TESIS - FIN 14-JUNIO.

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IDENTIFICACION DE AGENTES ETIOLOGICOS EN NEONATOS CON CATETER UMBILICAL Antecedentes El inexorable progreso de la ciencia y la tecnología médica ha sido acompañado por el desarrollo de una enorme cantidad de nuevos dispositivos médicos diagnósticos y terapéuticos cada uno de los cuales se asocia con sus propias complicaciones 1 . Los gérmenes del medio hospitalario que actualmente causan enfermedad no pueden ser eliminados sólo con técnicas de higiene ambiental 2 , la infección asociada a catéter se ha convertido en una de las infecciones intrahospitalarias más comunes 3 . Por lo tanto, los esfuerzos recientes han sido enfocados hacia la manera de prevenir la transmisión de estos agentes y disminuir la susceptibilidad del paciente. 2 El uso de catéter (del lat. cathĕter, y éste del gr. καθετήρ) es, en medicina, un dispositivo que puede ser introducido dentro de un tejido o vena, con el objeto de permitir la inyección de fármacos, el drenaje de líquidos o bien el acceso de otros instrumentos médicos. CATÉTER VENOSO UMBILICAL Recambios sanguíneo Recambio parcial. Shock hipovolémico grave. 1

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IDENTIFICACION DE AGENTES ETIOLOGICOS EN NEONATOS CON CATETER UMBILICAL

Antecedentes

El inexorable progreso de la ciencia y la tecnologiacutea meacutedica ha sido acompantildeado por el

desarrollo de una enorme cantidad de nuevos dispositivos meacutedicos diagnoacutesticos y

terapeacuteuticos cada uno de los cuales se asocia con sus propias complicaciones1 Los

geacutermenes del medio hospitalario que actualmente causan enfermedad no pueden ser

eliminados soacutelo con teacutecnicas de higiene ambiental2 la infeccioacuten asociada a cateacuteter se ha

convertido en una de las infecciones intrahospitalarias maacutes comunes3 Por lo tanto los

esfuerzos recientes han sido enfocados hacia la manera de prevenir la transmisioacuten de estos

agentes y disminuir la susceptibilidad del paciente2

El uso de cateacuteter (del lat cathĕter y eacuteste del gr καθετήρ) es en medicina un dispositivo que

puede ser introducido dentro de un tejido o vena con el objeto de permitir la inyeccioacuten de

faacutermacos el drenaje de liacutequidos o bien el acceso de otros instrumentos meacutedicos

CATEacuteTER VENOSO UMBILICAL

Recambios sanguiacuteneo

Recambio parcial

Shock hipovoleacutemico grave

Medicioacuten de presioacuten venosa central en pacientes criacuteticamente enfermos

CATEacuteTER ARTERIAL UMBILICAL

Recieacuten nacido de preteacutermino menos de 1500 grs con distreacutes respiratorio

Recieacuten nacido con distreacutes respiratorio con requerimientos de oxigeno mayor de 50

Recieacuten nacido conectado a ventilacioacuten mecaacutenica

Administracioacuten de fluidos en situaciones de recieacuten nacido de preteacutermino en que es

imposible el acceso a venas perifeacutericas4

1

Existen diferentes tipos de cateacuteteres venosos centrales de acuerdo al tiempo de uso corta

duracioacuten larga duracioacuten nuacutemero de luacutemenes y uso terapeacuteutico por lo cual se hace

necesario conocer sus ventajas y riesgos como sus indicaciones manejo y mantencioacuten4

Seguacuten su tiempo de duracioacuten

Corta duracioacuten

- Cateacuteteres venosos perifeacutericos generalmente en miembros superiores especialmente en

manos y antebrazos

- Cateacuteteres arteriales perifeacutericos usualmente en arteria radial o braquial Tambieacuten tibia

posterior o femoral

- Cateacuteteres venosos centrales yugular interna subclavia o femoral-

- Cateacuteteres arteriales pulmonares a traveacutes de un introductor de tefloacuten en una vena central

(subclavia yugular o femoral)

- Cateacuteteres umbilicales se insertan dentro de la vena o la arteria umbilical5

Larga duracioacuten

- Cateacuteteres venosos de insercioacuten perifeacuterica (percutanea) generalmente en la vena basiacutelica

cefaacutelica o venas de miembros inferiores Entran en la vena cava superior o inferior

- Cateacuteteres venosos centrales tunelizados (semiemplantables) se implantan quiruacutergicamente

en subclavia yugular interna o femoral-

- Cateacuteteres totalmente implantados tunelizados a traveacutes de la piel tienen un reservorio

subcutaacuteneo al que se accede por puncioacuten5

Seguacuten su material

- Cloruro de polivinilo

- Poliuretano

2

- Silicona

- Tefloacuten6

Los CVC de Silicoacuten tienen un menor porcentaje de colonizacioacuten 38 en comparacioacuten con

los de poliuretano con 627

RETIRO

Los cateacuteter se retiran de acuerdo ha

CATEacuteTER VENOSO UMBILICAL

Exanguineotransfusioacuten y recambio parcial cuando haya terminado el procedimiento 30

a 90 minutos

Inmediatamente posterior al cese de la indicacioacuten

CATEacuteTER ARTERIAL UMBILICAL

Recieacuten nacido con requerimientos bajo 40 y puncioacuten arterial sin problemas

Retiro de ventilacioacuten mecaacutenica

Evidencia cliacutenica o confirmacioacuten bacterioloacutegica de infeccioacuten del cateacuteter

Cateacuteter arterial ubicado en zona peligrosa de acuerdo a Rx toracoabdominal4

Las Infecciones del Torrente Sanguiacuteneo son una de las complicaciones mas graves que

puede ocurrir en el hospital si bien su incidencia no es tan elevada su alta LETALIDAD

determina la prioridad que se debe tener en las medidas tendientes a su prevencioacuten

DEFINICION DE LOS TIPOS DE CATETERIZACION

- CATETERIZACIOacuteN VASCULAR es la canalizacioacuten de un vaso sanguiacuteneo venoso o

arterial realizada por medio de un cateacuteter a traveacutes de una puncioacuten o incisioacuten

- CATETERIZACIOacuteN TEMPORAL es aquella cateterizacioacuten que tiene una duracioacuten

miacutenima ya que se introduce y se retira el cateacuteter en el mismo procedimiento

3

- CATETERIZACIOacuteN PERMANENTE es aquella cateterizacioacuten en que se introduce el

cateacuteter en el vaso por un tiempo mayor que la duracioacuten del procedimiento

CONCEPTO DE SINTOMAS DE UN NEONATO CON CATETER INFECTADO

- BACTEREMIA POR CATETER Aislamiento de bacterias viables en la sangre con

cultivo de cateacuteter positivo sin que se identifique otro foco originario

Primaria es aquella en que no existe otro foco de infeccioacuten Se consideran

asociadas a los equipos de infusioacuten endovenosa

Secundaria es aquella en que existe foco infeccioso en otro sitio (pulmonar

urinario piel gastrointestinal) por el mismo microorganismo

- FLEBITIS es la inflamacioacuten de la iacutentima de la vena puede evolucionar de compromiso

leve a severo con tromboflebitis emboliacutea pulmonar y bacteremia Este compromiso se

inicia con sensibilidad local ligero dolor eritema calor local ligera induracioacuten y cordoacuten

venoso palpable

- INFILTRACIOacuteN es la extravasacioacuten de fluidos endovenosos al espacio intersticial a

causa del desplazamiento del cateacuteter o la perforacioacuten de la pared venosa La

infiltracioacuten de soluciones aacutecidas alcalina o hipertoacutenica puede producir necrosis

hiacutestica4

- COLONIZACION DE CATETER se define por un cultivo positivo de punta de cateacuteter

con 15 UFC (Unidad Formadora de Colonias) utilizando la teacutecnica descrita por maki

- CONTAMINACION DE CATETER Presencia de un cultivo semicuantitativo o

cuantitativo con un nuacutemero de UFCml por debajo del nivel considerado como positivo

seguacuten la teacutecnica considerada8

4

- SEPSIS POR CATETER Traduce la respuesta inflamatoria del paciente a la

colonizacioacuten de un cateacuteter Esta puede ser de tipo local o sisteacutemica 9

Cateacuteter umbilical en neonatos

El uso de cateacuteteres umbilicales se utilizan como liacuteneas centrales para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales en la Unidad de Recieacuten Nacidos asiacute como las complicaciones que se presentan

con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea oral concomitante el cateterismo de

los vasos umbilicales es un procedimiento relativamente sencillo raacutepido y de uso comuacuten

en las unidades de cuidado intensivo neonatal10

Los vasos umbilicales son la viacutea de eleccioacuten para el neonato criacuteticamente enfermo La

canalizacioacuten de los cateacuteteres umbilicales es realizada por el facultativo

El cateterismo de la arteria umbilical estaacute indicado cuando se requieren determinaciones

frecuentes de los gases en sangre arterial este procedimiento tambieacuten se utiliza para la

monitorizacioacuten continua de la presioacuten arterial y para realizar exanguinotransfusioacuten

El cateterismo de la vena umbilical estaacute indicado para la monitorizacioacuten de la presioacuten venosa

central acceso inmediato para liacutequidos intravenosos y faacutermacos de emergencia

exanguinotransfusioacuten acceso venoso de largo plazo en recieacuten nacidos de peso

extremadamente bajo y en espera de la canalizacioacuten por enfermeriacutea de un cateacuteter venoso

epicutaacuteneo11

Agentes etioloacutegicos

Entre los agentes etioloacutegicos bacterianos que con mayor frecuencia causan infecciones

asociadas a cateacuteter y que a su vez son los maacutes estudiados se encuentran Gram

positivos como Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus

streptococcus ssp Enterococcus ssp Gram negativos como Escherichia coli Klebsiella

ssp Enterobacter serratia ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son

Candida albicans otras especies de Candidas12

5

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada

por una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

que afecta tambieacuten al depoacutesito de proteiacutenas seacutericas en la superficie del cateacuteter La

adhesioacuten variacutea seguacuten el material del cateacuteter siendo mayor en los de polivinilo o laacutetex

siliconado y menor en los cateacuteteres de poliuretano polietileno o tefloacuten A este primer

paso que es reversible le sigue un proceso de adherencia bacteriana mediante un

sistema de adhesinas a diferentes receptores como son el fibrinoacutegeno o la fibrina

Mientras el Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante

interaccioacuten hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada

por las proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor Una vez colonizado el cateacuteter los

microorganismos forman la llamada biocapa bacteriana mediante una sustancia

polimeacuterica (slime) que protege a las bacterias facilitando su adhesioacuten y disminuyendo

su sensibilidad a los antibioacuteticos favoreciendo la aparicioacuten de resistencias13

La prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos invasivos a los que son sometidos los

recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas infecciones bacterianas La duracioacuten de

la estancia hospitalaria es inversamente proporcional al peso del nacimiento y a la edad

gestacional factores relacionados directamente con infecciones nosocomiales A pesar de

todos los avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean siendo una

importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal14

Factores de riesgo

Los factores de riesgo de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes

dependen del sitio donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter

en los vasos umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso

canalizado15

6

Infeccioacuten en cateacuteter umbilical

El empleo de los cateacuteteres umbilicales en el tratamiento de nintildeos recieacuten nacidos es un

procedimiento comuacuten en el manejo que se hace en ellos en las unidades de cuidados

intensivos neonatales (UCIN) ante problemas que ponen en peligro su vida Los primeros en

usar los vasos umbilicales para alguno de los propoacutesitos mencionados fueron Diamond

(1947) y James(1959)16

A pesar de la aparente facilidad para colocar los cateacuteteres umbilicales el procedimiento no

estaacute exento de complicaciones las maacutes frecuentes son infecciones arritmias cardiacas

vasoespasmo trombosis y embolias vasculares taponamiento cardiaco enterocolitis

necrosante necrosis hepaacutetica e hipertensioacuten de la porta1718 Como factor predisponente se

menciona el tiempo de permanencia cateacuteter en el vaso canalizado por lo que se tiene el

cuidado de retirarlo tan pronto como se logre la estabilizacioacuten del nintildeo y sea posible contar

con otra viacutea es por la relativa facilidad de canalizar estos vasos para obtener en ellos

muestras de sangre para administrar soluciones y medicamentos y para hacer mediciones

vascular central

Se informa una mayor frecuencia de las complicaciones infecciosas que generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo19

Epidemiologia

El indicador de infeccioacuten relacionada con cateacuteter recomendado y utilizado en los principales

estudios de vigilancia de infeccioacuten nosocomial es la BRC Su definicioacuten puede variar

teniendo en cuenta aspectos epidemioloacutegicos que incluyen la bacteriemia primaria (origen

desconocido) o cliacutenicos (comprobacioacuten de la BRC con cultivos de microorganismos iguales

en el cateacuteter y en hemocultivos) La CDC y la JCAHO recomiendan que las tasas de BRC se

expresen en episodios de BRC1000 diacuteas de cateacuteter20

Aunque la incidencia de BRC ha disminuido en los uacuteltimos antildeos a unos 56 episodios1000

diacuteas de cateacuteter posiblemente por mejor disentildeo y calidad de los cateacuteteres el nuacutemero de

7

pacientes con BRC sigue siendo elevado Esto es debido al mayor uso de CVC su elevada

manipulacioacuten a los avances en los meacutetodos de diagnoacutestico microbioloacutegico y a la puesta en

marcha de estaacutendares de sistemas de vigilancia de infeccioacuten nosocomial21

Patogenia

Se considera que la patogeacutenesis de las infecciones relacionadas a cateacuteter es compleja y

multifactorial Las bacterias pueden llegar al torrente sanguiacuteneo por dos viacuteas principales

1048707 Pueden migrar desde la piel en la interfase del cateacuteter hasta colocarse en la superficie externa

de eacuteste

1048707 Pueden ingresar a la luz interna del cateacuteter a traveacutes del conector

La migracioacuten de microorganismos presentes en la piel en el sitio de insercioacuten del cateacuteter con

colonizacioacuten de la punta es la ruta mas comuacuten de infeccioacuten en cateacuteteres de corta

permanencia mientras que los cateacuteteres de larga permanencia la contaminacioacuten del tubo de

cateacuteter contribuye sustancialmente a su colonizacioacuten intraluminal22

Se han reconocido numerosas medidas de prevencioacuten efectivas en la reduccioacuten de las

infecciones pero la ejecucioacuten de estas medidas en la praacutectica parece ser el problema maacutes

relevante existiendo gran diferencia entre la mejor evidencia disponible y la praacutectica cliacutenica

