UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y … · 2018. 4. 18. ·...
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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE ANTÍGENOS DE PARVOVIRUS CANINO, EN CACHORROS NO VACUNADOS DE 0 A 4 MESES DE EDAD, EN EL MUNICIPIO DE FRAIJANES GUATEMALA JOSÉ FERNANDO RÍOS FERNÁNDEZ Médico Veterinario GUATEMALA, OCTUBRE DE 2017
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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA
DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE ANTÍGENOS DE
PARVOVIRUS CANINO, EN CACHORROS NO
VACUNADOS DE 0 A 4 MESES DE EDAD, EN EL
MUNICIPIO DE FRAIJANES GUATEMALA
JOSÉ FERNANDO RÍOS FERNÁNDEZ
Médico Veterinario
GUATEMALA, OCTUBRE DE 2017
UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA
DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE ANTÍGENOS DE
PARVOVIRUS CANINO, EN CACHORROS NO VACUNADOS DE 0
A 4 MESES DE EDAD, EN EL MUNICIPIO DE FRAIJANES
GUATEMALA
TRABAJO DE GRADUACIÓN
PRESENTADO A LA HONORABLE JUNTA DIRECTIVA DE LA FACULTAD
POR
JOSÉ FERNANDO RÍOS FERNÁNDEZ
Al conferirle el título profesional de
Médico Veterinario
En el grado de Licenciado
GUATEMALA, OCTUBRE DE 2017
UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
JUNTA DIRECTIVA
DECANO: M.A. Gustavo Enrique Taracena Gil
SECRETARIO: Dr. Hugo René Pérez Noriega
VOCAL I: M.Sc. Juan José Prem González
VOCAL II: Lic. Zoot. Edgar Amílcar García Pimentel
VOCAL III: Lic. Zoot. Alex Rafael Salazar Melgar
VOCAL IV: Br. Brenda Lissette Chávez López
VOCAL V: Br. Javier Augusto Castro Vásquez
ASESORES
M.V. MARIA ANDREA CARBONELL PILOÑA
M.V. ALEJANDRO JOSÉ HUN MARTÍNEZ
HONORABLE TRIBUNAL EXAMINADOR
En cumplimiento con lo establecido por los reglamentos y normas de
la Universidad de San Carlos de Guatemala, presento a su
consideración el trabajo de graduación titulado:
DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE ANTÍGENOS DE
PARVOVIRUS CANINO, EN CACHORROS NO VACUNADOS DE 0
A 4 MESES DE EDAD, EN EL MUNICIPIO DE FRAIJANES
GUATEMALA
Que fuera aprobado por la Honorable Junta Directiva de la
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Como requisito previo a optar al título de:
MÉDICO VETERINARIO
ACTO QUE DEDICO A:
A DIOS: Por darme la vida, brindarme la oportunidad, la
sabiduría y las fuerzas necesarias para cumplir y
llegar a esta meta.
A MI PADRES: José Fernando Ríos y Hilda Lucrecia Ríos, que
se que desde el cielo siempre está a la par mía
apoyándome y cuidándome, por haberme regala-
do la vida, por ser un ejemplo a seguir, por todos
los esfuerzos que hicieron para darme lo
necesario para estar acá presente, por ser mi
ejemplo a seguir, por su apoyo incondicional. Los
amo.
A MI ESPOSA: Ana Rosario por darme amor más bello que un
hombre pueda sentir todos los días, por
apoyarme siempre y luchar juntos para alcanzar
nuestras metas y nuestros sueños, por haberme
dado lo más hermoso de mi vida nuestro hijo
Fernando Ríos, mi inspiración para seguir
adelante y ser como lo es mi papa un ejemplo a
seguir . Los amo
A MIS HERMANAS: Por estar siempre apoyándome en las buenas y
en las malas y ser parte de mi vida, las amo.
A MIS AMIGOS: Gracias por ser mis amigos, por su apoyo, sus
regaños y por su amistad incondicional y por
todos los momentos que pasamos juntos, Diego,
Mariano, Carlos, André, Emilio, David, Javier,
Gabriela, Mane, Ana, Pablo, Pawis, y a todos las
personas que se que su momento me apoyaron.
AGRADECIMIENTOS
A LA TRICENTENARIA Especialmente a la Facultad de Medicina
UNIVERSIDAD DE Veterinaria y Zootecnia por haberme formado
SAN CARLOS DE profesionalmente y prepararme para servir y
GUATEMALA: ayudar al pueblo de Guatemala.
A MIS CATEDRÁTICOS: Por haberme compartido sus conocimientos y
consejos.
A MIS ASESORES: Dra. Andrea Carbonell, Dr. Alejandro José Hun
gracias por aceptar ser mis asesores y compartir
sus conocimientos para poder realizar este
estudio.
A TODA MI FAMILIA: Todo su apoyo desde el inicio hasta el final de
esta carrera.
