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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE BIOLOGÍA Seroprevalencia de leptospirosis en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, 2010. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGA CON MENCIÓN EN LA ESPECIALIDAD DE MICROBIOLOGÍA PRESENTADO POR: Bach. PALOMINO PALOMINO, SARITA

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tesis medicina final terminado

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTBAL DE HUAMANGA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA DE FORMACIN PROFESIONAL DE BIOLOGA

Seroprevalencia de leptospirosis en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, 2010.

TESIS PARA OPTAR EL TTULO PROFESIONAL DE BILOGA CON MENCIN EN LA ESPECIALIDAD DE MICROBIOLOGA

PRESENTADO POR:

Bach. PALOMINO PALOMINO, SARITA

AYACUCHO, PER

2011

En memoria de mi padre Octavio y a mi madre Mara, hermanos Maruja, Jos Alfredo, Gladys,

Trudy y Mara Elena.AGRADECIMIENTOA la Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga, Facultad de Ciencias Biolgicas, Escuela de Formacin Profesional de Biologa por acogerme en sus aulas durante mis estudios y la culminacin de mi formacin profesional.

Al Laboratorio de Referencia Regional en Salud Pblica Ayacucho, a la Blga. Vanesa Garca Apaico por haberme permitido utilizar su ambiente, equipos y reactivos para el procesamiento de las muestras del presente trabajo de investigacin.

Al Instituto Nacional de Salud, a la Blga. Dana Gonzles Quispe, que labora en el rea de zoonosis bacteriana por el apoyo en la confirmacin de las muestras.

Al Blgo. Jos Alarcn Guerrero y a la Blga. Silvia Guerrero Quincho por su apoyo y asesoramiento durante la elaboracin y ejecucin del presente trabajo de investigacin.

A las Blga. Guadalupe Infante Crdenas y a la Blga. Miriam Chacaltana Medina por su apoyo en la recoleccin de las muestras.

NDICE

Pg.

RESUMEN. V I. INTRODUCCIN.. 1 II. MARCO TERICO.... 4 2.1. Antecedentes.. 4 2.2. Leptospirosis 6

2.3. Leptospiras. 7 2.4. Patogenia. 9 2.4.1. Mecanismo de Patogenia. . . 9

2.4.2. Rin. . 10 2.5. Aspectos Clnicos 11 2.5.1. Manifestaciones Clnicas 12 2.5.1.1. Leptospirosis Anicterica.... 12 2.5.1.2. Leptospirosis Ictrica. 13 2.6. Aspectos Epidemiolgicos. . 13 2.6.1. Fuentes de Infeccin y Modos de Transmisin. 13

2.6.2. Reservorio.............. 14

2.6.3. Factor de Riesgo 15 2.6.4. Distribucin Geogrfica 15 III. MATERIALES Y MTODOS 16

IV. RESULTADOS 21 V. DISCUSIN. 33

VI. CONCLUSIONES.. 45 VII. RECOMENDACIN 46 VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS. 47 ANEXOS. 51 Seroprevalencia de leptospirosis en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, 2010.

Autora

: Bach. Sarita PALOMINO PALOMINO

Asesores : Blgo, Jos ALARCN GUERRERO y Blga. Silvia GUERRERO QUINCHO RESUMEN

La investigacin se desarroll con la finalidad de determinar la seroprevalencia de leptospirosis en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos: Mariscal Cceres, Nery Garca Zarate, Mara Magdalena, Andrs F. Vivanco del distrito de Ayacucho, de junio a agosto de 2010. El estudio ejecutado fue descriptivo transversal, habindose tomado muestras de sueros sanguneos a 302 manipuladores de alimentos de los cuatro mercados, el procesamiento se realiz en el Laboratorio de Referencia Regional en Salud Pblica Ayacucho, mientras el control de calidad y serotipificacin en el Laboratorio de Metaxnica Bacteriana del Instituto Nacional de Salud. Las pruebas se realizaron con los sueros sanguineos por el mtodo de ELISA indirecta IgM. Elaborndose el anlisis estadstico descriptivo y los factores asociados (OR) de la informacin recopilada en la encuesta.

De las 302 muestras de suero sanguneo el 8.9%(27) presentaron anticuerpos anti-leptospiras, procedentes de los mercados: Mariscal Cceres 4,9%(2), Nery Garca Zarate 15,9%(13), Mara Magdalena 4,3%(4) y Andrs F. Vivanco 9,2%(8), donde el 8,4%(24) fueron mujeres, el 20% (3) varones y los serovares ms frecuentes fueron Cynopteri y Varillal segn la tcnica de microaglutinacin. Se concluye que la seroprevalencia de anticuerpos anti-leptospiras en manipuladores de alimentos en los mercados de abastos del distrito de Ayacucho fue de 8.9%, mientras los factores asociados a la positividad a anticuerpos anti-leptopiras en los manipuladores de alimentos fueron: estar en contacto con aguas servidas, agua estancada (OR=1,42), estar en contacto con ratas y ratones (OR=1,2), estar en contacto con carne de porcinos, carne de vacunos contaminados, (OR=1,15), si sus alimentos son consumidos por las ratas (OR=3,8).Palabras claves: Leptospirosis, anticuerpos anti-leptospiras, manipuladores de

alimentos.