Bases Cliacutenicas

Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter fue descrito por primera vez por Maki y cols

en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa de la punta del cateacuteter El criterio de

positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea de los pacientes con recuentos

inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten mientras que todos los casos que

cursaban con bacteriemia tuvieron recuentos superiores a 15 UFC y con frecuencia las

colonias fueron incontables La especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76 Este meacutetodo por

su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de microbiologiacutea y es la

teacutecnica de referencia23

8

En el estado o condicioacuten con relacioacuten a un cateacuteter ya colocado por la cual el cuerpo o parte

de este ha sido invadido por un agente patoacutegeno que en condiciones favorables se

multiplica y produce efectos dantildeinos Una vez que el microorganismo se ha instalado en el

cateacuteter hay un cierto nuacutemero de condiciones subsiguientes posibles ya sean localizadas o

sisteacutemicas La mejor manera de determinar si el cateacuteter es la causa de la infeccioacuten es hacer

un cultivo cuantitativo de cateacuteteres junto con un cultivo perifeacuterico de sangre Usando un

meacutetodo semicuantitativo para un cultivo de cateacuteter las siguientes definciones son aplicables

al diagnoacutestico de infeccioacuten

A Esteacuteril No hay crecimiento

B Contaminacioacuten lt 15 UFC de la punta del cateacuteter

C Localizada

1 Colonizacioacuten gt 15 UFC de la punta del cateacuteter El organismo se presenta sin siacutentomas

2 Infeccioacuten del lugar de insercioacuten gt 15 UFC en cultivos de la punta del cateacuteter

generalmente con siacutentomas externos de infeccioacuten localizada

D Sisteacutemica Bacteremia relacionada con el cateacuteter gt 15 UFC en cultivos de l apunta del

cateacuteter y en cultivos perifeacutericos de sangre positivos con el mismos organismo sin

identificarse otro sitio de infeccioacuten23

Agentes etioloacutegicos de infecciones en cateacuteter umbilical

La bacteremia es una invasioacuten del torrente sanguiacuteneo por bacterias La bacteremia se

desarrolla como resultado del dantildeo externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio el

tracto digestivo) de las barreras del cuerpo El agente causante de la bacteremia en un 71

es el Staphylococcus aureus Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras

puede ser las heridas cateacuteteres de la vena las viacuteas aeacutereas los pulmones el tracto digestivo

etc24

Staphylococcus aureus9

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

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10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

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11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

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12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

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20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

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25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 2: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Existen diferentes tipos de cateacuteteres venosos centrales de acuerdo al tiempo de uso corta

duracioacuten larga duracioacuten nuacutemero de luacutemenes y uso terapeacuteutico por lo cual se hace

necesario conocer sus ventajas y riesgos como sus indicaciones manejo y mantencioacuten4

Seguacuten su tiempo de duracioacuten

Corta duracioacuten

- Cateacuteteres venosos perifeacutericos generalmente en miembros superiores especialmente en

manos y antebrazos

- Cateacuteteres arteriales perifeacutericos usualmente en arteria radial o braquial Tambieacuten tibia

posterior o femoral

- Cateacuteteres venosos centrales yugular interna subclavia o femoral-

- Cateacuteteres arteriales pulmonares a traveacutes de un introductor de tefloacuten en una vena central

(subclavia yugular o femoral)

- Cateacuteteres umbilicales se insertan dentro de la vena o la arteria umbilical5

Larga duracioacuten

- Cateacuteteres venosos de insercioacuten perifeacuterica (percutanea) generalmente en la vena basiacutelica

cefaacutelica o venas de miembros inferiores Entran en la vena cava superior o inferior

- Cateacuteteres venosos centrales tunelizados (semiemplantables) se implantan quiruacutergicamente

en subclavia yugular interna o femoral-

- Cateacuteteres totalmente implantados tunelizados a traveacutes de la piel tienen un reservorio

subcutaacuteneo al que se accede por puncioacuten5

Seguacuten su material

- Cloruro de polivinilo

- Poliuretano

2

- Silicona

- Tefloacuten6

Los CVC de Silicoacuten tienen un menor porcentaje de colonizacioacuten 38 en comparacioacuten con

los de poliuretano con 627

RETIRO

Los cateacuteter se retiran de acuerdo ha

CATEacuteTER VENOSO UMBILICAL

Exanguineotransfusioacuten y recambio parcial cuando haya terminado el procedimiento 30

a 90 minutos

Inmediatamente posterior al cese de la indicacioacuten

CATEacuteTER ARTERIAL UMBILICAL

Recieacuten nacido con requerimientos bajo 40 y puncioacuten arterial sin problemas

Retiro de ventilacioacuten mecaacutenica

Evidencia cliacutenica o confirmacioacuten bacterioloacutegica de infeccioacuten del cateacuteter

Cateacuteter arterial ubicado en zona peligrosa de acuerdo a Rx toracoabdominal4

Las Infecciones del Torrente Sanguiacuteneo son una de las complicaciones mas graves que

puede ocurrir en el hospital si bien su incidencia no es tan elevada su alta LETALIDAD

determina la prioridad que se debe tener en las medidas tendientes a su prevencioacuten

DEFINICION DE LOS TIPOS DE CATETERIZACION

- CATETERIZACIOacuteN VASCULAR es la canalizacioacuten de un vaso sanguiacuteneo venoso o

arterial realizada por medio de un cateacuteter a traveacutes de una puncioacuten o incisioacuten

- CATETERIZACIOacuteN TEMPORAL es aquella cateterizacioacuten que tiene una duracioacuten

miacutenima ya que se introduce y se retira el cateacuteter en el mismo procedimiento

3

- CATETERIZACIOacuteN PERMANENTE es aquella cateterizacioacuten en que se introduce el

cateacuteter en el vaso por un tiempo mayor que la duracioacuten del procedimiento

CONCEPTO DE SINTOMAS DE UN NEONATO CON CATETER INFECTADO

- BACTEREMIA POR CATETER Aislamiento de bacterias viables en la sangre con

cultivo de cateacuteter positivo sin que se identifique otro foco originario

Primaria es aquella en que no existe otro foco de infeccioacuten Se consideran

asociadas a los equipos de infusioacuten endovenosa

Secundaria es aquella en que existe foco infeccioso en otro sitio (pulmonar

urinario piel gastrointestinal) por el mismo microorganismo

- FLEBITIS es la inflamacioacuten de la iacutentima de la vena puede evolucionar de compromiso

leve a severo con tromboflebitis emboliacutea pulmonar y bacteremia Este compromiso se

inicia con sensibilidad local ligero dolor eritema calor local ligera induracioacuten y cordoacuten

venoso palpable

- INFILTRACIOacuteN es la extravasacioacuten de fluidos endovenosos al espacio intersticial a

causa del desplazamiento del cateacuteter o la perforacioacuten de la pared venosa La

infiltracioacuten de soluciones aacutecidas alcalina o hipertoacutenica puede producir necrosis

hiacutestica4

- COLONIZACION DE CATETER se define por un cultivo positivo de punta de cateacuteter

con 15 UFC (Unidad Formadora de Colonias) utilizando la teacutecnica descrita por maki

- CONTAMINACION DE CATETER Presencia de un cultivo semicuantitativo o

cuantitativo con un nuacutemero de UFCml por debajo del nivel considerado como positivo

seguacuten la teacutecnica considerada8

4

- SEPSIS POR CATETER Traduce la respuesta inflamatoria del paciente a la

colonizacioacuten de un cateacuteter Esta puede ser de tipo local o sisteacutemica 9

Cateacuteter umbilical en neonatos

El uso de cateacuteteres umbilicales se utilizan como liacuteneas centrales para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales en la Unidad de Recieacuten Nacidos asiacute como las complicaciones que se presentan

con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea oral concomitante el cateterismo de

los vasos umbilicales es un procedimiento relativamente sencillo raacutepido y de uso comuacuten

en las unidades de cuidado intensivo neonatal10

Los vasos umbilicales son la viacutea de eleccioacuten para el neonato criacuteticamente enfermo La

canalizacioacuten de los cateacuteteres umbilicales es realizada por el facultativo

El cateterismo de la arteria umbilical estaacute indicado cuando se requieren determinaciones

frecuentes de los gases en sangre arterial este procedimiento tambieacuten se utiliza para la

monitorizacioacuten continua de la presioacuten arterial y para realizar exanguinotransfusioacuten

El cateterismo de la vena umbilical estaacute indicado para la monitorizacioacuten de la presioacuten venosa

central acceso inmediato para liacutequidos intravenosos y faacutermacos de emergencia

exanguinotransfusioacuten acceso venoso de largo plazo en recieacuten nacidos de peso

extremadamente bajo y en espera de la canalizacioacuten por enfermeriacutea de un cateacuteter venoso

epicutaacuteneo11

Agentes etioloacutegicos

Entre los agentes etioloacutegicos bacterianos que con mayor frecuencia causan infecciones

asociadas a cateacuteter y que a su vez son los maacutes estudiados se encuentran Gram

positivos como Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus

streptococcus ssp Enterococcus ssp Gram negativos como Escherichia coli Klebsiella

ssp Enterobacter serratia ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son

Candida albicans otras especies de Candidas12

5

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada

por una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

que afecta tambieacuten al depoacutesito de proteiacutenas seacutericas en la superficie del cateacuteter La

adhesioacuten variacutea seguacuten el material del cateacuteter siendo mayor en los de polivinilo o laacutetex

siliconado y menor en los cateacuteteres de poliuretano polietileno o tefloacuten A este primer

paso que es reversible le sigue un proceso de adherencia bacteriana mediante un

sistema de adhesinas a diferentes receptores como son el fibrinoacutegeno o la fibrina

Mientras el Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante

interaccioacuten hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada

por las proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor Una vez colonizado el cateacuteter los

microorganismos forman la llamada biocapa bacteriana mediante una sustancia

polimeacuterica (slime) que protege a las bacterias facilitando su adhesioacuten y disminuyendo

su sensibilidad a los antibioacuteticos favoreciendo la aparicioacuten de resistencias13

La prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos invasivos a los que son sometidos los

recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas infecciones bacterianas La duracioacuten de

la estancia hospitalaria es inversamente proporcional al peso del nacimiento y a la edad

gestacional factores relacionados directamente con infecciones nosocomiales A pesar de

todos los avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean siendo una

importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal14

Factores de riesgo

Los factores de riesgo de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes

dependen del sitio donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter

en los vasos umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso

canalizado15

6

Infeccioacuten en cateacuteter umbilical

El empleo de los cateacuteteres umbilicales en el tratamiento de nintildeos recieacuten nacidos es un

procedimiento comuacuten en el manejo que se hace en ellos en las unidades de cuidados

intensivos neonatales (UCIN) ante problemas que ponen en peligro su vida Los primeros en

usar los vasos umbilicales para alguno de los propoacutesitos mencionados fueron Diamond

(1947) y James(1959)16

A pesar de la aparente facilidad para colocar los cateacuteteres umbilicales el procedimiento no

estaacute exento de complicaciones las maacutes frecuentes son infecciones arritmias cardiacas

vasoespasmo trombosis y embolias vasculares taponamiento cardiaco enterocolitis

necrosante necrosis hepaacutetica e hipertensioacuten de la porta1718 Como factor predisponente se

menciona el tiempo de permanencia cateacuteter en el vaso canalizado por lo que se tiene el

cuidado de retirarlo tan pronto como se logre la estabilizacioacuten del nintildeo y sea posible contar

con otra viacutea es por la relativa facilidad de canalizar estos vasos para obtener en ellos

muestras de sangre para administrar soluciones y medicamentos y para hacer mediciones

vascular central

Se informa una mayor frecuencia de las complicaciones infecciosas que generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo19

Epidemiologia

El indicador de infeccioacuten relacionada con cateacuteter recomendado y utilizado en los principales

estudios de vigilancia de infeccioacuten nosocomial es la BRC Su definicioacuten puede variar

teniendo en cuenta aspectos epidemioloacutegicos que incluyen la bacteriemia primaria (origen

desconocido) o cliacutenicos (comprobacioacuten de la BRC con cultivos de microorganismos iguales

en el cateacuteter y en hemocultivos) La CDC y la JCAHO recomiendan que las tasas de BRC se

expresen en episodios de BRC1000 diacuteas de cateacuteter20

Aunque la incidencia de BRC ha disminuido en los uacuteltimos antildeos a unos 56 episodios1000

diacuteas de cateacuteter posiblemente por mejor disentildeo y calidad de los cateacuteteres el nuacutemero de

7

pacientes con BRC sigue siendo elevado Esto es debido al mayor uso de CVC su elevada

manipulacioacuten a los avances en los meacutetodos de diagnoacutestico microbioloacutegico y a la puesta en

marcha de estaacutendares de sistemas de vigilancia de infeccioacuten nosocomial21

Patogenia

Se considera que la patogeacutenesis de las infecciones relacionadas a cateacuteter es compleja y

multifactorial Las bacterias pueden llegar al torrente sanguiacuteneo por dos viacuteas principales

1048707 Pueden migrar desde la piel en la interfase del cateacuteter hasta colocarse en la superficie externa

de eacuteste

1048707 Pueden ingresar a la luz interna del cateacuteter a traveacutes del conector

La migracioacuten de microorganismos presentes en la piel en el sitio de insercioacuten del cateacuteter con

colonizacioacuten de la punta es la ruta mas comuacuten de infeccioacuten en cateacuteteres de corta

permanencia mientras que los cateacuteteres de larga permanencia la contaminacioacuten del tubo de

cateacuteter contribuye sustancialmente a su colonizacioacuten intraluminal22

Se han reconocido numerosas medidas de prevencioacuten efectivas en la reduccioacuten de las

infecciones pero la ejecucioacuten de estas medidas en la praacutectica parece ser el problema maacutes

relevante existiendo gran diferencia entre la mejor evidencia disponible y la praacutectica cliacutenica