ÍNDICE
I. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………. 1
II. OBJETIVOS……………………………………………………………………. 3
2.1 Objetivo General……………………………………………………….. 3
2.2 Objetivos Específicos....…….………………………………………… 3
III. REVISIÓN DE LITERATURA………………………………………………… 4
3.1 Etiología…………………………………………………………………. 4
3.1.2 Características antigénicas del Parvovirus Canino………. 4
3.2 Epidemiología…………………………………………………………... 5
3.3 Patogenia……………………………………………………………….. 6
3.4 Signos…………………………………………………………………… 7
3.4.1 Existen tres formas de presentación………………………. 7
3.4.1.1 Cuadro sobre agudo……………………………… 7
3.4.1.2 Cuadro sub-agudo………………………………... 8
3.4.1.3 Cuadro agudo……………………………………... 8
3.5 Tratamiento……………………………………………………………... 8
3.6 Diagnóstico……………………………………………………………… 9
3.6.1 Hemoaglutinación (He) e inhibición de la hemoglobina….. 9
3.6.2 Neutralización con suero…………………………………….. 10
3.6.3 Técnicas de anticuerpos fluorescentes……………………. 10
3.6.4 Aislamiento del parvovirus…………………………………... 11
3.6.5 Detección de antígeno de parvovirus canino en prueba
inmunocromatográfica directa………………………………. 12
3.6.6 Principio de la técnica………………………………………... 12
3.6.7 Características………………………………………………... 12
3.6.8 Especificaciones……………………………………………… 13
3.6.9 Toma de la muestra………………………………………….. 13
3.6.10 Conservación y estabilidad…………………………………. 14
3.6.11 Estudios similares…………………………………………… 14
IV. MATERIALES Y MÉTODOS………………………………………………… 16
4.1 Materiales………………...…………………………………………….. 16
4.1.1 Recursos humanos………………………………………….. 16
4.1.2 Recursos biológicos………………………………………….. 16
4.1.3 Recursos de laboratorio……………………………………… 16
4.1.4 Recursos de escritorio……………………………………….. 16
4.2 Metodología…………………………………………………………….. 17
4.2.1 Diseño del estudio……………………………………………. 17
4.2.2 Procedimiento………………………………………………… 17
V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN………………………………………………. 19
VI. CONCLUSIONES……………………………………………………………… 23
VII. RECOMENDACIONES……………………………………………………….. 24
VIII. RESUMEN……………………………………………………………………… 25
SUMMARY…………………………………………………………………….... 26
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………… 27
X. ANEXOS………………………………………………………………………... 30
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro 1
Porcentajes de prevalencia de pacientes atendidos con parvovirus canino….…. 34
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1
Porcentaje de muestras positivas a la prueba inmunocromatográfica
directa para antígeno de parvovirus, en cachorros de 0 a 4 meses de
edad con signos de gastroenteritis hemorrágica……………………………………..18
Figura 2
Porcentaje de machos y hembras de 0 a 4 meses de edad positivos a
parvovirus canino con signos de gastroenteritis hemorrágica………………………19
Figura 3
Porcentaje de hembras y machos positivos y negativos a la prueba
inmunocromatográfica directa para antígeno de parvovirus………………………..20
Figura 4
Prevalencia de parvovirus canino por raza, en cachorros de 0 a 4 meses
de edad con signos de gastroenteritis hemorrágica…………………………………21
1
I. INTRODUCCION
El Parvovirus canino, se presentó por primera vez en los Estado Unidos de
Norteamérica en 1977 y actualmente se encuentra diseminado en todo el mundo.
Este es uno de los principales agentes virales que afectan a los caninos sin
importar la edad, siendo los cachorros y los gerontes los que comúnmente se
infectan.
Los caninos infectados excretan grandes cantidades de virus en sus heces
antes de manifestar los signos, tres semanas después de haber adquirido el virus;
actuando como reservorios y contagiando animales susceptibles por contacto
feco- oronasal o fómites. La trasmisión ocurre de ocho a doce días post-infección.
Tras un corto periodo de incubación de cuatro a siete días y en menos de 48
horas los caninos presentan repentinamente vómitos, diarrea sanguinolenta,
anorexia, fiebre y depresión. Los pacientes gravemente afectados mueren en un
periodo corto de tiempo y los que sobreviven, desarrollan una inmunidad de larga
duración.
Actualmente la situación epidemiológica mundial de la enfermedad es de tipo
enzoótico, a pesar de que existe vacunación. Por lo cual el uso de una prueba
inmunocromatografica directa ayudaría a realizar diagnósticos más rápidos y
precisos,ya que es una prueba sensible y específica capaz de detectar el virus
durante la fase de eliminación por heces; antes que aparezcan los signos. El test
inmunocromatografica de Parvo le ofrece un resultado fiable y preciso.
Como se sabe, la población humana y por tanto la canina va en aumento.
Debido a esto se necesita un diagnóstico rápido, poco invasivo que permita
identificar al antígeno (virus) en las vías de eliminación (heces). Para instaurar un
2
tratamiento adecuado a la afección, aumentar el número de animales recuperados
y disminuir la transmisión.
En Guatemala no hay estudios publicados acerca de la presencia de
Parvovirus Canino; en la Universidad de San Carlos de Guatemala solo se cuenta
con un estudio sobre la presencia de parvovirus canina el cual fue realizado en
Honduras en el mes de junio de 1982.
El presente estudio proporciona información acerca de la presencia de
parvovirus canino en el municipio de Fraijanes del departamento de Guatemala, a
través del ensayo de inmunocromatografía de un solo paso. El diagnostico
temprano de Parvovirus canino permite tratar a los animales enfermos
oportunamente, evita que los caninos actúen como transmisores y se reduce la
contaminación en el medio ambiente; Además, es importante considerar, que
dentro de la tenencia responsable de mascotas, se incluye brindarles una salud
adecuada. (Matamoros, 2000; Acha, 2001)
3
II. OBJETIVOS
2.1 Objetivo General
Generar información sobre la presencia de antígenos de parvovirus canino
en el municipio de Fraijanes, Guatemala.
