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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS MODALIDAD: INVESTIGACIÓN TEMA: “EFECTO DE LA ACTIVIDAD ANALGÉSICA DEL ACEITE ESENCIAL DE Eucalyptus globulus Labill EN SISTEMAS DE LIBERACIÓN PROLONGADA” TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA OPTAR AL GRADO DE QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS AUTORES: María Martha Amado Tejada Pierina Mabel Falquez Orellana TUTORA: Lcda. Carolina Santiago, Ph.D. COTUTORA: Lcda. María Elizabeth Herrera, M.Sc. GUAYAQUIL- ECUADOR 2018
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MODALIDAD: INVESTIGACIÓN
TEMA:
“EFECTO DE LA ACTIVIDAD ANALGÉSICA DEL ACEITE ESENCIAL DE
Eucalyptus globulus Labill EN SISTEMAS DE LIBERACIÓN
PROLONGADA”
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO
PARA OPTAR AL GRADO DE QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS
AUTORES:
María Martha Amado Tejada
Pierina Mabel Falquez Orellana
TUTORA:
Lcda. Carolina Santiago, Ph.D.
COTUTORA:
Lcda. María Elizabeth Herrera, M.Sc.
GUAYAQUIL- ECUADOR
2018
I
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
FICHA DE REGISTRO DE TESIS/TRABAJO DE GRADUACIÓN
TÍTULO Y SUBTÍTULO: EFECTO DE LA ACTIVIDAD ANALGÉSICA DEL ACEITE ESENCIAL DE
Eucalyptus globulus Labill EN SISTEMAS DE LIBERACIÓN PROLONGADA
AUTOR(ES)
(apellidos/nombres): AMADO TEJADA MARÍA MARTHA
FALQUEZ ORELLANA PIERINA MABEL
REVISOR(ES)/TUTOR(ES)
(apellidos/nombres):
Q.F. PILAR SOLEDISPA CAÑARTE M.Sc. (REVISOR)
Lcda. CAROLINA SANTIAGO, Ph.D. (TUTORA)
INSTITUCIÓN: UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
UNIDAD/FACULTAD: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MAESTRÍA/ESPECIALIDAD:
GRADO OBTENIDO: TERCER NIVEL-QUÍMICO FARMACÉUTICO
FECHA DE PUBLICACIÓN: 14 SEPTIEMBRE 2018 No. DE PÁGINAS: 68
ÁREAS TEMÁTICAS:
PALABRAS CLAVES/
KEYWORDS:
Eucalyptus globulus Labill, cristal líquido, actividad analgésica
RESUMEN/ABSTRACT (150-250 palabras): En el presente trabajo de investigación se realiza el estudio preliminar
sobre la actividad analgésica del aceite esencial de Eucalyptus globulus L. en sistemas de liberación prolongada. Se
prepararon sistemas ternarios a base de Tween-80, aceite esencial de Eucalyptus globulus L. y agua destilada, los
cuales se caracterizaron por medio de microscopía de luz polarizada como cristales líquidos(LC) presentando fases
lamelares y hexagonales. Fue posible incorporar entre 40 y 60 mg de paracetamol en los sistemas cristal líquido.
Finalmente para la evaluación analgésica se utilizó el modelo de inducción del dolor mediante la administración de
ácido acético al 0,6% por vía intraperitoneal. Se conformaron 7 grupos: G1(Control Negativo), G2(Control Positivo),
G3(Aceite esencial), G4(LC-28), G5(LC-28+), G6(LC-29) y G7(LC-29+). Los resultados obtenidos de LC-28+ y LC-29+
demostraron un aumento en el porcentaje de inhibición del dolor con respecto al paracetamol y el aceite esencial puro.
ADJUNTO PDF: SI NO
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Teléfono: 0984332191 0998517381
E-mail: [email protected] [email protected]
CONTACTO CON LA
INSTITUCIÓN:
Nombre: SEDE CIENCIAS Químicas
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E-mail: www.fcq.ug.edu.ec
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AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a Dios por habernos dado la vida y guiarnos a lo
largo de nuestras vidas en aquellos momentos de dificultad y debilidad.
De manera especial agradecemos a nuestra tutora de tesis, Ph.D.
Carolina Del Rosario Santiago, quien con sus conocimientos, experiencia y
motivación nos ha orientado durante el trabajo de titulación. De igual
manera, agradecemos a M.Sc. María Elizabeth Herrera y Ph.D. Fernanda
Kolenyak Dos Santos por el apoyo y tiempo que nos han ofrecido en el
desarrollo de nuestra tesis.
María Martha Amado Tejada y Pierina Falquez Orellana
Un agradecimiento especial para mi madre, quien ha sido mi pilar y
mi ejemplo de superación donde deposite todas mis ganas de salir
adelante, a mis hermanas Priscila, Ma. José, Mayra, mi hermano Luis y su
esposa, mis cuñados Juan y Jorge, mis sobrinas Ivette y Daniela, quienes
han estado apoyándome desde el inicio de este sueño y motivándome en
cada etapa para finalmente llegar a la meta. A mi dupla perfecta María, sin
ti esto hoy no fuese posible. Gracias infinitas por toda tu entrega y
paciencia.
Pierina Falquez Orellana
Le agradezco a mi madre por el cariño y paciencia que me ha
brindado día a día, por los valores y principios que me ha inculcado para
siempre seguir adelante y no dejarme vencer. A mi abuelita por sus
consejos y enseñanzas. A mi tía Margarita por estar presente en cada
etapa de mi vida sin importar la distancia. A Jim por siempre creer en mí y
querer lo mejor, gracias por ese apoyo incondicional. Y a todas aquellas
personas que forman parte de mi vida y me han ayudado a crecer como
persona, mil gracias familiares, amigos y maestros.
María Martha Amado Tejada
XI
ÍNDICE GENERAL
RESUMEN ....................................................................................................... XVI
ABSTRACT .................................................................................................... XVII
INTRODUCCIÓN ................................................................................................. 1
CAPITULO I. PROBLEMA ................................................................................... 3
I.1 Formulación del problema ........................................................................... 3
I.2 Justificación e importancia .......................................................................... 3
I.3 Hipótesis ..................................................................................................... 4
I.4 Objetivo general .......................................................................................... 4
I.5 Objetivos específicos .................................................................................. 4
CAPÍTULO II. MARCO TEÓRICO ....................................................................... 5
II.1 Taxonomía, morfología y distribución geográfica del Eucalyptus globulus
Labill ................................................................................................................ 5
II.2 Aceite esencial ........................................................................................... 7
II.2.1 Aceite esencial del Eucalyptus ............................................................. 8
II.3 Métodos de extracción de aceites esenciales ............................................. 9
II.3.1 Métodos directos ................................................................................. 9
II.3.1.1 Extrusión o expresión .................................................................... 9
II.3.2 Extracción con solventes ................................................................... 10
II.3.2.1 Extracción con solventes volátiles ............................................... 10
II.3.2.2 Extracción por Fluidos Supercríticos (EFS) ................................. 10
II.3.2.3 Maceración .................................................................................. 10
II.3.2.4 Enfloración .................................................................................. 11
II.3.3 Hidrodestilación ................................................................................. 11
II.3.3.1 Destilación por arrastre con vapor ............................................... 11
II.3.3.2 Hidrodestilación con trampa de Clevenger .................................. 11
II. 4 Cristales líquidos (LC) ............................................................................. 12
II.4.1 Cristales Líquidos Termotrópicos ....................................................... 13
II.4.2 Cristales Líquidos Liotrópicos ............................................................ 13
II.5 Tensoactivos ............................................................................................ 14
II.5.1 Tensoactivos iónicos .......................................................................... 15
XII
II.5.1.1 Tensoactivos aniónicos ............................................................... 15
II.5.1.2 Tensoactivos catiónicos .............................................................. 15
II.5.2 Tensoactivos Anfóteros (zwiteriónicos) .............................................. 15
II.5.3 Tensoactivos no iónicos ..................................................................... 16
II.6 Diagrama de fases ternario ...................................................................... 17
II.7 Técnicas de caracterización de cristales líquidos ..................................... 18
II.7.1 Microscopía de luz polarizada ............................................................ 18
II.8 El dolor ..................................................................................................... 19
II.9 Analgésicos .............................................................................................. 20
II.9.1 Analgésicos mayores (opiáceos) ....................................................... 20
II.9.2 Analgésicos menores (no opiáceos) .................................................. 20
II.9.2.1 Paracetamol ................................................................................ 20
II.10 Efecto farmacológico “in vivo” ................................................................. 21
II.10.1 Estudio de la actividad analgésica ................................................... 21
II.10.1.1 Prueba de contorciones inducidas por ácido acético ................. 22
II.10.2 Ética en el uso de animales de experimentación ............................. 22
CAPITULO III. METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN ................................. 25
III.1 Diseño experimental ................................................................................ 25
III.2 Metodología de la investigación .............................................................. 26
III.3 Equipos, aparatos, materiales y reactivos ............................................... 26
III.3.1 Equipos ............................................................................................. 26
III.3.2 Aparatos ........................................................................................... 26
III.3.3 Materiales ......................................................................................... 26
III.3.4 Reactivos químicos ........................................................................... 27
III.3.5 Reactivos biológicos ......................................................................... 27
III.4 Muestra ................................................................................................... 27
III.5 Técnicas y métodos ................................................................................ 28
III.5.1 Extracción del aceite esencial con Trampa de Clevenger ................. 28
III.5.2 Preparación de los cristales líquidos ................................................. 28
III.5.3 Microscopía de Luz polarizada.......................................................... 28
III.5.4 Solubilización del paracetamol en los cristales líquidos .................... 29
