UNIVERSIDAD AUTONOMAMETROPOLITANA

IZTAPALAPA

TRABAJO DE INVESTIGACIÓN:EFECTO DE LA NORETISTERONA Y DE SUS

METABOLITOS REDUCIDOS SOBRE LA CAPACIDADFERTILIZANTE DE LOS OVOCITOS DE RATÓN.

LUGAR DE REALIZACIÓN:DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA

MOLECULAR. INSTITUTO NACIONAL DEPERINATOLOGÍA.

PRESENTA:PAOLA BANESSA DÍAZ CERVANTES.

MATRICULA:97335376

ASESORES:BIO. EXP. HÉCTOR FLORES HERRERA

DR. PABLO DAMIÁN MATSUMURA

FIRMA DE LOS ASESORES

11 DE JUNIO DEL 2003

INDICE

Introducción................................................................................................ 4

Antecedentes.............................................................................................. 7

Hipótesis................................................................................................... 13

Objetivo.................................................................................................... 13

Material y Método.................................................................................. 14

Resultados.............................................................................................. 18

Discusiones............................................................................................ 27

Bibliografía.......................................................................................... 39

4

TITULO DEL PROYECTO

EFECTO DE LA NORETISTERONA (NET) Y DE SUS

METABOLITOS REDUCIDOS SOBRE LA CAPACIDAD

FERTILIZANTE DE LOS OVOCITOS DE RATÓN.

INTRODUCCIÓN

El proceso de fecundación en los mamíferos puede definirse como una

secuencia de acontecimientos celulares y moleculares coordinados en los que

participan los gametos masculinos (espermatozoide) y femeninos (ovocito).

Consiste en la fusión y penetración de un espermatozoide en un ovocito y

finaliza con la primera división normal del cigoto. Para que este proceso

natural se pueda llevar a cabo con éxito, es necesario que ambos gametos

hayan llevado a cabo el proceso de maduración antes de ponerse en contacto,

este proceso tiene como finalidad la preservación de la especie (Buch, 1999).

A pesar de que la fecundación es uno de los procesos indispensables para la

preservación de la especie uno de los problemas más complejos en la

5

actualidad es la sobrepoblación, especialmente en los países en desarrollo, en

donde se incluye México, cuya tasa de natalidad sigue siendo alta (Pérez-

Palacios y cols., 1987) a pesar de que se han implementado importantes

campañas para promover la planificación familiar, desafortunadamente las

tasas de nacimiento, han bajado a un ritmo menor al esperado (Rosenfield A. y

Fathalla M., 1994).

Los métodos anticonceptivos se pueden dividen en dos grandes grupos:

mecánicos y hormonales, que se usan solos o en combinación. Dentro del

primer grupo tenemos a los anillos vaginales, dispositivos intrauterinos

(DIU’s), espermaticidas, espumas, condón, diafragmas y tapón cervical,

mientras que en el grupo de los anticonceptivos hormonales se encuentran los

orales, píldoras, inyectables e implantes subdérmicos (fíg.1). Las

formulaciones orales por lo general presentan un componente estrogénico y un

componente progestacional, el cual es una progestina sintética (Rosenfield A.

y Fathalla M., 1994) cuyo mecanismo de acción radica en la supresión de la

secreción preovulatoria de LH y FSH y por lo tanto inhibe la ovulación

eficazmente (Rudel, HW., 1967).

6

Fig.1. Muestra algunas de las presentaciones de los métodos anticonceptivos.

De acuerdo a la estructura química las progestinas sintéticas se han clasificado

en dos grupos: las que derivan de la l7-hidroxi-progesterona y aquellas que

derivan de la l9-nortestosterona.(Pérez-Palacios y cols, 1981).

La Noretisterona (NET); 17α- etinil- 17ßhidroxi- 4 estrene- 3 ona), es una

progestina sintetica de la serie 19-nortestosterona que presenta la

incorporación de un grupo etinilo en el C 17, con ordenación alfa, lo que

genera que pierda la actividad androgénica y adopte una actividad

progestacional (Pérez-Palacios y col., 1991). Esta progestina sintética fue

producida en la ciudad de México en 1951, obra de tres distinguidos

investigadores, los doctores Jorge Rosenkranz, Luis Ernesto Miramontes y

Carl Djerassi (Lemus, y cols., 1998).

7

A partir de su síntesis, NET ha sido la progestina sintética más empleada en

formulaciones anticonceptivas hormonales orales, inyectables y subdérmicas.