2.2 Objetivos Específicos
Determinar la presencia de antígenos de parvovirus canino en cachorros de
0 a 4 meses de edad que no hayan sido vacunados, con la prueba de
ensayo inmunocromatográfico de un solo paso, en la localidad del municipio
de Fraijanes, Guatemala.
Determinar la prevalencia de parvovirus canino, de acuerdo a sexo y raza
de los perros que fueron muestreados.
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III. REVISION DE LITERATURA
3.1. Etiología
El Parvovirus canino (CPV-2) afecta principalmente el sistema digestivo de
los caninos, provocando diarrea sanguinolenta, vómitos y deshidratación, en
ocasiones con resultados fatales. La parvovirosis se conoce también como diarrea
hemorrágica canina o gastroenteritis viral hemorrágica.
El agente causal de Parvovirosis canina pertenece al género pavovirus de la
familia Parvovioridae, recibe el nombre de parvovirus tipo 2. El virus tiene una
forma icosahedrica, circular o hexagonal, está constituido por ácido
desoxirribonucleico y el diámetro de las partículas virales es de 20-25 nanómetros
en promedio. Las partículas virales producen cuerpos de inclusión intranucleares
en las células afectadas, que pueden aparecer en 36 horas formando material
contaminante, en especial deposiciones nucleares (Nelson et al. 2008).
Son virus resistentes a los solventes lipidicos, enzimas proteolíticas y al
medio ambiente; son estables en rangos de Ph 3.0 a 9.0 y se multiplican en el
núcleo celular sin producir efecto citopático en cultivos celulares (Etttinger, 2007).
3.1.2 Características antigénicas del parvovirus canino
La multiplicación del parvovirus tiene lugar en el núcleo de las células en
división, los componentes se multiplican en tejido celular sin virus auxiliar y puede
resistir mucho tiempo en las células, antes de que se presente una infección vírica
evidenciable, la partícula viral contiene una hemoaglutinina y es requisito para su
multiplicación que la célula se esté dividiendo, ya que durante este proceso se
5
sintetizan algunas enzimas que son indispensables para su replicación (Bush,
2000).
3.2 Epidemiologia
La aparición casi simultánea de parvovirosis canina en Australia, Europa y
Estados Unidos de Norteamérica, sugiere una fuente común, sin embargo el
origen exacto de la enfermedad no se ha establecido., el Parvovirus canino se
relaciona antigénicamente con el virus de la Panleucopenia Viral Felina. Sin
embargo, la enfermedad no se iniciaría a partir de ellos ya que la líneas celulares
de pavovirus canino son diferentes patógenos. La cepa original del CPV- 2, causa
infección intestinal y sistémica únicamente en perros mientras, que la cepa CPV-
2a, CPV- 2b, CPV- 2c; pueden infectar tanto perros como a gatos, en condiciones
experimentales, como naturalmente (Butendieck, 1986).
El parvovirus canino afecta a perros de cualquier raza, sexo y edad, la
mayoría de los casos ocurre en cachorros de 6 y 20 semanas de vida (Butendieck
E. 2006).
El periodo de incubación del parvovirus tipo 2a y 2b es de cuatro a seis días.
Las razas predisponentes a esta enfermedad son rottweiler, doberman, labrador
retriever negro, doberman pincher y pastor alemán, parecen adquirir la infección
con mayor facilidad. Sin embargo se debe tomar en cuenta el tiempo que dura la
inmunidad materna para producir la neutralización de los anticuerpos que ya
poseen, ya que el sistema inmunitario tarda más en desarrollase y no es por
completo maduro hasta después de los siete meses de edad. Por lo que quienes
requieren vacunación más frecuente. (Gutiérrez, 2010).
El virus reside en prendas de vestir, suelo, utensilios contaminados, por
periodos de cinco meses o más tiempo; es resistente a detergentes,
desinfectantes, pH de 3 a 9. Los parvovirus son estables en el ambiente, soportan
6
una temperatura de 56º grados centígrados, durante más de 60 minutos (Puentes,
2012)
3.3 Patogenia
La principal vía de infección es oral (contacto con heces o secreciones
infectadas). Sin embargo, evidencias recientes muestran que este virus es capaz
de mantener a temperatura ambiente, su capacidad infectante por un periodo
aproximado de cinco meses, por lo tanto, la infección es transmitida por fómites
(Flores, 1987)
El parvovirus canino posee tropismo por células del tejido linfoide, por lo
tanto, los primeros sitios de replicación del virus son el tejido linfoide asociado a la
región bucofaríngea y ganglios linfáticos mesentéricos. Posteriormente se produce
una fase de viremia, afectando principalmente intestino y corazón, lo que explica
los dos cuadros principales de la enfermedad (Entérico y miocárdico) (Hoskins,
2000).
Una vez colonizado el epitelio intestinal, existe destrucción y colapso de éste,
alterando el recambio normal de células y acortando las vellosidades,
(aplanamiento y fusión) cubriéndose luego con epitelio cubico inmaduro, lo que
altera los procesos de digestión y absorción, generando diarrea sanguinolenta.
El cuadro cardiaco ocurre por infección in útero o en cachorros menores a ocho
semanas. Puede o no ser precedido por el cuadro entérico, o aparecer
súbitamente (Hoskins, 2000).
La viremia se produce aproximadamente 12 horas después del momento de
la infección, y la excreción del virus en las heces ocurre desde el tercer día hasta
el octavo día post-infección, donde la diseminación viral comienza a descender
(Hoskins, 2000).
