Enfermedad de Chagas Trypanosoma cruzi. Tripanosomiasis americana.
TRANSMISIÓN VECTORIAL Y CONGÉNITA DEL TRYPANOSOMA CRUZI EN LAS LOMITAS, FORMOSA.
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INVESTIGACIÓN DE BACTERIAS EN SALIVA
EMITIDA POR TRIATOMINOS TRANSMISORES DE T. CRUZI.
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Trypanosoma cruzi se encuentra ampliamente en el continente Americano, con la distribución de transmisores del orden Triatominae.
El papel de los triatominos en el ciclo de vida del parásito es fundamental pues en ellos T. cruzi se reproduce en fase de epimastigote y se diferencia a la fase de tripomastigote metacíclico que posee la capacidad de infectar al huésped vertebrado.
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Se han realizado estudios tratando de demostrar la presencia de alguna fase de T. cruzi en saliva y por extensión, la transmisión del parásito por esta vía ha sido negativos en todos los casos.
Se ha estudiado la presencia de bacterias en las glándulas salivales de los triatominos se a indicado la posibilidad de encontrar cocos gram positivos.
Si la saliva de triatominos tuviera bacterias u otras simbiontes patógenas al humano, existe la posibilidad de su transmisión durante su alimentación podrían producir una respuesta inflamatoria local hasta una bacteremia grave.
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Objetivo
Investigar la presencia de bacterias simbiontes en la saliva de Triatoma Infestans y discriminar si son potencialmente patógenas para el humano.
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Material y Métodos
Se emplearon lotes de cuatro machos y de
cuatro hembras de Triatoma infestans, se probaron los siguientes esquemas de alimentación artificial:
Esquema 1. Estimulación del Pronoto. Se procedió a estimular la emisión de saliva mediante contactos suaves con la yema del dedo índice directamente sobre el pronoto de los ejemplares, previamente se realizó una desinfección de la proboscis y se tomó una muestra de la zona externa de la misma como control negativo. Tras la emisión de saliva en ambiente estéril, se colectó y se sembró.
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Esquema 2. Método del Hisopo. Se procedió a embeber hisopos estériles con solución salina estéril precalentada a 37º C, se ofrecieron individualmente a los triatominos para que se alimentaran directamente del algodón rico en solución.
Esquema 3. Método de la Membrana de Látex: Se colocaron 2 ml de solución salina isotónica en recipientes estériles y se taparon con una membrana de látex estéril, se calentaron en baño Maria y se les ofrecieron a los triatominos para que se alimentaran a través de la membrana.
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El siguiente paso para todos los esquemas consistió en sembrar masivamente el material biológico colectado en placas con medio Agar Soya Tripticasa y Gelosa Sangre respectivamente. A continuación se procedió a incubar las placas a 37º C durante 24 horas. Se determinó su morfología colonial, morfología microscópica y tinción de Gram. Se sembraron las siguientes pruebas bioquímicas: Cátalasa, Oxidasa, Hemólisis, Vogues-Proskauer, Lactosa, Maltosa, Rafinosa, Dextrosa, Arginina, Manitol, Urea, Almidón, Bilis Esculina y Novobiocina
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Resultados
La metodología de estimulación del pronoto arrojó resultados negativos, en ningún caso se logró obtener saliva para ser sembrada en los medios de cultivo.
En la metodología del hisopo, sólo dos ejemplares se alimentaron de él y al sembrar no hubo crecimiento bacteriano.
La metodología de la membrana de Látex dio resultados positivos en todos los casos de alimentación de los triatominos por lo cual fue la metodología de elección para el estudio y las pruebas se realizaron por cuadruplicado.
La tabla 1 muestra los tipos de bacterias que se desarrollaron en los medios de cultivo de acuerdo a sus características coloniales y la tabla 2 las características microscópicas.
