Tema12- Fundamentos de Inmunohematologia

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Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 12Tema 12

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FUNDAMENTOS DE INMUNOHEMATOLOGÍAMÉTODOS GENERALES

DE ESTUDIO

BioquBioquíímica Clmica Clíínica i Hematologianica i Hematologia


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Fundamentos de inmunohematologíamétodos generales de estudio

Conceptos generalesAntígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y característicasAnticuerpos naturales e inmunes: característicasSistema A B O: Antígenos y anticuerpos

Determinación del grupo ABOSistema Rh: Antígenos y anticuerpos

Determinación del antígeno D (Rh)Prueba de Coombs indirectaPrueba de Coombs directa


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Conceptos generales

ANTIGENOSToda sustancia que introducida en el organismo provoca una reacción inmune

De tipo humoral: Formación de anticuerposDe tipo celular

ANTICUERPOSProteínas plasmáticas (γ-globulinas) producidas como respuesta a la entrada de un antígeno.Clasificación por la cadena pesada: IgG(γ), IgM(µ), IgA(α), IgD(δ), IgE(ε)

Subclases según cadena ligera: κ, λBioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

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Anticuerpo de clase IgM

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Grupo sanguíneo: Sistema bien definido de antígenos de los hematíes, controlado por un locus que posee un número variable de genesalélicos

ABO, RhLewis, P, I, MNS, Kidd, Kell, Duffy, Lutheran

Grupo sanguíneo personal: fenotipo antigènico de los genes de grupo sanguíneoheredados.

Conceptos generales


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ANTIGENOS ERITROCITARIOSTipos

Antígenos ABO: GlucolípidosSistema antigénico Rh: Lipoproteínas de la membranaOtros: Lewis, grupo P, grupo MMSs, Kell, Duffy, Lutheran,etc

Características antígenos ABOAntígenos A i B: Carbohidratos unidos a sustancia HLa herencia de los antígenos A y B es mendelianaDeterminan el grupo ABO y depende de la presencia de uno (homocigota) o dos (heterocigota) de los tres alelos: A, B y H cuyos genes están en el cromosoma 9pGenes codifiquen para glicosil transferasas

Si se heredan transferasas tipo A i B > grupo ABSi se heredan transferasas tipo A> grupo ANo se hereda ninguna transferasa > grupo O

Antígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y características


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ANTIGENOS ERITROCITARIOSCaracterísticas del sistema antigénico Rh

Segundo en importancia en la práctica transfusionalMuy polimorfo, pero sólo 5 son comunes:DCcEe La herencia de los antígenos es mendeliana

codominante.Tres alelos: D y d, C y c, E y eLos genes se localizan en el cromosoma 1La designación Rh positivo indica la presencia

del antígeno D : 85% de los individuos (42% homocigótico:DD, 58% heterocigótico: Dd)El antígeno D es muy inmunogénico y es causa

relevante de la “enfermedad hemolítica del recién nacido” (EHRN)



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ANTICUERPOS DE GRUPO SANGUÍNEOTipos

Heteroanticuerpos (de otras especies animales o vegetales)ALOANTICUERPOS (de otros individuos misma especie)Autoanticuerpos (contra los propios antígenos)

Naturales (A,B,O) ( sin estímulo previo)Inmunes (Rh) ( ha habido estímulo antigénico)

Regulares (presentes aunque no halla antígeno)Irregulares (no necesariamente existen en ausencia de

antígeno)

Aglutinantes en solución salina (completos)Sensibilizantes (incompletos)


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ANTICUERPOS DE GRUPO SANGUINEOCaracterísticas

Inmunoglobulinas específicas de grupo sanguíneoNaturales:

Congénitas; sin estimulaciones antigénicas Todos los individuos tienen anticuerpos contra antígenos que no poseen (isoaglutininas): grupo A> anticuerpos BDirigidos contra carbohidratos: por ejemplo sistema ABOIgM

Anticuerpos friosPuedan activar el complemento >hemólisis intravascular aguda

Inmunes o Reactivos:Adquiridos; como reacción a transfusiones o embarazosDirigidos contra proteinas ; Rh (D,C,c,E,e)IgM→IgG

Anticuerpos calientesHemólisis predominantemente extravascularAtraviesan la barrera placentariaenfermedad hemolítica del recién nacido

Anticuerpos naturales e inmunes: características


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SINoPasan la barrera placentaria

PocosLa mayoríaFijación complemento “in vitro”

37ºC4ºCTemperatura óptima

EscasaImportanteAglutinación eritrocitaria en solución salina

Generalmente IgG

Generalmente IgMInmunoglobulina

InmunesNaturales

Anticuerpos naturales e inmunes: características


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Sistema A B O – antígenos A1, A2, B, O (alelo silencioso)

Grupo A Grupo B Grupo AB Grupo 0Antigeno A Antigeno B Antigenos

AB No antígenos

Anticuerpos Anti-B

Anticuerpos Anti-A

No anticuerpos Anticuerpos

A y B

RBC

Plasma


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3,5A2 B (25% con anti-A1)

A2 B

A1 BA1 B9BB O

B B34A2 (2% con anti-A1)A2 O

A2 A2

A1 *A1 OA1 A2

A1 A1

53,5OOO

Frecuencia %FenotiposGenotipos

* El 80% de los sujetos A son A1

Sistema A B O – antígenos A1, A2, B, O (alelo silencioso)

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Sistema A B Odiferenciacion entre A1 y A2aglutinacion por las lectinas

