Tincion Histologica Professor: Verónica Pantoja. Lic. MSP. “Kinesiologia” IPCHILE -...

Tincion Histologica

Professor: Verónica Pantoja . Lic. MSP.“Kinesiologia”

IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

Reconocer las principales funciones y características fisiológicas de la sangre y relación con el sistema inmune..

Técnica Histológica

• Fijación• Deshidratación• Aclaramiento• Inclusión• Corte• Tinción• Montaje

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Colorantes

• ¿Por qué colorear una muestra?

Los diversos elementos de los tejidos poseen prácticamente el mismo índice de refracción, lo que hace que el reconocimiento de distintas estructuras sea una tarea difícil.


Tipos de Colorantes• Colorantes que diferencian los componentes ácidos

y básicos de la célula.

• Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular.

• Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.


Tipos de Coloraciones

• Directas: se producen por inmersión en el baño colorante.

• Indirectas: en este tipo de coloración, el colorante no puede actuar directamente, el objeto a colorear debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante, esta se llama mordiente.


Fundamentos Químicos de la Coloración

• Clasificación colorantes según afinidad:

– Colorantes nucleares o básicos: su componente colorante activo es una base coloreada que se combina con los ácidos nucleicos.

– Colorantes citoplasmáticos o ácidos: su componente activo es un ácido coloreado que se combina con el citoplasma.

– Colorantes neutros, tanto el ácido como la base son coloreadas.


Colorantes básicos

ANILINA+ Cl-

• Los colorantes básicos reaccionan con los GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes texturales, que son los grupos fosfato de los ácidos nucleicos (ADN y RNA), los grupos SULFATO de los glucosaminoglucanos y los GRUPOS CARBOXILO de las proteínas. La reacción de estos grupos varía según el pH.


Colorantes ácidos

Na+ ANILINA-

• Los colorantes ácidos se unen primariamente a los componentes texturales por medio de enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los colorantes básicos. Las anilinas ácidas reaccionan con grupos catiónicos, como los grupos amino ionizados de las proteínas.


Entonces:

• Elementos que se tiñan con colorantes básicos (ej. Hematoxilina) son basófilos:– La Heterocromatina y los

Nucleolos por los grupos Fosfato ionizados.

– Ergatoplasma por grupos Fosfato ionizados.

– Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados

• Elementos que se tiñan con colorantes ácidos (ej. Eosina) son acidófilos:– La mayor parte del citoplasma

no especializado.– Filamentos Citoplasmáticos.– Fibras extracelulares. Todos

estos debidos a grupos Amino ionizados.


Tinción (coloración) de cortes

• Diferentes componentes celulares y tisulares poseen diferentes afinidades tintoriales.


Tinción (coloración) de cortes


Hematoxilina-EosinaTécnica de tinción más usada.• Hematoxilina:

– Colorante natural.– Propiedades similares a las anilinas

básicas.– Tiñe todas las estructuras celulares,

pero principalmente el núcleo (Histonas).

• Eosina:– Colorante ácido.– Acción es la de una anilina ácida.– Tiñe ppalmente citoplasma celular.


Cortes de pielTinciónHematoxilina-Eosina


Tinciones Especiales


Tinciones para Amiloide

H/E Rojo Congo(cortes ±30 m)


Birrefringencia

Tinciones para Amiloide


Bacterias

a y b Gram positivos:tinción azul

c Gram negativo: colonias bacterianas se tiñen rojas

d FITE: bacilos ácido resistentes

se tiñen rojo

a

b

c

d


Bacterias II

Ambas placas con tinción Ziehl NeelsenBacilos ácido resistentes se tiñen rojo brillante


Calcio

Von Kossa-Azul Toluidina

Von Kossa: depósitos de calcioSe tiñen café oscuro-negroIPCHILE - Kinesiologia

DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

Colágeno I: proteína extracelular, predominante en dermis, función estructural

a y b Picrosirius: Colágeno I color amarillo-rojizo e Van Gieson: colágeno I rojo

c y d Tricromico Masson: colágeno I verde

a

c d

e

bb


http://images.search.yahoo.com/search/%20http:/images.search.yahoo.com/search/images/view?back=http://images.search.yahoo.com/search/images?p=picrosirius+collagen&ei=UTF-8&fr=yfp-t-501&x=wrt&w=846&h=886&imgurl=www.niaid.nih.gov/dir/labs/lpd/wynn_research.jpg&rurl=http://www.niaid.nih.gov/dir/labs/lpd/wynn.htm&size=652.2kB&name=wynn_research.jpg&p=picrosirius+collagen&type=jpeg&no=1&tt=7&oid=d62b4e3a367dad1a&ei=UTF-8

Colágeno III: o fibras de Reticulina, en dermis perineural, perivascular

Impregnación con Nitrato de Plata: fibras de reticulina se tiñen negras


Eosinófilos

Tinción Giemsa, eosinófilos se ven rojos


Fibras elásticas

HE Orceína ácida de Pinkus/Giemsa: fibras de coloración pardo oscura


Fibrina

ambas, Tinción de Picro-Mallory: Fibrina se tiñe rojo claroTambién PAS


Hongos

a Mucicarmin para teñir Criptococo: hongos de coloración azul-violácea

b PAS para Criptococo (rojo)

a

b

cc Tinción de PAS evidenciandoBlastomicosis

b

cIPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

Lípidos sólo en tj fijadoen formalina + cortes

por congelación

a Sudan IV: adipocitos anaranjados

b Sudan III: adipocitos rojos

c Sudan black b: Lípidos azul-negruzcos

c

b

a


Mastocitos

ambas, Tinción con Azul de Toluidina:gránulos de Mastocitos azul-púrpura(metacromasia)


Mastocitos

ambas, Tinción de Giemsa, donde los gránulos de losMastocitos son teñidos púrpura


Melanina

ambas, Tinción de Fontana Massonpigmento melánico se tiñe negroIPCHILE - Kinesiologia

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Principales colorantes


Tricrómico de Masson

• Principal Uso: Colágeno.

• Tiñe:– Colágeno Verde.– Núcleo, músculo y nervios

Rojo oscuro.– Citoplasma amarillo


Van Gieson

• Principal Uso: Tejido Fibroso

• Tiñe:– Colágeno rojo.– Núcleo azul negro– Músculos, nervios

amarillos – (+Verhoeff) fibras elásticas

negro


PAS

• Principales Usos: Glucógeno, MPS neutros y Hongos, Membrana basal.

• Tiñe: – Glucógeno Diastasa lábil.– MPS neutros y Paredes

micóticas Diastasa resistentes.


• Reacción positiva para glucógeno y polisacáridos neutros.

• Reacción positiva sólo para polisacáridos neutros.

+ DIASTASA


Azul de toluidina

• Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos

• Tiñe– Mucopolisacáridos

ácidos Purpura metacrómico.


Giemsa

• Principales usos: Gránulos mastocitarios, MPS ácidos, eosinófilos, leishmanias, médula ósea

• Tiñe:– Gránulos mastocitarios,

Mucopolisacaridos ácidos Púrpura.

– Eosinófilos, leishmanias Rojo.

Eosinófilos en Eosinófilos en mucosa gástricamucosa gástrica


Orceína ácida de Pinkus/Giemsa

• Principal Uso: Fibras elásticas.

• Tiñe:– Fibras elásticas Pardo

oscuro.


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