I.- INTRODUCCIN

La leptospirosis est ampliamente distribuida en el pas; infectando al hombre, animales domsticos y silvestres, por lo que el conocimiento de su situacin actual es de inters en salud pblica humana y veterinaria (Cspedes y col., 2006).En los ltimos diez aos la leptospirosis se ha presentado como una enfermedad infecciosa importante en el Per; hoy la encontramos en las principales ciudades de la costa, sierra y selva, as como en las reas rurales del pas. La mortalidad ha ido en aumento debido a la poca sospecha clnica, a la carencia de laboratorios de diagnstico en muchas regiones, y a otras razones poco conocidas de la bacteria como su patogenicidad.En Ayacucho se presentan muchas personas con enfermedades infecciosas durante el ao, sin llegar a determinarse especficamente de que etiologa se trate, solo son diagnosticados con mayor frecuencia los casos de malaria, tifoidea, hepatitis, fiebre amarilla, Bartonelosis, entre otros, sin embargo, se dio poca importancia a la existencia de casos de leptospirosis y se desconoce la cantidad de personas infectadas, o las que fallecen debido a esta causa.

Existen evidencias en Ayacucho, de casos de leptospirosis reportados en el Valle del Ro Apurmac y ENE, existiendo zonas de riesgo como los mercados de abastos, por lo que se di el inters de realizar el presente trabajo para conocer la leptospirosis en una poblacin de riesgo. En los mercados de abastos del distrito de Ayacucho (Carlos F. Vivanco, Nery Garca Zarate, Mariscal Cceres y Mara Magdalena) existen vectores, reservorios transmisores de leptospira, como la presencia de roedores, perros callejeros, desechos slidos, charcos de agua, uso de agua en comn, venta de productos crnicos de dudosa procedencia, sin registro sanitario, venta de comida en malas condiciones de higiene, productos de dudosa procedencia, implicados en la transmisin de la enfermedad y las condiciones ambientales favorables, permiten la presencia de leptospiras en la zona de estudio. Teniendo en cuenta estos factores, existe la necesidad prioritaria de determinar la presencia de anticuerpos anti-leptospiras en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos de Ayacucho. Hay que considerar tambin la alta infestacin de ratas que son objeto los mercados de abastos en general, debido a la abundancia de alimentos, as como a la forma en que son almacenados. Este conjunto de circunstancias condicionaran a las personas que laboran en los mercados a estar expuestas a la leptospiras. Tales razones indujeron a realizar una encuesta estructurada entre las personas que trabajan en los mercados ubicados en el distrito de Ayacucho; trazndose los siguientes objetivos:

Objetivo General Determinar la seroprevalencia de leptospirosis humana en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos, del distrito de Ayacucho, 2010. Objetivo Especficos Determinar la presencia de anticuerpos anti-leptospiras en los manipuladores de alimentos. Identificar los factores de riesgo asociados a la transmisin de la enfermedad.

