Tema 3

El medio de cultivo 2

Suplementos orgnicos

VitaminasLas plantas no producen vitaminas

Tiamina (Vit. B1)Metabolismo carbohidratos y sntesis

de aa Myo-inositol

Formacin pectinas y hemicelulosas Acido nicotnico o niacina Piridoxina (Vit. B6)

Suplementos orgnicos Otras vitaminas

Acido pantotnico Vitamina C (cido ascrbico)

Antioxidante, divisin y elongacin celular

Vitamina D Vitamina E Glicina (aminocido)

Suplementos no definidos Extracto de levadura (inositol y tiamina) Leche de coco

Aminocidos Acidos

orgnicos

Acidos

nucleicos Purinas Azcar Azcar-alcohol Vitaminas Reguladores del crecimiento Minerales

Acidos orgnicos

Agentes quelantes Tampn

Ojima

and

Ohira

(1980) Acido mlico y ctrico corrigen deficiencia en Fe

NutrientesAumento del metabolismo del N

Azcares

Energa Agente osmtico

Azcar como fuente de energa

Autotrofa Metabolismo de carbohidratos por

asimilacin de CO2 Enriquecimiento de CO2

y retirada de azcar Limitado nmero de ocasiones se observa in

vitro

Sacarosa

Unos ms que otros

SacarosaGlucosa

MaltosaRafinosa

ManosaLactosa

Por qu

es mejor la sacarosa que la glucosa?

Mejor translocacin a los centros de crecimiento

Menor impacto osmtico

Otros

Azcares alcoholManitol, Sorbitol

AlmidnLiberacin de amilasas, favorecida

por giberelinas Maretzki

et al. (1971, 1974)

Efectos de la sacarosa

Formacin de elementos vasculares (+) Formacin de clorofila (-)

Azcar como agente osmtico

La adicin de solutos a un solvente reduce el potencial osmtico de la solucin

s

=macronutrientes

+azcar

Efectos y usos de osmolitos

en cultivo de tejidos

Aislamiento y cultivo de protoplastos Crecimiento Contenido hdrico del tejido Morfognesis

Apogamia

en helechos Diferenciacin de yemas florales Formacin de raz y crecimiento radical Embriognesis somtica Formacin de rganos de almacenamiento Cultivo de anteras

El pH del medio de cultivo

Solubilidad de las sales Absorcin de nutrientes del medio Reacciones qumicas, especialmente

las enzimticas Eficiencia de los agentes solidificantes

Tampones

Aislamiento de protoplastos Cultivos celulares a bajas densidades

TRIS MES HEPES CAPS

Medio lquido

Medio lquido Aporte de Oxgeno Hiperhidricidad

Cuando el potencial del medio es elevado entra agua en las clulas y las clulas se vuelven hiperhdricas Se reduce:

aumentando los osmolitos

en el medio y/o la

concentracin de agar

aireando el medio para evaporar el agua

Uso del medio lquido

Cultivo de protoplastos Cultivos celulares/races

Metabolitos secundarios Propagacin

Embriones somticos Ndulos meristemticos Agregados de tallos Microtubrculos

Matrices semislidas

Agar Agarosa Alginatos Almidn Pectinas

Agar

Forma geles

con agua que mezclan a 100 C

y solidifica a 45 C

No digerido por enzimas vegetales Inerte Polisacridos a partir de galactosa

Gelidium y otras algas rojas Componente ms caro del medio de

cultivo

Alginatos

Heteropolmero

binario cido 1,4 --

D mannuronico

y cido 1,4--

L guluronico Brown algae

La sal de sodio expuesta a iones Ca provoca la gelacin

Cultivo de protoplastos Encapsulacin de semillas artificiales

Cultivos ventilados y soportes porosos

Menor humedad relativa Mayor transpiracin Menor hiperhidricidad Posible autotrofa

en medio sin azcar

Soportes porosos

Membranas de polipropileno Poliester

fleece

Papel de filtro ashless Mezcla de pulpa de papel y vermiculita

Clulas inmobilizadas

Aumentar el rendimiento de metabolitos secundarios a partir de clulas diferenciadas, con crecimiento lento

Auxinas

Induccin de callo Rizognesis Embriognesis (2,4 D)

Citoquininas

Estimulacin de la divisin celular Formacin de tallos adventicios Embriognesis Proliferacin de yemas axilares Inhibicin de la rizognesis

Giberelinas

Elongacin del tallo Inhibicin del desarrollo

Inhibidores de la sntesis de giberelinas

Acido abscsico

Embriognesis Tolerancia a la sequa

Carbono activo Absorcin de compuestos secretados al

medio de cultivo, inhibidores del crecimiento Fenoles de la herida, durante el establecimiento

del cultivo Impedir la formacin de callo Promover morfognesis, especialmente la

embriognesis Promover rizognesis Absorcin de metabolitos secundarios

Habituacin

Capacidad de las clulas de pasar de un estado dependiente del aporte exgeno de una determinada sustancia a otro, independiente de dicha sustancia.

Tema 3Suplementos orgnicosSuplementos orgnicosSuplementos no definidosAcidos orgnicosAzcaresAzcar como fuente de energaUnos ms que otrosPor qu es mejor la sacarosa que la glucosa?OtrosEfectos de la sacarosaAzcar como agente osmticoEfectos y usos de osmolitos en cultivo de tejidosEl pH del medio de cultivoTamponesMedio lquidoUso del medio lquidoMatrices semislidasAgarAlginatosCultivos ventilados y soportes porososSoportes porososClulas inmobilizadasAuxinasCitoquininasGiberelinasAcido abscsicoCarbono activoHabituacin