Tema propuesto: Identificación de genes potenciales relacionados con el eflujo de membrana de...
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Tema propuesto: Identificación de genes potenciales relacionados con el eflujo de
membrana de Mycobacterium tuberculosis utilizando herramientas bioinformáticas
Título del Proyecto: Identificación de genes homólogos a EmrB (de Escherichia coli) como genes potenciales relacionados con el flujo de salida de Ácido Pirazinóico en Micobacterium
tuberculosis
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Pirazinamida Nicotinamida
PZA
Introducción
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Resistencia: mutaciones en PZasa Resistencia: sin mutaciones y con actividad intacta
PZA
Introducción
+ H2O + NH4+PZasa
Monica Pajuelo Travezaño:
Prodroga
Enzima PZAsa
Monica Pajuelo Travezaño:
Prodroga
Enzima PZAsa
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Antecedentes
1. Mecanismo de acción de la PZA
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Mutación en PZasa ¿Bombas de flujo de salida involucradas? M. smegmatis:
Tiene dos PZasas activas Frente a inhibidores de transportadores: reserpina,
valinomicina, las cepas se hacen sensibles
Antecedentes
2. Resistencia a la PZA
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Objetivos
Identificar genes homólogos a EmrB de E. coli relacionados con el flujo de salida de ácidos orgánicos débiles o de drogas en M. tuberculosis
Verificar que los posibles genes contribuyan con el flujo de salida de POA en M. tuberculosis
Objetivos
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Planteamiento del Experimento
Búsqueda de genes homólogos a Emrb de E. coli
Búsqueda de genes homólogos a Emrb de E. coli
Uso de COG
Búsqueda en TubercuList
Predicción de Segmentos Transmembrana
Predicción de Segmentos Transmembrana
Uso de TMpred
Resultados PreliminaresResultados Preliminares
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Planteamiento del Experimento
Acumulación de POA
Acumulación de POA
Uso de sustrato radiactivo marcado con C14
Determinación de la sensibilidad a PZA/POA
Determinación de la sensibilidad a PZA/POA
Determinación de MIC
Knockout de genesKnockout de genesRecombinación genética homóloga
Determinación de la actividad de PZasa
Determinación de la actividad de PZasa
Método de Wayne
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Planteamiento del Experimento