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CARACTERÍSTICA COLONIA A COLONIA B COLONIA C COLONIA D
Tamaño 1 mm 3 mm 1 mm 1mm
Color Blanco Blanco Blanco Blanco
Forma Circular Ameboide Circular Circular
Elevación Convexa Convexa Convexa Convexa
Superficie Lisa Lisa Lisa Lisa
Aspecto Húmedo Húmedo Húmedo Húmedo
Borde Entero Ondulado Ondulado Entero
Luz Transmitida Opaca Opaca Translucida Opaca
Luz Reflejada Brillante Brillante Brillante Brillante
Consistencia Mucoide Mucoide Butirosa Butirosa
Pigmento Difusible S/pigmento S/pigmento S/pigmento S/pigmentoMedio de Cultivo TSA TSA TSA TSA
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Tabla 2. Características microscópicas de las colonias bacterianas obtenidas
COLONIA A COLONIA B COLONIA C COLONIA D
Gram Positivo Positivo Positivo Positivo
Morfología Cocos Cocos Cocos Cocos
Agrupación RacimosPares o Cadenas Cadenas Pares
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EXPERIMENTO Triatomino 1 Triatomino 2 Triatomino 3 Triatomino 4
1 A, B, D A, B, C, D A, B, C, D Negativo
2 A, B, C, D A, B, D Negativo A, B, C
3 Negativo A, B, C, D A, B, C, D A, B, D
4 D A, B, D A, B, C, D A
Tabla 3: Presenta los tipos de bacterias que crecieron a partir de la saliva de cada triatominio machos en experimentos por cuadruplicado
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EXPERIMENTO Triatomino 1 Triatomino 2 Triatomino 3 Triatomino 4
1 A, B, A, B, C A, B, C, D A, B, C, D
2 Negativo A, B, C Negativo A, B, C, D
3 A, B Negativo Negativo A, B,
4 A, B, C, D Negativo A, B, A, B, C, D
Tabla 4: Presenta los tipos de bacterias que crecieron a partir de la saliva de cada triatominio hembras en experimentos por cuadruplicado
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BIOQUÍMICA COLONIA A COLONIA B COLONIA C COLONIA D
Hemólisis γ γ γ γ
Lactosa Positivo Positivo Positivo Positivo
Vogues Proskauer Positivo Positivo ** Negativo
Maltosa Positivo Positivo Positivo Positivo
Rafinosa Negativo Negativo Positivo Negativo
Dextrosa Positivo Positivo ** Positivo
Arginina Positivo Positivo ** Negativo
Manitol Positivo Negativo Negativo Negativo
Urea Positivo Positivo ** Negativo
Almidón ** ** Positivo **
Bilis Esculina ** ** Positivo **
Novobiocina R S ** S
Oxidasa Negativo Negativo Negativo Negativo
Catalasa Positivo Positivo Negativo Positivo
**: NO DETERMINADA R: RESISTENTE S: SENSIBLE
Tabla 5: Los resultados muestran poca diferencias entre las bacterias aisladas
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Discusión
La alimentación de los triatominos en condiciones de laboratorio debe de ser lo mas cercana a la real.
Los resultados obtenidos con las metodologías uno y dos nos confirmaron que cuando la consistencia de zona de la picadura es similar a la de la piel, los ejemplares pican en la mayoría de los casos.
La ausencia de crecimiento bacteriano para el material sembrado de algunos de los ejemplares como el triatomino cuatro en el experimento 1 o el tres en el experimento 2 pudo deberse al estrés por manipulación del ejemplar o al atravesar el látex no hubiera emisión de saliva, o a que no existían simbiontes en esos ejemplares al momento del estudio.
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Las características macroscópicas y microscópicas (tablas 1 y 2) de las bacterias obtenidas, no correlacionan con los grupos de microorganismos que son patógenos para el humano y que en un momento podrían causar septicemia o alguna infección grave.
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Las pruebas bioquímicas (tabla 5) en combinación con las características antes referidas, nos permitieron establecer tres especies de bacterias del genero Staphylococcus: S. saprophyticus, S. hominis, y S. caseolyticus, de ellas, solo S. saprophyticus tiene importancia medica como agente etiológico de infecciones del tracto Urinario, También se aisló Enterococcus sp., el cual no es considerado patógeno para el humano, pero todas las especies encontradas son potencialmente capaces de causar septicemia en casos excepcionales y de inmunocompromiso.
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Conclusión
Confirmamos la existencia de simbiontes en saliva de T. infestans y no se descarta la posibilidad de presencia de patógenos.
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