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3.4 Signos
Los signos clínicos asociados al parvovirus canino, pueden variar desde una
infección inaparente hasta una enfermedad mortal aguda. Los signos clínicos,
inician con letárgia, anorexia con o sin pirexia; lo cual progresa en uno a dos días
con vómitos (productivos e improductivos) y diarreas, que a menudo son
hemorrágicas y con moco. Dolor abdominal, deshidratación desde un 7% hasta un
10% (Butendieck E., 2006).
Es poco frecuente que la enfermedad tenga una larga duración, los perros
gravemente afectados mueren en menos de tres días ya que pueden tener una
infección bacteriana secundaria que agrave más la enfermedad. Los animales que
sobreviven a esta, desarrollan una inmunidad de larga duración. Al realizar
estudios hematológicos, es frecuente encontrar en la serie blanca una leucopenia
marcada y neutropenia, también se observa una anemia microcíticahipocrómica, la
cual agrava el cuadro clínico del paciente, siendo la muerte muchas veces
relacionada por la deshidratación del canino (Avalos, 1982).
3.4.1 Existen tres formas de presentación
3.4.1.1 Cuadro sobre-agudo
Se presenta en cachorros de 4 a 12 semanas de edad. Clínicamente se
caracteriza por disnea, gritos y quejidos, vómitos no productivos, postración y
muerte en pocos minutos u horas. En este caso el virus produce el llamado
síndrome de miocarditis ya que el parvovirus canino posee tropismo por células
del tejido linfoide, y los primeros en afectarse son los ganglios de la región
bucofaríngea y los ganglios linfáticos mesentéricos. Posteriormente se producen
una fase de viremia, afectando principalmente intestino y corazón (Hoskins, 2000).
8
Los sobrevivientes presentan alteraciones electrocardiográficas, edema
pulmonar y congestión cardiaca (Nelson, 2008).
3.4.1.2 Cuadro sub-agudo
Caracterizado por una leve diarrea que responde generalmente con facilidad
al tratamiento. En este caso el animal permanece como portador sano de la
enfermedad. Generalmente no hay alza térmica (Nelson, 2008).
3.4.1.3 Cuadro agudo
Se presenta con vómitos a veces severos y explosivos, anorexia,
decaimiento y diarrea. Las heces inicialmente se presentan de color gris o gris
amarillento, y luego puede llegar a contener grandes cantidades de sangre, La
diarrea puede ser pastosa o acuosa. Los vómitos y la diarrea conducen al paciente
a un cuadro de deshidratación rápida, que más grave en cachorros (Craig E.
Greene, 2009).
La temperatura puede alcanzar entre 40° y 41º C. en el caso de animales
jóvenes, mientras en perros viejos la temperatura puede estar normal o levemente
aumentada. El recuento de serie blanca, presenta leucopenia especialmente
durante los primeros 4 a 5 días de la enfermedad. Posteriormente, el examen
hematológico puede indicar leucocitos con linfocitosis, debido a un cuadro de
origen bacteriano. En algunos casos clínicos se han observado vesículas en la
mucosa bucal, cuya ruptura produce ulceraciones. (Flores, C, Reinaldo ,2008).
3.5 Tratamiento
No existen drogas antivirales efectivas, por tanto la terapia es sintomática y
orientada fundamentalmente a restituir fluidos y electrolitos, también se debe de
9
controlar vómito y diarrea, para así poder prevenir infecciones secundarias y así
también lograr minimizar el stress en el paciente y lograr una restitución de los
elementos sanguíneos (Báez, 2012).
3.6 Diagnóstico
Es evidente que las manifestaciones clínicas de la infección por parvovirus,
por ser tan variables, no siempre permiten establecer un diagnostico confiable por
lo general el diagnóstico clínico es de carácter presuntivo y permite al Veterinario
iniciar una terapia de sostén, sin embargo existen otros procesos patológicos que
podrían presentar un cuadro clínico parecido al de la enteritis por parvovirus y que
hay que tener en cuenta el diagnostico diferencial, por eso existen diferentes
pruebas para comprobar que se trata de parvovirus canino el que esté afectando
a la mascota (Canine Vaccine Guidelines, 2006).
3.6.1 Hemoaglutinacion (He) e inhibición de la hemoglobina
El parvovirus canino es capaz de aglutinar a los glóbulos rojos, de manera
que para determinar la presencia de parvovirus en heces se centrifugan
suspensiones de la materia fecal y con el sobrenadante, luego se hacen
diluciones a cada dilución se añaden eritrocitos de cerdo, con este procedimiento
es posible estableces el titulo He aglutinante del virus de la muestra.
Posteriormente se intenta inhibir tal reacción, repitiendo la prueba pero añadiendo
suero anti-parvovirus canino. Los resultados positivos a la inhibición de la reacción
aglutinante indica la presencia de parvovirus en las heces examinadas. Esta
prueba es de utilidad durante la fase activa de eliminación del parvovirus en heces
luego se repite la prueba pero añadiendo suero anti-parvovirus canino. Los
resultados positivos a hemaglutinación e inhibición de hemoglobina indican la
presciencia del parvovirus en las heces examinadas (Canine Vaccine Guidelines,
2006).
10
3.6.2 Neutralización con suero
Esta prueba es una de las técnicas más sensibles que se utilizan en
virología, se basa en la reacción de anticuerpos específicos con un virus. La
suspensión de virus se mezcla con un suero y se incuba a 37 grados centígrados
por una hora, el suero que contiene anticuerpos específicos contra ese virus, evita
la infección.