Bases Cliacutenicas

Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter fue descrito por primera vez por Maki y cols

en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa de la punta del cateacuteter El criterio de

positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea de los pacientes con recuentos

inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten mientras que todos los casos que

cursaban con bacteriemia tuvieron recuentos superiores a 15 UFC y con frecuencia las

colonias fueron incontables La especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76 Este meacutetodo por

su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de microbiologiacutea y es la

teacutecnica de referencia23

8

En el estado o condicioacuten con relacioacuten a un cateacuteter ya colocado por la cual el cuerpo o parte

de este ha sido invadido por un agente patoacutegeno que en condiciones favorables se

multiplica y produce efectos dantildeinos Una vez que el microorganismo se ha instalado en el

cateacuteter hay un cierto nuacutemero de condiciones subsiguientes posibles ya sean localizadas o

sisteacutemicas La mejor manera de determinar si el cateacuteter es la causa de la infeccioacuten es hacer

un cultivo cuantitativo de cateacuteteres junto con un cultivo perifeacuterico de sangre Usando un

meacutetodo semicuantitativo para un cultivo de cateacuteter las siguientes definciones son aplicables

al diagnoacutestico de infeccioacuten

A Esteacuteril No hay crecimiento

B Contaminacioacuten lt 15 UFC de la punta del cateacuteter

C Localizada

1 Colonizacioacuten gt 15 UFC de la punta del cateacuteter El organismo se presenta sin siacutentomas

2 Infeccioacuten del lugar de insercioacuten gt 15 UFC en cultivos de la punta del cateacuteter

generalmente con siacutentomas externos de infeccioacuten localizada

D Sisteacutemica Bacteremia relacionada con el cateacuteter gt 15 UFC en cultivos de l apunta del

cateacuteter y en cultivos perifeacutericos de sangre positivos con el mismos organismo sin

identificarse otro sitio de infeccioacuten23

Agentes etioloacutegicos de infecciones en cateacuteter umbilical

La bacteremia es una invasioacuten del torrente sanguiacuteneo por bacterias La bacteremia se

desarrolla como resultado del dantildeo externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio el

tracto digestivo) de las barreras del cuerpo El agente causante de la bacteremia en un 71

es el Staphylococcus aureus Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras

puede ser las heridas cateacuteteres de la vena las viacuteas aeacutereas los pulmones el tracto digestivo

etc24

Staphylococcus aureus9

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

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10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

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11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

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37

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18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

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19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

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22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

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38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

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25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

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26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 3: TESIS - FIN 14-JUNIO.

- Silicona

- Tefloacuten6

Los CVC de Silicoacuten tienen un menor porcentaje de colonizacioacuten 38 en comparacioacuten con

los de poliuretano con 627

RETIRO

Los cateacuteter se retiran de acuerdo ha

CATEacuteTER VENOSO UMBILICAL

Exanguineotransfusioacuten y recambio parcial cuando haya terminado el procedimiento 30

a 90 minutos

Inmediatamente posterior al cese de la indicacioacuten

CATEacuteTER ARTERIAL UMBILICAL

Recieacuten nacido con requerimientos bajo 40 y puncioacuten arterial sin problemas

Retiro de ventilacioacuten mecaacutenica

Evidencia cliacutenica o confirmacioacuten bacterioloacutegica de infeccioacuten del cateacuteter

Cateacuteter arterial ubicado en zona peligrosa de acuerdo a Rx toracoabdominal4

Las Infecciones del Torrente Sanguiacuteneo son una de las complicaciones mas graves que

puede ocurrir en el hospital si bien su incidencia no es tan elevada su alta LETALIDAD

determina la prioridad que se debe tener en las medidas tendientes a su prevencioacuten

DEFINICION DE LOS TIPOS DE CATETERIZACION

- CATETERIZACIOacuteN VASCULAR es la canalizacioacuten de un vaso sanguiacuteneo venoso o

arterial realizada por medio de un cateacuteter a traveacutes de una puncioacuten o incisioacuten

- CATETERIZACIOacuteN TEMPORAL es aquella cateterizacioacuten que tiene una duracioacuten

miacutenima ya que se introduce y se retira el cateacuteter en el mismo procedimiento

3

- CATETERIZACIOacuteN PERMANENTE es aquella cateterizacioacuten en que se introduce el

cateacuteter en el vaso por un tiempo mayor que la duracioacuten del procedimiento

CONCEPTO DE SINTOMAS DE UN NEONATO CON CATETER INFECTADO

- BACTEREMIA POR CATETER Aislamiento de bacterias viables en la sangre con

cultivo de cateacuteter positivo sin que se identifique otro foco originario

Primaria es aquella en que no existe otro foco de infeccioacuten Se consideran

asociadas a los equipos de infusioacuten endovenosa

Secundaria es aquella en que existe foco infeccioso en otro sitio (pulmonar

urinario piel gastrointestinal) por el mismo microorganismo

- FLEBITIS es la inflamacioacuten de la iacutentima de la vena puede evolucionar de compromiso

leve a severo con tromboflebitis emboliacutea pulmonar y bacteremia Este compromiso se

inicia con sensibilidad local ligero dolor eritema calor local ligera induracioacuten y cordoacuten

venoso palpable

- INFILTRACIOacuteN es la extravasacioacuten de fluidos endovenosos al espacio intersticial a

causa del desplazamiento del cateacuteter o la perforacioacuten de la pared venosa La

infiltracioacuten de soluciones aacutecidas alcalina o hipertoacutenica puede producir necrosis

hiacutestica4

- COLONIZACION DE CATETER se define por un cultivo positivo de punta de cateacuteter

con 15 UFC (Unidad Formadora de Colonias) utilizando la teacutecnica descrita por maki

- CONTAMINACION DE CATETER Presencia de un cultivo semicuantitativo o

cuantitativo con un nuacutemero de UFCml por debajo del nivel considerado como positivo

seguacuten la teacutecnica considerada8

4

- SEPSIS POR CATETER Traduce la respuesta inflamatoria del paciente a la

colonizacioacuten de un cateacuteter Esta puede ser de tipo local o sisteacutemica 9

Cateacuteter umbilical en neonatos

El uso de cateacuteteres umbilicales se utilizan como liacuteneas centrales para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales en la Unidad de Recieacuten Nacidos asiacute como las complicaciones que se presentan

con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea oral concomitante el cateterismo de

los vasos umbilicales es un procedimiento relativamente sencillo raacutepido y de uso comuacuten

en las unidades de cuidado intensivo neonatal10

Los vasos umbilicales son la viacutea de eleccioacuten para el neonato criacuteticamente enfermo La

canalizacioacuten de los cateacuteteres umbilicales es realizada por el facultativo

El cateterismo de la arteria umbilical estaacute indicado cuando se requieren determinaciones

frecuentes de los gases en sangre arterial este procedimiento tambieacuten se utiliza para la

monitorizacioacuten continua de la presioacuten arterial y para realizar exanguinotransfusioacuten

El cateterismo de la vena umbilical estaacute indicado para la monitorizacioacuten de la presioacuten venosa

central acceso inmediato para liacutequidos intravenosos y faacutermacos de emergencia

exanguinotransfusioacuten acceso venoso de largo plazo en recieacuten nacidos de peso

extremadamente bajo y en espera de la canalizacioacuten por enfermeriacutea de un cateacuteter venoso

epicutaacuteneo11

Agentes etioloacutegicos

Entre los agentes etioloacutegicos bacterianos que con mayor frecuencia causan infecciones

asociadas a cateacuteter y que a su vez son los maacutes estudiados se encuentran Gram

positivos como Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus

streptococcus ssp Enterococcus ssp Gram negativos como Escherichia coli Klebsiella

ssp Enterobacter serratia ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son

Candida albicans otras especies de Candidas12

5

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada

por una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

que afecta tambieacuten al depoacutesito de proteiacutenas seacutericas en la superficie del cateacuteter La

adhesioacuten variacutea seguacuten el material del cateacuteter siendo mayor en los de polivinilo o laacutetex

siliconado y menor en los cateacuteteres de poliuretano polietileno o tefloacuten A este primer

paso que es reversible le sigue un proceso de adherencia bacteriana mediante un

sistema de adhesinas a diferentes receptores como son el fibrinoacutegeno o la fibrina

Mientras el Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante

interaccioacuten hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada

por las proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor Una vez colonizado el cateacuteter los

microorganismos forman la llamada biocapa bacteriana mediante una sustancia

polimeacuterica (slime) que protege a las bacterias facilitando su adhesioacuten y disminuyendo

su sensibilidad a los antibioacuteticos favoreciendo la aparicioacuten de resistencias13

La prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos invasivos a los que son sometidos los

recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas infecciones bacterianas La duracioacuten de

la estancia hospitalaria es inversamente proporcional al peso del nacimiento y a la edad

gestacional factores relacionados directamente con infecciones nosocomiales A pesar de

todos los avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean siendo una

importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal14

Factores de riesgo

Los factores de riesgo de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes

dependen del sitio donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter

en los vasos umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso

canalizado15

6

Infeccioacuten en cateacuteter umbilical

El empleo de los cateacuteteres umbilicales en el tratamiento de nintildeos recieacuten nacidos es un

procedimiento comuacuten en el manejo que se hace en ellos en las unidades de cuidados

intensivos neonatales (UCIN) ante problemas que ponen en peligro su vida Los primeros en

usar los vasos umbilicales para alguno de los propoacutesitos mencionados fueron Diamond

(1947) y James(1959)16

A pesar de la aparente facilidad para colocar los cateacuteteres umbilicales el procedimiento no

estaacute exento de complicaciones las maacutes frecuentes son infecciones arritmias cardiacas

vasoespasmo trombosis y embolias vasculares taponamiento cardiaco enterocolitis

necrosante necrosis hepaacutetica e hipertensioacuten de la porta1718 Como factor predisponente se

menciona el tiempo de permanencia cateacuteter en el vaso canalizado por lo que se tiene el

cuidado de retirarlo tan pronto como se logre la estabilizacioacuten del nintildeo y sea posible contar

con otra viacutea es por la relativa facilidad de canalizar estos vasos para obtener en ellos

muestras de sangre para administrar soluciones y medicamentos y para hacer mediciones

vascular central

Se informa una mayor frecuencia de las complicaciones infecciosas que generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo19

Epidemiologia

El indicador de infeccioacuten relacionada con cateacuteter recomendado y utilizado en los principales

estudios de vigilancia de infeccioacuten nosocomial es la BRC Su definicioacuten puede variar

teniendo en cuenta aspectos epidemioloacutegicos que incluyen la bacteriemia primaria (origen

desconocido) o cliacutenicos (comprobacioacuten de la BRC con cultivos de microorganismos iguales

en el cateacuteter y en hemocultivos) La CDC y la JCAHO recomiendan que las tasas de BRC se

expresen en episodios de BRC1000 diacuteas de cateacuteter20

Aunque la incidencia de BRC ha disminuido en los uacuteltimos antildeos a unos 56 episodios1000

diacuteas de cateacuteter posiblemente por mejor disentildeo y calidad de los cateacuteteres el nuacutemero de

7

pacientes con BRC sigue siendo elevado Esto es debido al mayor uso de CVC su elevada

manipulacioacuten a los avances en los meacutetodos de diagnoacutestico microbioloacutegico y a la puesta en

marcha de estaacutendares de sistemas de vigilancia de infeccioacuten nosocomial21

Patogenia

Se considera que la patogeacutenesis de las infecciones relacionadas a cateacuteter es compleja y

multifactorial Las bacterias pueden llegar al torrente sanguiacuteneo por dos viacuteas principales

1048707 Pueden migrar desde la piel en la interfase del cateacuteter hasta colocarse en la superficie externa

de eacuteste

1048707 Pueden ingresar a la luz interna del cateacuteter a traveacutes del conector

La migracioacuten de microorganismos presentes en la piel en el sitio de insercioacuten del cateacuteter con

colonizacioacuten de la punta es la ruta mas comuacuten de infeccioacuten en cateacuteteres de corta

permanencia mientras que los cateacuteteres de larga permanencia la contaminacioacuten del tubo de

cateacuteter contribuye sustancialmente a su colonizacioacuten intraluminal22

Se han reconocido numerosas medidas de prevencioacuten efectivas en la reduccioacuten de las

infecciones pero la ejecucioacuten de estas medidas en la praacutectica parece ser el problema maacutes

relevante existiendo gran diferencia entre la mejor evidencia disponible y la praacutectica cliacutenica

Bases Cliacutenicas

Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter fue descrito por primera vez por Maki y cols

en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa de la punta del cateacuteter El criterio de

positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea de los pacientes con recuentos

inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten mientras que todos los casos que

cursaban con bacteriemia tuvieron recuentos superiores a 15 UFC y con frecuencia las

colonias fueron incontables La especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76 Este meacutetodo por

su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de microbiologiacutea y es la

teacutecnica de referencia23

8

En el estado o condicioacuten con relacioacuten a un cateacuteter ya colocado por la cual el cuerpo o parte

de este ha sido invadido por un agente patoacutegeno que en condiciones favorables se

multiplica y produce efectos dantildeinos Una vez que el microorganismo se ha instalado en el

cateacuteter hay un cierto nuacutemero de condiciones subsiguientes posibles ya sean localizadas o

sisteacutemicas La mejor manera de determinar si el cateacuteter es la causa de la infeccioacuten es hacer

un cultivo cuantitativo de cateacuteteres junto con un cultivo perifeacuterico de sangre Usando un

meacutetodo semicuantitativo para un cultivo de cateacuteter las siguientes definciones son aplicables

al diagnoacutestico de infeccioacuten

A Esteacuteril No hay crecimiento

B Contaminacioacuten lt 15 UFC de la punta del cateacuteter

C Localizada

1 Colonizacioacuten gt 15 UFC de la punta del cateacuteter El organismo se presenta sin siacutentomas

2 Infeccioacuten del lugar de insercioacuten gt 15 UFC en cultivos de la punta del cateacuteter

generalmente con siacutentomas externos de infeccioacuten localizada

D Sisteacutemica Bacteremia relacionada con el cateacuteter gt 15 UFC en cultivos de l apunta del

cateacuteter y en cultivos perifeacutericos de sangre positivos con el mismos organismo sin

identificarse otro sitio de infeccioacuten23

Agentes etioloacutegicos de infecciones en cateacuteter umbilical

La bacteremia es una invasioacuten del torrente sanguiacuteneo por bacterias La bacteremia se

desarrolla como resultado del dantildeo externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio el

tracto digestivo) de las barreras del cuerpo El agente causante de la bacteremia en un 71

es el Staphylococcus aureus Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras

puede ser las heridas cateacuteteres de la vena las viacuteas aeacutereas los pulmones el tracto digestivo

etc24

Staphylococcus aureus9

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

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20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

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22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

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23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 4: TESIS - FIN 14-JUNIO.