XIII
III.5.5 Evaluación “in vivo” de la actividad analgésica ................................. 29
III.5.5.1 Modelo experimental .................................................................. 29
III.5.5.2 Efecto analgésico ....................................................................... 30
CAPITULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN .................................................. 31
IV.1 Extracción del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill................... 31
IV.2 Preparación de los cristales líquidos ....................................................... 32
IV.3 Caracterización: Microscopía de Luz polarizada ..................................... 34
IV.4 Evaluación de la solubilidad del paracetamol en los cristales líquidos .... 36
IV.5 Evaluación “in vivo” de la actividad analgésica ....................................... 39
CONCLUSIONES .............................................................................................. 43
RECOMENDACIONES ...................................................................................... 45
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................... 46
GLOSARIO ........................................................................................................ 53
ANEXOS ........................................................................................................... 56
XIV
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla I. Taxonomía de Eucalyptus globulus L. .................................................... 5
Tabla II. Usos de las especies de Eucalyptus según la composición del aceite
esencial ............................................................................................................... 8
Tabla III. Métodos de extracción de Aceites esenciales....................................... 9
Tabla IV. Clasificación del dolor ........................................................................ 19
Tabla V. Modelos “in vivo” para evaluar actividad analgésica ............................ 22
Tabla VI. Tratamiento de los grupos de experimentación para la evaluación de la
actividad analgésica .......................................................................................... 30
Tabla VII. Porcentaje de rendimiento de Aceite esencial de las hojas de
Eucalyptus globulus L ........................................................................................ 31
Tabla VIII. Composición y caracterización visual de cristales líquidos (LC)
obtenidos a partir de aceite esencial de Eucalyptus globulus L. ......................... 33
Tabla IX. Solubilidad del Paracetamol en los Cristales Líquidos (LC) ................ 36
Tabla X. Número de contorciones inducidas por ácido acético en cada grupo
experimental ...................................................................................................... 40
Tabla XI. Efecto analgésico de los sistemas y el aceite esencial de E. globulus
Labill en las contorciones inducidas por ácido acético ....................................... 40
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Eucalyptus globulus Labill A: Árbol; B: Hojas y flores ........................... 6
Figura 2. Distribución geográfica del Eucalyptus globulus L. en Ecuador ............ 7
Figura 3. Hidrodestilación con trampa Clevenger .............................................. 12
Figura 4. Ordenamiento molecular en las fases: a) sólida; b) cristal líquido; c)
líquido ................................................................................................................ 12
Figura 5. Tipos de Fases Liotrópicas ................................................................ 14
Figura 6. Estructura básica de un tensoactivo ................................................... 14
Figura 7. Estructura química del Tensoactivo Tween 80 ................................... 16
Figura 8. Representación del diagrama de fases ternario ................................. 17
XV
Figura 9. Onda electromagnética no polarizada y polarizada ............................ 18
Figura 10. Microscopía de luz polarizada LC-28 ............................................... 34
Figura 11. Microscopía de luz polarizada LC-29 ............................................... 35
Figura 12. Solubilidad del fármaco en los cristales líquidos .............................. 36
Figura 13. Microscopía de luz polarizada LC-28 + paracetamol ........................ 38
Figura 14. Microscopía de luz polarizada LC-29 + paracetamol ........................ 38
Figura 15. Cristales líquidos evaluados en el estudio “in vivo” .......................... 39
ÍNDICE DE ESQUEMAS
Esquema 1. Diseño experimental realizado en el presente trabajo ................... 25
INDICE DE GRÁFICOS
Gráfico I. Porcentaje de inhibición del dolor de cada grupo de animales vs el
tratamiento aplicado .......................................................................................... 41
INDICE DE ANEXOS
Anexo I. Identificación y descripción de la especie por el Herbario Guay .......... 56
Anexo II. Ficha de entrega de biomodelos por el Instituto Nacional de
Investigación en Salud Pública .......................................................................... 57
Anexo III. Manejo y cuidado de los animales de experimentación. .................... 57
Anexo IV. Extracción del aceite esencial de Eucalyptus globulus L................... 58
Anexo V. Preparación de los sistemas de liberación prolongada ...................... 59
XVI
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
“EFECTO DE LA ACTIVIDAD ANALGÉSICA DEL ACEITE ESENCIAL DE
Eucalyptus globulus Labill EN SISTEMAS DE LIBERACIÓN PROLONGADA”
Autoras: María Martha Amado Tejada
Pierina Mabel Falquez Orellana
Tutora: Lcda. Carolina Santiago Dugarte, Ph. D.
RESUMEN
En el presente trabajo de investigación se realiza el estudio preliminar sobre la
actividad analgésica del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill en
sistemas de liberación prolongada. Se prepararon sistemas ternarios a base de
Tween-80, aceite esencial de Eucalyptus globulus L. y agua destilada, los cuales
se caracterizaron por medio de microscopía de luz polarizada como cristales
líquidos (LC) presentando fases lamelares y hexagonales. Fue posible incorporar
entre 40 y 60 mg de paracetamol en los sistemas cristal líquido. Finalmente para
la evaluación analgésica se utilizó el modelo de inducción del dolor mediante la
administración de ácido acético al 0,6% por vía intraperitoneal. Se conformaron 7
grupos: G1 (Control Negativo), G2 (Control Positivo), G3 (Aceite esencial), G4
(LC-28), G5 (LC-28 +), G6 (LC-29) y G7 (LC-29 +). Los resultados obtenidos de
LC-28 + y LC-29 + demostraron un aumento en el porcentaje de inhibición del
dolor con respecto al paracetamol y el aceite esencial puro.
Palabras claves: Eucalyptus globulus Labill, cristal líquido, actividad analgésica
XVII
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
“EFFECT OF THE ANALGESIC ACTIVITY OF THE ESSENTIAL OIL OF Eucalyptus globulus Labill IN PROLONGED RELEASE SYSTEMS”
Authors: María Martha Amado Tejada
Pierina Mabel Falquez Orellana
Advisor: Lcda. Carolina Santiago Dugarte, Ph. D.
ABSTRACT
In the following paper, the preliminary study is conducted on the analgesic activity
of the essential oil of Eucalyptus globulus Labill in prolonged release systems.
Ternary systems based on Tween-80, essential oil of Eucalyptus globulus L., and
distilled water were prepared, which were then characterized by polarized light
microscopy as liquid crystals (LC) that presented lamellar and hexagonal phases.
It was possible to incorporate between 40 and 60 mg of paracetamol in liquid
crystal systems. Finally, for the analgesic evaluation, the pain induction model
was used by administering 0.6% acetic acid intraperitoneally. Seven groups were
formed: G1 (Negative Control), G2 (Positive Control), G3 (Essential Oil), G4 (LC-
28), G5 (LC-28 +), G6 (LC-29) and G7 (LC-29 +). The results obtained from LC-
28 + and LC-29 + showed an increase in the inhibition of pain percentage in
regards to paracetamol and pure essential oil.
Keywords: Eucalyptus globulus Labill, liquid crystal, analgesic activity
1
INTRODUCCIÓN
Los aceites esenciales son sustancias aromáticas volátiles características
del reino vegetal, en cuya composición presentan compuestos oxigenados de
bajo peso molecular, compuestos fenólicos y terpenos. Se hallan ampliamente
distribuidos por todas las partes de la planta. Debido a la variabilidad en su
composición química, se encuentran asociados a una gran multifuncionalidad
para las industrias cosmética, alimentaria y farmacéutica (Caballero &
Rodríguez, 2014; Usano, Palá & Díaz, 2014).
Entre las familias más representativas que poseen aceites esenciales se
destaca la Myrtaceae con una amplia variedad de géneros, dentro del cual se
encuentra el Eucalyptus con aproximadamente 600 especies. En el Ecuador, la
especie que predomina es el Eucalyptus globulus L., quien ha llegado a formar
parte primordial de la región interandina (Renobales & Sallés, 2001). El aceite
esencial proveniente del Eucalyptus globulus L. es muy utilizado en la fitoterapia
por presentar propiedades antibacterianas (Merghni et al. 2018), antifúngicas
(González, Elissetche, Pereira & Fernández, 2017), antiinflamatorias y
analgésicas (Silva et al., 2003).
El componente más abundante en el Eucalyptus es el eucaliptol con un
77,37%, dato obtenido mediante un análisis fitoquímico, el cual demostró ser el
responsable de la actividad analgésica (Rojas, 2016). Otros compuestos
presentes son el cineol, pineno, eudesmol, canfeno, pinocarvona, alcoholes
sesquiterpénicos, aldehídos, cetonas, taninos, ácido gálico y eucaliptina, a quien
se le otorga efectos bacteriostáticos (Morales, 2012).
En la actualidad, el uso de analgésicos es la primera opción de consumo
frente a algún malestar o dolencia, desconociendo que el abuso y la
automedicación es un serio factor de riesgo para la salud. Un estudio realizado
2
en Quito–Ecuador denominado el “Perfil del Consumo de los Medicamentos”,
concluye que la automedicación se encuentra mayormente en analgésicos
(46,4%), antibióticos (22,8%) y antiinflamatorios (9,1%) (Lalama, 2005).
En los últimos años los grandes avances nanotecnológicos, le han
permitido a la industria farmacéutica contar con sistemas de liberación
prolongada de fármacos, entre los cuales destacan las microemulsiones y los
cristales líquidos, estos últimos brindan múltiples ventajas, una de ellas, es tener
la capacidad para solubilizar fármacos liposolubles como hidrosolubles (Kalinin
et al., 2001), poseer similitud con las estructuras y composición de la membrana
celular y de los fluidos intercelulares del sistema tegumentario (Pasquali et al.,
2006; Patel et al., 2010; Hitesh et al., 2011; Chen Gui, 2014) y permitir que el
efecto farmacológico de un fármaco sea de mayor alcance, ya que libera
proporcionalmente la cantidad de fármaco que el cuerpo necesita.
En vista del alto potencial que presentan los sistemas de liberación
prolongada, surge el interés en combinar un analgésico de uso frecuente como
paracetamol y un extracto natural como el aceite esencial del Eucalyptus
globulus L. para evaluar la factibilidad de un sistema sinérgico en la actividad
analgésica.
