VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO POR CROMATOGRAFÍA …

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

“VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO POR

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN

(HPLC) PARA EL ENSAYO DE DISOLUCIÓN DE

DEXAMETASONA 0,5 mg TABLETAS”

TESIS II

PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO

DE:

BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA

AUTOR : PONCE MOSTACERO, VICTOR BERNARDO

ASESOR : Mg Q.F. RENGIFO PENADILLOS, ROGER ANTONIO

Trujillo – Perú

2017

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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DEDICATORIA

A Dios.

Por haberme permitido llegar hasta este punto y haberme dado salud para lograr mis

objetivos, además de su infinita bondad y amor.

A mis padres

Por ser el pilar fundamental en todo lo que soy, en toda mi educación, tanto académica,

como de la vida, por su incondicional apoyo perfectamente mantenido a través del tiempo.

A mis hermanos

Por haberme apoyado en todo momento, por sus consejos, sus valores, por a motivación

constante que me ha permitido ser una persona de bien, pero más que nada, por su amor.

A mi maestro

QF. Roger Rengifo Penadillos por su gran apoyo y motivación, por su tiempo compartido,

por impulsar el desarrollo de mi formación profesional.

A mis amigos

En especial a mi amigo Juan Ernesto Valdiviezo Campos, por su apoyo incondicional,

gracias por estar presente cuando lo he necesitado.



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PRESENTACIÓN

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:

En cumplimiento de las normas dispuestas en el reglamento interno de la Facultad de

Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos a su

consideración la Tesis II intitulado:

“VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE

ALTA RESOLUCIÓN (HPLC) PARA EL ENSAYO DE DISOLUCIÓN DE

DEXAMETASONA 0,5 mg TABLETAS”

Con el Propósito de optar el Grado Académico de Bachiller en Farmacia y Bioquímica.

Dejamos a vuestra consideración señores miembros del jurado la calificación del siguiente

trabajo.

Trujillo, Febrero del 2017

….…………………………………….

Victor Bernardo Ponce Mostacero



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JURADO CALIFICADOR

…………………………………….

Mc

Msc. QF. María V. González Blas

PRESIDENTE

…………………………………….

Dr. QF. Iván M. Quispe Díaz

MIEMBRO

…………………………………….

Mg. QF. Roger A. Rengifo Penadillos

MIEMBRO



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ÍNDICE

- DEDICATORIA……………………………………………….…i

- PRESENTACION………………………………………….….…ii

- JURADO CALIFICADOR……-………………………………..iii

- RESUMEN……………………………………………………….v

- ABSTRACT…………………………………………..................vi

I. INTRODUCCIÓN…………………………………...............1

o OBJETIVOS……………………………………………...5

II. MATERIAL Y MÉTODO……………………………….…..7

III. RESULTADOS…………………………………………….24

o ESPECIFICIDAD…………………………….…………24

o LINEALIDAD…………………………………………..25

o PRECISIÓN……………………………………………..28

REPETIBILIDAD……………………………….28

PRECISIÓN INTERMEDIA…………................30

IV. DISCUSIÓN………………………………………………..35

V. CONCLUSIÓN……………………………………………..39

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………...40

VII. ANEXOS……………………………………………………42



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RESUMEN

La validación de métodos es un requisito importante en la práctica de análisis

químicos, la cual garantiza la calidad del medicamento. En este trabajo se realizó

la validación de un método analítico por Cromatografía Líquida de Alta

Resolución (HPLC) para el ensayo de disolución de dexametasona 0,5 mg

tabletas, La especificidad, que determina la capacidad del método de medir

Dexametasona Acetato, sin interferencias de partes de los excipientes, da como

resultado ninguna respuesta del equipo por parte de los excipiente, por lo tanto el

método es específico. La linealidad; que mide la capacidad del método analítico

para producir resultados que son proporcionales a la concentración del analito, lo

cual queda demostrado en la validación al obtener un coeficiente de correlación

r= 0,9995, siendo el valor mínimo permisibles de 0,9900. La precisión del

método analítico es el grado de concordancia o de dispersión de los resultados

del ensayo. Los valores de CVf(%)= 2,852%, siendo este valor menor que el

límite especificado(CVf(%)Menor o igual de 5 %), siendo el método preciso. La

precisión intermedia la cual expresa variaciones dentro de un laboratorio, en el

caso de estudio fue variación de analista y de equipos HPLC, para los grupos de

repetibilidades de Precisión y Precisión Intermedia diferente analista dando un p-

value de 0,063 (> 0,05) con el test estadístico ANOVA , lo cual demuestra los

grupos son estadísticamente iguales y para los diferentes equipos HPLC

aplicando mismo test para los grupos de repetibilidades de Precisión y

Precisiones Intermedias diferente equipo dando un p-value de 0,071 (> 0,05) en

la prueba estadística, demostrando así que el método es preciso. El método de

Dexametasona 0,5 mg tabletas para el ensayo de disolución cumple los criterios

de aceptación, establecidos por la asociación española de farmacéuticos de la

industria (AEFI).