A través del uso clínico de NET y de estudios experimentales, se han

acumulado evidencias que indican que además del potente efecto

progestacional, la NET es capaz de producir, después de su administración

efectos estrogénicos, androgénicos en diferentes especies de mamíferos,

incluyendo al humano (Pérez- Palacios y cols., 1981).

La Noretisterona puede sufrir biotransformaciones en órganos blancos como

útero, hipotálamo, hipófisis anterior y próstata ventral de rata (Larrea, et. Al.,

1987). Estas biotransformaciones son debidas a la reducción en el anillo A, de

dicho compuesto, pasando de NET a 5α-dihidroNET (5α-NET), 3β,5α

tetrahidroNET (3β,5α-NET) y 5α,3α-tetrahidroNET (5α, 3 α-NET) (Chávez

y cols., 1985).

El efecto anticonceptivo de NET se ejerce en la unidad hipotálamo- hipófisis

en donde inhibe la ovulación al evitar la liberación cíclica de gonadotropinas

hipofisiarias. Por otro lado posee un efecto directo sobre el endometrio,

debido a que durante la terapia con este compuesto se origina un desequilibrio

en los niveles hormonales de estrógenos- progesterona, en consecuencia se

8

afecta el crecimiento y maduración idónea del endometrio (Goebelsman y

cols., 1979).

Flores y colaboradores (1999) han observado que al incubar a los

espermatozoide de ratón previamente capacitados, con 5α- NET se inhibe la

reacción acrosomal (RA); mientras que la incubación simultánea con

Progesterona y 5α- NET reduce el porcentaje de gametos reaccionados y este

efecto está en función de la dosis de 5α- NET, efecto que no es revertido por

la progesterona. Estos mismos autores observaron que al incubar a los

ovocitos fertilizados en presencia de 5α- NET se ocasionan daños en su

desarrollo hasta la etapa de mórula (Flores y cols.,1999), sin embargo, no se

conoce si dicho compuesto afecta la integridad del ovocito o la madurez del

mismo, la cual se alcanza dentro del folículo.

Al ser liberados del folículo, los ovocitos lo hacen rodeados de un complejo

de células, denominado células cúmulo que son importantes ya que sin éstas el

esperma no podría penetrar el óvulo y por lo tanto además la fecundación no

se podría llevar a cabo (Fig.2), sin embargo, estas capas de células cúmulo

están fuertemente compactadas a su alrededor, por lo que se comportan como

barreras selectivas que dificultan a la mayoría de los espermatozoides a que

9

alcancen las membranas del óvulo y evitar la polispermia. Además, los óvulos

inmaduros no pueden ser fertilizados adecuadamente hasta que alcanzan la

madurez final y el indicador de la madurez del óvulo es la presencia del

"cuerpo polar", el cual se visualiza como una pequeña célula que sobresale del

óvulo primario, liberando así la mitad de su carga genética (cromosomas), lo

que le permitirá al esperma aportar la carga genética faltante, indispensable

para un desarrollo embrionario normal (Burks y cols., 1995).

Fig.2- Muestra la estructura de un ovocito maduro.

ANTECEDENTES

Los estudios realizados para esclarecer el modo de acción de Noretisterona

han demostrado que la biotransformación de este compuesto, a nivel de los

Cuerpo Polar

Células Cúmulo

10

órganos blanco, modula la expresión de sus diferentes actividades biológicas,

ya que sus productos de transformación metabólica interactúan con los

diferentes receptores intracelulares y esto se debe a que estas

biotransformaciones le confieren al compuesto 5α reducido (5α−NET)

afinidad por los receptores intracelulares de progesterona (RP) y andrógenos

(RA) con constantes de afinidad de 2.6 x 10-7M y 1.0 x 10-8M

respectivamente (Chávez y cols., 1985), además de los efectos

antiprogestacionales (Pérez-Palacios y cols., 1991). Mientras que los

metabolitos tetrahidro-reducidos (3α, 5α− y 3ß, 5α- NET) presentan afinidad

por los receptores a estrógenos (RE), (Chávez y cols., 1985) confiriéndoles

efectos estrogénicos (Larrea y cols., 1987).

Fig.2: Muestra la estructura química de la NET y sus metabolitos

5α reducido.

5α- Esteroide reductasa

3β- Esteroide deshidrogenasa

11

Castro y colaboradores (1995) demostraron que al administrar NET en dosis

altas (5mg/kg) a conejas gestantes, se reduce la expresión del gene de la

uteroglobina (UTG; proteína que es regulada por progesterona), la

implantación del ovocito fecundado y el factor temprano de embarazo (FET).

