycultivar en el laboratorio oque causan enfermedades deevolución más lenta.


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Movimientos poblacionales y la intrusión de los seres humanos yanimales domésticos en nuevos hábitat, en particular las selvas

tropicales. Deforestación, con desarrollo de nuevas tierras de cultivo y exposicióde los agricultores y animales domésticos a nuevos artrópodos ypatógenos primarios.

Irrigación, en especial sistemas primitivos, que no controlan loartrópodos y organismos entéricos.

Urbanización descontrolada, con poblaciones de vectores que sereproducen en agua estancada.


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Aumento en los viajes aéreos a grandes distancias, concontacto o transporte de vectores artrópodos y patógenosprimarios.Agitación social, guerras civiles y desastres naturalesimportantes, que conducen a hambrunas y alteración delos sistemas sanitarios, programas de inmunización, etc.Cambio climático mundial.

Evolución microbiana, que conduce a selección natural dagentes multiresistentes. En algunos casos estos cambiospueden acelerarse en forma considerable por el usoindiscriminado de agentes antimicrobianos.

Ejemplos de enfermedades infecciosas en


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j psurgimiento o resurgimiento



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INFECCIÓN


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INFECCIÓN

Implica la multiplicación del organismo dentro osobre el hospedador y que quizá no sea

evidente; por ejemplo, durante el período latenteo de incubación cuando ocurre poca o ninguna

replicación. Ejm: Virus del Herpes.

Representa una respuesta o daño clínicamentemanifiesto en el hospedador como resultado de lainfección.

ENFERMEDAD

• La infección puede producir poca o ninguna enfermedad.• Los portadores pueden ser asintomáticos, pero infecciosos para otros.


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El período de incubación es eltiempo entre la exposición alorganismo y la aparición de losprimeros síntomas de la

enfermedad.

• Los períodos de incubación

van de unos cuantos díashasta varios meses.

La comunicabilidad de unaenfermedad en la que el organismose aloja en las secreciones puedeocurrir principalmente durante elperíodo de incubación.

• En otras infecciones, elcurso de la enfermedad es

corto, pero es posible que elhospedador excrete elorganismo durante períodosextensos.


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CONTACTO DIRECTOTRANSMISIÓN EN AEROSOLVÍA INDIRECTA OBJETOS OMATERIALES INANIMADOS)

• TRANSMISIÓNHORIZONTAL= directa oindirecta, de una persona aotra

• TRANSMISIÓN VERTICAL=de la madre al feto

CONTAGIO POR VÍASRESPIRATORIAS• Grado y método de

propulsión de lassecreciones de la boca ynaríz.

• Tamaño de las gotas en elaerosol

• Resistencia del agenteinfeccioso a la desecación einactivación a causa de laluz uv.

CONTAGIO POR VÍASRESPIRATORIAS


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RESPIRATORIAS

• En el aire en reposo, una partícula de 100 µm de diámetro requiere segundos para caer a una distancia equivalente a la altura de uhabitación.

• Una partícula de 10 µm permanece en el aire durante cerca de 20 minu

las partículas más pequeñas se mantienen incluso más tiempo en el aire.• Cuando se inhalan, las partículas con un diámetro de 6 µm o más po

general quedan atrapadas en la mucosa de los cornetes nasales, en tanque las partículas de 0,6 a 5,0 µm se adhieren a sitios de la mucosadiversos niveles a lo largo de las vías respiratorias superiores e inferior

pueden dar inicio a una infección. (Ejm: M. tuberculosis ).• Las secreciones respiratorias se transmiten en las manos o en objet

inanimados (fómites) y pueden llegar de este modo a las vías respiratode otros individuos.

CONTAGIO POR LASALIVA


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SALIVA

• Transmisión de manera directa

mediante el contacto con salivainfectada a través del beso.• Ejm. Herpes simple y

Mononucleosis.• Lavarse las manos es de especial

importancia para reducir el riesgode propagación.

CONTAGIOFECAL-ORAL

•

Implica propagación directa de dedos a boca, el uso deheces humanas comofertilizante o la contaminació

fecal de alimentos o agua.• La reducción del ácidoclorhídrico gástrico puedfacilitar las infeccionesentéricas.

