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SIGNIFICACION CLINICA

El tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) es una

prueba sensible a la deciencia de factores procoagulantes

del plasma as como a la presencia de ciertos inhibidores

de la coagulacin. Sirve para detectar anormalidades en

la va intrnseca de la coagulacin, como son los factores

necesarios para la formacin del activador intrnseco de

la protrombina, o sea los factores VIII, IX, XI y XII. Tam-

bin detecta deciencias severas de los factores II, V, X y

bringeno, no siendo as con los trastornos plaquetarios,

las deciencias de los factores VII y XIII ni los problemas

vasculares. La rapidez, sencillez y reproducibilidad de la

prueba la hacen muy adecuada para el control de la tera-putica anticoagulante por heparina. Tambin permite la

identicacin rpida de hemoflicos en potencia, a n de

poder someterlos a tratamientos preventivos prequirrgicos

y evitar problemas hemorrgicos.

FUNDAMENTOS DEL METODO

El ensayo se basa en la medida del tiempo que tarda en coa-

gular un plasma descalcicado, colocado en un bao a 37oC

y en presencia de un exceso de cefalina, activador y calcio.

REACTIVOS PROVISTOS

A. Reactivo A:viales conteniendo cefalina bovina con cido

ellgico como activador soluble.B. Reactivo B:solucin de cloruro de calcio estable 0,025 mol/l.

INSTRUCCIONES PARA SU USO

Reactivo A:listo para usar. Homogeneizar antes de usar.

Reactivo B:listo para usar.

PRECAUCIONES

Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro".

Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales

de trabajo en el laboratorio de anlisis clnicos.

Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de

acuerdo a la normativa local vigente.

ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE

ALMACENAMIENTO

Los Reactivos Provistos son estables en refrigerador (2-

10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.

No congelar.

MUESTRA

Plasma

a) Recoleccin:obtener sangre cuidadosamente (evitando

estasis o trauma) y colocar en un tubo con anticoagulant

proporcin 9 + 1 exacta (ejemplo: 4,5 ml de sangre + 0,de Anticoagulante TP de Wiener lab.). Mezclar suaveme

Centrifugar y separar el plasma antes de los 30 minutosrecomendable efectuar la extraccin con jeringas plstib) Aditivos:para obtener el plasma debe emplearse A

coagulante TP de Wiener lab. o citrato de sodio 130 mm(3,8%) o 109 mmol/l (3,2%).c) Sustancias interferentes conocidas:

- Las contaminaciones, visibles o no, son causa de tiemfalsamente prolongados.

- No debe emplearse EDTA o heparina para obtener plas

- Hemlisis visibles dicultan la medicin foto-ptica deresultados.

Referirse a la bibliografa de Young para los efectos dedrogas en el presente mtodo.d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento

plasma debe mantenerse en refrigerador (2-10oC) hel momento de efectuar la prueba. Este perodo no d

prolongarse ms de 4 horas. En caso de no poder prsarse en este lapso, el plasma debe congelarse a -2Este procedimiento, al igual que el descongelado, d

realizarse con rapidez (sumergiendo en bao a 37oC) pra la determinacin.La muestra debe conservarse hasta el momento de

anlisis en tubos plsticos para minimizar los efectoactivacin por contacto que pueden ocurrir con los tude vidrio.

MATERIAL REQUERIDO(no provisto)

- Tubos de hemlisis.- Pipetas y micropipetas para medirlosvolmenesindica- Bao de agua a 37oC.

- Cronmetro.- Fuente luminosa, para la observacin del cogulo.

PROCEDIMIENTO

Precalentar el Reactivo B antes de realizar la prueba bao de agua a 37oC.En un tubo de hemlisis colocar:

Muestra (plasma desconocido o control) 100

Reactivo A 100

Mezclar e incubar 3 minutos a 37oC, luego agregar:

Reactivo B(a 37oC) 100

Disparar simultneamente un cronmetro. Agitar brev

APTTes

Reactivos para la determinacin del Tiemp

Tromboplastina Parcial Activ

ellgiC

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mente para homogeneizar el contenido, mantener en el

bao unos 25 segundos. Luego sacar el tubo del bao,

inclinar suavemente una vez por segundo y detener el

cronmetro en el momento de la formacin del cogulo.

Pueden emplearse para la lectura de los resultados

aparatos automticos o semiautomticos que detecten

la formacin de cogulos de brina, por mtodos foto-

pticos o mecnicos.

Tomar nota del tiempo de coagulacin.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Los resultados pueden expresarse de distinta forma:

1) como tiempo de tromboplastina parcial activada en

segundos;

2)como relacin entre el tiempo obtenido con el desconocido

y el de un plasma control.

METODO DE CONTROL DE CALIDAD

Plasma Control normal - patolgico de Wiener lab..