La inefectividad de la mezcla puede determinarse inoculando animales,
embriones o cultivos celulares. En cultivos se puede determinar la neutralización
por medio de inhibición del efecto citopático en fase liquida o la producción de
placas. Esta prueba ofrece resultados equivalentes a las pruebas de la
hemaglutinación e inhibición de hemoglobina, sin embargo, se requiere una mayor
infraestructura en el área de su realización, puesto que se utilizan cultivos de
tejidos. Por otra parte, es una prueba que necesita varios días por lo que no se
utiliza como técnica de rutina (Canine Vaccine Guidelines, 2006).
3.6.3 Técnicas de anticuerpos fluorescentes
Este procedimiento se utiliza en muchos laboratorios para determinar la
posible presencia de partículas virales en tejidos de animales, o bien para
establecer si existen anticuerpos específicos en el suero de un animal
sospechoso. En este caso se baña la laminilla preparada con tejido infectado con
suero problema después de incubar y lavar la preparación, se tiñe con anticuerpos
fluorescentes específicos contra inmunoglobulina de perro. La persistencia del
conjugado fluorescente es la preparación, indica la presencia de anticuerpos
específicos contra parvovirus en el suero examinado (Canine Vaccine Guidelines,
2006).
11
3.6.4 Aislamiento del parvovirus
El diagnóstico de parvovirosis se puede lograr mediante el aislamiento del
virus, utilizando para ello varias líneas celulares e incluso cultivos primarios de
células de diferentes tejidos ente los que se encuentran los tejidos de riñón y
pulmón. El virus se puede aislar a partir de las heces de los perros infectados,
durante dos semanas siguientes a la infección.
Se ha llegado a demostrar que en la fase crítica de la enfermedad, el título
del virus en heces llega hasta 10Ʌ9 de dosis infectante del cultivo de tejidos y 50%
por gramo de materia fecal. Este resultado es de los más precisos pero el más
costoso y delicado, por lo que tampoco se utiliza rutinariamente (Canine Vaccine
Guidelines, 2006).
3.6.5 Detección de antígeno de parvovirus canino en prueba
inmunocromatografica directa
La inmunocromatografía se basa en la migración de una muestra a través de
una membrana de nitrocelulosa. La muestra es añadida en la zona del conjugado,
el cual está formado por un anticuerpo específico contra uno de los epítopos del
antígeno a detectar y un reactivo de detección. Si la muestra contiene el antígeno
problema, éste se unirá al conjugado formando un complejo inmune y migrará a
través de la membrana de nitrocelulosa. También migrarán el conjugado y la
muestra sin unirse (Canine Vaccine Guidelines, 2006).
La zona de captura está formada por un segundo anticuerpo específico
contra otro epítopos del antígeno. Al llegar la muestra a esta zona, los complejos
formados por la unión del antígeno y conjugado quedarán retenidos y la línea se
coloreará (muestras positivas). En el caso contrario las muestras son negativas.
12
La zona control está formada por un tercer anticuerpo que reconoce al
reactivo de detección. Cuando el resto de muestra alcanza esta zona, el
anticuerpo se unirá al conjugado libre que no ha quedado retenido en la zona de
captura (Canine Vaccine Guidelines, 2006).
Esta línea es un control de que el ensayo ha funcionado bien, porque se
colorea siempre, con muestras positivas y negativas (Canine Vaccine Guidelines,
2006).
3.6.6 Principio de la técnica inmunocromatografica directa
El kit de diagnóstico Parvo-Virus, de la casa farmacéutica Urano
(Uranotest®) es una técnica de inmunocromatografía para la detección cualitativa
de antígeno de parvovirus canino en heces (Canine Vaccine Guidelines, 2006).
3.6.7 Características de la inmunocromatográfica directa
Una de las ventajas de utilizar esta prueba es la detección precoz de virus en
heces, incluso antes de la aparición de la sintomatología. Además, no detecta
antígenos de origen vacunal. No posee reacciones cruzadas con virus de moquillo,
hepatitis infecciosa, parainfluenza y parásitos intestinales (Canine Vaccine
Guidelines, 2006).
El test consta de un pocillo redondeado donde se añade la muestra, una
línea T (línea de test) y una C (línea de control). Una vez aplicada la muestra el
pocillo redondeado comienza la migración por capilaridad a lo largo de la
membrana (Canine Vaccine Guidelines, 2006).
Si el resultado es negativo aparecerá una banda de color purpura en la zona
C; la banda de la zona C aparece siempre ya que se trata de una banda de control
13
que indica que el test de ha realizado correctamente. Si el resultado es positivo
además de la banda C, se formara una segunda banda en la zona de test (Banda
T) (Canine Vaccine Guidelines, 2006).
3.6.8 Especificaciones
Finalidad: Detección simultanea de antígeno Parvovirus y
Coronavirus canino.
Muestra: Heces.
Sensibilidad Parvovirus 100% versus Hemaglutinación.
Especificidad: Parvovirus 98.8% versus Hemaglutinación.
Tiempo de lectura: 5-10 minutos.
Tiempo de realización: 2 minutos.
Presentación: Cajas individuales de 1 test / cajas de 5 test.
No. Registro 1645 RD
3.6.9 Toma de la muestra
Se utilizan las heces del perro, tomadas directamente del ano del paciente,
se puede realizar un raspado suave en las paredes laterales del ano. Todo esto se
debe de realizar con el hisopo que viene incluido en el kit de la prueba
inmunocromatografía directa (prueba Elisa). Las muestras se deben de analizar
inmediatamente después de ser recogidas (Canine Vaccine Guidelines, 2006).