TRANSFERENCIA DEPIEL A PIEL


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PIEL A PIEL• Ocurre con una variedad de

infecciones en las que la piel es elportal de acceso (Ejm: T. pallidum,S. pyogenes y hongosdermatófitos).

• En la mayoría de los casos es

posible que esté implicada unacortadura inadvertida en el epiteliocomo entrada de la infección.

• La transmisión de piel a pielocurre en general por abrasionesen la epidermis, las cuales quizápasen inadvertidas.

TRANSMISIÓNSANGUÍNEA• La transmisión sanguínea de l

infección a través de insectosvectores requiere de un período

de multiplicación o alteraciódentro de un insecto vector antede que el organismo puedainfectar a otro hospedadorhumano (Ejm. Paludismo)

•

Transmisión directa de persona persona a través de la sangre(transfusiones sanguíneas yproductos de la sangre,autoadministración de drogailícitas) (Ejm: VHB, VHC, HIV)

TRANSMISIÓNGENITAL


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GENITAL• El contagio puede ocurrir

entre una pareja sexual o demadre a lactante durante elparto.

• Factores: persistencia,elevadas tasas de portaciónasintomática y frecuenciaen la recurrencia deorganismos como C.trachomatis, CMV, VHS y N.gonorrhoeae.

TRANSMISIÓNOCULAR• Las infecciones de la

conjuntiva pueden ocurrirde manera epidémica o

endémica (Ejm: Adenovirus ,Haemophilus, Chlamydia).• Transmisión: contacto

directo a través de equipooftalmológico o porsecreciones transmitidas enlas manos o fómites comotoallas.

TRANSMISIÓNZOONÓTICA


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ZOONÓTICA• Algunas zoonosis se contraen

en forma directa por lamordedura del animal, otras setransmiten por vectores (enespecial artrópodos).

TRANSMISIÓNVERTICAL

• Puede ocurrir a través de laplacenta, durante el parto o

por medio de la lechematerna (Ejm: Rubéola, S.agalactiae, C. trachomatis,N. gonorrhoeae, VHS, CMV ).


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El PRIMER PRINCIPIO DEL CONTROL

ES EL RECONOCIMIENTO DE LAEXISTENCIA DE UNA EPIDEMIA ATRAVÉS DE ACTIVIDADES DEVIGILANCIA CONTÍNUA (Informesrutinarios a las secretarías odepartamentos de salud y registrosde ausentismo escolar y laboral)

• Es obligatorio identificar alagente causal e iniciar losestudios para determinar lavía de transmisión.

Después deben adoptarse medidaspara controlar el contagio y eldesarrollo de infección adicional.

1. Bloquear en lo posible la vía de transmisión.2. Identificar, tratar y en caso necesario, aislar a loindividuos infectados y a los portadores.

3. Elevar el nivel de inmunidad en la población afectadaa través de inmunización.

4. Utilizar en forma selectiva la profilax

farmacológica para los sujetos o poblaciones enriesgo específico de infección, como en lasepidemias de infecciónpor meningococo.

5. Corregir las condiciones como el hacinamientola contaminación de los acuíferos que hanconducido a la epidemia o que han facilitado ltransferencia.


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La inmunización puede ser activa, conestimulación de los mecanismos

inmunitarios del organismo a través dela administración de una vacuna, opasiva, a través de la administración deplasma o globulina que contengaanticuerpos preformados contra unagente específico.

• Las vacunas de organismos vivosproporcionan en generalinmunidad humoral tanto local

como duradera.• Las vacunas con organismos

muertos o con subunidades deéstos, proporcionaninmunogenicidad sin infectividad

(Influenza y toxoide tetánico).

La inmunización activa conorganismos vivos atenuadosproduce en general una enfermedadsubclínica o leve

• La inmunización es elmétodo más eficaz para darprotección a los individuos ycomunidades contra

muchas enfermedadesepidémicas.


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Tema 2. Naturaleza de La Infección

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