- CATETERIZACIOacuteN PERMANENTE es aquella cateterizacioacuten en que se introduce el

cateacuteter en el vaso por un tiempo mayor que la duracioacuten del procedimiento

CONCEPTO DE SINTOMAS DE UN NEONATO CON CATETER INFECTADO

- BACTEREMIA POR CATETER Aislamiento de bacterias viables en la sangre con

cultivo de cateacuteter positivo sin que se identifique otro foco originario

Primaria es aquella en que no existe otro foco de infeccioacuten Se consideran

asociadas a los equipos de infusioacuten endovenosa

Secundaria es aquella en que existe foco infeccioso en otro sitio (pulmonar

urinario piel gastrointestinal) por el mismo microorganismo

- FLEBITIS es la inflamacioacuten de la iacutentima de la vena puede evolucionar de compromiso

leve a severo con tromboflebitis emboliacutea pulmonar y bacteremia Este compromiso se

inicia con sensibilidad local ligero dolor eritema calor local ligera induracioacuten y cordoacuten

venoso palpable

- INFILTRACIOacuteN es la extravasacioacuten de fluidos endovenosos al espacio intersticial a

causa del desplazamiento del cateacuteter o la perforacioacuten de la pared venosa La

infiltracioacuten de soluciones aacutecidas alcalina o hipertoacutenica puede producir necrosis

hiacutestica4

- COLONIZACION DE CATETER se define por un cultivo positivo de punta de cateacuteter

con 15 UFC (Unidad Formadora de Colonias) utilizando la teacutecnica descrita por maki

- CONTAMINACION DE CATETER Presencia de un cultivo semicuantitativo o

cuantitativo con un nuacutemero de UFCml por debajo del nivel considerado como positivo

seguacuten la teacutecnica considerada8

4

- SEPSIS POR CATETER Traduce la respuesta inflamatoria del paciente a la

colonizacioacuten de un cateacuteter Esta puede ser de tipo local o sisteacutemica 9

Cateacuteter umbilical en neonatos

El uso de cateacuteteres umbilicales se utilizan como liacuteneas centrales para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales en la Unidad de Recieacuten Nacidos asiacute como las complicaciones que se presentan

con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea oral concomitante el cateterismo de

los vasos umbilicales es un procedimiento relativamente sencillo raacutepido y de uso comuacuten

en las unidades de cuidado intensivo neonatal10

Los vasos umbilicales son la viacutea de eleccioacuten para el neonato criacuteticamente enfermo La

canalizacioacuten de los cateacuteteres umbilicales es realizada por el facultativo

El cateterismo de la arteria umbilical estaacute indicado cuando se requieren determinaciones

frecuentes de los gases en sangre arterial este procedimiento tambieacuten se utiliza para la

monitorizacioacuten continua de la presioacuten arterial y para realizar exanguinotransfusioacuten

El cateterismo de la vena umbilical estaacute indicado para la monitorizacioacuten de la presioacuten venosa

central acceso inmediato para liacutequidos intravenosos y faacutermacos de emergencia

exanguinotransfusioacuten acceso venoso de largo plazo en recieacuten nacidos de peso

extremadamente bajo y en espera de la canalizacioacuten por enfermeriacutea de un cateacuteter venoso

epicutaacuteneo11

Agentes etioloacutegicos

Entre los agentes etioloacutegicos bacterianos que con mayor frecuencia causan infecciones

asociadas a cateacuteter y que a su vez son los maacutes estudiados se encuentran Gram

positivos como Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus

streptococcus ssp Enterococcus ssp Gram negativos como Escherichia coli Klebsiella

ssp Enterobacter serratia ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son

Candida albicans otras especies de Candidas12

5

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada

por una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

que afecta tambieacuten al depoacutesito de proteiacutenas seacutericas en la superficie del cateacuteter La

adhesioacuten variacutea seguacuten el material del cateacuteter siendo mayor en los de polivinilo o laacutetex

siliconado y menor en los cateacuteteres de poliuretano polietileno o tefloacuten A este primer

paso que es reversible le sigue un proceso de adherencia bacteriana mediante un

sistema de adhesinas a diferentes receptores como son el fibrinoacutegeno o la fibrina

Mientras el Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante

interaccioacuten hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada

por las proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor Una vez colonizado el cateacuteter los

microorganismos forman la llamada biocapa bacteriana mediante una sustancia

polimeacuterica (slime) que protege a las bacterias facilitando su adhesioacuten y disminuyendo

su sensibilidad a los antibioacuteticos favoreciendo la aparicioacuten de resistencias13

La prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos invasivos a los que son sometidos los

recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas infecciones bacterianas La duracioacuten de

la estancia hospitalaria es inversamente proporcional al peso del nacimiento y a la edad

gestacional factores relacionados directamente con infecciones nosocomiales A pesar de

todos los avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean siendo una

importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal14

Factores de riesgo

Los factores de riesgo de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes

dependen del sitio donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter

en los vasos umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso

canalizado15

6

Infeccioacuten en cateacuteter umbilical

El empleo de los cateacuteteres umbilicales en el tratamiento de nintildeos recieacuten nacidos es un

procedimiento comuacuten en el manejo que se hace en ellos en las unidades de cuidados

intensivos neonatales (UCIN) ante problemas que ponen en peligro su vida Los primeros en

usar los vasos umbilicales para alguno de los propoacutesitos mencionados fueron Diamond

(1947) y James(1959)16

A pesar de la aparente facilidad para colocar los cateacuteteres umbilicales el procedimiento no

estaacute exento de complicaciones las maacutes frecuentes son infecciones arritmias cardiacas

vasoespasmo trombosis y embolias vasculares taponamiento cardiaco enterocolitis

necrosante necrosis hepaacutetica e hipertensioacuten de la porta1718 Como factor predisponente se

menciona el tiempo de permanencia cateacuteter en el vaso canalizado por lo que se tiene el

cuidado de retirarlo tan pronto como se logre la estabilizacioacuten del nintildeo y sea posible contar

con otra viacutea es por la relativa facilidad de canalizar estos vasos para obtener en ellos

muestras de sangre para administrar soluciones y medicamentos y para hacer mediciones

vascular central

Se informa una mayor frecuencia de las complicaciones infecciosas que generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo19

Epidemiologia

El indicador de infeccioacuten relacionada con cateacuteter recomendado y utilizado en los principales

estudios de vigilancia de infeccioacuten nosocomial es la BRC Su definicioacuten puede variar

teniendo en cuenta aspectos epidemioloacutegicos que incluyen la bacteriemia primaria (origen

desconocido) o cliacutenicos (comprobacioacuten de la BRC con cultivos de microorganismos iguales

en el cateacuteter y en hemocultivos) La CDC y la JCAHO recomiendan que las tasas de BRC se

expresen en episodios de BRC1000 diacuteas de cateacuteter20

Aunque la incidencia de BRC ha disminuido en los uacuteltimos antildeos a unos 56 episodios1000

diacuteas de cateacuteter posiblemente por mejor disentildeo y calidad de los cateacuteteres el nuacutemero de

7

pacientes con BRC sigue siendo elevado Esto es debido al mayor uso de CVC su elevada

manipulacioacuten a los avances en los meacutetodos de diagnoacutestico microbioloacutegico y a la puesta en

marcha de estaacutendares de sistemas de vigilancia de infeccioacuten nosocomial21

Patogenia

Se considera que la patogeacutenesis de las infecciones relacionadas a cateacuteter es compleja y

multifactorial Las bacterias pueden llegar al torrente sanguiacuteneo por dos viacuteas principales

1048707 Pueden migrar desde la piel en la interfase del cateacuteter hasta colocarse en la superficie externa

de eacuteste

1048707 Pueden ingresar a la luz interna del cateacuteter a traveacutes del conector

La migracioacuten de microorganismos presentes en la piel en el sitio de insercioacuten del cateacuteter con

colonizacioacuten de la punta es la ruta mas comuacuten de infeccioacuten en cateacuteteres de corta

permanencia mientras que los cateacuteteres de larga permanencia la contaminacioacuten del tubo de

cateacuteter contribuye sustancialmente a su colonizacioacuten intraluminal22

Se han reconocido numerosas medidas de prevencioacuten efectivas en la reduccioacuten de las

infecciones pero la ejecucioacuten de estas medidas en la praacutectica parece ser el problema maacutes

relevante existiendo gran diferencia entre la mejor evidencia disponible y la praacutectica cliacutenica

Bases Cliacutenicas

Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter fue descrito por primera vez por Maki y cols

en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa de la punta del cateacuteter El criterio de

positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea de los pacientes con recuentos

inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten mientras que todos los casos que

cursaban con bacteriemia tuvieron recuentos superiores a 15 UFC y con frecuencia las

colonias fueron incontables La especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76 Este meacutetodo por

su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de microbiologiacutea y es la

teacutecnica de referencia23

8

En el estado o condicioacuten con relacioacuten a un cateacuteter ya colocado por la cual el cuerpo o parte

de este ha sido invadido por un agente patoacutegeno que en condiciones favorables se

multiplica y produce efectos dantildeinos Una vez que el microorganismo se ha instalado en el

cateacuteter hay un cierto nuacutemero de condiciones subsiguientes posibles ya sean localizadas o

sisteacutemicas La mejor manera de determinar si el cateacuteter es la causa de la infeccioacuten es hacer

un cultivo cuantitativo de cateacuteteres junto con un cultivo perifeacuterico de sangre Usando un

meacutetodo semicuantitativo para un cultivo de cateacuteter las siguientes definciones son aplicables

al diagnoacutestico de infeccioacuten

A Esteacuteril No hay crecimiento

B Contaminacioacuten lt 15 UFC de la punta del cateacuteter

C Localizada

1 Colonizacioacuten gt 15 UFC de la punta del cateacuteter El organismo se presenta sin siacutentomas

2 Infeccioacuten del lugar de insercioacuten gt 15 UFC en cultivos de la punta del cateacuteter

generalmente con siacutentomas externos de infeccioacuten localizada

D Sisteacutemica Bacteremia relacionada con el cateacuteter gt 15 UFC en cultivos de l apunta del

cateacuteter y en cultivos perifeacutericos de sangre positivos con el mismos organismo sin

identificarse otro sitio de infeccioacuten23

Agentes etioloacutegicos de infecciones en cateacuteter umbilical

La bacteremia es una invasioacuten del torrente sanguiacuteneo por bacterias La bacteremia se

desarrolla como resultado del dantildeo externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio el

tracto digestivo) de las barreras del cuerpo El agente causante de la bacteremia en un 71

es el Staphylococcus aureus Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras

puede ser las heridas cateacuteteres de la vena las viacuteas aeacutereas los pulmones el tracto digestivo

etc24

Staphylococcus aureus9

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

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10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

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11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

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12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

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19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

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umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

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498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

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25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

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26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

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el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

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28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 5: TESIS - FIN 14-JUNIO.

- SEPSIS POR CATETER Traduce la respuesta inflamatoria del paciente a la

colonizacioacuten de un cateacuteter Esta puede ser de tipo local o sisteacutemica 9

Cateacuteter umbilical en neonatos

El uso de cateacuteteres umbilicales se utilizan como liacuteneas centrales para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales en la Unidad de Recieacuten Nacidos asiacute como las complicaciones que se presentan

con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea oral concomitante el cateterismo de

los vasos umbilicales es un procedimiento relativamente sencillo raacutepido y de uso comuacuten

en las unidades de cuidado intensivo neonatal10

Los vasos umbilicales son la viacutea de eleccioacuten para el neonato criacuteticamente enfermo La

canalizacioacuten de los cateacuteteres umbilicales es realizada por el facultativo

El cateterismo de la arteria umbilical estaacute indicado cuando se requieren determinaciones

frecuentes de los gases en sangre arterial este procedimiento tambieacuten se utiliza para la

monitorizacioacuten continua de la presioacuten arterial y para realizar exanguinotransfusioacuten

El cateterismo de la vena umbilical estaacute indicado para la monitorizacioacuten de la presioacuten venosa

central acceso inmediato para liacutequidos intravenosos y faacutermacos de emergencia

exanguinotransfusioacuten acceso venoso de largo plazo en recieacuten nacidos de peso

extremadamente bajo y en espera de la canalizacioacuten por enfermeriacutea de un cateacuteter venoso

epicutaacuteneo11

Agentes etioloacutegicos

Entre los agentes etioloacutegicos bacterianos que con mayor frecuencia causan infecciones

asociadas a cateacuteter y que a su vez son los maacutes estudiados se encuentran Gram

positivos como Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus

streptococcus ssp Enterococcus ssp Gram negativos como Escherichia coli Klebsiella

ssp Enterobacter serratia ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son

Candida albicans otras especies de Candidas12

5

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada

por una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

que afecta tambieacuten al depoacutesito de proteiacutenas seacutericas en la superficie del cateacuteter La

adhesioacuten variacutea seguacuten el material del cateacuteter siendo mayor en los de polivinilo o laacutetex

siliconado y menor en los cateacuteteres de poliuretano polietileno o tefloacuten A este primer

paso que es reversible le sigue un proceso de adherencia bacteriana mediante un

sistema de adhesinas a diferentes receptores como son el fibrinoacutegeno o la fibrina