II. MARCO TERICO

2.1. ANTECEDENTESEn el Per; el primer caso de leptospirosis fue diagnosticado por Arce y Ribeyro en 1917, en la ciudad de Lima en un ciudadano Japons. En 1960, Herrer y Liceras, realizaron un trabajo en el mercado central de Lima y encontraron una incidencia de infeccin de las ratas (Rattus norvergicus) de 38,3% con Leptospira icterohaemorrhagiae en humanos se encontr anticuerpos anti-leptospiras, en 3 de 112 (2,7%) personas examinadas en dicho mercado. El serovar encontrado en esas personas fue canicola a diferencia del serovar icterohaemorrhagiae esperado. Esta incongruencia en los resultados fue interpretada como consecuencia de no haber usado antgeno proveniente de cultivos de cepas aisladas de las mismas ratas. De las tres personas positivas dos eran chinos y se dedicaban al expendio de carnes. Desde 1953, en el INS, se iniciaron estudios epidemiolgicos de leptospirosis en ratas de los desages, gatos, perros y cerdos sacrificados en el camal del Callao, as como al personal del mercado Central. A partir de 1962, se intensificaron estos trabajos, principalmente fuera de Lima, efectundose estudios en Tumbes, Ancash, Cajamarca, Arequipa, Amazonas, San Martin, Hunuco, Ayacucho, Loreto y Madre de Dios. Se concluy que era una enfermedad ocupacional presentndose espordicamente y que es producida principalmente por leptospiras del serovar Icterohaemorrhagiae, aislndose numerosas cepas de leptospiras, tanto del hombre como de animales domsticos y silvestres, algunos de los cuales resultaron serovares nuevos (INS, 2000).En 1965, Navarro y Miranda, realizaron un estudio serolgico en la ciudad de Trujillo a 200 personas expuestas a la infeccin por condicin de trabajo, encontraron 2,5 % de reacciones positivas a los serovares: Canicola, Hebdomanis, Pomona e Icterohaemorrhagiae.En 1981, Liceras y col., en Tingo Mara, Hunuco encontraron 11 de 57 (19%) muestras humanas con anticuerpos anti-leptospiras y de igual manera vacunos, cerdos, cabras y perros presentaron anticuerpos anti-leptospiras positivos. Se aislaron hasta 6 cepas de leptospiras en vacunos y cerdos. Ninguna de las cepas aisladas result virulenta ni produjo ictericia en los cobayos inoculados Durante el ao de 1997 el Instituto Nacional de Salud report 11 casos positivos, en 1998 por los problemas de fenmeno del Nio, el laboratorio de leptospiras report 98 casos positivos, en el 1999 se report 93 casos, en el 2000 se report 105 casos positivos, en el 2001, 113 casos y en el 2002 en Ayacucho 12 casos.En el 2002, Cruz y col., realizaron un trabajo de Hiperendemicidad de leptospirosis y factores de riesgo asociados en localidades arroceras del departamento de San Martn. De 457 pobladores, 115 (25,2%) tuvieron anticuerpos anti-leptospiras.En el 2004, Cspedes y col., en Coronel Portillo, Ucayali, se analizaron a 364 personas de las cuales 114 (31,3%) pobladores tuvieron anticuerpos anti-leptospiras y los serovares ms frecuentes fueron Bratislava y Georgia segn la tcnica de microaglutinacin. En el 2005, DIRESA., en el distrito de San Juan Bautista, Ayacucho se report un brote de leptospirosis en una comunidad urbana, de un total 67 personas se encontr una prevalencia de 57%(32). En el 2007, Cspedes y col., en Chancay, Lima realizaron un trabajo de prevalencia de anticuerpos anti-leptospiras en personas asintomticas y en canes. De 268 personas se encontr una prevalencia de anticuerpos anti-leptospiras de 10,1%. En el 2008, Vargas y col., en San Francisco, Ayacucho realizaron un trabajo de investigacin en 209 personas cuya prevalencia fue de 30,6%.2.2. LEPTOSPIROSIS

La leptospirosis humana resulta del contacto con agua, suelo o alimentos contaminados con la orina de ratas, canes, cerdos y otros animales leptospirricos. Las leptospiras mviles penetran por la piel rota o a travs de las superficies mucosas y generan una enfermedad aguda y sistmica que se hacaracterizado por fiebre de inicio brusco, mialgias, cefalea intensa y hemorragias conjuntivales. La mayora de los casos humanos son leves y anictricos; sin embargo, de 5 a 30% de los casos ictricos pueden ser mortales, debido a complicaciones hemorrgicas, meningitis asptica e insuficiencia renal (sndrome de Weil). Las leptospiras se multiplican en los tubulillos contorneados del rin y salen por la orina, alcanzando densidades de 107 por mililitro en la ratas, canes y ciertos animales silvestres infectados (Carrada, 2005).2.3. LEPTOSPIRAS Las leptospiras son espiroquetas enrolladas estrechamente delgadas, flexibles de 5 a 15m de longitud, que pertenecen a dos especies; L interrogans (parasita) y biflexa (vida libre). En la especie L. interrogans se agrupan las leptospiras patgenas clasificadas en grupos a travs de sus serogrupos y serovares que presentan caractersticas comunes. Las leptospiras se clasifican entre las bacterias de la siguiente manera: Reino : BacteriaOrden : SpirochaetalesFamilia : LeptospiraceaeGenero : Leptospira