VALORES DE REFERENCIA

El intervalo de valores de referencia observados en indivi-duos normales, empleando la tcnica manual mencionada,

oscila entre 30-43 segundos.

Se consideran fuera de lo normal valores que dieran en ms

de 6 segundos de un pool de plasmas normales.

Es recomendable que cada laboratorio procese un pool de

plasmas normales con cada lote de reactivos empleado y

que correlacione los valores obtenidos para los pacientes

con el de dicho plasma, haciendo constar estos resultados

en el informe.

Cada laboratorio debe establecer sus propios valores de

referencia a partir de las tcnicas e instrumental empleado,

ya que los valores de APTT de individuos sanos varan en

funcin del laboratorio, dependiendo de la tcnica empleada.

CURVA DE CALIBRACION

Este mtodo es til como control de la respuesta a la hepa-

rina en pacientes tratados con este anticoagulante.

La tcnica empleada es la siguiente:

Preparar una Solucin de Trabajo de heparina en solucin

siolgica cuya concentracin sea 10 unidades/ml. Debe

emplearse la misma heparina que se suministra al paciente.

Preparar diluciones de esta Solucin de Trabajo utilizando

un pool de plasmas frescos normales o Plasma Control

normalcomo diluyente. Se debern obtener diluciones de

0,8; 0,6; 0,4; 0,2 y 0,1 unidades/ml.

Determinar el tiempo de tromboplastina parcial para cadauna de estas soluciones as como para el pool de plasmas

y gracar en papel semilogartmico APTT vs. concentracin

de heparina.

El valor obtenido para el paciente debe correlacionarse con

los valores de la grca para obtener la concentracin actual

de heparina circulante.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver Sustancias interferentes conocidas y Estabilidad e ins-

trucciones de almacenamiento en MUESTRA.

El mecanismo de la coagulacin involucra una serie

reacciones enzimticas que pueden ser inuenciadas

toda condicin que afecte a los sistemas enzimtico

general, razn por la cual se deben observar las mis

precauciones metodolgicas.

Debe tenerse en cuenta que variaciones en la relacin

coagulante/muestra o en la concentracin de citrato utiliz

afectan los tiempos de tromboplastina parcial activada

lo que se recomienda controlar la dosis de anticoagul

empleada al tomar la muestra.

PERFORMANCE

Reproducibilidad:los estudios de precisin se realiz

siguiendo una modicacin del protocolo EP5-A del NC

(National Committee on Clinical Laboratory Standards

obtuvieron los siguientes resultados:

Precisin intraensayo

Muestra Nivel D.S. C.

Plasma Control normal 34,1 seg 0,49 seg 1,4

Plasma Control patolgico 87,9 seg

0,49 seg 0,5Pool de plasmas normales 29,3 seg 0,35 seg 1,1

Precisin total

Muestra Nivel D.S. C.

Plasma Control normal 34,1 seg 1,00 seg 2,9

Plasma Control patolgico 87,9 seg 3,66 seg 4,1

Pool de plasmas normales 29,3 seg 0,51 seg 1,7

PRESENTACION

- 150 determinaciones (6 x 2,5 ml). (Cd 1705004).

BIBLIOGRAFIA

- Bell, W.N.; Alton, H.G. - Nature 174:880 (1954).

- Dacie, J.B.; Lewis, S.M. - Hematologa Prctica - Edicio

Toray, 2aEdicin (1970).

- Wintrobe, M.M. - Hematologa Clnica, 3a. Edicin I

mdica (1969).

- Bragos, I.; Rodrguez Pcora, S.; Lorenzo, L.; Cap

G. - 53 Triduo Bioqumico Cientco Anual, Baha Bla

(1988).

- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Te

AACC Press, 4thed., 2001.

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2000 Rosario - Arge

M

Wiener Laboratorios S.A.I.C.Riobamba 29442000 - Rosario - Argentinahttp://www.wiener-lab.com.arDir. Tc.: Viviana E. CtolaBioqumicaProducto Autorizado A.N.M.A.T.Cert. N: 1225/95

UR1

Wiener la

SmbolosLos siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnstico de Wiener lab.

CEste producto cumple con los requerimientos

previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de

productos sanitarios para el diagnstico "in vitro"

V Uso diagnstico "in vitro"

X Contenido suciente para ensayos

H Fecha de caducidad

l Lmite de temperatura (conservar a)

No congelar

F Riesgo biolgico

Volumen despus de la reconstitucin

Contenido

g Nmero de lote h Nmero de catlogo

Calibrador

b Control

b Control Positivo

c Control Negativo

i Consultar instrucciones de uso

M Elaborado por:

Xn

Nocivo

Corrosivo / Castico

Irritante

Xi

P Representante autorizado en la ComunidadEuropea

Cont.

Calibr.