Mientras el Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante

interaccioacuten hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada

por las proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor Una vez colonizado el cateacuteter los

microorganismos forman la llamada biocapa bacteriana mediante una sustancia

polimeacuterica (slime) que protege a las bacterias facilitando su adhesioacuten y disminuyendo

su sensibilidad a los antibioacuteticos favoreciendo la aparicioacuten de resistencias13

La prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos invasivos a los que son sometidos los

recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas infecciones bacterianas La duracioacuten de

la estancia hospitalaria es inversamente proporcional al peso del nacimiento y a la edad

gestacional factores relacionados directamente con infecciones nosocomiales A pesar de

todos los avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean siendo una

importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal14

Factores de riesgo

Los factores de riesgo de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes

dependen del sitio donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter

en los vasos umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso

canalizado15

6

Infeccioacuten en cateacuteter umbilical

El empleo de los cateacuteteres umbilicales en el tratamiento de nintildeos recieacuten nacidos es un

procedimiento comuacuten en el manejo que se hace en ellos en las unidades de cuidados

intensivos neonatales (UCIN) ante problemas que ponen en peligro su vida Los primeros en

usar los vasos umbilicales para alguno de los propoacutesitos mencionados fueron Diamond

(1947) y James(1959)16

A pesar de la aparente facilidad para colocar los cateacuteteres umbilicales el procedimiento no

estaacute exento de complicaciones las maacutes frecuentes son infecciones arritmias cardiacas

vasoespasmo trombosis y embolias vasculares taponamiento cardiaco enterocolitis

necrosante necrosis hepaacutetica e hipertensioacuten de la porta1718 Como factor predisponente se

menciona el tiempo de permanencia cateacuteter en el vaso canalizado por lo que se tiene el

cuidado de retirarlo tan pronto como se logre la estabilizacioacuten del nintildeo y sea posible contar

con otra viacutea es por la relativa facilidad de canalizar estos vasos para obtener en ellos

muestras de sangre para administrar soluciones y medicamentos y para hacer mediciones

vascular central

Se informa una mayor frecuencia de las complicaciones infecciosas que generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo19

Epidemiologia

El indicador de infeccioacuten relacionada con cateacuteter recomendado y utilizado en los principales

estudios de vigilancia de infeccioacuten nosocomial es la BRC Su definicioacuten puede variar

teniendo en cuenta aspectos epidemioloacutegicos que incluyen la bacteriemia primaria (origen

desconocido) o cliacutenicos (comprobacioacuten de la BRC con cultivos de microorganismos iguales

en el cateacuteter y en hemocultivos) La CDC y la JCAHO recomiendan que las tasas de BRC se

expresen en episodios de BRC1000 diacuteas de cateacuteter20

Aunque la incidencia de BRC ha disminuido en los uacuteltimos antildeos a unos 56 episodios1000

diacuteas de cateacuteter posiblemente por mejor disentildeo y calidad de los cateacuteteres el nuacutemero de

7

pacientes con BRC sigue siendo elevado Esto es debido al mayor uso de CVC su elevada

manipulacioacuten a los avances en los meacutetodos de diagnoacutestico microbioloacutegico y a la puesta en

marcha de estaacutendares de sistemas de vigilancia de infeccioacuten nosocomial21

Patogenia

Se considera que la patogeacutenesis de las infecciones relacionadas a cateacuteter es compleja y

multifactorial Las bacterias pueden llegar al torrente sanguiacuteneo por dos viacuteas principales

1048707 Pueden migrar desde la piel en la interfase del cateacuteter hasta colocarse en la superficie externa

de eacuteste

1048707 Pueden ingresar a la luz interna del cateacuteter a traveacutes del conector

La migracioacuten de microorganismos presentes en la piel en el sitio de insercioacuten del cateacuteter con

colonizacioacuten de la punta es la ruta mas comuacuten de infeccioacuten en cateacuteteres de corta

permanencia mientras que los cateacuteteres de larga permanencia la contaminacioacuten del tubo de

cateacuteter contribuye sustancialmente a su colonizacioacuten intraluminal22

Se han reconocido numerosas medidas de prevencioacuten efectivas en la reduccioacuten de las

infecciones pero la ejecucioacuten de estas medidas en la praacutectica parece ser el problema maacutes

relevante existiendo gran diferencia entre la mejor evidencia disponible y la praacutectica cliacutenica

Bases Cliacutenicas

Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter fue descrito por primera vez por Maki y cols

en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa de la punta del cateacuteter El criterio de

positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea de los pacientes con recuentos

inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten mientras que todos los casos que

cursaban con bacteriemia tuvieron recuentos superiores a 15 UFC y con frecuencia las

colonias fueron incontables La especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76 Este meacutetodo por

su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de microbiologiacutea y es la

teacutecnica de referencia23

8

En el estado o condicioacuten con relacioacuten a un cateacuteter ya colocado por la cual el cuerpo o parte

de este ha sido invadido por un agente patoacutegeno que en condiciones favorables se

multiplica y produce efectos dantildeinos Una vez que el microorganismo se ha instalado en el

cateacuteter hay un cierto nuacutemero de condiciones subsiguientes posibles ya sean localizadas o

sisteacutemicas La mejor manera de determinar si el cateacuteter es la causa de la infeccioacuten es hacer

un cultivo cuantitativo de cateacuteteres junto con un cultivo perifeacuterico de sangre Usando un

meacutetodo semicuantitativo para un cultivo de cateacuteter las siguientes definciones son aplicables

al diagnoacutestico de infeccioacuten

A Esteacuteril No hay crecimiento

B Contaminacioacuten lt 15 UFC de la punta del cateacuteter

C Localizada

1 Colonizacioacuten gt 15 UFC de la punta del cateacuteter El organismo se presenta sin siacutentomas

2 Infeccioacuten del lugar de insercioacuten gt 15 UFC en cultivos de la punta del cateacuteter

generalmente con siacutentomas externos de infeccioacuten localizada

D Sisteacutemica Bacteremia relacionada con el cateacuteter gt 15 UFC en cultivos de l apunta del

cateacuteter y en cultivos perifeacutericos de sangre positivos con el mismos organismo sin

identificarse otro sitio de infeccioacuten23

Agentes etioloacutegicos de infecciones en cateacuteter umbilical

La bacteremia es una invasioacuten del torrente sanguiacuteneo por bacterias La bacteremia se

desarrolla como resultado del dantildeo externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio el

tracto digestivo) de las barreras del cuerpo El agente causante de la bacteremia en un 71

es el Staphylococcus aureus Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras

puede ser las heridas cateacuteteres de la vena las viacuteas aeacutereas los pulmones el tracto digestivo

etc24

Staphylococcus aureus9

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

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302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 6: TESIS - FIN 14-JUNIO.

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada

por una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

que afecta tambieacuten al depoacutesito de proteiacutenas seacutericas en la superficie del cateacuteter La

adhesioacuten variacutea seguacuten el material del cateacuteter siendo mayor en los de polivinilo o laacutetex

siliconado y menor en los cateacuteteres de poliuretano polietileno o tefloacuten A este primer

paso que es reversible le sigue un proceso de adherencia bacteriana mediante un

sistema de adhesinas a diferentes receptores como son el fibrinoacutegeno o la fibrina

Mientras el Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante

interaccioacuten hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada

por las proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor Una vez colonizado el cateacuteter los

microorganismos forman la llamada biocapa bacteriana mediante una sustancia

polimeacuterica (slime) que protege a las bacterias facilitando su adhesioacuten y disminuyendo

su sensibilidad a los antibioacuteticos favoreciendo la aparicioacuten de resistencias13

La prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos invasivos a los que son sometidos los

recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas infecciones bacterianas La duracioacuten de

la estancia hospitalaria es inversamente proporcional al peso del nacimiento y a la edad

gestacional factores relacionados directamente con infecciones nosocomiales A pesar de

todos los avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean siendo una

importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal14

Factores de riesgo

Los factores de riesgo de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes

dependen del sitio donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter

en los vasos umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso

canalizado15

6

Infeccioacuten en cateacuteter umbilical

El empleo de los cateacuteteres umbilicales en el tratamiento de nintildeos recieacuten nacidos es un

procedimiento comuacuten en el manejo que se hace en ellos en las unidades de cuidados

intensivos neonatales (UCIN) ante problemas que ponen en peligro su vida Los primeros en

usar los vasos umbilicales para alguno de los propoacutesitos mencionados fueron Diamond

(1947) y James(1959)16

A pesar de la aparente facilidad para colocar los cateacuteteres umbilicales el procedimiento no

estaacute exento de complicaciones las maacutes frecuentes son infecciones arritmias cardiacas

vasoespasmo trombosis y embolias vasculares taponamiento cardiaco enterocolitis

necrosante necrosis hepaacutetica e hipertensioacuten de la porta1718 Como factor predisponente se

menciona el tiempo de permanencia cateacuteter en el vaso canalizado por lo que se tiene el

cuidado de retirarlo tan pronto como se logre la estabilizacioacuten del nintildeo y sea posible contar

con otra viacutea es por la relativa facilidad de canalizar estos vasos para obtener en ellos

muestras de sangre para administrar soluciones y medicamentos y para hacer mediciones

vascular central

Se informa una mayor frecuencia de las complicaciones infecciosas que generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo19

Epidemiologia

El indicador de infeccioacuten relacionada con cateacuteter recomendado y utilizado en los principales

estudios de vigilancia de infeccioacuten nosocomial es la BRC Su definicioacuten puede variar

teniendo en cuenta aspectos epidemioloacutegicos que incluyen la bacteriemia primaria (origen

desconocido) o cliacutenicos (comprobacioacuten de la BRC con cultivos de microorganismos iguales

en el cateacuteter y en hemocultivos) La CDC y la JCAHO recomiendan que las tasas de BRC se

expresen en episodios de BRC1000 diacuteas de cateacuteter20

Aunque la incidencia de BRC ha disminuido en los uacuteltimos antildeos a unos 56 episodios1000

diacuteas de cateacuteter posiblemente por mejor disentildeo y calidad de los cateacuteteres el nuacutemero de

7

pacientes con BRC sigue siendo elevado Esto es debido al mayor uso de CVC su elevada

manipulacioacuten a los avances en los meacutetodos de diagnoacutestico microbioloacutegico y a la puesta en

marcha de estaacutendares de sistemas de vigilancia de infeccioacuten nosocomial21

Patogenia

Se considera que la patogeacutenesis de las infecciones relacionadas a cateacuteter es compleja y

multifactorial Las bacterias pueden llegar al torrente sanguiacuteneo por dos viacuteas principales

1048707 Pueden migrar desde la piel en la interfase del cateacuteter hasta colocarse en la superficie externa

de eacuteste

1048707 Pueden ingresar a la luz interna del cateacuteter a traveacutes del conector

La migracioacuten de microorganismos presentes en la piel en el sitio de insercioacuten del cateacuteter con

colonizacioacuten de la punta es la ruta mas comuacuten de infeccioacuten en cateacuteteres de corta

permanencia mientras que los cateacuteteres de larga permanencia la contaminacioacuten del tubo de

cateacuteter contribuye sustancialmente a su colonizacioacuten intraluminal22

Se han reconocido numerosas medidas de prevencioacuten efectivas en la reduccioacuten de las

infecciones pero la ejecucioacuten de estas medidas en la praacutectica parece ser el problema maacutes

relevante existiendo gran diferencia entre la mejor evidencia disponible y la praacutectica cliacutenica

Bases Cliacutenicas

Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter fue descrito por primera vez por Maki y cols

en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa de la punta del cateacuteter El criterio de

positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea de los pacientes con recuentos

inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten mientras que todos los casos que

cursaban con bacteriemia tuvieron recuentos superiores a 15 UFC y con frecuencia las

colonias fueron incontables La especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76 Este meacutetodo por

su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de microbiologiacutea y es la

teacutecnica de referencia23

8

En el estado o condicioacuten con relacioacuten a un cateacuteter ya colocado por la cual el cuerpo o parte

de este ha sido invadido por un agente patoacutegeno que en condiciones favorables se

multiplica y produce efectos dantildeinos Una vez que el microorganismo se ha instalado en el

cateacuteter hay un cierto nuacutemero de condiciones subsiguientes posibles ya sean localizadas o

sisteacutemicas La mejor manera de determinar si el cateacuteter es la causa de la infeccioacuten es hacer

un cultivo cuantitativo de cateacuteteres junto con un cultivo perifeacuterico de sangre Usando un

meacutetodo semicuantitativo para un cultivo de cateacuteter las siguientes definciones son aplicables

al diagnoacutestico de infeccioacuten

A Esteacuteril No hay crecimiento

B Contaminacioacuten lt 15 UFC de la punta del cateacuteter

C Localizada

1 Colonizacioacuten gt 15 UFC de la punta del cateacuteter El organismo se presenta sin siacutentomas

2 Infeccioacuten del lugar de insercioacuten gt 15 UFC en cultivos de la punta del cateacuteter

generalmente con siacutentomas externos de infeccioacuten localizada

D Sisteacutemica Bacteremia relacionada con el cateacuteter gt 15 UFC en cultivos de l apunta del

cateacuteter y en cultivos perifeacutericos de sangre positivos con el mismos organismo sin

identificarse otro sitio de infeccioacuten23

Agentes etioloacutegicos de infecciones en cateacuteter umbilical

La bacteremia es una invasioacuten del torrente sanguiacuteneo por bacterias La bacteremia se

desarrolla como resultado del dantildeo externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio el

tracto digestivo) de las barreras del cuerpo El agente causante de la bacteremia en un 71

es el Staphylococcus aureus Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras

puede ser las heridas cateacuteteres de la vena las viacuteas aeacutereas los pulmones el tracto digestivo

etc24

Staphylococcus aureus9

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

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10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

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11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

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12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

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19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 7: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Infeccioacuten en cateacuteter umbilical

El empleo de los cateacuteteres umbilicales en el tratamiento de nintildeos recieacuten nacidos es un

procedimiento comuacuten en el manejo que se hace en ellos en las unidades de cuidados

intensivos neonatales (UCIN) ante problemas que ponen en peligro su vida Los primeros en

usar los vasos umbilicales para alguno de los propoacutesitos mencionados fueron Diamond