Se mezcla durante 10 segundos y luego se espera un minuto para que se
sedimente. Posteriormente, se toma la muestra del sobrenadante con la pipeta
desechable y se añaden cuatro gotas en el pocillo correspondiente a la prueba de
parvovirus que se identifica como CPV Ag al cabo de 10 minutos se observa el
resultado (Canine Vaccine Guidelines, 2006).
14
3.6.10 Conservación y estabilidad
El kit debe ser conservado a una temperatura de 2°C a 30°C. Bajo estas
condiciones se puede garantizar su estabilidad hasta la fecha de caducación.
No se debe de congelar o someterse a luz solar directa por mucho tiempo.
(Canine Vaccine Guidelines, 2006).
3.6.11 Estudios realizados en Latinoamérica con la prueba
inmunocromatográfica directa
En Chile se realizó un estudio en 41 caninos menores de 6 meses de edad,
que presentaban signos clínicos de gastroenteritis hemorrágica aguda, se detectó
la presencia de parvovirus canino tipo 2 en las heces, a través de una prueba
inmunoenzimática comercial (ELISA). Se estudió también las variaciones
hematológicas y de química sanguínea de los pacientes.
Del total de animales, 41,46% resultó positivo a la presencia de parvovirus
canino, mientras que 58,53% fue negativo, por la prueba de ELISA. Las
variaciones sanguíneas observadas más frecuentemente, tanto en los caninos
ELISA positivos como negativos, fueron anemia, neucopenia, neutropenia,
linfopenia, eosinopenia e hipoproteinemia (López, 1994).
En Uruguay se realizó un estudio que tuvo como objetivo confirmar la
infección en casos agudos con diagnóstico presuntivo de CPV mediante test de
hemoaglutinación. Un total de 26 muestras fecales fueron analizadas. La IC fue
capaz de detectar 15/26 (58%) y la HA detectó 16/26 (61,5%). Las posibles
causas de las diferencias encontradas entre la clínica y el resultado del laboratorio
pueden deberse entre otras cosas a la sensibilidad de los tests utilizados, al
momento de la toma de muestra o al diagnóstico clínico equivocado. En cualquier
15
caso, los resultados de este trabajo advierten sobre las posibles diferencias que se
pueden encontrar entre la clínica y las técnicas de IC y HA, debiéndose ser
cauteloso en la interpretación de resultados obtenidos para esta enfermedad
(Puentes R. 2010).
16
IV. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1 Materiales
4.1.1 Recursos humanos
Se trabajo con 4 veterinarios.
Estudiante tesista.
Asistentes de veterinarios.
4.1.2 Recursos biológicos
Se utilizaron perros de 0 a 4 meses de edad que presentaron signos de
gastroenteritis hemorrágica, que presentaron signos de enterroragia,
hematoquecia, hemofecia (diarreas con sangre).
4.1.3 Materiales de laboratorio
5 Kit de prueba inmunocromatográfica directa.
Algodón.
Hisopo.
Alcohol.
Desinfectante.
Guantes.
4.1.4 Materiales de escritorio
Computadora.
Cuaderno.
Lapicero.
17
4.2 Metodología
4.2.1 Diseño del estudio
Estudio descriptivo de corte transversal.
4.2.2 Procedimiento
Se escogieron cuatro clínicas veterinarias en el municipio de Fraijanes.
El médico veterinario de cada clínica realizó el examen clínico de los
pacientes, previo a su inclusión en el estudio.
Se solicito autorización a los propietarios de los perros que presentaron
los signos de gastroenteritis hemorrágica para realizar la prueba
inmunocromatografica directa.
Los propietarios firmaron la hoja de autorización para poder realizar la
prueba a su mascota.
Se realizó la toma directa de la muestra de heces del ano del paciente
con ayuda de un hisopo.
Se saco el test de su empaque y se coloco en un lugar plano y seco.
El hisopo que contiene la muestra de heces se introdujo en el tubo de
tampón diluyente.
Se mezclo durante 10 segundos y luego se espero un minuto para que
sedimentara la muestra
Se tomó la muestra del sobrenadante con la pipeta desechable y se
añadió 4 gotas en el pocillo correspondiente a la determinación de
parvovirus que se identifica como CPV Ag.
Se esperó que el test empezara a funcionar apreciando la migración de
la muestra moviéndose a través de la ventana de resultados situada en
el centro del test.
Se observó el resultado y se registro en la hoja de recolección de datos.
18
V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos se analizaron mediante estadística descriptiva. De
los 30 cachorros de 0 a 4 meses de edad, que fueron muestreados, 12 fueron
positivos a la prueba de ensayo inmuocromatográfico de un solo paso para
detectar la presencia de antígenos de parvovirus canino, se obtuvo un porcentaje
positivo del 40% (Figura 1).
FIGURA 1.PORCENTAJE DE MUESTRAS POSITIVAS A LA PRUEBA
INMUNOCROMATOGRÁFICA DIRECTA PARA ANTÍGENO DE PARVOVIRUS,
EN CACHORROS DE 0 A 4 MESES DE EDAD CON SIGNOS DE
GASTROENTERITIS HEMORRÁGICA Fuente: Elaboración propia
La prueba utilizada presenta una sensibilidad del 100% y una especificidad
de 98.8%. Sin embargo, se debe tener presente que cualquier prueba que detecta
virus en las heces está limitada por el tiempo en que el virus será eliminado en
ellas. En el caso del parvovirus la excreción del virus en las heces ocurre desde el
tercer día hasta el octavo día post-infección, posterior a este periodo la
diseminación viral comienza a descender y desaparece a los 12 días. Las
muestras negativas (60%) pueden deberse a que estos cachorros ya no
presentaban excreción viral en el momento de la toma de la muestra,
considerándose falsos negativos.