3
CAPITULO I. PROBLEMA
De acuerdo con los antecedentes recogidos a modo de introducción se
establece el planteamiento del problema de investigación:
I.1 Formulación del problema
¿Qué efecto tendrán los cristales líquidos obtenidos a partir del aceite
esencial de Eucalyptus globulus L. y paracetamol sobre la actividad analgésica?
I.2 Justificación e importancia
Un sistema de liberación prolongada permite la liberación de un fármaco
a una velocidad determinada dependiendo de las necesidades del organismo,
proporcionando así un efecto terapéutico prolongado y niveles plasmáticos
controlados. Dentro de las alternativas para el desarrollo de este tipo de
sistemas encontramos los cristales líquidos y las microemulsiones, los cuales
permiten incorporar tanto compuestos hidrófilos como lipófilos, por tal razón, se
han descrito como sistemas de reservorios que permiten una liberación lenta del
fármaco (Ghosh & Murthy, 2006).
Por otra parte, aunque el uso del paracetamol parezca inofensivo debido
a su gran demanda por ser la primera opción de los médicos para el tratamiento
de algún malestar general, su consumo en altas dosis ha comprobado que
desarrolla efectos tóxicos en el hígado principalmente, lo cual puede afectar
también a los riñones, desencadenando enfermedades como insuficiencia
hepática-renal, provocando a largo plazo hasta la muerte (McGill & Sharpe,
2012; Mazer & Perrone, 2008).
4
En vista de la propiedad analgésica que ha demostrado el Eucalyptus
globulus L., surge el interés de estudiar un sistema de liberación prolongada
como los cristales líquidos a base del aceite esencial de Eucalyptus globulus L. y
paracetamol, con la finalidad de conocer el efecto sobre la actividad analgésica
en modelos “in vivo” y disminución de los efectos tóxicos derivados de las dosis
elevadas del fármaco.
I.3 Hipótesis
Los cristales líquidos obtenidos a partir del aceite esencial de Eucalyptus
globulus L. y paracetamol tendrán efecto sobre la actividad analgésica.
I.4 Objetivo general
Estudiar el efecto de la actividad analgésica del aceite esencial de
Eucalyptus globulus L. en sistemas de liberación prolongada.
I.5 Objetivos específicos
Determinar la concentración de tensoactivo, agua y aceite
esencial de Eucalyptus globulus L. para la formación de cristales líquidos.
Valorizar la solubilidad del fármaco en los cristales líquidos
obtenidos con aceite esencial de Eucalyptus globulus L.
Evaluar la actividad analgésica de los sistemas de liberación
prolongada del aceite esencial de Eucalyptus globulus L. en modelos “in vivo”.
5
CAPÍTULO II. MARCO TEÓRICO
II.1 Taxonomía, morfología y distribución geográfica del Eucalyptus
globulus Labill
El Eucalyptus se trata de un género botánico originario del Sureste de
Australia que agrupa alrededor de 600 especies, pertenecientes a la
familia Myrtaceae. En Ecuador fue introducido en 1865 sobre la meseta central
entre las alturas de 1800 y 3300 m (Renobales & Sallés, 2001). En la Tabla I se
describe la posición taxonómica de la especie en estudio:
Tabla I. Taxonomía de Eucalyptus globulus L.
Reino: Plantae
División: Mangnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Subclase: Rosidae
Orden: Myrtales
Familia: Myrtaceae
Tribu: Eycalypteae
Género: Eucalyptus
Especie: Eucalyptus globulus
Labill
Fuente: Cornejo, 2018
En cuanto a su morfología, se trata de un árbol que puede alcanzar los 50
m de altura, con una corteza blanquecina, gris-azulada o verdosa capaz de
desprenderse en largas tiras longitudinales. Sus hojas presentan dimorfismo, las
jóvenes son opuestas, ovadas-lanceoladas y sésiles verdes azuladas, mientras
6
que las hojas adultas son alternas, pecioladas y acuminadas de color verde
oscuro. El fruto se presenta como una cápsula leñosa de cuatro caras con forma
de una pirámide invertida (García, 2015). En la Figura 1 se observa la
morfología del Eucalyptus globulus Labill.
Figura 1. Eucalyptus globulus Labill A: Árbol; B: Hojas y flores
Fuente: Mazza, s.f.
Las principales plantaciones de Eucalyptus globulus L. en el Ecuador se
encuentran en las ciudades de Quito y Latacunga, extendiéndose a las
provincias de Imbabura, Carchi, Tungurahua, Bolívar, Chimborazo, Cañar,
Azuay y Loja. Una característica particular para el desarrollo de la especie en
estas zonas, es que los suelos son de origen volcánico y fértil (Organización de
las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación FAO, 1981). En la
Figura 2 se muestra la distribución geográfica del Eucalyptus globulus L. en
Ecuador.
A B
7
Figura 2. Distribución geográfica del Eucalyptus globulus L. en Ecuador
Fuente: Ramírez, 2016
II.2 Aceite esencial
Los aceites esenciales consisten en una mezcla de sustancias
aromáticas producidas por el reino vegetal. En general están compuestos por
componentes volátiles, en su mayor parte por terpenos (C5H8), compuestos
oxigenados como alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres y compuestos fenólicos
(Flores, 2010).
Estos se encuentran ampliamente distribuidos en distintas partes de la
planta como sus hojas, corteza, raíces, flores, frutos o semillas. Las principales
familias productoras de aceites esenciales son: Compuestas, Labiadas,
Lauráceas, Pináceas, Rosáceas, Rutáceas, Umbelíferas y Mirtáceas (Martínez,
2003).
8
Generalmente son sustancias de aspecto oleoso incoloro o ligeramente
amarillo, altamente volátil, soluble en alcohol y disolventes orgánicos (éter,
cloroformo, tetracloruro de carbono). Y según su composición química presentan
diversas propiedades farmacológicas como antiséptica, espasmolítica y sedante,
irritante, analgésica, entre otras (Bruneton, 2001).
II.2.1 Aceite esencial del Eucalyptus
La mayoría de las especies de Eucalyptus tienen glándulas secretoras de
aceite esencial que le otorga el olor característico a las hojas, y a su vez según
la composición del mismo se utilizan para diversos fines (Organización de las
Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación FAO, 1981). En la Tabla II
se observa el uso de cada especie según la composición del aceite esencial.
Tabla II. Usos de las especies de Eucalyptus según la composición del
aceite esencial
Especies Composición del aceite esencial
Usos
E. citriodora Citronela Perfume, repelente contra insectos
E. cneorifolia Cineol Medicinal
E. dives Piperotine, felandrene Fuente para producir timol y mentol
E. dumosa Cineol Medicinal
E. globulus Cineol, eudesmol Medicinal
E. goniocalyx Cineol, eudesmol Medicinal
E. leucoxylon Cineol Medicinal
E. macarthurii Genariol, eudesmol Perfumería
E. polybractea Cineol Medicinal
E. radiata Cineol terpineol Medicinal, desinfectante
Fuente: FAO, 1981
El componente mayoritario del Eucalyptus globulus L. es el 1,8-Cineol o
Eucaliptol, cuyo porcentaje puede variar según la ubicación geográfica de la
especie: Algeria-55.29% (Harkat-Madouri et al., 2015) España-63.81% (Luís,
9
Duarte, Gominho, Domingues & Duarte, 2015), Colombia-82,27% (Yáñez &
Cuadro, 2012) y Ecuador-77.37% (Rojas, 2016).
II.3 Métodos de extracción de aceites esenciales
En dependencia de la variedad del material vegetal, de la parte de la
planta a emplear y de la estabilidad del aceite esencial que se pretenda obtener,
se emplean diversos procedimientos físicos y químicos de extracción, en donde
su correcta aplicación será lo que determine la calidad del producto final (SENA,
2014). En la Tabla III se observan los diferentes métodos de extracción.
Elaborado por: Autoras
II.3.1 Métodos directos
II.3.1.1 Extrusión o expresión
Consiste en un método directo que se utiliza principalmente en la
extracción de aceites esenciales de cítricos presentes en la corteza de la fruta
(cáscara), que al ser sometidos al calor se puede alterar su composición. Se
basa en la ruptura de las glándulas secretoras de aceite, recolectando de forma
inmediata la esencia para evitar su absorción por la corteza esponjosa que
resulta después del proceso. Por esta razón los equipos de extracción de aceite
Tabla III. Métodos de extracción de Aceites esenciales
Tipo de métodos Procedimientos
Métodos directos Extrusión o expresión
Extracción con solventes
Extracción con solventes volátiles
Extracción con Fluidos supercríticos
Maceración
Enfloración
Hidrodestilación Destilación por arrastre con vapor
Trampa de Clevenger
10
esencial de cítricos cuentan con un sistema de aspersión de agua que
humedece constantemente la superficie del fruto (Flores, 2010).
II.3.2 Extracción con solventes
II.3.2.1 Extracción con solventes volátiles
Se basa en poner en contacto el material vegetal con solventes orgánicos
tales como éter de petróleo, pentano, éter etílico, alcohol o cloroformo. Estos
solventes solubilizan las esencias y a su vez extrae otras sustancias como
grasas, ceras y pigmentos que finalmente se separan por destilación. Se suele
trabajar a temperatura ambiente, por lo que es muy útil para evitar la alteración
química de los componentes del aceite (Paredes & Quinatoa, 2010).
II.3.2.2 Extracción por Fluidos Supercríticos (EFS)
Se trata de uno de los procedimientos más modernos, en el cual se
utilizan sustancias químicas en condiciones especiales de temperatura y presión
como material de arrastre. El solvente supercrítico con mayor uso es el CO2, que
al entrar en contacto con el material vegetal provoca que las glándulas o
vesículas secretoras explosionen y liberen los aceites contenidos en ellas. Una
vez culminada la extracción, el CO2 debe enfriarse por debajo de 5°C para que la
bomba pueda tomarlo en su estado líquido (SENA, 2014).