Especie : Leptospira interrogans

23 serogrupos

Ms de 200 serovares (Madigan y col., 2001).Las leptospiras tienen espirales muy finas de 0.1 a 0.2m de ancho. Con frecuencia uno de los extremos del microorganismo se dobla y tiene forma de un gancho. Estos organismos tienen una gran movilidad que se puede observar en un microscopio de campo oscuro un delgado filamento axial y una delicada membrana, la espiroqueta es tan delicada que vista en el campo oscuro puede aparecer solo como una cadena. No se tie con facilidad pero puede ser impregnada con plata. La leptospira puede sobrevivir durante semanas en agua en particular con pH alcalino (Butel y col., 2008).La leptospira es aerobia, que utilizan cidos grasos de cadena larga como donadores de electrones y fuentes de energa. Con pocas excepciones estos son los nicos sustratos que utilizan las leptospiras para su crecimiento la clula es delgada, finamente enrollada y doblada en los extremos formando ganchos caractersticos semicirculares (Madigan y col., 2000).En el fri puede sobrevivir hasta 100 das a -20 C. Es importante mencionar que la pasteurizacin no destruye a las leptospiras lo que indica que es necesaria la ebullicin para cumplir con su destruccin. A los segundos muere con 100 C y slo a los 10 minutos si la temperatura es de 56 C. La orina cida es letal para las leptospirosis y por eso es necesario alcalinizarlos si se pretende aislarla de la orina de un enfermo. En el medio cido pierde su motilidad tan rpido como en 15 minutos (Farrar, 1995).2.4. PATOGENIA2.4.1. Mecanismo de patogeniaEl microorganismo llega al hombre al contactar directamente con orina o tejidos infectados, o en forma indirecta, a travs de agua, suelos o alimentos contaminados. La bacteria penetra principalmente, por inoculacin a travs de piel erosionada, mucosas nasofarngea, bucal, genital, o conjuntival Excepcionalmente, se ha documentado transmisin sexual y transplacentaria y la infestacin por ingestin de agua contaminada. Para ello, las leptospiras cuentan con propiedades agresivas, como su motilidad y, probablemente, el efecto de toxinas y/o enzimas del tipo fosfolipasas, que no han sido claramente definidas. Se ha planteado que la glicoprotena bacteriana actuara como endotoxina y perforara la membrana celular, causando la muerte celular. Desde la puerta de entrada se produce el paso a la sangre y luego a los diferentes rganos o sistemas, produciendo las manifestaciones (Zunino y Pizarro, 2007). Los anticuerpos en la leptospirosis son detectables con tcnicas de aglutinacin, al final de la primera semana de enfermedad, y alcanzan niveles mximos en la tercera y cuarta semanas. Luego declinan gradualmente, pero siguen siendo titulables durante meses o aos. La gran movilidad y la finura de la Leptospira facilitan la invasin del sistema nervioso central (meningitidis despus de penetracin por la piel la asptica) y del ojo, produciendo cuadros de conjuntivitis, uvetis, iridociditis y la demostracin del parsito en el lquido cefalorraqudeo o en el humor acuoso del ojo (Carrada, 2005).2.4.2. En el rinLa enfermedad se inicia con un periodo febril variable durante el cual las espiroquetas pueden encontrarse en el torrente sanguneo. Estas se establecen en rganos parenquimatosos en particular hgado y riones produciendo hemorragias y necrosis de los tejidos dando lugar a la disfuncin de estos rganos (ictericia, hemorragias y retencin de nitrgeno) las anomalas de la funcin renal pueden ser profundas y desproporcionadas con respecto a los cambios histolgicos observados en el rin (Butel y col., 2008). El compromiso renal puede manifestarse en una amplia gama de grados que incluye desde simples alteraciones del sedimento urinario hasta cuadros gravsimos de insuficiencia renal aguda. Este ltimo compromiso representa la principal causa de bito. La insuficiencia renal es primariamente el resultado del dao tisular y es habitual encontrar leptospiras en la luz tubular, la causa principal de la lesin tubular parece ser la hipoxemia o algn efecto toxico directo de las leptospiras. Las alteraciones inflamatorias en el rin pueden observarse en los estadios mas tardos del desenvolvimiento de la lesin renal y en un caso de asociacin con inmunocomplejos circulantes y depsitos de componentes del complemento y cuerpos electro densos en los glomrulos sugestivos de glomerulonefritis por inmunocomplejos. La hipovolemia y la hipotensin causadas por la prdida de volumen intravascular como resultado de la lesin endotelial, pueden contribuir al desenvolvimiento de la insuficiencia renal (Aroca y col., 2004).2.4. ASPECTOS CLNICOSLa leptospirosis presenta cuadros clnicos diversos, conforme al tropismo del agente, intensidad de la infeccin y posiblemente de las condiciones inmunitarias del hospedero. Entre los signos y sntomas, algunos son comunes a todas las formas clnicas (Barbosa, 1972).La leptosipirosis es una tpica enfermedad bifsica. Este comportamiento bifsico se desarrolla en los dos tipos de presentaciones que tiene esta enfermedad: la forma anictrica y la segunda ms grave, en la forma ictrica. (Acha y Szyfres, 1992).El perodo de incubacin es de 7 a 12 das (mximo de 2 a 20 das). Esto se ha podido estudiar despus de exposicin accidental o el tiempo transcurrido despus de inmersin. Enseguida comienza la primera fase que es la llamada fase sptica que dura alrededor de 4 a 7 das, donde las caractersticas principales pueden ser gripales. En esta fase se puede aislar a las leptospiras de la sangre, del lquido cefalorraqudeo (LCR) y de la mayora de los tejidos.