Claros ejemplos de efectos antiprogestacionales, por otro lado, al administrar

5α- NET a dosis menores (1.5mg/kg) se produce el mismo efecto

antiimplantación, la inhibición en la síntesis del FET y de UTG, así como de

su mRNA, en una magnitud similar al encontrado con RU-486, componente

antiprogestacional muy potente (Castro y cols., 1995).

En cuanto al efecto de la NET y de su metabolitos reducidos sobre los

espermatozoides capacitados de ratón, se observó que al incubarlos en

presencia de 5α- NET no se induce la reacción acrosomal (RA), mientras que

la incubación simultánea con Progesterona y 5α- NET reduce el porcentaje de

gametos reaccionados en un efecto dependiente de la dosis. Dado que la RA

es un paso importante para la fertilización y como la 5α- NET reduce el

porcentaje de los espermatozoides reaccionados, se estudio la capacidad

fertilizante de los mismos tratados con 5α- NET y se encontró que la adición

de este compuesto reduce la proporción de los ovocitos fertilizados en forma

dependiente de la dosis.

12

Flores y colaboradores (1999), han observado que al incubar a los ovocitos

fertilizados en presencia de 5α- NET se ocasionan daños en el desarrollo

hasta la etapa de mórula, los cuales se caracterizan por la falta de unión entre

los blastómeros, la pérdida de integridad de sus membranas, así como una

reducción en el tamaño de sus blastómeros, a diferencia del grupo que

recibió progesterona que se desarrollaron de manera normal. Durante este

estudio no se exploró la posibilidad de que la NET y sus metabolitos afectan

en la capacidad fertilizante de los ovocitos, por lo que en el presente trabajo

se quiere determinó si NET y su 5α NET puede interaccionar con los

ovocitos, alterando su capacidad de ser fertilizado y el papel que tienen las

células cúmulo en la interacción con 5α NET y sobre el porcentaje de

fertilización.

13

HIPOTESIS:

El compuesto 5α-NET reduce el porcentaje de fertilización y las células

cúmulo juegan un papel importante en este proceso .

OBJETIVO GENERAL:

Determinar la capacidad antifertilizante de 5α NET y el papel de las células

cúmulo en el porcentaje de fertilización de los óvulos de ratón.

OBJETIVOS PARTICULARES:

1) Analizar la capacidad de 5α−NET para inhibir el porcentaje de

fertilización en óvulos.

2) Evaluar el efecto de las células cúmulo en la capacidad antifertilizante

de 5α−NET.

3) Determinar la interacción de 5α−NET con proteínas de membrana que

unen a P4.

14

MATERIAL Y MÉTODO

Esteroides

Noretisterona y sus metabolitos fueron proporcionados por el Dr. Gustavo

García de la Mora de la Facultad de Química, UNAM.

Animales:

Se utilizaron ratones hembras de la cepa Balb/c de 12-16 semanas de edad y

ratones machos de la cepa C57bl/6j de 16 semanas de edad. Estos animales se

mantuvieron a temperatura ( 22 ± 1ºC ) y humedad ( 55 ± 5 % ) constantes,

agua y comida ad libitum y con ciclos de luz / oscuridad de 12/12 horas.

Obtención de los espermatozoides:

Con la finalidad de extraer los espermatozoides, ratones machos fueron

sacrificados por dislocación cervical. Se disectó el epidídimo y se depositó en

el medio Tyrode (T6) compuesto de NaCl 124.5 mM, KCl 2.6 mM, MgCl2

0.49 mM, NaH2PO4 0.39 mM, glucosa 5.5 mM, NaHCO3 25.0 mM, CaCl2 1.7

mM a un pH 7.2 y suplementado con 0.4 g/100 ml de albúmina de suero de

bovino. Posteriormente los espermatozoides fueron incubados en este medio

15

para su capacitación por 90 minutos a 37 °C, en una atmósfera de 5 % CO2 y

95 % aire (Mann, 1988; Eppig, 1995).