II.3.2.3 Maceración
Es una extracción que consiste en sumergir por varios días el material
vegetal en un solvente (agua o etanol) a temperatura ambiente. Por lo general,
se recomienda usar como solvente el etanol, ya que extraer por largos períodos
en agua puede propiciar la fermentación o formación de moho. Para la obtención
del aceite esencial, se filtra el líquido y se lo lleva a un rotaevaporador
(González, 2004).
11
II.3.2.4 Enfloración
También conocido como Enfleurage, se emplea para la extracción de
esencias de flores delicadas o sensibles al calor. Se lleva a cabo mediante la
interacción de flores con una grasa durante varios días hasta la saturación de la
grasa. Posteriormente se trata con alcohol y se destila para obtener los aceites
esenciales (Tol, 2005).
II.3.3 Hidrodestilación
II.3.3.1 Destilación por arrastre con vapor
La destilación por arrastre con vapor es uno de los procesos mayormente
utilizados para extraer aceites esenciales, ya que es capaz de separar
sustancias ligeramente volátiles e insolubles en agua. La extracción se realiza
cuando el vapor de agua entra en contacto con el material vegetal y provoca que
el aceite esencial se difunda desde las membranas de la célula hacia fuera, para
luego ser condensados. Por ello, es considerada una destilación a partir de la
mezcla de dos líquidos inmiscibles (Contreras & Ruiz, 2012).
II.3.3.2 Hidrodestilación con trampa de Clevenger
Es otro de los procedimientos comúnmente utilizados para la extracción
de aceites esenciales. Se caracteriza por ser un proceso constante que consiste
en llevar a estado de ebullición una suspensión acuosa de un material vegetal
aromático, de tal manera que los vapores generados puedan ser condensados y
recolectados a través de una trampa para su posterior separación. El equipo más
conocido a escala de laboratorio es la trampa de Clevenger, ya que es
considerado el más adecuado para la determinación del contenido total del
aceite esencial de una planta aromática. Se encuentra compuesto principalmente
por un matraz redondo, una conexión en forma de D y un condensador, como se
muestra en la Figura 3. Generalmente se considera una técnica muy sencilla y
económica, aunque requiere de un largo tiempo de extracción (Rodríguez,
Alcaraz & Real, 2012).
12
Figura 3. Hidrodestilación con trampa Clevenger
Fuente: Vinatoru, Mason Calinescu, 2017
II. 4 Cristales líquidos (LC)
Los cristales líquidos (LC) fueron descritos por primera vez en 1889 por
Otto Lehmann definiéndolos como sistemas mesofásicos, es decir, presentan
una fase intermediaria con propiedades tanto de sólido como de líquido (Dierking
& Al-Zangana, 2017). Otra característica que poseen es un orden orientacional
como cristales y un desorden molecular semejante a los líquidos, como se ilustra
en la Figura 4 (Chávez & Santiago, 1999; Quirino et al., 2017). Si este orden es
en función de la temperatura se denominan termotrópicos y si es en función de la
concentración de líquidos se denominan liotrópicos (Chávez, Parra, Luzardo,
Bravo & Márquez, 2013).
Figura 4. Ordenamiento molecular en las fases: a) sólida; b) cristal líquido; c) líquido
Fuente: Chávez & Santiago, 1999
13
II.4.1 Cristales Líquidos Termotrópicos
Se origina cuando la transición hacia el estado cristal líquido es
provocada térmicamente; es decir, se puede llegar a esta mesofase elevando la
temperatura de un sólido y/o disminuyendo la temperatura de un líquido. Pueden
ser clasificados en dos tipos: cristales líquidos enantiotrópicos, aquellos que
pueden alcanzar el estado de cristal líquido de las dos maneras, disminuyendo la
temperatura de un líquido o elevando la temperatura de un sólido; y cristales
líquidos monotrópicos, aquellos que sólo pueden alcanzar el estado cristal
líquido a partir de una disminución en la temperatura de un líquido (Nesrullajev,
2016).
II.4.2 Cristales Líquidos Liotrópicos
Se presentan en un cierto intervalo de temperatura cuando algunas
sustancias se dispersan en un líquido. Los sistemas más comunes están
constituidos por dispersiones de tensoactivos en agua. También pueden formar
parte de esta fase otras sustancias anfifílicas, tales como ácidos grasos y
esteroles, aminas y alcoholes (Kim et al., 2015). Las fases liotrópicas que se
presentan con mayor frecuencia en las formulaciones farmacéuticas y
cosméticas son lamelares, hexagonales normal e inversa y cúbicas (Pasquali,
Bregni & Serrao, 2006).
Las fases lamelares están formadas por bicapas anfifílicas extendidas a
gran distancia y separadas por capas de agua. Las fases hexagonales se
encuentran formadas por micelas cilíndricas agrupadas en una red hexagonal y
pueden formar dos fases hexagonales (normal e inversa) dependiendo de la
concentración (Lancelot, Sierra & Serrano, 2014). Por último, la fase cúbica
consiste en una red 3D que separa dos secciones hidrofílicas distintas continuas
pero no interseccionadas (Demetzos et al., 2018).
14
Figura 5. Tipos de Fases Liotrópicas
Fuente: adaptado de Karami & Hamidi, 2016
II.5 Tensoactivos
Los tensoactivos son un grupo de sustancias químicas que pueden
modificar la tensión superficial en las interfaces entre diferentes medios. Son
considerados moléculas anfifílicas; es decir, poseen una doble afinidad por lo
que constan de una cabeza soluble en agua (parte hidrofílica) unida a una cola
insoluble en agua (parte hidrófoba), Figura 6. La cabeza consta de un grupo
polar que contiene O, S, P o N incluidos en grupos funcionales tales como:
alcohol, acido, sulfato, sulfonato, fosfato, amina, amida, etc. Mientras que la cola
es una cadena hidrocarbonada generalmente del tipo alquil o alquil benceno
(Fernández, 2006; Rubert, 2013; Jiménez, 2017).
Figura 6. Estructura básica de un tensoactivo
Fuente: Fernández, 2006
Son moléculas utilizadas como potenciadores de la permeabilidad, debido
a que modifican los enlaces de hidrógeno y las fuerzas iónicas. Por lo tanto, el
balance hidrófilo-lipófilo (HLB) indica si el tensoactivo presenta mayor afinidad
15
por la región hidrofílica o la región lipofílica. Los tensoactivos de bajo HLB son
útiles en la formulación agua/aceite (W/O), mientras que los tensoactivos de alto
HLB (> 12) se prefieren para aceite/agua (O/W) (Bravo, 2017).
De acuerdo a la estructura molecular, los tensoactivos se clasifican según
su capacidad de disociación en agua en:
II.5.1 Tensoactivos iónicos
II.5.1.1 Tensoactivos aniónicos
Son tensoactivos que se distinguen por poseer grupos funcionales que se
ionizan produciendo iones de carga negativa responsables de la actividad
superficial, comúnmente contienen grupos sulfatos o sulfonatos de sodio. Dentro
de este grupo encontramos: agentes espumantes (lauril sulfato), detergentes
sintéticos (alquil benceno sulfonatos), jabones (sales de sodio de ácidos grasos),
humectantes (sulfosuccinato) y dispersantes (lignosulfonatos) (Martínez, 2014).
II.5.1.2 Tensoactivos catiónicos
Los tensoactivos catiónicos cuentan con grupos funcionales que se ioniza
en iones de carga positiva responsables de la actividad superficial y presentan
moléculas nitrogenadas del tipo amina o amonio cuaternario. Suelen ser
utilizados como agentes emulsionantes a pH < 7, suavizantes o desinfectantes.
Por lo general, son compatibles con tensoactivos no iónicos y anfóteros (Ríos,
2014).
II.5.2 Tensoactivos Anfóteros (zwiteriónicos)
Son aquellos que contienen grupos aniónicos y catiónicos en la misma
molécula. Su característica anfótera se da cerca de su punto isoeléctrico, por
16
poseer dos cargas a la vez con un mínimo de actividad superficial. A este grupo
pertenecen los aminoácidos, los fosfolípidos y las betaínas. Proporcionan una
excelente espumación y bajo nivel de irritabilidad cutánea y ocular, siendo así
apropiados para la elaboración de champú (Fernández, 2006).
II.5.3 Tensoactivos no iónicos
Constituyen a un grupo de tensoactivos de amplia y variada aplicación,
que poseen grupos funcionales con elevada afinidad por el agua como son los
grupos alcohol, fenol, éter o amida. Mientras que el grupo hidrófobo
generalmente es un radical alquilo o alquil benceno (Ríos, 2014).
Los Spans y Tweens son una gama de tensoactivos no iónicos muy
utilizados en diferentes formulaciones de productos por ofrecer una buena
estabilidad, flexibilidad y una amplia compatibilidad. Son estables en ácidos
débiles, álcalis y electrolitos (Fernández, 2006).
El Tween 80 o polisorbato 80 consiste en una molécula de monooleato de
sorbitán con 20 unidades de óxido de etileno, Figura 7, muy utilizado como
emulsionante en productos alimenticios, cosméticos y medicamentos. Estos
tensoactivos por ser derivados del sorbitol presentan muy baja toxicidad, sin
embargo, se han documentado reacciones adversas al ser administrado por vía
intravenosa (Salager, 2002; Gómez, 2014).
Figura 7. Estructura química del Tensoactivo Tween 80
Fuente: Gómez, 2014
17
II.6 Diagrama de fases ternario
El diagrama de fase ternario es la representación gráfica de tres
componentes (tensoactivo, agua y aceite) para la formación de sistemas. Se
considera un enfoque útil para ilustrar las diferentes interacciones que se
pueden originar, dependiendo de la composición química y proporción de cada
componente (Ghosh & Murthy, 2006).