Posteriormente aparece una etapa intercalar donde inclusive puede el paciente presentarse afebril por uno o dos das. Luego aparece la segunda fase, que es llamada fase inmune, donde caractersticamente las leptospiras desaparecen de la sangre y LCR siendo posible hallarlas en el rin, orina y humor acuoso. (Carrada, 2005).Algunas veces puede aislarse a las leptospiras hasta 24 horas despus de aparecida la ictericia (en las formas ictricas) En esta fase que dura de 4 a 30 das se desarrollan los anticuerpos circulantes presentndose la afectacin renal, heptica, meningitis, uvetis (INS, 2000).Entre los pacientes con leptospirosis, el 90% presenta la forma anictrica que es la mas leve de la enfermedad mientras que entre 5-10% tiene la forma grave de la leptospirosis con ictericia. Esta ltima es llamada enfermedad de Weil, se admite que el 30-70% de los pacientes presentan manifestaciones diagnosticadas como gripe o resfriado y solo se identifican mediante estudios serolgicos. Se encontr evidencia serolgica de infeccin en aproximadamente 15% de las personas que trabajan en mataderos y en veterinarios (Aroca y col., 2004).2.5.1. Manifestaciones clnicas2.5.1.1. Leptospirosis anictrica En la fase sptica la enfermedad se caracteriza por ser de inicio sbito con fiebre remitente alta, cefalea persistente, mialgias intensas, y dolor abdominal. Adems malestar general y astenia. Esta es la forma leve de la leptospirosis. Estos signos y sntomas se mantienen por 4 a 7 das. De manera general no hay muertes en esta fase (Aroca y col., 2004).Los pacientes en esta fase estn agudamente enfermos, febriles y con bradicardia relativa. La cefalea es intensa y su presencia y severidad puede anunciar que se inicia la meningitis. Lo ms frecuente en la fase sptica es la sensibilidad muscular y las manifestaciones oculares como hemorragias conjuntivales, fotofobia y dolor ocular. En la segunda semana de la enfermedad se inicia la fase inmune. En ella, la fiebre, en caso de estar presente, es baja y dura de uno a tres das. Esta fase se correlaciona con la aparicin de anticuerpos IgM circulantes mientras que la concentracin se encuentra en el rango normal (Carrada, 2005).2.5.1.2. Leptospirosis ictrica (sndrome de Weil) La forma ictrica fue descrita originalmente con la especie L. icterohaemorrhagiae pero se observa casi en cualquier tipo de leptospira. Este sndrome tiene como caracterstica principal la disfuncin renal y heptica con fenmenos hemorrgicos colapso vascular as como alteraciones graves de conciencia y una mortalidad que puede llegar al 5 10% de los pacientes. Las manifestaciones de este sndrome comienzan a aparecer entre el tercero y sexto da de enfermedad pero es en la segunda semana que se les identifica plenamente (INS, 2000).2.6. ASPECTOS EPIDEMIOLOGICOS2.6.1. Fuente de infeccin y modo de transmisin

La infeccin en el humano se produce por va directa a travs de la piel y mucosa nasal, oral o conjuntival. La forma indirecta se produce al contacto con agua, suelo y alimentos contaminados por orina de animales infectados. La exposicin a aguas contaminadas por roedores que infestan los campos, es una forma frecuente de infeccin en trabajadores agrcolas (Acha y Szyfres, 1992).La humedad, temperatura elevada y la abundancia de roedores son factores que pueden desencadenar brotes en reas tropicales o semitropicales. Las Leptospiras patgenas (L. interrogans) solo se multiplican dentro del organismo de animales por lo que los focos de leptospirosis precisan condiciones ambientales favorables para la supervivencia del agente causal en el medio exterior (Cspedes y col., 2006).As el agua salina no favorece su supervivencia al contrario del agua dulce de arroyos, embalses naturales etc. Necesitan un alto grado de humedad, un pH neutro o ligeramente alcalino y temperaturas adecuadas. La composicin suelo tambin influye en su supervivencia. La fuente de infeccin y el modo de transmisin son variados y tienen relacin con actividades de riesgo (Acha y Szyfres, 1992).2.6.2. ReservorioLos reservorios de las leptospirosis se encuentra en una serie de animales salvajes y domsticos. Los animales son frecuentemente asintomticos, pero pueden ser portadores de leptospiras en gran nmero (>10 microorganismos/g) en sus riones y excretndolas en ros, canales, etc. (Carrada, 2005).Serovariedad de la leptospira infectante vara de acuerdo con el animal afectado. En las ratas el sertipo caracterstico es el icterohemorrhagiae, en los cerdos el pomona, en el ganado bovino hardjo, en los perros canicola y en los mapaches autumnales. En los reservorios la infeccin suele ser oligo o asintomtico pero mantienen leptospiuria por largo tiempo y en algunas especies por toda la vida. Los roedores son los animales ms importantes en la transmisin de las leptospirosis, sobre todo la relacionada a las formas ictricas y de mayor cuidado en el humano. La mayora de ellos vive en ambientes silvestres en equilibrio con la naturaleza; pero, al producirse alteraciones en la misma como consecuencia del Fenmeno del El Nio, que alter el curso por la lluvia excesiva, con destruccin de sus madrigueras, los acerc a la vivienda humana (INS, 2000).2.6.3. Factores de riesgo