Obtención de los ovocitos

A las ratones hembras se les administró intraperitonealmente 5 UI de PMSG

(Intevert International B.V boxmeer-Holland). Después de 48 horas se les

inyectaron 5 UI de hCG (Hoechst Marion Roussel) y se sacrificaron por

dislocación cervical 19 horas después de la ultima inyección para obtener los

ovocitos, la región del ovario-oviducto fue disectada y transferida al medio

T6-BSA. Posteriormente, con la ayuda de un microscopio de disección 16 X

(Zeiss) se localizó en el ámpula al complejo de los ovocitos-células cúmulo y

fue puncionada una aguja de insulina para permitir la salida de estos. Este

complejo fue aspirado por medio de una pipeta Pasteur adelgazada de la punta

y los ovocitos se incubaron en medio T6-BSA por 30 minutos. La eliminación

de las células cúmulo se realizó mediante el desacoplamiento de las mismas

con Hialuronidasa (1 µg/ml). Los ovocitos con y sin células recibieron los

siguientes tratamientos durante una hora:

Tabla1 : Tratamiento a los que fueron sometidos los ovocitos por un periodo

de 60 minutos.

16

GRUPO TRATAMIENTO

vehículo T6-BSA (500 µl)

vehículo ETOH (5.5%) (10-5M - 500 µl)

Testigo positivo Progesterona (P4) (10-5M – 500 µl)-

Muestra problema Noretisterona (NET 1x10-3 M)

Muestra problemaDistintas concentraciones de 5α−NET

( 1X10-5 a 1X10-12M) – 500 µl

Muestra problema

Distintas concentraciones de P4

P4 (1x10-5M a 1x10-12M) + 5α-NET

(1x10-5M) – 500 µl

Testigo negativo RU-486 (1x10-5M) – 500 µl

Concluido el tiempo de incubación se adicionaron los espermatozoides,

previamente capacitados (1 X 106 espermatozoides/ ml), para que se lleve a

cabo la fertilización in vitro durante un lapso de 90 minutos (Eppig, 1995). Al

término de este período los ovocitos fueron lavados con el medio T6-BSA y se

transfirieron al medio M16 – BSA que contiene NaCl 94.7 mM, KCl 4.7 mM,

KH2PO4 1.19 mM, MgSO4 1.18 mM, lactato de sodio 0.011 mM, glucosa 5.5

mM, penicilina 200 unidades / ml, estreptomicina 200 µg / ml, NaHCO3 25.0

17

mM, y ácido pirúvico 0.036 mM ajustado a un pH de 7.2 y suplementado con

0.4% BSA (M16-BSA). Después de 15 horas de exposición a los

espermatozoides se contó el porcentaje de los ovocitos que se desarrollaron

hasta una etapa de 2 células, el cuál fue utilizado como índice de fertilización

(Mann, 1988).

Evaluación de la Viabilidad

Tanto a los ovocitos sin fertilizar como los fertilizados (caracterizados por su

desarrollo hasta en el estadio de 2 células) se transfirieron al medio T6

ajustado a un pH de 2.5 por 10 minutos con la finalidad de eliminar la zona

pelúcida (ZP). Posteriormente los ovocitos libres de la ZP se incubaron por 10

minutos con azul tripano al 1%. Concluido este tiempo se colocaron en medio

T6 y se contó el número total de los ovocitos viables y no viables, donde las

células muertas incorporan el azul tripano al citoplasma por difusión pasiva y

los viables lo eliminan por transporte activo (Hutz, 1985).

Unión a Proteínas de Membrana

Los ovocitos tanto en presencia como en ausencia de células cúmulo se

colocaron en portaobjetos los cuales contenía 5µl de formaldehído, dejándose

secar a temperatura ambiente por 30minutos, concluido este tiempo se les

18

adicionó 5µl de PBS con la finalidad de lavar los ovocitos, posteriormente se

sometieron a los siguientes tratamientos:

GRUPO TRATAMIENTO

Control P4-BSA-ITFC

Muestra problema P4 (1X10-3M- 1X10-5M) + P4-BSA-

ITFC

Muestra problema 5α-NET (1X10-3M- 1X10-5M) + P4-

BSA-ITFC

Después de 30minutos se visualizaron en un microscopio de fluorescencia,

con la finalidad de observar si nuestros compuestos interaccionaban con

proteínas membranales.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO:

Se utilizó la prueba de ANOVA (análisis de varianza). Cabe destacar que se

manejo por cada grupo una n total de 75.

RESULTADOS

Al incubar a los ovocitos con P4, tanto en presencia de células cúmulo como

en ausencia de estas, ( de 73.7% y 76.2% respectivamente), se aprecia un

19

incrementó significativo en el porcentaje de fertilización en comparación con

T6-BSA (con células 48.6% y 57.2% sin células) y ETOH (con células 47.2%

con células y 52.2% sin células). Sin embargo al incubar a los ovocitos con

NET (82.8% con células cúmulo y 85.3% sin células cúmulo) se aprecia un

incremento en el porcentaje de fertilización mayor que el observado con

progesterona . También se puede observar que el porcentaje de fertilización en

presencia de células cúmulo es ligeramente menor, esto en comparación con

los ovocitos que presentan células cúmulo (gráfica 1).