(1947) y James(1959)16

A pesar de la aparente facilidad para colocar los cateacuteteres umbilicales el procedimiento no

estaacute exento de complicaciones las maacutes frecuentes son infecciones arritmias cardiacas

vasoespasmo trombosis y embolias vasculares taponamiento cardiaco enterocolitis

necrosante necrosis hepaacutetica e hipertensioacuten de la porta1718 Como factor predisponente se

menciona el tiempo de permanencia cateacuteter en el vaso canalizado por lo que se tiene el

cuidado de retirarlo tan pronto como se logre la estabilizacioacuten del nintildeo y sea posible contar

con otra viacutea es por la relativa facilidad de canalizar estos vasos para obtener en ellos

muestras de sangre para administrar soluciones y medicamentos y para hacer mediciones

vascular central

Se informa una mayor frecuencia de las complicaciones infecciosas que generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo19

Epidemiologia

El indicador de infeccioacuten relacionada con cateacuteter recomendado y utilizado en los principales

estudios de vigilancia de infeccioacuten nosocomial es la BRC Su definicioacuten puede variar

teniendo en cuenta aspectos epidemioloacutegicos que incluyen la bacteriemia primaria (origen

desconocido) o cliacutenicos (comprobacioacuten de la BRC con cultivos de microorganismos iguales

en el cateacuteter y en hemocultivos) La CDC y la JCAHO recomiendan que las tasas de BRC se

expresen en episodios de BRC1000 diacuteas de cateacuteter20

Aunque la incidencia de BRC ha disminuido en los uacuteltimos antildeos a unos 56 episodios1000

diacuteas de cateacuteter posiblemente por mejor disentildeo y calidad de los cateacuteteres el nuacutemero de

7

pacientes con BRC sigue siendo elevado Esto es debido al mayor uso de CVC su elevada

manipulacioacuten a los avances en los meacutetodos de diagnoacutestico microbioloacutegico y a la puesta en

marcha de estaacutendares de sistemas de vigilancia de infeccioacuten nosocomial21

Patogenia

Se considera que la patogeacutenesis de las infecciones relacionadas a cateacuteter es compleja y

multifactorial Las bacterias pueden llegar al torrente sanguiacuteneo por dos viacuteas principales

1048707 Pueden migrar desde la piel en la interfase del cateacuteter hasta colocarse en la superficie externa

de eacuteste

1048707 Pueden ingresar a la luz interna del cateacuteter a traveacutes del conector

La migracioacuten de microorganismos presentes en la piel en el sitio de insercioacuten del cateacuteter con

colonizacioacuten de la punta es la ruta mas comuacuten de infeccioacuten en cateacuteteres de corta

permanencia mientras que los cateacuteteres de larga permanencia la contaminacioacuten del tubo de

cateacuteter contribuye sustancialmente a su colonizacioacuten intraluminal22

Se han reconocido numerosas medidas de prevencioacuten efectivas en la reduccioacuten de las

infecciones pero la ejecucioacuten de estas medidas en la praacutectica parece ser el problema maacutes

relevante existiendo gran diferencia entre la mejor evidencia disponible y la praacutectica cliacutenica

Bases Cliacutenicas

Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter fue descrito por primera vez por Maki y cols

en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa de la punta del cateacuteter El criterio de

positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea de los pacientes con recuentos

inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten mientras que todos los casos que

cursaban con bacteriemia tuvieron recuentos superiores a 15 UFC y con frecuencia las

colonias fueron incontables La especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76 Este meacutetodo por

su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de microbiologiacutea y es la

teacutecnica de referencia23

8

En el estado o condicioacuten con relacioacuten a un cateacuteter ya colocado por la cual el cuerpo o parte

de este ha sido invadido por un agente patoacutegeno que en condiciones favorables se

multiplica y produce efectos dantildeinos Una vez que el microorganismo se ha instalado en el

cateacuteter hay un cierto nuacutemero de condiciones subsiguientes posibles ya sean localizadas o

sisteacutemicas La mejor manera de determinar si el cateacuteter es la causa de la infeccioacuten es hacer

un cultivo cuantitativo de cateacuteteres junto con un cultivo perifeacuterico de sangre Usando un

meacutetodo semicuantitativo para un cultivo de cateacuteter las siguientes definciones son aplicables

al diagnoacutestico de infeccioacuten

A Esteacuteril No hay crecimiento

B Contaminacioacuten lt 15 UFC de la punta del cateacuteter

C Localizada

1 Colonizacioacuten gt 15 UFC de la punta del cateacuteter El organismo se presenta sin siacutentomas

2 Infeccioacuten del lugar de insercioacuten gt 15 UFC en cultivos de la punta del cateacuteter

generalmente con siacutentomas externos de infeccioacuten localizada

D Sisteacutemica Bacteremia relacionada con el cateacuteter gt 15 UFC en cultivos de l apunta del

cateacuteter y en cultivos perifeacutericos de sangre positivos con el mismos organismo sin

identificarse otro sitio de infeccioacuten23

Agentes etioloacutegicos de infecciones en cateacuteter umbilical

La bacteremia es una invasioacuten del torrente sanguiacuteneo por bacterias La bacteremia se

desarrolla como resultado del dantildeo externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio el

tracto digestivo) de las barreras del cuerpo El agente causante de la bacteremia en un 71

es el Staphylococcus aureus Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras

puede ser las heridas cateacuteteres de la vena las viacuteas aeacutereas los pulmones el tracto digestivo

etc24

Staphylococcus aureus9

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

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emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 8: TESIS - FIN 14-JUNIO.

pacientes con BRC sigue siendo elevado Esto es debido al mayor uso de CVC su elevada

manipulacioacuten a los avances en los meacutetodos de diagnoacutestico microbioloacutegico y a la puesta en

marcha de estaacutendares de sistemas de vigilancia de infeccioacuten nosocomial21

Patogenia

Se considera que la patogeacutenesis de las infecciones relacionadas a cateacuteter es compleja y

multifactorial Las bacterias pueden llegar al torrente sanguiacuteneo por dos viacuteas principales

1048707 Pueden migrar desde la piel en la interfase del cateacuteter hasta colocarse en la superficie externa

de eacuteste

1048707 Pueden ingresar a la luz interna del cateacuteter a traveacutes del conector

La migracioacuten de microorganismos presentes en la piel en el sitio de insercioacuten del cateacuteter con

colonizacioacuten de la punta es la ruta mas comuacuten de infeccioacuten en cateacuteteres de corta

permanencia mientras que los cateacuteteres de larga permanencia la contaminacioacuten del tubo de

cateacuteter contribuye sustancialmente a su colonizacioacuten intraluminal22

Se han reconocido numerosas medidas de prevencioacuten efectivas en la reduccioacuten de las

infecciones pero la ejecucioacuten de estas medidas en la praacutectica parece ser el problema maacutes

relevante existiendo gran diferencia entre la mejor evidencia disponible y la praacutectica cliacutenica

Bases Cliacutenicas

Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter fue descrito por primera vez por Maki y cols

en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa de la punta del cateacuteter El criterio de

positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea de los pacientes con recuentos

inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten mientras que todos los casos que

cursaban con bacteriemia tuvieron recuentos superiores a 15 UFC y con frecuencia las

colonias fueron incontables La especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76 Este meacutetodo por

su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de microbiologiacutea y es la

teacutecnica de referencia23

8

En el estado o condicioacuten con relacioacuten a un cateacuteter ya colocado por la cual el cuerpo o parte

de este ha sido invadido por un agente patoacutegeno que en condiciones favorables se

multiplica y produce efectos dantildeinos Una vez que el microorganismo se ha instalado en el

cateacuteter hay un cierto nuacutemero de condiciones subsiguientes posibles ya sean localizadas o

sisteacutemicas La mejor manera de determinar si el cateacuteter es la causa de la infeccioacuten es hacer

un cultivo cuantitativo de cateacuteteres junto con un cultivo perifeacuterico de sangre Usando un

meacutetodo semicuantitativo para un cultivo de cateacuteter las siguientes definciones son aplicables

al diagnoacutestico de infeccioacuten

A Esteacuteril No hay crecimiento

B Contaminacioacuten lt 15 UFC de la punta del cateacuteter

C Localizada

1 Colonizacioacuten gt 15 UFC de la punta del cateacuteter El organismo se presenta sin siacutentomas

2 Infeccioacuten del lugar de insercioacuten gt 15 UFC en cultivos de la punta del cateacuteter

generalmente con siacutentomas externos de infeccioacuten localizada

D Sisteacutemica Bacteremia relacionada con el cateacuteter gt 15 UFC en cultivos de l apunta del

cateacuteter y en cultivos perifeacutericos de sangre positivos con el mismos organismo sin

identificarse otro sitio de infeccioacuten23

Agentes etioloacutegicos de infecciones en cateacuteter umbilical

La bacteremia es una invasioacuten del torrente sanguiacuteneo por bacterias La bacteremia se

desarrolla como resultado del dantildeo externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio el

tracto digestivo) de las barreras del cuerpo El agente causante de la bacteremia en un 71

es el Staphylococcus aureus Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras

puede ser las heridas cateacuteteres de la vena las viacuteas aeacutereas los pulmones el tracto digestivo

etc24

Staphylococcus aureus9

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

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Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

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10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

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11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

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37

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17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

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18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

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19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

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498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

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38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

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25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 9: TESIS - FIN 14-JUNIO.

En el estado o condicioacuten con relacioacuten a un cateacuteter ya colocado por la cual el cuerpo o parte

de este ha sido invadido por un agente patoacutegeno que en condiciones favorables se

multiplica y produce efectos dantildeinos Una vez que el microorganismo se ha instalado en el

cateacuteter hay un cierto nuacutemero de condiciones subsiguientes posibles ya sean localizadas o

sisteacutemicas La mejor manera de determinar si el cateacuteter es la causa de la infeccioacuten es hacer

un cultivo cuantitativo de cateacuteteres junto con un cultivo perifeacuterico de sangre Usando un

meacutetodo semicuantitativo para un cultivo de cateacuteter las siguientes definciones son aplicables

al diagnoacutestico de infeccioacuten

A Esteacuteril No hay crecimiento

B Contaminacioacuten lt 15 UFC de la punta del cateacuteter

C Localizada

1 Colonizacioacuten gt 15 UFC de la punta del cateacuteter El organismo se presenta sin siacutentomas

2 Infeccioacuten del lugar de insercioacuten gt 15 UFC en cultivos de la punta del cateacuteter

generalmente con siacutentomas externos de infeccioacuten localizada

D Sisteacutemica Bacteremia relacionada con el cateacuteter gt 15 UFC en cultivos de l apunta del

cateacuteter y en cultivos perifeacutericos de sangre positivos con el mismos organismo sin

identificarse otro sitio de infeccioacuten23

Agentes etioloacutegicos de infecciones en cateacuteter umbilical

La bacteremia es una invasioacuten del torrente sanguiacuteneo por bacterias La bacteremia se

desarrolla como resultado del dantildeo externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio el

tracto digestivo) de las barreras del cuerpo El agente causante de la bacteremia en un 71

es el Staphylococcus aureus Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras

puede ser las heridas cateacuteteres de la vena las viacuteas aeacutereas los pulmones el tracto digestivo

etc24

Staphylococcus aureus9

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

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10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

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11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

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19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

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498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 10: TESIS - FIN 14-JUNIO.

S aureus forma parte de la familia Microccocaceae geacutenero Staphylococcus el cual contiene

maacutes de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo no moacutevil No forma esporas puede

encontrarse solo en pares en cadenas cortas o en racimos Es un anaerobio facultativo

pero crece mejor en condiciones aerobias25 El S aureus es un microorganismo positivo a la

coagulasa que se aiacutesla con mayor frecuencia en infecciones de piel26 Staphylococcus

aureus es la principal especie patoacutegena de su geacutenero y la causa comuacuten de diversas

infecciones de origen nosocomial y comunitario27

Los Staphylococcus producen muy diversos siacutendromes con manifestaciones cliacutenicas que

van desde una simple puacutestula hasta la sepsis y la muerte28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tincioacuten de Gram es anaerobio

facultativo moacutevil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo) no forma esporas es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa Klebsiella es un geacutenero de bacterias no moacutetiles Gram-

negativas con una prominente caacutepsula de polisacaacuteridos Estas especies patoacutegenas estaacuten

significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapeacuteuticas

cada vez son menores por ser importantes fuentes de resistencia antibioacutetica transferible29

Estos patoacutegenos estaacuten asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las

unidades de cuidado intensivo son causantes de neumoniacuteas bacteriemias infecciones del

tracto urinario e infecciones de herida quiruacutergica30

10

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

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10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

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13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

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19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 11: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Planteamiento de problema

iquestCuales son los agentes etioloacutegicos que presentan los pacientes neonatos con cateacuteter

umbilical durante su atencioacuten hospitalaria

11

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

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20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

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21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

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22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

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24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

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25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

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Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

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28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 12: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Justificacioacuten

El uso temprano de cateacuteteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recieacuten nacido sus complicaciones son escasas y no asociadas a la

administracioacuten de medicamentos o al uso de la viacutea enteral

El cateacuteter umbilical en neonatos es muy uacutetil como liacutenea central para administrar

soluciones y medicamentos monitorizar la presioacuten arterial y tomar muestras de gases

arteriales

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta praacutectica haciendo especial eacutenfasis en la viacutea

oral concomitante

Es sumamente importante contar con un buen meacutetodo diagnoacutestico para poder enfrentar

las infecciones asociadas a cateacuteter por lo tanto la decisioacuten de retiro de un dispositivo

debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa La sola presencia del cuadro

cliacutenico no determina su asociacioacuten con el dispositivo intravascular ya que habitualmente

los signos cliacutenicos son inespeciacuteficos es el diagnoacutestico microbioloacutegico el que

determinaraacute su retiro yo tratamiento seguacuten corresponda

12

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

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neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 13: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Objetivos

Objetivo general

1- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de cateacuteter

durante su atencioacuten hospitalaria

Objetivos especiacuteficos

1- Identificar el geacutenero y especie de los agentes etioloacutegicos presentes en infecciones del

ombligo por uso de cateacuteter umbilical en neonatos durante la atencioacuten hospitalaria

2- Proporcionar informacioacuten al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades Hospitalarias

13

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

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Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

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recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

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neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

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16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 14: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Hipoacutetesis

HI

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho

Los pacientes neonatos con cateacuteter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como

Staphylococcus coagulasa negativos Staphylococcus aureus streptococcus ssp

Enterococcus ssp Gram negativos Escherichia coli Klebsiella ssp Enterobacter Serratia

ssp Los agentes etioloacutegicos fuacutengicos de mayor incidencia son Candida albicans otras

especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

14

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

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Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

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10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

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15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

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16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

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17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 15: TESIS - FIN 14-JUNIO.