La construcción del diagrama se realiza sobre un triángulo equilátero, el
cual se ha convertido en la forma estándar de representar los diagramas
ternarios, Figura 8. Cada vértice del triángulo representa el 100% del
componente designado y las combinaciones posibles para los sistemas son el
resultado de un punto en el interior del triángulo (Fernández, 2006).
Figura 8. Representación del diagrama de fases ternario
Fuente: adaptado de Jiménez, 2017
18
II.7 Técnicas de caracterización de cristales líquidos
II.7.1 Microscopía de luz polarizada
Tradicionalmente se utiliza la microscopia de luz polarizada como método
de caracterización moléculas isotrópicas que presentan birrefringencia, como los
cristales líquidos. Ya que son sistemas bien ordenados, presentan un cambio de
coloración al rotar el plano de luz polarizada (Omura, Okamoto, Konno & Shiro,
2010).
La luz polarizada es aquella en la que las ondas vibran paralelamente en
el mismo plano formado por su trayectoria y la dirección de vibración. Esta luz no
es distinguible a simple vista de la luz normal, debido a que las ondas vibran en
varias direcciones del espacio. Comúnmente para la obtención de esta luz, se
realiza una adaptación al microscopio de un filtro conocido como polarizador
(Acero, Mateo & Lucha, 2013).
Figura 9. Onda electromagnética no polarizada y polarizada
Fuente: Leiva et al., 2015
19
II.8 El dolor
La Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (IASP) define al
dolor como: “una experiencia sensorial y emocional desagradable, asociada a
daño tisular actual o potencial” (IASP, 2017). El dolor es una experiencia única,
individual y compleja que abarca componentes sensitivos y afectivos. La Tabla
IV muestra la clasificación del dolor.
Tabla IV. Clasificación del dolor
Según su fisiopatología Nociceptivo
Neuropático
Según su duración Agudo
Crónico
Según el lugar de origen Somático
Visceral
Según la causa Neoplásico
Postoperatorio
Fuente: Montejano, 2007
El dolor se origina con la presencia de un estímulo nocivo activando
terminaciones nerviosas denominadas nociceptores, que transmiten la
información al Sistema Nervioso Central a través de fibras nerviosas Aδ y C
(Zegarra, 2007).
Una vez estimulados los nociceptores, se produce un cambio en la carga
eléctrica de la membrana neuronal propagando el estímulo nervioso hasta el
asta dorsal de la médula espinal. Donde se produce la unión de glutamato con
las neuronas post-sinápticas para poder transmitir la información hacia los
centros superiores del sistema nervioso central: tálamo y corteza cerebral. Dicha
información puede ser inhibida o modificada en el asta dorsal por medio de
sustancias endógenas o exógenas que actuarán modulando la transmisión del
dolor (Pabón, Pineda Cañas, 2015).
20
II.9 Analgésicos
II.9.1 Analgésicos mayores (opiáceos)
Los analgésicos opioides como su nombre lo indica se caracterizan por la
afinidad selectiva por los receptores opioides. Debido a esto, se produce la
activación de dichos receptores causando analgesia de gran intensidad sobre el
SNC principalmente. Pueden ser productos naturales derivados del opio o
sintéticos similares a la morfina. En comparación con los analgésicos menores,
no presentan "techo" analgésico, lo que indica que la dosis máxima está solo
limitada por los efectos adversos (Boechat, 2013).
II.9.2 Analgésicos menores (no opiáceos)
Este grupo lo comprenden el paracetamol, la aspirina y los
antiinflamatorios no esteroides (AINES). Poseen un "techo" analgésico, es decir,
que por arriba de la dosis máxima no tienen mayor eficacia analgésica. Su
asociación a codeína con o sin cafeína, favorecen el aumento de dicho "techo".
No presentan adicción, sin embargo su uso en dosis excesivas no descartan
efectos adversos graves como: intoxicaciones, nefropatía, síndrome confusional
en el anciano, asma, reacciones de hipersensibilidad y gastropatía por AINES,
entre otros (Gutiérrez, 2007).
II.9.2.1 Paracetamol
El paracetamol (Acetaminofén) es un analgésico de uso común que
pertenece al grupo de los AINES, con reconocidas propiedades antipiréticas y
analgésicas se mantiene como uno de los fármacos de elección para el dolor
leve a moderado (Remy, Marret & Bonnet, 2005).
21
El mayor porcentaje de absorción de este fármaco tiene lugar en el
intestino pasando previamente por un mínimo efecto de primer paso, con una
biodisponibilidad oral de más del 60%. Como preparación intravenosa es eficaz
para la analgesia perioperatoria. Se distribuye y se elimina rápidamente y es
metabolizado por el citocromo hepático P450 (Hebbes, 2016).
Por lo general, el paracetamol es considerado seguro y eficaz, aunque
varios estudios demuestran que tras una sobredosis iatrogénica podría provocar
una insuficiencia hepática fulminante entre otras afecciones hepáticas
remarcando su efecto tóxico proporcionalmente relacionado con la dosis
(Figueroa & Pérez, 2017).
Investigaciones recientes mantienen la complejidad del mecanismo de
acción de este fármaco relacionando su efecto a nivel periférico y central no solo
con la acción inhibitoria sobre las ciclooxigenasas (COX) y sus diferentes
isoformas (Oscier & Milner, 2009; Smith, 2009; Saliba et al., 2017), sino que
también sugieren la modificación del trayecto basal de las vías serotoninérgicas
y dopaminérgicas que repercuten en el proceso nociceptivo (Hebbes, 2016;
Bhagyashree, Manikkoth, Sequeira, Nayak & Rao, 2017).
II.10 Efecto farmacológico “in vivo”
II.10.1 Estudio de la actividad analgésica
La actividad analgésica de una sustancia se evalúa por medio de pruebas
antinociceptivas. La mayoría de los modelos se fundamentan en aplicar un
estímulo nociceptivo de intensidad conocida para evaluar el umbral de reacción
al dolor de dicha molécula con supuesta actividad analgésica. Los estímulos que
suelen ser utilizados son de tipo químico, térmico, mecánico y eléctrico (Milind &
Monu, 2013; Mendoza, 2016). En la Tabla V se presentan los diferentes modelos
“in vivo” para evaluar actividad analgésica según el tipo de estímulo.
22
Tabla V. Modelos “in vivo” para evaluar actividad analgésica
Modelos con estímulos químicos
Prueba de contorciones inducidas por
ácido acético
Ensayo con formalina
Estimulación de órganos huecos
Modelos con estímulos térmicos
Inmersión de la cola en agua caliente
Latigazo en la cola
Prueba de la placa caliente
Estado de dolor usando estímulos fríos
Modelos con estímulos
mecánicos
Prueba de plano inclinado
Mediadores de deformación
Filamentos de Von-Frey
Modelos con estímulos
eléctricos
Estimulación eléctrica de la cola
Estimulación eléctrica de extremidades
Estimulación de la pulpa dental
Elaborado por: Autoras
II.10.1.1 Prueba de contorciones inducidas por ácido acético
Es un modelo en el cual se aplica una estimulación química, por medio de
la administración de ácido acético en la cavidad peritoneal de ratones o ratas,
provocando irritación en las membranas serosas. El dolor periférico ocasionado
por este procedimiento se evalúa través de contorsiones acompañadas de
estiramiento de los miembros posteriores, incomodidad, torsión dorsal e
incoordinación motora. Estos comportamientos permiten realizar la cuantificación
respectiva para determinar el grado de dolor manifestado por el modelo
experimental (Milind & Monu, 2013; Patel, Sahu & Chandel, 2017).
II.10.2 Ética en el uso de animales de experimentación
La conciencia de que el trabajo con animales va más allá del simple
hecho experimental fue creciendo paulatinamente desde las últimas décadas del
siglo XX principalmente en la comunidad científica tomando en cuenta que los
animales comparten junto con la raza humana la sensibilidad al dolor y la
23
capacidad de sufrimiento y por lo tanto precisan de cuidados básicos en función
de su bienestar (Mármol, 2004). Así fue como Russell y Burch (1959), plantearon
los principios respecto a la utilización de animales de experimentación lo que se
conoce como las 3 erres: Reemplazar, Reducir y Refinar.
El Reemplazo consiste en aplicar alternativas en el uso de los animales
de experimentación por ejemplo se pueden sustituir animales vertebrados por
otras especies de menor desarrollo en la escala biológica o a su vez por cultivos
de células, tejidos u órganos para estudios in-vitro; además se desarrollan
trabajos con modelos matemáticos computarizados y simuladores que predicen
los efectos de diversos compuestos en base a la relación estructura-actividad
(Montenegro, Gayol & Tarrés, 2011).
La Reducción, se fundamenta en emplear el menor número de animales,
sin que esto afecte estadísticamente los resultados y su grado de confiabilidad
por lo que sería necesario establecer un buen diseño experimental con la
elección de un tamaño adecuado de muestra y de un modelo biológico acorde a
las necesidades del estudio, además de prever las condiciones controlables para
que tenga lugar la aplicación de los diversos procedimientos (Sánchez, 2012).
El Refinamiento persigue garantizar el bienestar de los animales antes,
durante y después de un procedimiento experimental reduciendo
considerablemente los niveles de estrés y dolor a los que puedan estar
expuestas las especies, por lo que es necesario revisar a conciencia cada una
de las técnicas a emplear identificando dentro de los protocolos tanto los pasos
que pueden desencadenar procesos dolorosos como los puntos finales en el
desarrollo de la investigación en función de la severidad de los procedimientos
(Aguilar, Coyo & Giménez, 2012).