0102030405060708090

100

T6 ETOH P4 NETTratamiento

% F

ertil

izac

ión

Con célulassin células

X + DE n = 75 óvulos por grupop<0.05

Gráfica 1- Muestra el porcentaje de fertilización, encontrado de los vehículos,

como del control positivo y NET.

b b

a a

20

Sin embargo, al incubar a los ovocitos con 5α- NET se observa una inhibición

en el porcentaje de fertilización por debajo del índice observado con los

vehículos ETOH y Medio T6- BSA) comportamiento muy similar al que

presenta RU- 486. Sin embargo, en presencia de células cúmulo se aprecia una

ligera disminución en el porcentaje de fertilización en todos los casos en

comparación de aquellos ovocitos que están ausentes de dicho complejo

(gráfica 2).

FERTILIZACIÓN CON 5α-NET

0102030405060708090

100

ETOH P4 NET 5a-NET RU-486TRATAMIENTOS

% F

ERTI

LIZA

CIÓ

N

con célulassin células

X + DE n = 75 óvulos por grupop<0.05

Gráfica 2: Porcentaje de fertilización encontrado, al incubar a los ovocitos en

presencia 5α- NET .

a

b b

cc

21

Con la finalidad de determinar si el efecto antifertilizante de 5α−NET es

debido a su actividad antiprogestaciónal, se variaron las concentraciones de

5α−NET (10-5M, 10-6M, 10-8M, 10-12M) en combinación con P4 en

concentración constante (10-5M). Se observo que el porcentaje de fertilización

es semejante al obtenido con P4 sola, cuando las concentraciones de 5α−NET

son bajas (1X10-12M) disminuye conforme se aumentan las concentraciones de

5α−NET, por lo que se puede observar que 5α−NET es capaz de revertir el

efecto de P4 (gráfica 3). El efecto de la presencia o ausencia de células

cúmulo sobre el porcentaje de fertilización es semejante al observado en los

experimentos anteriores, donde la presencia de células cúmulo reduce

ligeramente el porcentaje de fertilización, pero en ningún caso es

estadísticamente significativo.

22

CONCENTRACIONES CRECIENTES DE 5α-NET

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

ETOH P4 5a-NET+P4 5a-NET(10-6)

5a-NET (10-8)

5a-NET (10-12)

Tratamiento

% F

ertil

izac

ión con células

sin células

X + DE n = 75 óvulos por grupop<0.05

Gráfica 3: Porcentaje de fertilización al variar las concentraciones de 5α-NET y

mantener constantes las concentraciones de P4.

Posteriormente los ovocitos fueron incubados con distintas concentraciones de

P4 (10-5M, 10-6M, 10-8M, 10-12M) en combinación con una concentración

constante de 5 α-NET (10-5M), para determinar si P4 era capaz de revertir el

efecto de 5α−NET., encontrándose que a medida que vamos bajando las

1x10-5M 1x10-6M 1X10-8M 1X10-12M 5α-NET + + + + P4 (1x10-3M)

a

b

a c

a

b

23

concentraciones P4 el porcentaje de fertilización disminuye y este tiene un

comportamiento muy similar al encontrado con el vehículo, en cuanto a los

ovocitos que están en presencia o ausencia de células cúmulo, el porcentaje de

fertilización es ligeramente menor cuando los ovocitos están en presencia de

células cúmulo, sin embargo no hay una diferencia significativa.

CONCENTRACIONES CRECIENTES DE P4

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

ETOH P4 5a-NET 5a-NET+P4

P4(10-8) P4(10-10)

P4(10-12)

Tratamientos

% F

ertil

izac

ión con células

sin células

X + DE n = 75 óvulos por grupop<0.05

Gráfica 4. Muestra el porcentaje de fertilización cuando los ovocitos se

incubaron con distintas concentraciones de P4.