Palabras claves: validación, Dexametasona.



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ABSTRACT

The validation of methods is an important requirement in the practice of

chemical analysis, which guarantees the quality of the drug. In this work we

performed the validation of an analytical method by High Performance Liquid

Chromatography (HPLC) for the dissolution test of dexamethasone 0.5 mg

tablets, specificity, which determines the ability of the method to measure

Dexamethasone Acetate, without interference of Parts of the excipients, results in

no response of the equipment by the excipient, therefore the method is specific.

Linearity; Which measures the ability of the analytical method to produce results

that are proportional to the concentration of the analyte, which is demonstrated in

the validation when obtaining a correlation coefficient r = 0.9999, with the

minimum value being permissible of 0.9900. The accuracy of the analytical

method is the degree of agreement or dispersion of the test results. The values of

CVf (%) = 2.852%, this value being lower than the specified limit (CVf (%) Less

than or equal to 5%), being the precise method. Intermediate precision which

expresses variations within a laboratory, in the case of study was variation of

analyst and HPLC equipment, for the groups of repeatability of Precision and

Intermediate Precision different analyst giving a p-value of 0.063 (> 0.05 ) With

the ANOVA statistical test, which shows the groups are statistically the same and

for the different HPLC equipment applying the same test for the groups of

repeatability of Accuracy and Intermediate Accuracy different equipment giving

a p-value of 0.071 (> 0.05) in The statistical test, thus demonstrating that the

method is accurate. The Dexamethasone method 0.5 mg tablets for the

dissolution test meets the acceptance criteria, established by the Spanish

Association of Pharmaceuticals Industry (AEFI).

Key words: validation, Dexamethasone



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I. INTRODUCCIÓN

La validación de métodos es un requisito importante en la práctica de análisis

químicos, la cual garantiza la calidad del medicamento, puesto que le confiere

fiabilidad a los resultados obtenidos en el análisis, asegurando así, que el

medicamento cumpla los parámetros de calidad establecidos, que puede ser de

carácter prospectivo o retrospectivo. Entre las definiciones que se le confiere a la

validación tenemos: Según la Real Academia Española de la lengua; Validar

es, dar fuerza o firmeza a algo, hacerlo válido. La Organización Internacional

para la Estandarización (ISO) 9000; La validación es la confirmación, a través de

la aportación de evidencia objetiva, de que se han cumplido los requisitos para

un uso o aplicación específico previsto. ISO/IEC 17025; La validación es la

confirmación, a través del examen y el aporte de evidencias objetivas, de que se

cumplen los requisitos particulares para un uso específico previsto. Vocabulario

Internacional de Metrología (VIM); La validación es una verificación, donde

los requisitos especificados son adecuados para un uso previsto 1,2.

La validación de un procedimiento analítico es el proceso que establece,

mediante estudios en laboratorio, que las características de desempeño del

procedimiento cumplen los requisitos para las aplicaciones analíticas previstas.

Las características de desempeño habituales que deben considerarse en la

validación de los tipos de procedimientos descritos en este documento 2,3.

Exactitud: Es la proximidad entre los resultados de la prueba obtenidos mediante

ese procedimiento y el valor verdadero. La exactitud de un procedimiento

analítico debe establecerse en todo su intervalo 4.

Precisión: Es el grado de concordancia entre los resultados de las pruebas

individuales cuando se aplica el procedimiento repetidamente a múltiples

muestreos de una muestra homogénea. La precisión de un procedimiento

analítico habitualmente se expresa como la desviación estándar o la desviación

estándar relativa (coeficiente de variación) de una serie de mediciones entre ellas

tenemos a la Precisión Intermedia; la cual expresa variaciones dentro de un

laboratorio: Diferentes días, diferentes analistas, diferentes equipos, entre otros y

la Repetibilidad; que es la cercanía de la concordancia entre los resultados de



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mediciones sucesivas de las misma medida y bajo las mismas condiciones de

medición 2,4.

Especificidad: Los documentos de la Conferencia Internacional sobre

armonización de requisitos técnicos para el registro de productos farmacéuticos

para uso humano (ICH) definen especificidad como la capacidad de evaluar

inequívoca el analito en presencia de aquellos componentes cuya presencia

resulta previsible, tales como impurezas, productos de degradación y

componente de la matriz 4.