MATERIAL Y METODOS

Lugar de estudio y ubicacioacuten

La investigacioacuten se realizoacute en Veracruz Veracruz Meacutexico que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado

Ensayo cliacutenico y tamantildeo de muestra

Para calcular el tamantildeo de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

cateacuteter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95 De tal manera el tamantildeo de

muestra estimado fue de 80 pacientes pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y

por defuncioacuten debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato

Criterios de inclusioacuten

Se desarrolloacute un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infeccioacuten de forma natural y conocer su prevalencia Soacutelo fueron

considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz

del aacuterea de Pediatriacutea con sospecha de infeccioacuten bacteriana que fueran mayores de una

semana de vida y no mayores a 1 antildeo asiacute como tambieacuten que los cateacuteteres umbilicales

fueran retirados en condiciones higieacutenicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin

antecedentes de alguna infeccioacuten previa Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que

reunioacute las caracteriacutesticas oacuteptimas para este estudio

Criterios de exclusioacuten

15

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

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10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

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15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

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17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

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18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

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19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 16: TESIS - FIN 14-JUNIO.

No se tomaron en consideracioacuten para este estudio los cultivos de cateacuteteres umbilicales que

no fueron retirados en condiciones apropiadas y los cateacuteteres umbilicales de neonatos que

fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado Los Pacientes neonatos que

autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una patologiacutea traumaacutetica asociada y

los pacientes neonatos que autorizada su participacioacuten en el estudio presentaron una baja

por defuncioacuten fueron totalmente descartados para fines de esta investigacioacuten

Caracteriacutesticas de la unidad de pediatriacutea

La unidad de pediatriacutea del Hospital Regional de Alta Especialidad estaacute dividida en diferentes

aeacutereas de las cuales para fines de esta investigacioacuten se analizaron pacientes neonatos de

UCIN UCIM y cunero patoloacutegico Debido a que existen pacientes en el aacuterea de pediatriacutea que

ya no cumplen con el reacutegimen de edad estipulado para este estudio

Muestreo para la seleccioacuten de neonatos

Para la seleccioacuten de los neonatos y para reunir el tamantildeo de la muestra necesario para el

estudio se analizaron cateacuteteres de todos los neonatos con sospecha de infeccioacuten bacteriana

a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el cateacuteter Para

este muestreo no se tomoacute en cuenta el sexo Cada tubo de Stuart se identificoacute con el nombre

completo del paciente el servicio de donde se tomo el tipo de muestra fecha y un nuacutemero

de folio con continuidad Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la

transportacioacuten a su anaacutelisis y luego fueron remitidas al laboratorio para su anaacutelisis

microbioloacutegico

Teacutecnicas de laboratorio

Para el estudio microbioloacutegico del cateacuteter umbilical del neonato fue utilizada la teacutecnica

semicuantitativa de maki Esta teacutecnica ha sido aceptada por la mayoriacutea de los laboratorios

de microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia

16

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

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Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

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recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

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Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

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de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

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9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 17: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Proceso de Investigacioacuten

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz

los cuales tuvieron participacioacuten en esta investigacioacuten hasta la identificacioacuten del agente

etioloacutegico en el cateacuteter umbilical

Se realizo el retiro del cateacuteter umbilical del neonato con una teacutecnica aseacuteptica utilizando

material esteacuteril se desinfecto la piel con alcohol al 10 y se dejo secar con pinza se retiro el

cateacuteter cuidando de no rosar la piel se corto de 3 a 5 cm de la porcioacuten distal y se coloco en

el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiologiacutea para su anaacutelisis

bacterioloacutegico

En el laboratorio se inoculo el cateacuteter umbilical en el agar base sangre por la teacutecnica

semicuantitativa de maki rotando el cateacuteter con ayuda del asa bacterioloacutegica 5 veces Se

incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera O2 Se prosiguioacute con la interpretacioacuten de la morfologiacutea

colonial se resembraron colonias en los medios Agar sal y manitol Agar Mac Conkey y Agar

Biggy para su diferenciacioacuten se Incubo 24 Hrs A 37degC en atmosfera de O2 continuando con

la Interpretacioacuten de la morfologiacutea colonial

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas para Gram

positivas como para Gam negativas se procedioacute a la preparacioacuten de paneles Se Incubaron

los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37degC por 24 Hrs en atmosfera de O2 Se

continuacuteo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre obteniendo asiacute el

resultado bacteriano en cuanto a geacutenero y especie

17

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

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recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

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5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

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de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

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de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

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16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 18: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Material empleado

Paneles Combo Sensititre

Laminas adhesivas

Agua desmineralizada Sensititre

Tira de substrato para prueba de Gram positivos

Aceite mineral

Reactivos para tincioacuten de Gram

Cabezales de dosificacioacuten Sensititre

Estaacutendar de turbidez McFarland 05

Puntas desechables para pipeta

Tubos de ensaye 13 x 100

Tubos de ensaye 10 x 75

Pipetas Automaacuteticas de 5 ųl

Gradilla

Quemador bunsen

Asa bacterioloacutegica

Cajas petri

Goteros

Jaboacuten de manos

Detergente

Toalla

Franela

Alcohol

Cubrebocas

Guantes desechables

Recipiente para material contaminado

Rollo de papel adsorbente

Cloro

Gasas

Bolsas de plaacutestico

Cerillos

Porta objetos

Cubre objetos 18

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

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recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

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de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

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16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 19: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Papel estraza

Computadora

Impresora

Hojas tamantildeo carta blancas

Medios de cultivo

Agar base sangre

Agar Sal de manitol

Agar Mac Conkey

Biggy

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre

Medio de transporte Stuart

Equipos de Laboratorio

1 Estufa de cultivo

2 Microscopio

3 Vortex

4 Auto inoculador

5 SISTEMA SENSITITRE

a Autoreader Sensititre

b Estufa Sensititre

Fundamentos

19

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

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Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

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5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

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7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

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16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 20: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Uno de los sistemas maacutes importantes para la identificacioacuten de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de

los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son temperatura grado de humedad y presioacuten de oxiacutegeno

adecuadas asiacute como un grado correcto de acidez o alcalinidad Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante

Estos Medios fueron utilizados en esta investigacioacuten para fines de identificacioacuten de

microorganismos bacterianos Cada medio tiene una caracteriacutestica importante para ser

empleado en este proyecto

A continuacioacuten se describen

Medio de Transporte Stuart

Medio semisoacutelido no nutritivo Contiene tioglicolato de sodio el cual provee un ambiente

reducido y es uacutetil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte y azul de

metileno que es el indicador de oxido reduccioacuten De esta manera se favorece la viabilidad de

los microorganismos durante su enviacuteo al laboratorio

Agar sangre

La infusioacuten de muacutesculo de corazoacuten y la peptona otorgan al medio un alto valor nutritivo que

permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos auacuten de aquellos

nutricionalmente exigentes El cloruro de sodio mantiene el balance osmoacutetico

El agregado de sangre al medio de cultivo en concentracioacuten final de 5-10 aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemoacutelisis

Agar Mac Conkey

20

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

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recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

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5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

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6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

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de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 21: TESIS - FIN 14-JUNIO.

En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el

cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora

Gram positiva Por fermentacioacuten de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro) la absorcioacuten en las colonias y la

precipitacioacuten de las sales biliares Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras

Agar sal y manitol

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracioacuten salina Los

estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio las colonias

aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos

presentan colonias rodeadas de una zona roja o puacuterpura En el medio de cultivo el extracto

de carne y la pluripeptona constituyen la fuente de carbono nitroacutegeno vitaminas y

minerales el manitol es el hidrato de carbono fermentable el cloruro de sodio (que se

encuentra en alta concentracioacuten) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora

acompantildeante y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio

con alta concentracioacuten de sal y fermentan el manitol producen aacutecidos con lo que se modifica

el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen

en altas concentraciones de sal y pueden o no fermentar el manitol Los estafilococos

coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de

una zona del mismo color Los estafilococos que no fermentan el manitol se visualizan como

colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o puacuterpura

Agar Biggy

El Agar Biggy es una modificacioacuten de la foacutermula desarrollada por Nickerson La

diferenciacioacuten estaacute basada en la morfologiacutea colonial y la pigmentacioacuten tiacutepica que se presenta

en este medio La reduccioacuten del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacioacuten de la

colonia que en ocasiones difunde en el medio En este medio el extracto de levadura

proporciona vitaminas y aminoaacutecidos La glicina es utilizada para estimular el crecimiento La

dextrosa es la fuente de carbono El indicador sulfito de bismuto actuacutea tambieacuten como un

inhibidor del desarrollo bacteriano El agar es adicionado como agente solidificante

21

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

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Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

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20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

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21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

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22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

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24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

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colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

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29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 22: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes

El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de

susceptibilidad de organismos comuacutenmente aislados aeroacutebicos o facultativos de raacutepido

crecimiento El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++) El pH

debe estar entre 72 y 74 a temperatura ambiente (25ordm C)

22

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

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Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

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Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

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neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

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37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

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epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

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15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

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17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
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Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram positivas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar glucosa glicerol maltosa manitol B-metilglucoacutesido

ramnosa sacarosa sorbitol trehalosa La produccioacuten de acido reduce la fluorescencia de un

fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substrato fluorogeacutenico el substrato enzimaacutetico esta vinculado a un fluoroacuteforo

que suprime la fluorescencia La ruptura enzimaacutetica de la unioacuten libera el fluoroacuteforo con

capacidad de fluorescencia

3- Pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea y la arginina (requieren la adicioacuten de aceite

mineral esteacuteril) incrementa el pH y la fluorescencia La esculina es una moleacutecula fluorescente

que al hidrolizarse se descompone en productos no fluorescentes

23

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 24: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Paneles Combo Sensititre para identificacioacuten y determinacioacuten de sensibilidad de

bacterias Gram negativas

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificacioacuten y determinacioacuten de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas

Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquiacutemicas secas cada una y agentes

antimicrobiamos a las diluciones adecuadas Las pruebas de identificacioacuten incluyen medios

bioquimicos claacutesicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan

substratos fluorogenicos Las pruebas de sensibilidad implica la deteccioacuten cuantitativa del

crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los

organismos Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se

agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo

1- Pruebas de fermentacioacuten de azuacutecar Arabinosa arabitol celobiosa fructosa inositol

maltosa manitol rafinosa sacarosa sorbitol trehalosa xilosa La produccioacuten de acido

reduce la fluorescencia de un fluoroacuteforo sensible al pH

2- Pruebas de substratos fluorogeacutenico Cada substrato enzimaacutetico esta vinculado a un

fluoroacuteforo que suprime la fluorescencia La ruptura particioacuten enzimaacutetico de la unioacuten libera el

fluoroacuteforo con capacidad de fluorescencia

3- Pruebas de utilizacioacuten de carbono Agmatina arginina citrato lisina malonato ornitina y

piruvato La descomposicioacuten del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia

4- Otras pruebas especificas la hidroacutelisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia La

esculina es una moleacutecula fluorescente que al hidrolizarse se descompone en productos no

fluorescentes Desaminacioacuten del triptofano La formacioacuten de un color oscuro suprime la sentildeal

fluorescente

24

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 25: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiologiacutea el cual realiza la identificacioacuten y

susceptibilidad microbiana en concentracioacuten miacutenima inhibitoria (MIC) Utiliza un sustrato

fluorescente presente en cada medio para detectar el crecimiento microbiano y medir la

actividad metaboacutelica

Fluorescencia es un proceso de emisioacuten en el cual las moleacuteculas son excitadas por la

absorcioacuten de radiacioacuten electromagneacutetica Las especies excitadas se relajan al estado

fundamental liberando su exceso de energiacutea en forma de fotones Una vez excitada la

moleacutecula pasara al modo vibracional de menor energiacutea del estado excitado El fotoacuten emitido

por fluorescencia tiene menos energiacutea que el absorbido Por tanto posee una frecuencia

menor y emite a mayor longitud de onda

25

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

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Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

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neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

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11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

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12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

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13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 26: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Tecnica

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXPC1 para identificacioacuten y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

Encender el autoinoculador y calibrar con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Se tomoacute de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y suspenderlas en

el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc Farland de 05 en el

autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo

Inmediatamente despueacutes colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia una tira

con sustrato fluorogegravenico

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22

sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inocula el resto de los

pocillos dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo

Leer las placas a las 24 horas

26

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 27: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Protocolo de trabajo e inoculacioacuten de las placas combo MEXNC1F para identificacioacuten

y susceptibilidad a organismos Gram-negativos

Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estaacutendar de Mc Farland de 05

Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas caracteriacutesticas coloniales (previa

verificacioacuten de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar Mc

Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inoacuteculo y ajustarlo al estaacutendar de Mc

Farland de 05 en el autoinoculador

Una vez ajustado el caldo para inoacuteculo al estaacutendar de 05 transferir 10 μl con micropipeta y

punta esteacuteril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar

Homogenizar

En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21

Sample 1 el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales

contienen las pruebas bioquiacutemicas

Despueacutes colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2 el equipo inoculara el resto de

los pocillos dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad

Finalmente con sample 3 el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos

Leer las placas a las 24 horas

NOTA

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIOacuteN DE TIRA FLUOROGENICA

27

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 28: TESIS - FIN 14-JUNIO.

RESULTADOS

En relacioacuten al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del cateacuteter umbilical se

obtuvo que el 78 de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano mientras que el

22 fue negativo (grafica No 1)

Grafica No 1

AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA

DEL CATETER UMBILICAL

78

22

MUESTRAS TOTALES

POSITIVAS NEGATIVAS

28

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 29: TESIS - FIN 14-JUNIO.