De acuerdo con Concepción y colaboradores (2007), son numerosas las
consideraciones éticas que aseguran el bienestar animal, entre las que
24
destacan: manejar con cuidado y respeto a los animales, mantener las
condiciones necesarias tanto en su macroambiente (luz, temperatura, humedad,
ventilación) como en su microambiente (alimentación, agua, factores de
enriquecimiento ambiental) en favor de que el animal desarrolle
comportamientos acordes a su especie y no desencadene procesos fisiológicos
o conductas aberrantes producto de situaciones de estrés.
La implementación de leyes que protegen a los animales con fines de
experimentación desde finales del siglo pasado se convirtió en una necesidad
para cada uno de los países que promueven el desarrollo científico en áreas
relacionadas con la biomedicina, ya que año a años sigue creciendo el número
de animales y especies empleadas en investigación. En este contexto, en
Ecuador existen leyes y proyectos como la Ley Orgánica de Sanidad
Agropecuaria, la Ley de Sanidad Animal, Ley de Mataderos y la Ley Orgánica de
Bienestar Animal (LOBA) que promueven el bienestar de los animales en
especial en procesos de enfermedad y aunque es escasa la información en
cuando a las especies empleadas en investigación, se busca cumplir con
normativas internacionales que respaldan los derechos de los animales bajo
diversas circunstancias todo en pro de garantizar su bienestar y preservación
(Sánchez, 2017; Alvarado, 2015; Repetto, Herrera & del Peso, 2014).
25
CAPITULO III. METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
III.1 Diseño experimental
Esquema 1. Diseño experimental realizado en el presente trabajo
Elaborado por: Autoras
26
III.2 Metodología de la investigación
Se trató de un estudio experimental y descriptivo que abarcó dos fases: la
primera fase, se llevó a cabo en el Laboratorio de Análisis Orgánico en la
Facultad de Ciencias Químicas, para proceder con la extracción del aceite
esencial del Eucalipto y la preparación de los sistemas de liberación prolongada
(LC). La segunda fase, se realizó en el Bioterio de la Facultad en mención,
donde se realizaron los respectivos ensayos de actividad analgésica en los
animales de experimentación. Finalmente se compararon los efectos causados
por los diferentes sistemas preparados.
III.3 Equipos, aparatos, materiales y reactivos
III.3.1 Equipos
Balanza Analítica BOECO BBL-31
Microscópico Zeiss Axiostar plus
III.3.2 Aparatos
Hornilla eléctrica HACEB EM-1
III.3.3 Materiales
Beakers (50-400 mL)
Balón de destilación (1000 mL)
Trampa de Clevenger
Refrigerante
Tubos de ensayo
Gradilla de tubos de ensayo
Pipetas graduadas (1-10 mL)
Auxiliar de pipetas
27
Agitador de vidrio
Mangueras
Soporte universal y pinzas
Espátula
Envases de plástico (3-30 g)
Cánula de administración oral
Agujas 27 g
III.3.4 Reactivos químicos
Tween 80
Aceite esencial de Eucalyptus globulus L.
Agua destilada
Paracetamol 99,9%
Ácido acético 0,6%
Solución Salina 0,9%
III.3.5 Reactivos biológicos
Ratones CD1 (25-30 g)
III.4 Muestra
La muestra vegetal fue colectada manualmente en la Provincia de
Tungurahua en el Cantón Pelileo, Parroquia Salasaca. Las plantaciones de
Eucalipto se encontraban a los costados de la carretera Vía a Baños.
Una vez obtenidas las hojas de Eucalipto, necesarias para la ejecución
del presente trabajo de investigación, fueron llevadas al Laboratorio de Análisis
Orgánico de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad de Guayaquil,
cumpliendo con las condiciones necesarias para el buen almacenamiento de la
muestra.
28
Finalmente la muestra vegetal fue identificada y descrita por el M.Sc.
Xavier Cornejo, curador del Herbario GUAY de la Facultad de Ciencias de la
Universidad de Guayaquil, quién reportó que el material vegetal en estudio se
trataba de la especie Eucalyptus globulus Labill (Anexo I).
III.5 Técnicas y métodos
III.5.1 Extracción del aceite esencial con Trampa de Clevenger
El aceite esencial de Eucalyptus globulus L. fue obtenido por medio de
una hidrodestilación con Trampa de Clevenger. En primer lugar, las hojas
frescas se cortaron en trozos pequeños, se pesaron 100 g del material vegetal
cortado y se introdujo en el balón de destilación (1000 mL) con 600 mL de agua.
El calentamiento se realizó por 1 hora aproximadamente y el aceite esencial
obtenido se recolectó en tubos de ensayo estériles. El procedimiento se repitió
hasta la obtención de aproximadamente 40 mL de aceite.
III.5.2 Preparación de los cristales líquidos
El diagrama de fase ternario es una herramienta útil para identificar las
regiones donde se forman cristales líquidos mezclando Tween-80 (T-80), aceite
esencial de Eucalyptus globulus L. y agua destilada con agitación manual (1 a 3
minutos). Las muestras se almacenaron a una temperatura de 25 ± 1 °C durante
24 h para completar el equilibrio del sistema nanoestructurado.
III.5.3 Microscopía de Luz polarizada
La caracterización de los sistemas se realizó con ayuda de un
microscopio Zeiss Axiostar plus adaptando polarizadores cruzados en la fuente
29
de energía, lo cual permitió observar la presencia de la fase cristalina líquida de
las muestras.
III.5.4 Solubilización del paracetamol en los cristales líquidos
Los estudios de solubilización del paracetamol, fueron evaluados
añadiendo 20 mg del fármaco a 1 g de cristal líquido, por separado hasta la
saturación del sistema. Todos los ensayos de solubilidad se realizaron a
temperatura ambiente.
III.5.5 Evaluación “in vivo” de la actividad analgésica
III.5.5.1 Modelo experimental
Los animales empleados en el estudio fueron adquiridos desde la
Plataforma de Bioterio del Instituto Nacional de Investigación en Salud Publica-
INSPI, de la ciudad de Guayaquil, Ecuador (Anexo II).
Se emplearon 42 ratones hembras CD1 con un peso de alrededor 25 a
30 gramos los cuales luego del traslado hacia el Bioterio de la Facultad de
Ciencias Químicas de la Universidad de Guayaquil mantuvieron un período de
adaptación de 7 días previos al procedimiento experimental, bajo condiciones
controladas de temperatura (22 ± 2 °C), humedad relativa (31 ± 5 %), ciclos de
luz-oscuridad de 12 h, agua y alimento peletelizado “ad libitum“. Posteriormente
se prosiguió al marcaje y aleatorización de los grupos separándolos en 7 grupos
de 6 animales (Anexo III). La señalización de los animales se realizó con marcas
de I a VI en la cola del animal.
Diariamente se realizó la limpieza de las jaulas y de los utensilios
correspondientes, al igual que el control del estado de los animales
implementando material de enriquecimiento ambiental para favorecer el proceso
30
de adaptación. La comida fue retirada la noche anterior al ensayo, garantizando
un ayuno de 8 horas aproximadamente.
Durante el procedimiento experimental el manejo de los animales se
realizó de acuerdo a los aspectos éticos correspondientes al buen cuidado y
manejo de los animales de experimentación basados en el principio de las 3 R’s
y contando con el apoyo de personal calificado.
III.5.5.2 Efecto analgésico
La actividad analgésica se evaluó mediante la prueba de contorciones
inducidas por ácido acético, de acuerdo con el método de Siegmund et al.
(1957). Se inyectó una solución de ácido acético 0,6% (10 mL/Kg) por vía
intraperitoneal 40 minutos después del tratamiento de cada grupo según se
indica en la Tabla VI. Los ratones se colocaron en cajas de observación y se
contaron el número de contorciones durante 20 minutos después de la
administración de ácido acético.
Tabla VI. Tratamiento de los grupos de experimentación para la evaluación
de la actividad analgésica
Grupo Tratamiento Concentración de
Aceite esencial Dosis
Vía de administración
1 (-) Solución salina - 10 mL/Kg Oral
2 (+) Paracetamol - 200 mg/Kg Oral
3 Aceite esencial de E. globulus
100% - Oral
4 LC-28 20% - Oral
5 LC-28 +
Paracetamol 20% 200 mg/Kg Oral
6 LC-29 30% - Oral
7 LC-29 +
Paracetamol 30% 200 mg/Kg Oral
Elaborado por: Autoras
31
CAPITULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
IV.1 Extracción del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill
El procedimiento de extracción del aceite se realizó a partir de hojas
frescas de Eucalyptus globulus L. mediante una hidrodestilación con Trampa de
Clevenger. Esta técnica es de bajo costo con altos rendimientos para la
obtención del aceite esencial en el material vegetal (Anexo IV).
El porcentaje de rendimiento del aceite esencial de las hojas de
Eucalyptus globulus L. fue de 1,4% con un coeficiente de variación 7,1%, tal
como se indica en la Tabla VII. Estos resultados son congruentes con los
reportados en “Modelación y optimización del proceso de extracción de aceite
esencial de eucalipto (Eucalyptus globulus)” (Moreno, López & Siche ,2010); con
un rendimiento de 1,7%.
Tabla VII. Porcentaje de rendimiento de Aceite esencial de las hojas de
Eucalyptus globulus L.