__ 1X10-5M 1X10-8M 1X10-10M 1X10-12M P4 + + + + + 5α− ΝΕΤ (1X 10−5Μ)

a

b

c

d d

a

c

24

Con respecto a los experimentos de la interacción de 5α−NET con proteínas

de membrana, se observó que al incubar los ovocitos con el ligando

fluorescente (P4-BSA-ITCF) que presentaban células cúmulo los sitios de

unión a P4 se saturaron ya que se distingue un halo fluorescente alrededor del

ovocito, sin embargo cuando son incubados en presencia de 5α−NET o con P4

a concentraciones bajas 10-5M se observa que la fluorescencia disminuye,

debido a que hay competencia por los sitios de unión a P4 y cuando se

emplean concentraciones mayores (10-3 M) de estos mismos compuestos, la

fluorescencia alrededor del ovocito prácticamente desaparece tanto en

presencia de 5α−NET como con P4 (Fig. 4).

control (P4-BSA-FITC) P4 (10-5M) P4 (10-3M)

25

5α- NET (10-5M) 5α- NET (10-3M)

Figura 4- Ovocitos que contienen células cúmulo incubados con el ligando

P4-BSA-ITCF (A), bajas concentraciones (1x10-5M) de P4 (C) ó 5α−NET

(D) y altas (1X10-3M) (E y F).

Control (P4-BSA-FITC) P4 (10-5M) P4 (10-3M)

26

5α-NET (10-5M) 5α-NET (10-3M)

Figura 5- Ovocitos a los que se les han removido las células cúmulo

incubados con el ligando P4-BSA-ITCF (A), y con bajas (1x10-5M) (B y D)

o altas (1X10-3M) (E y F) concentraciones de P4 ó 5α−NET.

Cuando se incubaron a los ovocitos que carecían de células cúmulo con el

ligando fluorescente P4-BSA-ITCF (Fig. 5), se observo que la fluorescencia es

menos intensa comparados con los ovocitos intactos (con células cúmulo) y

que al incubarlos con bajas (1x10-5M) ó altas (1x10-3M) concentraciones de

5α- NET ó P4 la fluorescencia alrededor del ovocito no desaparece

totalmente. Sin embargo la florescencia se reduce en un 50% cuando los

ovocitos sin células cúmulo son incubados con altas concentraciones de

5α−NET o P4.

27

DISCUSIÓN

Como se esperaba, los resultados de este estudio indican que NET tiene un

efecto progestacional semejante al de P4, en función de un aumento en el

porcentaje de ovocitos fertilizados (82.8% con células cúmulo y 85.27% sin

células cúmulo), con respecto a los incubados con P4 (73.7% con células

cúmulo y 76.19% sin células cúmulo) y a los vehículos. También se observó

que 5α-NET tiene un efecto inhibitorio sobre el porcentaje de fertilización,

semejante al observado con el control negativo RU- 486, potente

antiprogestina. Es importante señalar que al incubar a los ovocitos con

distintas concentraciones de P4 desde 1x10-5M hasta 1x10-12M y manteniendo

constante la concentración de 5α-NET (10-5M), se observó que el porcentaje

de fertilización se reestablece a medida que la concentración de P4 es

mayor, sin alcanzar el porcentaje de fertilización observados con P4 sola. En

el experimento inverso, cuando se incubaron a los ovocitos con distintas

concentraciones de 5α-NET (de 1x10-5M a 1x10-12M) y con una

concentración constante de P4 (10-5M) se observó que el porcentaje de

fertilización se reestablece a medida que se disminuye la concentración de 5α-

NET hasta alcanzar valores semejantes a P4, cuando la concentración de 5α-

28

NET es de 1x10-12M. En cuanto a los experimentos de unión a proteínas que

unen P4, se observa 5α-NET se une a los mismos sitios de unión a P4,

además estos experimentos están sugiriendo que las células cúmulo pueden

servir como un filtro para el paso selectivo de componentes. Lo cierto es que,

con base a estos resultados, la 5α-NET podría ser un método anticonceptivo

muy eficiente, ya que afecta los procesos más importantes para que pueda

llevarse a cabo la fecundación, estos procesos son la disminución de la

reacción acrosomal (Flores y cols., 1999), por parte del espermatozoide y

disminuye la capacidad fertilizante de los óvulos. Las formulaciones en las

que se presentaría probablemente 5α-NET serían en dispositivos intrauterinos

medicados, espumas vaginales, esto en mujeres y en hombres condones que

contengan dicha formulación. Cabe destacar que en inyecciones hormonales

mensuales o anticonceptivos orales probablemente no daría resultado, ya que

NET lleva a cabo reducciones en órganos blancos, por lo que podría tener otro

efecto y no el esperado. Sin embargo se tendrían que realizar diversos

estudios para su uso en dichas formulaciones.

29

BIBLIOGRAFÍA

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