De estos cultivos positivos el 57 mostroacute desarrollo de bacterias Gram positivas el 29

fueron bacterias Gram negativas y el 14 fueron levaduras (grafica No 2)

Grafica No 2

ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER

UMBILICAL

n = 39 Aislamientos

50

7

29

14

MORGOLOGIA COLONIAL

Coccos Gram + 50 Basilos Gram + 7

Basilos Gram - 29 Hongos Levaduriformes 14

29

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 30: TESIS - FIN 14-JUNIO.

De las bacterias Gram positivas encontradas el 36 correspondioacute a la especie S

epidermidis el 16 a S haemolyticus y con menor incidencia se encontroacute al S aureus con 1

caso correspondiente al 4 (Grafica No 3)

Grafica No 3

AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS

Sepid

erm

idis

S hae

moly

ticus

S hom

inis-

hom

inis

S cap

itis-c

apitis

S coa

gulas

a ne

g

S war

nery

S aur

eus

0

5

10

15

20

25

30

35

40

3600

16001200 1200 1200

800400

30

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 31: TESIS - FIN 14-JUNIO.

De las bacterias Gram negativas encontradas el 40 correspondioacute a la especie P

aeruginosa el 30 a E coli y con menor incidencia se encontroacute K oxytoca con 1 caso

correspondiente al 10 (Grafica No 4)

Grafica No 4

AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES

INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL

n = 10 Aislamientos

P aeruginosa

E coli

K pneumoniae

K oxytoca

4000

3000

2000

1000

GRAM NEGATIVOS

31

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 32: TESIS - FIN 14-JUNIO.

De manera particular en cuanto al geacutenero Caacutendida se encontroacute que el 50 correspondioacute a C

albicans y el 50 a C tropicalis (grafica No 5)

Grafica No 5

ESPECIES DEL GEacuteNERO Caacutendida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE

CATETER UMBILICAL

n = 4 Aislamientos

5050

HONGOS LEVADURIFORMES

C albicans

C tropicalis

DISCUSIOacuteN

32

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 33: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Clark R (2004) en su estudio de Prevencioacuten y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo

de infecciones asociadas a cateacuteteres umbilicales son diferentes ya que dependen del sitio

donde se instale el cateacuteter aunque el tiempo de permanencia del cateacuteter en los vasos

umbilicales parece ser un factor de riesgo comuacuten independientemente del vaso canalizado

En el presente trabajo del total de pacientes 50 fueron colocados en arteria y 50 en

vena dando como resultado una colonizacioacuten de cateacuteter de 39 muestras correspondiente al

78

Gaspar U (2007) menciona en su artiacuteculo que las complicaciones infecciosas generalmente

obedecen a dos circunstancias 1) que 90 de estos vasos se encuentran colonizados por

bacterias al tercer diacutea de vida y 2) que el cateacuteter por su caraacutecter invasivo favorezca la

entrada de bacterias al organismo

Lo que llamo la atencioacuten en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad

es la diversidad de especies encontradas como fue 4 muestras de S haemolyticus

correspondiente al 103 S hominis-hominis con 3 muestras correspondiente al 77 y S

warnery que aunque no es considerada de importancia cliacutenica obtienen relevancia para este

estudio

El geacutenero maacutes relevante en esta investigacioacuten fue el S epidermidis con un 23 ya que es

una bacteria de flora normal esta bacteria estaacute muy lejos de ser oportunista ya que es

encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel respecto

a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial debido a esta caracteriacutestica

el s epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el cateacuteter

Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c albicans

esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraiacutedo de la madre al hijo siendo

esta la portadora de la candidiasis

33

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 34: TESIS - FIN 14-JUNIO.

La estancia hospitalaria favorecioacute la colonizacioacuten por agentes microbianos tanto por Gram

positivos y Gram negativos tenieacutendose que el 3846 de los pacientes permanecioacute entre 15

y 30 diacuteas dentro del hospital la estancia y el tiempo favorecioacute el desarrollo de

microorganismos en el cateter de los pacientes

El Cultivo semicuantitativo de la punta del cateacuteter que en esta investigacioacuten se empleo fue

descrito por primera vez por Maki y cols en 1977 Este meacutetodo cultiva la superficie externa

de la punta del cateacuteter con un criterio de positividad (gt15 UFC) fue elegido porque la mayoriacutea

de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infeccioacuten La

especificidad de eacutesta teacutecnica fue del 76

Este meacutetodo por su sencillez ha sido aceptado por la mayoriacutea de los laboratorios de

microbiologiacutea y es la teacutecnica de referencia que se tomo para esta investigacioacuten en donde de

los 39 casos positivos uacutenicamente 9 muestras correspondientes al 2307 coinciden con

este paraacutemetro esto no significa que el 7693 no tengan importancia cliacutenica

CONCLUSION

34

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 35: TESIS - FIN 14-JUNIO.

La colonizacioacuten de un cateacuteter depende de un proceso de adhesioacuten bacteriana mediada por

una interaccioacuten fiacutesico-quiacutemica (interaccioacuten hidrofoacutebica fuerzas de Van der Waals)

Staphylococcus epidermidis se une al cateacuteter principalmente mediante interaccioacuten

hidrofoacutebica la adhesioacuten de Staphylococcus aureus o Candida estaacute estimulada por las

proteiacutenas seacutericas siendo su adherencia mayor

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del

neonato al utilizar el cateacuteter como via de administracioacuten de soluciones o para la toma de

presioacuten durante su atencioacuten Hospitalaria obteniendo el genero y especie de los

micoorganismos encontrados

De los resultados obtenidos en esta investigacioacuten el agente microbiano con mayor incidencia

fueron los Gram positivos en un 50 donde el geacutenero maacutes relevante fue el S epidermidis

con un total de 9 casos correspondiente al 23

A pesar de que K pneumoniae al igual que E coli estaacuten en igualdades de proporcioacuten con 2

casos cada uno correspondiente al 51 llaman la importancia las P aeruginosa con 4 casos

correspondientes al 103 no sin olvidar la presencia de oacuterganos levaduriformes con 2 casos

cada uno de las especies albicas y tropicalis indiscutiblemente es importante su

identificacioacuten es estos casos en los que la prolongada hospitalizacioacuten y los procedimientos

invasivos a los que son sometidos los recieacuten nacidos han contribuido al aumento de ciertas

infecciones bacterianas La duracioacuten de la estancia hospitalaria un factores relacionado

directamente con infecciones nosocomiales

35

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 36: TESIS - FIN 14-JUNIO.

Aunque se tienen avances en la prevencioacuten y el tratamiento las infecciones continuacutean

siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal

Se proporciono esta informacioacuten al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad Logrando asiacute

los objetivos de esta investigacioacuten

BIBLIOGRAFIAS

1 Geral L Mandell John E Bennett Raphael Dolin ldquoPrinciples and practice of Infectious

Diseasesrdquo Churchill livingstone 2000 Vol 2 Num5 pp 3005-3015

36

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 37: TESIS - FIN 14-JUNIO.

2 Delgado P Rodriacuteguez P Moreno C Debrosse B ldquoDeterminacioacuten de antibiotipos de

Pseudomonas aeruginosardquo Mexicana Patologiacutea Cliacutenica 2004 Vol 51 Nuacutem 4 pp 226-230

3 Jaen Roxana Saporiti Adrian ldquoInfeccioacuten asociada a cateacuteter Estudio comparativo entre

recambio periodico o permanencia prolongadardquo Pediatrica Argentina 2004 Vol 2 pp 96-101

4 Gobierno de Chile Ministerio de Salud Servicio de salud Valdivia Hospital Base Valdivia

5 Grandi Carlos Valenti Eduardo ldquoPrevencioacuten de infecciones intrahospitalariasrdquo Revista del

Hospital materno infantil Ramoacuten Sarna 2005 Vol 24 Nuacutem 4 pp 179-182

6 Villalobos E Sandra ldquoCuidados y generalidades sobre cateacuteteres venosos centralesrdquo Hospital

de Pediatria Centro Meacutedico Nacional Siglo XXI IMSS Pp 29-34

7 Tome-Z Enrique Lizardo Luis ldquoExperiencia en el uso de cateacuteteres venosos centrales en

pacientes ingresados a las unidades de cuidados intensivos del instituto Hondurentildeo de

Seguridad Socialrdquo Honduras Pediaacutetrica 2000 Vol XXI Nuacutem 1

8 Garcia R Jose A Picazo Juan J Microbiologiacutea Cliacutenica Harcourt Brace 1996 Vol 2 Pp

302

9 Rumi B Luisa Torralbas O Jordi Mallafre CarmenrdquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccioacuten 3 Capitulo 52

10 Restrepo C Natalia Hoyos R Aacutengela ldquoUso de cateacuteteres umbilicales en recieacuten nacidos

experiencia en la Cliacutenica del Countryrdquo Sociedad Colombiana de Pediatria 2006 Vol

11Rumi B Luisa Mallafre Carmen Jimeacutenez M Marisol ldquoCuidados y prevencioacuten de la infeccioacuten

de cateacuteteres intravascularesrdquo Tratado de enfermeriacutea cuidados criacuteticos pediaacutetricos y

neonatales 2006 Seccion 3 Capitulo 51

12Cuerda Compes C Breton Lesmes I Bonada Sanjaume A Planas Vila A ldquoProtocolo para

el diagnostico y tratamiento de las infecciones relacionadas con el cateacuteter en el paciente con

nutricioacuten parenteralrdquo Revista cliacutenica Especializada 2005 Num8 pp 387-389

37

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 38: TESIS - FIN 14-JUNIO.

13 Rk Lane Matthay Ma Central Line Infections Curr Opin Crit Care 2002 8 441-448

14Eraso Jenny Troncoso Gloria Aacutelvarez Marta Ibaacutentildeez Milciacuteades ldquoComportamiento

epidemioloacutegico de la sepsis nosocomial en la Unidad de Recieacuten Nacidos de la Fundacioacuten

Cardioinfantilrdquo Nosocomial Infections at the Neonatal Intensive Care Unit of Fundacioacuten

Cardioinfantil in Bogotaacute 2008 Vol 6 Num 1 Pp 36-49

15R Clarck Powers R With R Bloom B Sanchez P Benjamin D Prevention and treatment of

nosocomial sepsis in the NICU J Perinatol 2004 24 446-53

16K Tiffany B Burke C Collins-Odoms D Oelberg Current practice regarding the enteral

feeding of high-risk newborns with umbilical catheters in situ Pediatrics 2003 112 20-3

17Hermansen MC Hermansen MG Intravascular catheter complications in the neonatal

intensive Care Unit Clin Perinatol 2005 32 141-56

18Hogan M Neonatal vascular catheters and their complications Radiol Clin North Am 1999

37 165-72

19Gaspar U Caacuteceres-Papadakis M Hortensia Peacuterez-Villalobos Ugalde- Fernaacutendez J Horacio

Gamboa-Caacutezares Isidro A ldquoComplicaciones asociadas a la colocacioacuten de cateacuteteres

umbilicales en neonatosrdquo Revista Mexicana de Pediatria 2007 Vol 74 Nuacutem 2 pp 70-73

20National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report data summary from

January 1992 through June 2003 issued August 2003 Am J Infect Control 2003 31 481-

498

21Brun-Buisson C Suspected central venous catheter-associated infection can the catheter be

safely retained Intensive Care Med 2004 30 1005-1007

22 Villavicencio M Heacutector D Ochoa Linares Marina ldquoGuiacutea para las prevencioacuten de infecciones

relacionadas a cateacuteter vascularrdquo Ministerio de salud 2006 Pp 7-17

23Deirdre OReilly Neonatologist Divisioacuten of Newborn Medicine Childrens Hospital Boston and

Instructor in Pediatrics Harvard Medical School Boston Massachusetts

38

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

pediaacutetricos del Hospital Universitario Medicina Universitaria Meacutexico 20068(31)79-83

28Gonzaacutelez Alemaacuten M Juaacuterez Gaacutemez I Gonzaacutelez Mesa L Nadal Becerra L Frecuencia de

colonizacioacuten de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en un grupo de nintildeos en edad

escolar Revista de enfermedades infecciosas en pediatriacutea 2007 Cuba Vol XX Nuacutem 80

pp 86-91

29Calderoacuten E R Sacsaquispe C R Pasteraacuten F G Galas M F Soto P J Riveros Q J and

cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

intensivos neonatal de lima Rev Peruacute MED Exp salud publica 2003 20 (3) 121-127

30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli productoras de β-lactamasas de espectro extendido

(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

39

  • Sistema Sensititre
Page 39: TESIS - FIN 14-JUNIO.

24Vostrugina Kristina Gudavičienė Daiva Vitkauskienė Astra Bacteremias in patients with

severe burn trauma Kaunas Lithuania Medicina (Kaunas) 2006 42(7)

25Bustos Martiacutenez J A Hamdan Partida A Gutieacuterrez Caacuterdenas M Staphylococcus aureus la

emergencia de un patoacutegeno en la comunidad Rev Biomed 2006 Meacutexico 17287-305

26Bonino A Gnesetti A Pujadas M Broggi A Infecciones por Staphylococcus aureus

meticilino resistente adquirido en la comunidad anaacutelisis de la poblacioacuten pediaacutetrica asistida en

el Hospital Policial de Uruguay 2004 Arch Pediatr Urug 2007 78(1) 41-47

27Muntildeoz Mendoza D Cavazos Elizondo M E Loera Reyna A Zapata Castilleja C Trevintildeo

Salinas M B Peacuterez Chaacutevez A Bacteriemia por Staphylococcus aureus en pacientes

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cools Caracterizacioacuten molecular de klebsiella pneumoniae Y enterobacter cloacae

productoras de szlig-lactamasas de Espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados

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30Martiacutenez Ramos P J Espinal Mariacuten P A Bustos G Aacute Mattar Velilla S Prevaleciacutea de

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(BLEE) en el Hospital San Jeroacutenimo de Monteriacutea Med UNAB 2005 Colombia8 (1) 15-22

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