El contacto directo entre roedores y carnvoros con la fuente de alimento peridomiciliar para roedores salvajes, es uno de los principales factores de riesgo debido a que expone al humano. La leptospirosis se asocia a diferentes ocupaciones por lo que algunos casos es una enfermedad de tipo ocupacional (INS, 2000).2.6.4. Distribucin geogrfica

La distribucin geogrfica de la leptospirosis es mundial. Sin embargo vara en diferentes partes del mundo. La leptospirosis tiene alta prevalencia en los pases tropicales donde hay precipitaciones pluviales que caen sobre el suelo alcalino y neutro. En el Per los serovares con mayor prevalencia son icterohemorragiae, grippothyphosa, pomona, cynopteri, georgia, canicola, djasinaman y autumnales (Barbosa, 1972).Con el fenmeno de globalizacin, los cambios climticos y migracionales de animales y personas, han hecho que la bacteria se disemine y que emerja en muchas regiones, convirtindola en un problema latente para cualquier tipo de poblacin. (Cspedes y col., 2006).III. MATERIALES Y MTODOS

3.1. METODOLOGA

3.1.1. Tipo de investigacin

No experimental

3.1.2. Nivel de investigacinEstudio descriptivo transversal.3.1.3. PoblacinLa poblacin de los manipuladores de alimentos de los mercados: Carlos F. Vivanco, Nery Garca Zrate, Mariscal Cceres y Maria Magdalena, segn la Administracin de los mercados fue de 1578 personas.a) Criterios de inclusin Personas mayores de 8 aos de edad.

Personas que aceptaron y firmaron el consentimiento informado para la recoleccin de muestras.

Personas que vendan: comida, verduras, frutas, abarrotes, carne (res, pollo, porcino, ovino y pescado), jugo, pan, queso, especera.

b) Criterios de exclusin

Personas menores de 8 ao de edad

Personas con trastorno mental (psicosis, esquizofrenia)

Personas que no estn registrados en el padrn.

Personas que vendan: ropa, joyera, plsticos.3.1.4. MuestraSe consider 302 manipuladores de alimentos como tamao muestral. Se realiz un muestreo aleatorio proporcional al nmero de manipuladores de los mercados. El muestreo se consider a travs del padrn de inscritos en la oficina de Administracin de los mercados segn numeracin, se cogi balotas y se procedi a sortear para las muestras hasta completar el mnimo tamao de muestra requerido para cada mercado, este tamao muestral se obtuvo por la siguiente frmula:

n = Tamao de muestra. N = Poblacinp = 50.0% manipuladores sin anticuerpos de Leptospira.q = 50.0% manipuladores con anticuerpos de Leptospira. E = 5% error permitido, 95% nivel de confianza.Z = 1.96Factor constante = 302 = 0,1916