N° Cantidad de
muestra (g)
Volumen obtenido de
aceite esencial (ml)
Porcentaje de
rendimiento (%)
1 100, 2 1,5 1,5
2 100,0 1,5 1,5
3 100,0 1,4 1,4
4 99,7 1,2 1,2
5 100,0 1,4 1,4
6 100,3 1,5 1,5
7 100,1 1,5 1,5
8 100,0 1,4 1,4
9 100,0 1,4 1,4
32
10 100,0 1,4 1,4
11 99,6 1,2 1,2
12 99,7 1,3 1,3
13 100,0 1,3 1,3
14 100,0 1,3 1,3
15 100,3 1,5 1,5
16 99,6 1,2 1,2
17 100,1 1,4 1,4
18 100,9 1,6 1,6
19 100,0 1,4 1,4
20 100,0 1,4 1,4
21 100,0 1,4 1,4
22 100,0 1,2 1,2
23 100,1 1,4 1,4
24 100,2 1,4 1,4
25 99,9 1,3 1,3
26 101,6 1,6 1,6
27 100,2 1,4 1,4
28 100,1 1,4 1,4
29 100,2 1,5 1,5
30 100,0 1,4 1,4
1,4
CV % 7,1
Elaborado por: Autoras
IV.2 Preparación de los cristales líquidos
El diagrama de fase desarrollado en el trabajo de titulación “Efecto de la
actividad antibacteriana del aceite esencial de Eucalyptus globulus L. en
sistemas de liberación prolongada” (Castro & Palma, 2018); fue construido
mezclando diferentes proporciones de Tween-80, aceite esencial de Eucalyptus
globulus L. y agua. La Tabla VIII muestra la composición y la caracterización
visual de los sistemas (Anexo V).
33
Tabla VIII. Composición y caracterización visual de cristales líquidos (LC)
obtenidos a partir de aceite esencial de Eucalyptus globulus L.
Región Muestra T-80
(%)
Aceite esencial
(%)
Agua
(%) Apariencia
5 LC-28 50 20 30
Transparente Viscosa (formación
de gel)
LC-29 50 30 20 Transparente Viscosa
6 LC-31 60 10 30 Transparente
Viscosa
LC-32 60 20 20 Transparente Viscosa
7 LC-34 70 10 20 Transparente Fluido
Elaborado por: Autoras
En la Tabla VIII es posible observar que los sistemas formados en la
región 5 y 6 presentaron un aspecto transparente y viscoso, siendo esto una
característica importante para los cristales líquidos, Singhvi y colaboradores
(2018), describen los cristales líquidos como sistemas transparentes y viscosos.
Los cristales líquidos también pueden presentar un grado de fluidez, esto
dependerá de la organización de la matriz y la estructura formada. Otte y
colaboradores (2017), evaluaron las propiedades farmacocinéticas “in vitro” de
los cristales líquidos y obtuvieron sistemas fluidos, los resultados mostraron una
mayor tasa de liberación cuando los LC eran menos viscosos. Wei y
colaboradores (2018), en su trabajo titulado “Structural properties, in vitro release
and radical scavenging activity of lecithin based curcumin-encapsulated inverse
hexagonal (HII) liquid crystals” discute las ventajas de los cristales líquidos
fluidos comparados a los sistemas viscoso, sugiriendo que el aspecto fluido se
debe a la posible formación de una estructura hexagonal.
Considerando lo expuesto, se sugiere que la región 7 también formó
cristales líquidos; sin embargo, estos presentaron un aspecto más fluido
comparado con las otras regiones. Para la confirmación de las estructuras de los
sistemas mostrados en la Tabla VII, se procedió en caracterizar los sistemas por
34
microscopía de luz polarizada, después de 24horas (tiempo mínimo necesario
para la estabilización de los sistemas).
IV.3 Caracterización: Microscopía de Luz polarizada
La microscopía de luz polarizada es una técnica que permite visualizar y
caracterizar estructuras con birrefringencia cuando la refracción de la luz
atraviesa un filtro polarizador a distintas velocidades (Vermey, Chapman, Cooke
& Kilani, 2015). Los cristales líquidos más comunes encontrados son de
estructura lamelar y hexagonal; La fase lamelar se caracteriza por la presencia
de cruces de Malta, mientras que la fase hexagonal por estrías (Vicentini et al.,
2008; Froelich, et al., 2017). Las muestras analizadas mostraron la formación de
ambas fases de cristales líquidos.
En la muestra LC-28 conformada por 50% Tween-80, 20% aceite
esencial y 30% agua, se observó la presencia de estrías como se refleja en la
Figura 10; mientras que, LC-29 constituido por 50% Tween-80, 30% aceite
esencial y 20% agua se destacaron las cruces de malta como se muestra en la
Figura 11.
Figura 10. Microscopía de luz polarizada LC-28
Fuente: Autoras
35
Figura 11. Microscopía de luz polarizada LC-29
Fuente: Autoras
Vicentini y colaboradores (2008), identificaron la presencia de estrías y
cruces de malta en la microscopía de luz polarizada de cristales líquidos
conteniendo quercetina. Oyafuso y colaboradores (2017), desarrollaron cristales
líquidos para evaluar la liberación controlada de dexametasona mostrando la
presencia de cruces de malta y estrías en la microscopía de luz polarizada. La
discusión presentada, respalda la formación de LC de fase lamelar y hexagonal
para los LC-28 (Figura 10) y LC-29 (Figura 11).
Las muestras LC-31, LC-32 y LC-34 luego de transcurridos 60 días se
observaron nuevamente al microscopio de luz polarizada y se evidenció la
ausencia de estrías y cruces de malta, lo que sugiere un cambio estructural de
cristales líquidos a microemulsiones.
Se presume que la posible causa de lo observado se deba a que las
condiciones de almacenamiento no hayan sido las adecuadas, como por ejemplo
temperaturas y porcentaje de humedad elevados. Es importante mencionar que
bajo estas condiciones la proporción del componente oleoso podría disminuir
36
debido a la alta volatilidad del aceite esencial, esto sugeriría un posible cambio
en el sistema nanoestructurado.
IV.4 Evaluación de la solubilidad del paracetamol en los cristales
líquidos
La solubilidad del paracetamol fue evaluada agregando una cantidad
determinada de fármaco a 1 g del sistema hasta saturación, la cual se evidenció
mediante un cambio en la coloración del mismo. La Tabla IX muestra que es
posible incorporar varios miligramos de paracetamol en los sistemas
caracterizados como cristales líquidos (Figura 12).
Elaborado por: Autoras
Figura 12. Solubilidad del fármaco en los cristales líquidos
Fuente: Autoras
Tabla IX. Solubilidad del Paracetamol en los Cristales Líquidos (LC)
Región Muestra Masa (g) Resultado
Paracetamol (mg)
5 LC-28 1 60
LC-29 1 40
6 LC-31 1 50
LC-32 1 40
7 LC-34 1 60
37
Se observó que la solubilidad del paracetamol en la región 5 aumenta
cuando el sistema posee menor porcentaje de aceite esencial, siendo 20% (LC-
28) y 30% (LC-29), por tal razón se logró incorporar 60 mg y 40 mg
respectivamente, ambos poseen la misma concentración de tensoactivo (50%),
Se observa el mismo comportamiento en la región 6, es decir, ambos sistemas
presentaron la mayor solubilización del paracetamol cuando había una menor
concentración de aceite esencial (LC-31 y LC-32).
Con el objetivo de evaluar el comportamiento de la mezcla tensoactivo y
aceite esencial, se evaluó la región 7 del diagrama de fases (LC-34), en donde
se observa que este sistema presenta una mayor concentración de tensoactivo y
menor de aceite esencial comparado a las otras regiones, sin embargo, la
solubilidad del fármaco fue semejante a LC-28. Una hipótesis para las
diferencias de solubilidad en los resultados presentados puede ser la
estructuración de los sistemas.
Carvalho y colaboradores (2011), desarrollaron cristales líquidos para la
incorporación de zidovudina (AZT), los resultados para la solubilidad del fármaco
presentaron las mismas características, es decir, la misma concentración de
tensoactivo y el cambio en la concentración de aceite, modifico el grado de
solubilidad del fármaco. Chiappetta y colaboradores (2010), también mostraron
un aumento en la solubilización de fármacos lipofílicos en la matriz de sistemas
nanoestructurados, ambos autores sugieren que el tensoactivo influencia en la
solubilización de los fármacos estudiados.
Por otra parte, al adicionar paracetamol los sistemas se mantuvieron
estables sin alterar su nanoestructura tal como se observa en la Figura 13 y
Figura 14.
38
Figura 13. Microscopía de luz polarizada LC-28 + paracetamol
Fuente: Autoras
Figura 14. Microscopía de luz polarizada LC-29 + paracetamol
Fuente: Autoras
39
IV.5 Evaluación “in vivo” de la actividad analgésica
Para la determinación de la actividad analgésica se consideraron los
sistemas LC-28 y LC-29 por presentar mayor cantidad de aceite esencial y
menor porcentaje de Tween-80 (Figura 15), ya que al seleccionar un sistema
con mayor porcentaje de tensoactivo podría aumentar la probabilidad de causar
un efecto tóxico en los animales de experimentación.
Según el estudio realizado por el Instituto de Farmacia y Alimento de la
Universidad de la Habana (2018) sobre la determinación de la toxicidad aguda
oral de un producto a base de Tween-80, aceite coco y agua, no se evidencia
efectos tóxicos sobre los animales sometidos a una dosis de 400 mg/Kg.
Figura 15. Cristales líquidos evaluados en el estudio “in vivo”
Fuente: Autoras
Luego de haber aplicado el tratamiento a cada grupo experimental, la
administración de ácido acético al 0,6% produjo contracciones abdominales,
estiramiento de las patas traseras e incoordinación motora en los animales. En la
Tabla X se muestra el número de contorciones observadas en cada uno de los
grupos experimentales.
40
Tabla X. Número de contorciones inducidas por ácido acético en cada grupo
experimental
Animal
N°
G1
(-)
G2
(+)
G3
(A. esencial)
G4 (LC 28)
G5 (LC 28+)
G6 (LC 29)
G7 (LC 29+)
1 98 48 80 54 37 50 38
2 95 51 75 59 42 47 40
3 99 47 74 56 39 45 42
4 100 53 81 61 41 55 35
5 94 42 78 55 36 52 41
6 102 45 79 64 34 49 33
98 48 78 58 38 50 38
CV% 3 8 4 7 8 8 11
Elaborado por: Autoras
Se puede apreciar que los animales tratados con las diferentes muestras;
LC 28 (G4), LC 28+ (G5), LC 29 (G6) y LC 29+ (G7); disminuyeron el número de
contorciones en comparación de los animales que solamente recibieron solución
salina (G1). El grupo 1 presentó una media de 98 ± 3, frente los grupos 4, 5, 6 y
7 con medias de 58 ± 4; 38 ± 3; 50 ± 4 y 38 ± 4 respectivamente (Tabla XI).
