UNIVERIDAD AUTNOMA GABRIEL REN MORENO DIRECCIN UNIVERSITARIA DE INVESTIGACIN

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UNIVERSIDAD AUTNOMA GABRIEL REN MORENO DIRECCIN UNIVERSITARIA DE INVESTIGACIN

FACULTAD DE CIENCIAS AGRCOLAS CARRERA DE BIOLOGA

EXPOCIENCIA 2015 PROYECTO DE INVESTIGACIN

CEPAS BACTERIANAS PRODUCTORAS DE BIOCINAS, AISLADAS A PARTIR DE SUELOS CULTIVADOS EN LA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRCOLAS DE LA U.S.G.R.M.. SANTA CRUZ-BOLIVIA

AUTORES: JUSDIN RUIZ UMAA MARCELINO LPEZ RENDN

ASESOR: MSC. MILENKA VELASCO

Santa Cruz Estado Plurinacional de Bolivia 2015

UNIVERIDAD AUTNOMA GABRIEL REN MORENO DIRECCIN UNIVERSITARIA DE INVESTIGACIN

CEPAS BACTERIANAS PRODUCTORAS DE BIOCINAS, AISLADAS A PARTIR DE SUELOS CULTIVADOS EN LA FACULTAD DE CIENCIAS AGRCOLA

DE LA U.A.G.R.M. SANTA CRUZ-BOLIVIA 1,2Ruiz J. &1Lpez M.

RESUMEN

Los microorganismos poseen distintas formas para competir en su ambiente una de ellas es la produccin de sustancias antagnicas, entre estas se incluyen antibiticos clsicos, agentes lticos, exotoxinas y biocinas(bacteriocinas). La diversidad de estas sustancias es muy grande y muchas an no han sido estudiadas. El presente estudio se centr en el aislamiento e identificacin de cepas bacterianas productoras de biocinas, obtenidas a partir de suelos cultivados de la Facultad de Ciencias Agrcolas de la U.A.G.R.M. Adems se evalu las propiedades antagnicas de estas, sobre cepas de referencias (Staphylococcusaureus, Staphylococcusepidermidis, Escherichiacoliy Pseudomonasaureginosa), para ello se utilizaron metodologas de bioprospeccin. Se identificaron 5 cepas antagnicas, una de Bacillussubtilis, dos de Bacilluscereus y dos deStreptomycessp. las mismas que inhibieron el crecimiento de colonias de bacilos Gram negativos y bacilos Gram positivos. Mediante los bioensayos in vitro las cepas de B. cereus no presentaron antagonismo sobre ninguna de las cepas de referencia, mientrasque las cepas deB. subtilisy S. sp., inhibieron solo el crecimiento de P. aureginosa. Resultados que nos revelan indicios de posibles alternativas para contrarrestar la multiresistencias de bacterias Gram positivas y Gram negativa y entre ella a P.aureginosa.

Palabras claves: Bacterias del suelo, Biocinas, ,Bioprospeccin

1 Estudiante de Biologa, F.C.A. U.A.G.R.M. Santa Cruz, Bolivia 2 Egresado de Bioqumica y Farmacia, UDABOL, Santa cruz, Bolivia

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TABLA DE CONTENIDOS

Pg.

RESUMEN i TABLA DE CONTENIDOS ................................................................................................... iii LISTA DE CUADROS ........................................................................................................... v LISTA DE FIGURAS ............................................................................................................ vi I. INTRODUCCIN ........................................................................................................ 1 II. OBJETIVOS 2

2.1 Objetivo general ................................................................................................. 2 2.2 Objetivos especficos ......................................................................................... 2

III. MARCO TEORICO ..................................................................................................... 2 3.1 Diversidad microbiana del suelo ......................................................................... 2 3.2 Importancia de los microorganismos del suelo. .................................................. 2 3.3 Biocinas (bacteriocinas) ..................................................................................... 3 3.4 Modo de accin de las bacteriocinas ................................................................. 3 3.5 Tcnicas de identificacin deteccin y cuantificacin ......................................... 3 3.6 Clasificacion de las biocinas .............................................................................. 3 3.7 Beneficios de la biocinas .................................................................................... 4

3.7.1 Control de bacterias patgenas y alterantes en carne cruda. ............... 4 3.7.2 Productos crnicos cocidos .................................................................. 5 3.7.3 Productos fermentados ........................................................................ 5 3.7.4 La alimentacin con biocinas ................................................................ 5

IV. MATERIALES Y MTODOS ....................................................................................... 6 4.1 rea de estudio .................................................................................................. 6 4.2 Materiales .......................................................................................................... 7

4.2.1 Materiales de campo ............................................................................ 7 4.2.2 Materiales de laboratorio ...................................................................... 7 4.2.3 Reactivos ............................................................................................. 7

4.3 Metodologa ....................................................................................................... 7 4.3.1 Fase de campo (toma de muestra) ....................................................... 8 4.3.2 Fase de laboratorio .............................................................................. 8

4.3.2.1 Procesamiento de la muestra ............................................................... 8 4.3.2.2 Aislamiento de bacterias productoras de biocinas (antagonista) ......... 9 4.3.2.3 Identificacin de caractersticas culturales y morfolgicas .................... 9 4.3.2.4 Identificacin por pruebas bioqumicas ................................................. 9 4.3.2.5 Bioensayos de Bioprospeccin ............................................................10 4.3.2.6 Interpretacin de resultados ................................................................11

V. RESULTADOS ...........................................................................................................12 VI. CONCLUSIONES ......................................................................................................15 BIBLIOGRAFIA ............................................................................................................16

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ANEXOS 17

Anexo 1. Puntos de muestreo .......................................................................................... 18 Anexo 2. Registro fotogrfico ........................................................................................... 19

Toma de muestra del suelo ........................................................................................ 19 Toma de datos in situ ................................................................................................. 20 Pesado de muestra .................................................................................................... 21 Dilucin de las muestras ............................................................................................ 22 Siembra de las muestras de forma homogneas sobre Agar nutriente ...................... 23

Anexo 3. Microfotografas de las colonias productoras de biocinas, aisladas a partir de los suelos cultivados .................................................................................... 24 Bacillus cereus (colonia 1) ........................................................................................ 24 Bacillus subtilis (colonia 2) ........................................................................................ 25 Streptomyces sp.(colonia 3) ...................................................................................... 26 Bacillus cereus (colonia 4) ........................................................................................ 27 Streptomycessp. (Colonia 5) ...................................................................................... 28

Anexo 4. Bacterias cuyo crecimiento fue inhibido ............................................................ 29 Bacillus sp.................................................................................................................. 29 Pseudomonas sp. ..................................................................................................... 30 Crecimiento de los microorganismos ......................................................................... 31

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LISTA DE CUADROS

Pg.

Cuadro 1. Caractersticas culturales y morfolgicas de las bacterias productoras de

biocinas (antagonistas) .................................................................................12

Cuadro 2. Caractersticas culturales y morfolgicas de las bacterias con inhibicin de su crecimiento .............................................