En etapas tardías de la infección, los altos niveles de anticuerpos en el lumen
19
intestinal pueden secuestrar la mayoría de viriones por lo que las pruebas que se
basan en la unión de antígeno-anticuerpo (ej: inmunocromatografía,
hemoaglutinación y ELISA) pueden dar falsos negativos como resultados (Javier
J.D., 2000).
Así mismo, puede ser que los signos de gastroenteritis hemorrágica en los
casos negativos se debieron a la presencia de otros agentes etiológicos que
producen signos similares, como otros virus, bacterias, parásitos o protozoos
intestinales (Javier J.D, 2000).
En cuanto al sexo, los pacientes que presentaron signos de gastroenteritis
hemorrágica a los que se les realizó la prueba, se obtuvo que el 66.67% fueron
machos, mientras que el 33.33% fueron hembras (figura 2).
FIGURA 2. PORCENTAJE DE MACHOS Y HEMBRAS DE 0 A 4 MESES DE
EDAD POSITIVOS A PARVOVIRUS CANINO CON SIGNOS DE
GASTROENTERITIS HEMORRÁGICA Fuente: Elaboración propia
Un 13.33% de las pacientes hembras fueron positivas y 23.33% negativas.
Mientras que en el caso de los machos un 26.66% fue positivo y el 36.66%
negativo (Figura 3).
20
FIGURA 3. PORCENTAJE DE HEMBRAS Y MACHOS POSITIVOS Y
NEGATIVOS A LA PRUEBA INMUNOCROMATOGRAFICA DIRECTA PARA
ANTÍGENO DE PARVOVIRUS Fuente: Elaboración propia
En los pacientes que se incluyeron en el estudio se encontró una gran
variedad de razas. Entre las razas que presentaron una prueba de
inmunocromatografía positiva, las más predominantes fueron el pastor ovejero y
rottweiler; ambas con un 16.7%. El resto de razas (doberman pincher, golden
retriever, husky siberiano, pastor alemán, pastor belga, dachshund, schnauzer y
SRD) presentaron una prevalencia de 8.33% cada una (Figura 4).
21
FIGURA 4. PREVALENCIA DE PARVOVIRUS CANINO POR RAZA, EN
CACHORROS DE 0 A 4 MESES DE EDAD CON SIGNOS DE
GASTROENTERITIS HEMORRÁGICA Fuente: Elaboración propia
22
En la literatura se habla que los perros con manto negro son más propensos
a padecer parvovirus canino. Se cree que esto se debe a que el sistema
inmunitario tarda más en desarrollarse en ellos y está completamente desarrollado
al cabo de los siete meses de edad (Gutiérrez, 2010).
En este estudio las razas de manto negro en las que se obtuvieron pruebas
de inmunocromatografía positivas fueron rottweiler, doberman pincher, pastor
alemán y dachshund (Gutiérrez, 2010).
23
VI. CONCLUSIONES
En el 40% de los cachorros de 0 a 4 meses de edad del municipio de
Fraijanes, que no fueron vacunados, se encontró la presencia de antígenos
de parvovirus, mediante el uso de la prueba de inmunocromatografía directa.
La prevalencia de parvovirus canino según el sexo de los pacientes
atendidos fue de 13.33 % hembras y 26.67% de machos.
La prevalencia de parvovirus canino fue 16.67% en los cachorros de razas
rottweiler y pastor ovejero. Fue de un 8.33% en los cachorros de las razas
doberman pincher, golden retriever, husky siberiano, pastor alemán, pastor
belga, dachshund, schnauzer y SRD.
24
VII. RECOMENDACIONES
Generar estudios sobre la presencia de parvovirus canino, no solo en el
municipio de Fraijanes, sino también en otros municipios de la ciudad de
Guatemala.
Realizar estudios comparativos de la prevalencia de parvovirus canino en
razas de manto negro versus otras razas.
Realizar estudios para evaluar costos del tratamiento de Parvovirus Canino
sin prueba inmunocromatográfica directa, versus el costo del tratamiento al
realizar el diagnóstico a través de la prueba inmunocromatográfica en un solo
paso , considerando que es una prueba de diagnóstico rápido, precisa y con
ello se puede instaurar un tratamiento oportuno y adecuado con el paciente.
.
25
VIII. RESUMEN
El parvovirus canino, se presentó por primera vez en los Estado Unidos de
Norteamérica en 1977 y actualmente se encuentra diseminado en todo el mundo.
Este es uno de los principales agentes virales que afectan a los caninos sin
importar la edad, siendo los cachorros y los gerontes los que comúnmente se
infectan, la trasmisión ocurre de 8 a 12 días post infección; tras un corto periodo
de incubación de 4-7 días y en menos de 48 horas los caninos presentan
repentinamente vómitos, diarrea sanguinolenta, anorexia, fiebre y depresión. Los
pacientes gravemente afectados mueren en un periodo corto de tiempo.
El presente estudio proporcionará información acerca de la presencia de
parvovirus canino en el municipio de Fraijanes a través del ensayo
inmunocromatográfica de un solo paso y la determinación de la prevalencia de
antígenos de parvovirus canino en cachorros de 0 a 4 meses de edad que no
hayan sido vacunados, con la prueba de ensayo inmunocromatográfico de un solo
paso, en la localidad del municipio de Fraijanes, Guatemala.