1578

MercadoSubpoblacinMuestra

uestra (n)neres

Mariscal Cceres21441

Nery Garca Zarate42882

Mara Magdalena48192

Andrs F. Vivanco45487

TOTAL1578302

3.2. RECOLECCION DE DATOS3.2.1. Captacin de la poblacin a estudiar

Se coordin con la Municipalidad Provincial de Huamanga con la Oficina de Subgerencia y Mercados y con los Administradores de los mercados para la ejecucin del estudio. Se capt a la poblacin que cumplieron con los criterios de inclusin en el periodo de junio a agosto de 2010.3.2.2. Recoleccin de la informacin A los participantes que cumplieron con el criterio de inclusin, se explic sobre la trasmisin, signos y sntomas y consecuencias de la enfermedad, una vez obtenida la aceptacin y la firma del consentimiento informado de la persona, se aplic una encuesta estructurada en la que contena datos generales, epidemiolgicos. Inmediatamente despus de llenado la ficha epidemiolgica. Se procedi a tomarles la muestra de sangre usando la tcnica convencional y siguiendo las normas de bioseguridad.3.3. OBTENCIN DE MUESTRA DE SANGRESe obtuvieron muestras de sangre venosa de 10 mL de cada participante, utilizando tubos al vacio sin anticoagulante. Se dejaron las muestras en reposo aproximadamente por unos 20 minutos para luego centrifugar a 2500 rpm durante 10 minutos. Los sueros sanguneos se separaron con la ayuda de una pipeta Pasteur pasando a crioviales estriles de 2 mL de capacidad, los cuales se conservaron de 4 a 8 C. Cada vial fue rotulado con la identificacin de cada persona (INS, 2002).3.4. PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS3.4.1. Procesamiento en laboratorioEn el Laboratorio Regional de Salud Pblica de Ayacucho de la Direccin Regional de Salud, se realizaron los procesamientos de los sueros sanguneos y se determinaron la presencia de anticuerpos anti-leptospiras, mediante la prueba de ELISA indirecta IgM. Las mismas muestras de sueros juntamente con las fichas epidemiolgicas de cada paciente y los resultados obtenidos en Laboratorio Regional de Ayacucho, sean positivos o negativos, fueron enviados en recipientes primarios en este caso crioviales conteniendo 1.5 mL de suero sanguneo, rotulados y embalados con parafilm y colocados en una caja de teknoport con cubetas de hielo, manteniendo la cadena de fri 4 C y fijados con soportes con el fin de inmovilizarlas al momento del transporte terrestre al laboratorio de Metaxnica Bacteriana del Instituto Nacional de Salud Pblica, Lima, para su control de calidad, serotipificacin y confirmacin de resultados, mediante la tcnica de microaglutinacin. 3.4.2. Tcnica de ELISA indirecta IgM (Enzima Linked Inmunoasorbent Assay) para leptospirosis Procedimiento Las muestras de sueros sanguneos y los reactivos del kit se mantuvieron a temperatura ambiente 15 minutos antes de realizar la prueba. Las muestras de sueros, los controles positivo, negativo y calibradores se diluyeron 1:100 (5L) con (495L) del diluyente de suero en tubos de dilucin. Se agregaron 100L de controles positivo, negativo, calibradores y muestras de sueros a cada pocillo de la microplaca de cada dilucin respectivamente. Se incubaron por 1 hora a 37 C. Se diluyeron la solucin de lavado con 95 mL de agua destilada estril, 5mL de PBS 20X y 1mL tween 20. Se lavaron 6 veces con la solucin de lavado cada vez con 300L de buffer por pocillo. Se diluyeron 2L de conjugado con 1ml de diluyente de conjugado. Se agregaron 100 L de conjugado anti-humano IgM en cada pocillo de la microplaca. Se incubaron por 30 minutos a 37 C. Se lavaron 6 veces con la solucin de lavado cada vez con 300L de buffer por pocillo. Se agregaron 100L de sustrato ABTS a cada pocillo. Se incubaron por 30 minutos a 37 C. Terminado la incubacin, se agregaron 100L de SDS a 1%. Se realizaron las lecturas en un lector de microplacas a 405 nm. Los controles positivos presentaron una coloracin verde intenso y el control negativo fue transparente. Los calibradores estuvieron ligeramente coloreados. Las muestras positivas presentaron una coloracin verde semejante al control positivo Interpretacin Posterior a la lectura se realiz el clculo de la unidad lepto para cada

muestra mediante la siguiente frmula

(UL) = 10 x D. Om X

UL = Unidades lepto

D.Om = Densidad ptica de la muestra

X = Promedio de densidad ptica de calibradores de corte Se consider una muestra como positivo, si las unidades obtenidas mediante este clculo fuern mayores a 11. Se consider una muestra como negativa, cuando las unidades obtenidas mediante el clculo fueron menores a 9.

Si en una muestra se detectaron valores intermedios entre 9 y 11, se realiz un segundo anlisis (INS, 2002).Unidad leptoResultadosInterpretacin

< 9

NegativoNo evidencia de anticuerpos IgM contra leptospira

9-11IndeterminadoSugiere segunda muestra

1

PositivoPresencia de anticuerpos IgM contra leptospira

3.5 ANLISIS DE DATOSSe realiz un anlisis estadstico descriptivo de todos los datos recolectados y de los resultados de diagnstico de las muestras en estudio, se determin la seroprevalencia de leptospirosis humana. Mediante el software SPSS versin 18; con los cuales se realizaron los clculos de frecuencias y anlisis de significancia estadstica. Se busc los factores asociados con leptospiras calculando el Odds Ratio (OR).IV RESULTADOS

Resultado N 1 La prevalencia de anticuerpos anti-leptospiras en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho de junio - agosto de 2010 fue de 89 x 1000 manipuladores de alimentos.Cuadro N 01: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, junio - agosto de 2010.

Anticuerpos anti-leptopiras N%

Positivo278,9

Negativo27591,1

Total302100,0

Cuadro N 02: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras segn sexo en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, junio - agosto de 2010.