Tabla XI. Efecto analgésico de los sistemas y el aceite esencial de E. globulus Labill en las contorciones inducidas por ácido acético
Grupos tratados Media ± I.C Porcentaje de inhibición del dolor (%)
G1 (-) 98 ± 3 -
G2 (+) 48 ± 4* 51
G3 (A. esencial) 78 ± 4* 20
G4 (LC 28) 58 ± 4* 41
G5 (LC 28+) 38 ± 3* 61
G6 (LC 29) 50 ± 4* 49
G7 (LC 29+) 38 ± 4* 61
* P < 0,05 comparado con el grupo control I.C: Intervalo de confianza
Elaborado por: Autoras
41
Gráfico I. Porcentaje de inhibición del dolor de cada grupo de animales vs el
tratamiento aplicado
Elaborado por: Autoras
Según los resultados presentados en el Grafico I se realizan las
siguientes observaciones:
El grupo tratado con paracetamol 200 mg/Kg (control positivo) inhibió las
contorciones inducidas por el ácido acético un 51%, mientras que el grupo
tratado con aceite esencial puro de Eucalyptus globulus L. reportó un 20% de
inhibición del dolor.
Los grupos tratados con los sistemas LC 28 y LC 28+fármaco inhibieron
las contorciones un 41% y 61% respectivamente. A su vez los sistemas LC 29 y
LC 29+fármaco reportaron valores similares; 49% y 61%. Con ello, se observa
que existe una disminución de las contorciones inducidas por ácido acético.
0% 51% 20% 41% 61% 49% 61% 0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
ControlNegativo
ControlPositivo
Aceiteesencial
E.globulus
LC 28 LC 28 + LC 29 LC 29 +
Po
rcen
taje
de i
nh
ibic
ion
Tratamiento aplicado
Porcentaje de inhibicion vs Tratamiento aplicado
42
El porcentaje de inhibición del sistema LC-29 (49%) fue mayor al del
sistema LC-28 (41%), lo cual se podría deber a que LC-29 presenta en su
composición mayor porcentaje de aceite esencial de Eucalyptus globulus L.
Dichos resultados comparados con el aceite esencial puro (20%), reflejan que
podría existir una disminución de las contorsiones cuando el aceite forma parte
de un sistema ternario.
Por último, los sistemas de liberación prolongada obtenidos con el aceite
esencial de Eucalyptus globulus L. más paracetamol (LC-28 +; LC-29 +)
presentan un porcentaje de inhibición del 61%, mostrando un aumento de la
acción farmacológica del fármaco en comparación con la actividad que ejerce
por sí solo (51%).
Los resultados obtenidos en el presente estudio de investigación son
congruentes con los reportados en “Nanoparticles prolong N
palmitoylethanolamide anti-inflammatory and analgesic effects in vivo”; por
Tronino y colaboradores (2016), en donde concluyen que el desarrollo de
formulaciones nanotecnológicas puede aumentar la posibilidad potencializar el
efecto farmacológico.
43
CONCLUSIONES
En base a los resultados obtenidos en el presente trabajo de titulación se puede
concluir lo siguiente:
Al realizar la extracción del aceite esencial a partir de las hojas de
Eucalyptus globulus Labill se obtuvo un porcentaje de rendimiento de
1,4%.
Para la formación de los nanoestructuras se determinó la concentración
más apropiada de tensoactivo, agua y aceite esencial (Eucalyptus
globulus L.) para la obtención de cinco cristales líquidos: LC-28, LC-29,
LC-31, LC-32 y LC-34.
Mediante microscopía de luz polarizada se caracterizaron los sistemas,
observándose estructuras lamelares y hexagonales propias de los
cristales líquidos.
Se valorizó la solubilidad del paracetamol en los cinco cristales líquidos
obtenidos, teniendo como resultado que LC-28 y LC-29, pertenecientes a
la región 5 del diagrama de fases con una proporción de tensoactivo al
50%, poseen una mayor capacidad de incorporación sin alterar las
estructuras. Debido a esto, la relación entre el porcentaje de aceite
esencial y de tensoactivo evidenció el aumento en la solubilidad del
fármaco.
44
Con la evaluación “in vivo” de la actividad analgésica del aceite esencial
de Eucalyptus globulus Labill, se llegó a la conclusión de que esta
actividad farmacológica fue mayor cuando el aceite forma parte de una
nanoestructura (cristales líquidos) y adicionalmente se observó que la
actividad analgésica fue aún mayor al incorporar paracetamol.
El estudio realizado constituye el primer reporte sobre los efectos de la
actividad analgésica “in vivo” del aceite esencial de Eucalyptus globulus
Labill en cristales líquidos con paracetamol.
45
RECOMENDACIONES
En función de los resultados obtenidos se plantean las siguientes sugerencias
para posteriores análisis que se deseen llevar a cabo.
Realizar estudios de estabilidad a bajas temperaturas y porcentaje de
humedad controlada a los diferentes sistemas caracterizados como cristal
líquido con y sin principio activo, de tal manera que se pueda determinar
la conservación o no de las nanoestructuras por mayor tiempo.
Efectuar los estudios de calorimetría de barrido (DSC) y perfil reológico
para confirmar la caracterización de cada uno de los sistemas cristal
líquido.
Con la finalidad de verificar el comportamiento de las muestras LC-28 y
LC-29 con fármaco se recomienda realizar el perfil farmacocinético, para
determinar la variación de la concentración vs el tiempo y demostrar sí
estos sistemas actúan como transportadores de liberación prolongada.
46
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53
GLOSARIO
Analgésico:
Se dice del medicamento o droga que suprime o disminuye la sensación
dolorosa.
Anfifílica:
Característica de las moléculas que contiene grupos hidrófilos e hidrófobos,
permitiéndole estar parcialmente diluida en agua o en disolventes orgánicos.
Anfóteros:
Cuerpo o sustancia que presenta doble comportamiento.
Anisótropo:
Se aplica a la sustancia que presenta distintas propiedades en función de la dire
cción.
Bacteriostático:
Sustancia que aunque no produce la muerte a una bacteria impide su
reproducción; la bacteria envejece y muere sin dejar descendencia.
Balance hidrófilo-lipófilo (HLB):
Es el balance del tamaño y fuerza de los grupos hidrofílicos (polar) y lipofílicos
(no polar) de un surfactante. Se atribuye un cierto número HLB a los agentes
emulsionantes a partir de datos relativos a la estabilidad de una emulsión.
Birrefringencia:
Fenómeno en el cual un rayo que incide en un cristal anisótropo se desdobla en
dos, cuyas direcciones son paralelas.
Dimorfismo:
Propiedad de algunos cuerpos de cristalizar en dos sistemas diferentes.
Dolor neuropático:
Es una afección neurológica que aparece como consecuencia de alteraciones
del sistema nervioso, tanto periférico como central.
54
Dolor nociceptivo:
También denominado dolor normal o fisiológico, se produce como consecuencia
de una lesión somática o visceral.
Dolor somático:
Producido por la activación de los nociceptores de la piel, huesos y partes
blandas.
Dolor visceral:
Se origina por lesión con receptores de los órganos internos como riñones y
tracto gastrointestinal.
Enantiotrópicos:
Se dice que las sustancias pueden ocurrir en dos formas distintas, convertibles
entre sí por efecto de la variación de temperatura.
Espasmolítico:
Sustancia que actúa contra los espasmos musculares de las vísceras calmando
los cólicos.
Estado mesomórfico:
Estado de la materia intermedio entre el estado amorfo y el cristalino.
Fitoterapia:
Tratamiento médico de algunas enfermedades basado en el empleo de plantas y
sustancias vegetales.
Hojas sésiles:
Hojas en las que el limbo se asienta directamente en el tallo de la planta.
Iatrogénica:
Estado, enfermedad o afección causado por los médicos, tratamientos médicos o
medicamentos.
Inmiscible:
Que no se puede mezclar.
Interseccionadas:
Interconectarse, interactuar con algo o alguien.
55
Intrínseco:
Que es propio o característico a la naturaleza de una cosa.
Isotrópico:
Que tiene las mismas propiedades en todas las direcciones;
físicamente homogéneo.
Maceración:
Proceso de extracción de solido-liquido, el cual los compuestos químicos de
interés se encuentran en la materia sólida y la parte liquida se realiza la
extracción.
Mesógenas:
Se aplica a lo que se forma en medio de algo.
Nocicepción:
Proceso neuronal de codificación y procesamiento de estímulos nocivos.
Opiáceo:
Compuesto con opio o extraído de él.
Perioperatoria:
Es el período de tiempo que describe la duración de un paciente de
procedimiento quirúrgico. Se refiere generalmente a las tres fases de la cirugía:
preoperatorio, intraoperatorio y postoperatorio.
Quiral:
Es la propiedad de un objeto de no ser superponible con su imagen especular.
Transición:
Acción y efecto de pasar de un estado a otro.
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ANEXOS
Anexo I. Identificación y descripción de la especie por el Herbario Guay
57
Anexo II. Ficha de entrega de biomodelos por el Instituto Nacional de
Investigación en Salud Pública
Anexo III. Manejo y cuidado de los animales de experimentación.
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Anexo IV. Extracción del aceite esencial de Eucalyptus globulus L.
3) Recepción del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill
1) Material Vegetal en el
balón de destilación
2) Montaje del equipo
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Anexo V. Preparación de los sistemas de liberación prolongada
4) Agitación manual de los componentes
2) Tensoactivo 1) Aceite esencial de
E. globulus Labill
3) Agua destilada
5) Resultado final de los sistemas preparados