Esto permitirá tratar a los animales enfermos, evitar que actúen como
transmisores, reducir el riesgo que otros la padezcan y reducir la contaminación al
medio ambiente.
26
SUMMARY
The canine parvovirus, first appeared in the United States of America in 1977
and is currently scattered around the world. This is one of the main viral agents
that affect canines regardless of age, with puppies and geronetes being commonly
infected, transmission occurs from 8 to 12 days post infection; after a short
incubation period of 4-7 days and in less than 48 hours the canines suddenly
present with vomiting, bloody diarrhea, anorexia, fever and depression. Severely
affected patients die in a short period of time.
The present study will provide information about the presence of canine
parvovirus in the municipality of Fraijanes through the single-step
immunochromatographic assay and the determination of the prevalence of canine
parvovirus antigens in puppies from 0 to 4 months of age that have not been
vaccinated with the single-step immunochromatographic test in the town of
Fraijanes, Guatemala.
This will make it possible to treat sick animals, to prevent them from acting as
transmitters, to reduce the risk that others may suffer and to reduce pollution to the
environment.
27
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Veterinaria, ISSN 0376-4362, Vol. 48, Nº. 185-188, 2012, págs. 5-10
30
X. ANEXOS
31
ANEXO 1. RESULTADOS OBTENIDOS DE LA PRUEBA
INMUNOCROMATOGRÁFICA DIRECTA PARA ANTÍGENOS DE PARVOVIRUS
CANINO; SEGÚN RAZA, EDAD Y SEXO DE LOS PACIENTES
Muestra
Numero Edad Sexo Raza
Prueba
Inmunocromatográfica
Directa
Positivo a la
Prueba
Negativo a la
prueba 1 3 meses Hembra PASTOR ALEMAN
X
2 3 mese Macho PASTOR ALEMAN
X
3 3 meses Macho PASTOR ALEMAN
X
4
2 meses 6
días Macho SIN RAZA DEFINIDA X
5 2 meses y 8
días Hembra Schnauzer X
6 25 días Macho ROTTWEILER X
7
3 meses 17
días Macho PUG
X
8 3 meses 8
días Macho SHITZU
X
9 2 meses 14
días Hembra PASTOR OVEJERO X
10 2 meses 14
días Hembra PASTOR OVEJERO X
11 3 meses 22
días Hembra SIN RAZA DEFINIDA
X
12 1 mes 19 días Macho PASTOR ALEMAN X
13
2 meses 11
días Macho DACHSHUND X
14 3 meses 15
días Hembra PUG
X
15 2 meses Macho HUSKY SIBERIANO X
16
2 meses 23
días Macho SIN RAZA DEFINIDA
X
17 3 meses 12
días Macho PASTOR ALEMAN
X
Fuente: Elaboración propia
32
Fuente: Elaboración propia
.
18 25 días Macho BOXER
X
19 4 meses Macho BORDER COLI
X
20 4 meses Macho SIN RAZA DEFINIDA
X
21
2 meses 17
días Hembra ROTTWEILER
X
22 3 meses Macho DOBERMAN PINCHER X
23 28 días Macho YORK SHIRE TERRIER
X
24
2 meses 12
días Hembra
GIGANTE DE LOS
PIRINEOS X
25 1 mes 9 días Hembra POINTER INGLES
X
26
3 meses 24
días
Hembra
GOLDEN RETRIVER
X
27 2 meses 27
días Macho SIN RAZA DEFINIDA
X
28 1 mes 4 días Hembra DOBERMAN
X
29
2 meses 15
días Macho PASTOR BELGA X
30 1 mes 28 días Macho ROTTWEILLER X
33
CUADRO 2. PORCENTAJES DE PREVALENCIA DE PACIENTES ATENDIDOS
CON PARVOVIRUS CANINO
Fuente: Elaboración propia
Raza
Porcentaje de
individuos/Numero
BORDER COLI 0.0%
BOXER 0.0%
DOBERMAN 0.0%
DOBERMAN PINCHER 8.3% (1)
GIGANTE DE LOS PIRINEOS 0.0%
GOLDEN RETRIVER 8.3% (1)
HUSKY SIBERIANO 8.3% (1)
PASTOR ALEMAN 8.3% (1)
PASTOR BELGA 8.3% (1)
PASTOR OVEJERO 16.6%(2)
POINTER INGLES 0.0%
PUG 0.0%
ROTTWEILER 16.6%(2)
DACHSHUND 8.3% (1)
SCHNAUZER 8.3% (1)
SHITZU 0.0%
SIN RAZA DEFINIDA 8.3% (1)
YORK SHIRE TERRIER 0.0%
34
UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA
DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE ANTÍGENOS DE
PARVOVIRUS CANINO, EN CACHORROS NO VACUNADOS DE 0
A 4 MESES DE EDAD, EN EL MUNICIPIO DE FRAIJANES
GUATEMALA
F._____________________________ JOSÉ FERNANDO RÍOS FERNÁNDEZ
F. ____________________________ F.______________________________
M.V. María Andrea Carbonell Piloña M.V. Alejandro José Hun Martínez
Hernández
ASESOR PRINCIPAL ASESOR
f. __________________________________
M.V. Rolando Gudiel Jovel
EVALUADOR
IMPRÍMASE
f._______________________________
M.A. Gustavo Enrique Taracena Gil
DECANO