SexoAnticuerpos anti-leptospiras

PositivoNegativoTotal

N%N%N%

Femenino248,4263

91,6287100,0

Masculino3 2012

8015100,0

Total27275302

Cuadro N 03: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras segn edad en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, junio - agosto de 2010.Edad (aos)Anticuerpos anti-leptospiras

PositivoNegativoTotal

N%N%N%

Menos de 170011001100,0

18 - 3049,33990,743100,0

31 - 431211,29588,8107100,0

44 - 5688,98291,190100,0

57 a mas34,95895,161100,0

Total27275302

Cuadro N 04: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras segn nivel de instruccin en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, junio - agosto de 2010.

Nivel de instruccinAnticuerpos anti-leptospiras

PositivoNegativoTotal

N%N%N%

Analfabeta(o)29,51990,521100,0

Primaria88,38891,796100,0

Secundaria1510,113489,9149100,0

Superior25,63494,436100,0

Total27275302

Cuadro N 05: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras segn tipo de alimento de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, junio - agosto de 2010.

Tipo de alimento que manipulaAnticuerpos anti-leptospiras

PositivoNegativoTotal

N%N%N%

Carne de res914,85285,261100,0

Carne de Pollo15,31894.719100,0

Comida1014,16185,971100,0

Jugo36,54393,546100,0

Abarrotes413,32686,730100,0

Verduras0 018100,018100,0

otros (Queso, pan,especeras)0057100,057100,0

Total27275302

Cuadro N 06: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras segn la procedencia de mercado de abastos en manipuladores de alimentos del distrito de Ayacucho, junio - agosto de 2010.

Procedencia de mercadosAnticuerpos anti-leptospiras

PositivoNegativoTotal

N%N%N%

Mariscal Cceres24,93995,141100,0

Nery Garca Zarate1315,96984,182100,0

Magdalena44,38895,792100,0

Andrs F Vivanco89,27990,8 87100,0

Total27275302

Cuadro N 07: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras segn procedencia de los manipuladores de alimentos que laboran en los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, junio - agosto de 2010.

ProcedenciaAnticuerpos anti-leptospiras

PositivoNegativoTotal

N%N%N%

Ayacucho85,6135 94,4143100,0

San Juan Bautista212,51487,516100,0

Carmen Alto216,71083,312100,0

Jess Nazareno005805100,0

Huanta116,7583,36100,0

Tambo11099010100,0

Ayna - San Francisco114,3685,77100,0

Cangallo214,31285,714100,0

Vilcas Huamn11099010100,0

Otros911,470 88,679100,0

Total27275302

Cuadro N 08: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras segn antecedentes epidemiolgicos (exposicin ocurrida en las dos ltimas semanas) en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, junio agosto de 2010.

Positivo Negativo Total

Antecedentes N % N % N % OR Tuvo alguna herida en las manos? Abierta 21 11,1 168 88,9 189 100,0 Puncin 6 6,2 91 93,8 97 100,0 No tuvo 0 0,0 16 100,0 16 100,0 Total 27 275 302 Tuvo contacto con aguas servidas, agua estancada? Si 25 9,2 247 90,8 272 100,0

No 2 6,7 28 93,3 30 100,0

Total 27 275 302 1,42Tuvo contacto con orina de ratas, ratones? Si 24 9,2 239 90.8 263 100,0

No 3 7,7 36 92,3 39 100,0

Total 27 275 302 1,2Tuvo contacto con carne de porcinos, carne de vacunos? Si 16 9,5 153 90,5 169 100,0 No 11 8,3 122 91,7 133 100,0

Total 27 275 302 1,15Cuadro N 09: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras segn antecedentes epidemiolgicas (caractersticas del mercado) en los manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, junio agosto de 2010.

Positivo Negativo Total

Caracterstica del mercado N % N % N % ORSe abastece de agua por?

Red pblica 17 7,3 215 92,7 232 100,0Grifo con conexin en puesto 10 14,3 60 85,7 70 100,0

Total 27 275 302 0,47Su mercadera est sobre? Tablero 6 8,3 66 91,7 72 100,0

Suelo 0 0,0 20 100,0 20 100,0 Otros 21 10 189 90 210 100,0

Total 27 275 302 Los alimentos que vende son consumidos por las ratas? Si 25 26,9 68 73,1 93 100,0 No 2 10 207 90 20 100,0 Total 27 275 302 3,8Cuadro N 10: Frecuencia de anticuerpos anti-leptospiras segn antecedentes epidemiolgicos (actitudes y prcticas) en manipuladores de alimentos de los mercados de abastos del distrito de Ayacucho, junio-agosto de 2010.

Positivo Negativo Total

Actitudes y Practicas N % N % N % Se lava las manos antes o despus de comer?

Si 5 1,9 264 98,1 269 100,0

No 22 66,7 11 33,3 33 100,0

Total 27 275 302 (P