+-A 2

-+A 1

Ulexeuropaeus

Dolichosbiflorus


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Aloanticuerpos naturales y generalmente regularesLos anticuerpos irregulares (anti-A1) interfieren las pruebas cruzadas pretransfusionales pero sin importancia clínica, excepto si actúan a 37ºC (hemolizantes)Predominantemente IgMAglutinan en solución salinaTemperatura óptima: 4ºC pero son activos yhemolizantes a 37ºCInmunización fetomaterna rara (madre O que desarrolla anticuerpos IgG contra eritocitos A o B del feto)

Sistema A B O – anticuerpos


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Combinaciones de alelos que determinan los fenotipos ABO y sus anticuerpos

OBB

ABAA

Fenotipos ABO

Anti-A, Anti-B,Anti-AB

O, OAnti-AB, OAnti-AB, B

capA, BAnti-BA,OAnti-BA,A

Isoaglutininas:anticuerpos

Parejas dealelos


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Genotipo Fenotipo Antigenos de hematies

Anticuerpos séricos

A1A1

A1A2 A1O

A1 A1, H Anti-B

A2A2 A2O

A2 A2, H Anti-B (Anti A1)

BB BO

B B, H Anti A, A1

A1B A1B A1, B, H

A2B A2B A2, B, H (Anti-A1)

OO O H Anti-A, A1 Anti-B

hh Oh - Anti-A, A1 Anti-B Anti-H

Combinaciones de alelos que determinan los fenotipos ABO y sus anticuerpos

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CON SANGRE TOTAL SOBRE PLACASangre total problemaSueros anti-A, anti-B y anti-ABMezclar y observar la aglutinación o su ausencia

CON SANGRE TOTAL EN TUBOSuspensión de eritrocitos problema al 5%Sueros anti-A, anti-B y anti-ABMezclar y centrifugar 1 min. a 1000 rpm y observar la aglutinación o su ausencia

CON SUERO SOBRE PLACAEritrocitos A y B lavados (de donante) en solución salina al 10%Suero del pacienteMezclar y observar la aglutinación o su ausencia

CON SUERO EN TUBOEritrocitos A y B lavados (de donante) en solución salina al 10%Suero del pacienteMezclar y centrifugar 1 min. a 1000 rpm y observar la aglutinación o su ausencia

•Sistema A B O – determinación del grupo A B O


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CON SANGRE TOTAL SOBRE PLACA

Sangre total problemaSueros anti-A, anti-B y

anti-ABMezclar y observar la

aglutinación o su ausencia

•Sistema A B O – determinación del grupo A B O


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Sistema Rh Antígenos C, c, D, d (alelo silencioso), E, e

6(Cde, cdE)Otros

12cDE / cdeccDEe

13CDe / cDECcDEe

15cde / cde (Rh-)cc”dd”ee

20CDe / CDeCCDee

34CDe / cdeCcDee

Frecuencia genotípica %

Genotipo probableFenotipo


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Aloanticuerpos inmunesTipo IgG, generalmente

Sensibilizantes (incompletos): detectables en el sueropor el test de Coombs indirectoNo activan el complemento

Los más importantes: anti-D (luego anti-c y anti-E)

Transfusionales: En el 50% de casos de incompatibilidad para D (muy raros actualmente)

Inmunización fetomaterna: 1 de cada 6 mujeres D(-) con 2 hijos D(+) (muy raro actualmente: inmunoglobulina anti-D preventiva administrada posparto)

La incompatibilidad ABO protege de la sensibilización

Sistema Rh- Anticuerpos

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niño: Rh +madre: Rh -

Eritrocitos pasan a la circulaciónmaterna

Madredesarrolla

anticuerpos anti-D

Primer embarazo

Segon embaràs

Anticuerpos anti-D de la

madre pasan al hijo

Ac anti-D, via i.m.0-72 h postparto

Destrucción de eritrocitos⇒ No hay sensibilización


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METODO SOBRE PORTAOBJETOSSangre total problema

Suero anti-D Mezclar durante 2 min. y observar la aglutinación o su ausencia, a 40ºC

METODO EN TUBOSuspensión de eritrocitos problema al 2-5%

Suero anti-D y albúmina bovinaMezclar y centifugar 1 min. a 1000 rpm y

observar la aglutinación o su ausencia

Sistema Rh- determinacion del antigeno D (Rh)


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Grup ABO y DSistema de tipaje en tarjeta


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Prueba de coombs indirecta

Investigación en el suero de la existencia deanticuerpos sensibilizantesSe trata generalmente de anticuerpos inmunes o reactivos por previa transfusión o previo embarazo con feto que posee un antígeno del que carece la madre. Ejemplo: madre Rh negativa (D-) con un hijo D+.Realización:

Incubar eritrocitos de donante que contienen el antígeno y el suero problema durante 1 h a 37ºClavar 3 veces los eritrocitosañadir una gota de suero antiglobulina humana y centrifugar 1 min. a 1000 rpmVer si hay aglutinación

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lavados

Prueba de coombs indirecta


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Investigación de anticuerpos sensibilizantesfijados a la membrana eritrocitaria:Anemia hemolítica auto o aloinmune.Realización

Lavar los eritrocitos cuatro veces con solución salina y preparar una suspensión al 2-5%.Una gota de suspensión de eritocitos + una gota de suero antiglobulina humana en un tuboCentrifugar 45 segundos a 1000 rpm Leer si hay aglutinación

Prueba de coombs directa


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Aglutinación en tubo


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