Límite de Detección: Es una característica de las pruebas de límite. Es la

cantidad mínima de analito que puede de detectarse en una muestra, aunque no

necesariamente cuantificarse, en las condiciones experimentales indicadas. Las

pruebas de límite simplemente comprueban que la cantidad de analito se

encuentra por encima o por debajo de un nivel determinado, se expresa

habitualmente como concentración de analito en la muestra 4.

Límite de Cuantificación: Es una característica de las valoraciones cuantitativas

de compuesto que se encuentren en baja concentración en la matriz de una

muestra, tales como: impurezas en fármacos a granel y productos de degradación

en productos farmacéuticos terminados. Es la mínima cantidad de analito en una

muestra que se puede determinar con precisión y exactitud aceptables en las

condiciones experimentales indicadas, se expresa habitualmente como

concentración de analito 4.

Linealidad: Es su capacidad para obtener resultados de prueba que sean

proporcionales ya sea directamente, o por medio de una transformación

matemática bien definida, a la concentración de analito en muestras dentro de un

intervalo dado, las transformaciones posibles pueden incluir el logaritmo, la raíz

cuadrada, o el recíproco, aunque otras transformaciones son aceptables 4.

Intervalo: Es la amplitud entre las concentraciones inferior y superior del analito

en la cual se puede determinar al analito con un nivel adecuado de precisión,

exactitud y linealidad utilizando el procedimiento según se describe por escrito 4.

Robustez: Es una medida de su capacidad para no ser afectado por variaciones

pequeñas, aunque deliberadas, en los parámetros del procedimiento indicados en



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la documentación, y provee una indicación de sus aptitud durante condiciones

normales de uso, puede determinarse durante la etapa de desarrollo del

procedimiento analítico 4.

Los ensayos analíticos se clasifican según la farmacopea de los estados unidos (

USP) en 2,4:

Categoría I: Procedimientos analíticos para la cuantificación de los componentes

principales de fármacos a granel o ingredientes activos (incluyendo

conservantes) en productos farmacéuticos terminados.

Categoría II: Procedimientos analíticos para la determinación de impurezas en

fármacos a granel o productos de degradación en productos farmacéuticos

terminados, incluyen análisis cuantitativos y pruebas de límite.

Categoría III: Procedimiento analíticos para la determinación de las

características de desempeño (p.ej. disolución, liberación de fármacos, etc.)

Categoría IV: Pruebas de identificación.

Entre la categoría III tenemos al ensayo de disolución el cual constituye quizás el

método más importante en el desarrollo de una forma sólida oral. La cual

consiste en dispersar una sustancia en el seno de un líquido hasta nivel molecular

o iónico, o en términos más simples, es el proceso mediante el cual un sólido se

disuelve en un solvente y forma una solución 5.

Es empleado desde el comienzo del desarrollo de la formulación y utilizado en

fases posteriores a este. Permite el estudio de los mecanismos de liberación del

principio activo en las formulaciones de liberación controlada y la obtención de

un perfil de disolución predeterminado y reproducible. Es también utilizado para

evaluar los procesos de fabricación e identificación de las variables críticas de

este, permite el estudio de la calidad intralotes e interlotes, el estudio de

estabilidad del preparado farmacéutico y en algunos casos predice la

biodisponibilidad y bioequivalencia de productos sólidos orales 5,6.

La cual se realiza bajo condiciones controladas y medidas de temperatura,

velocidad de agitación, método de agitación, tiempo de disolución, volumen y

tipo de medio de disolución. Un aumento en la temperatura favorece la

solubilidad y la velocidad de disolución. La temperatura va a ser de 37 °C para



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todos los métodos de disolución sea cual sea la droga que contenga la forma

farmacéutica, esto debido a la temperatura corporal ya que en la disolución in

vitro se trata hasta donde sea posible de dar condiciones similares a las del

estómago humano, el cual será el destino final del medicamento (disolución “in

vivo”). La velocidad de agitación y el modo de agitar varían la disolución. La

velocidad de agitación puede variar entre uno y otro medicamento, siendo las

más comunes 50, 75 y 100 revoluciones por minuto (rpm), la cual es

proporcionada y controlada por el equipo de disolución (disolutor). El método de

agitación al igual que cada una de las condiciones del método se encuentran en la

monografía del medicamento (en la farmacopea), dicho método puede ser: el

aparato 1 (canastas rotatorias) o el aparato 2 (paletas rotatorias). El tiempo de

disolución comúnmente son 30, 45 o 60 minutos para tabletas (o cápsulas) de

liberación inmediata y hasta de 24 horas para los de liberación prolongada. El

volumen de medio de disolución generalmente es de 900 mililitros por cubeta

pero en algunos casos se utilizan 500 y 1000 mililitros por cubeta 7,8.

Uno de los métodos para la cuantificación de muestras obtenidas de la disolución

es la Cromatografía Líquida de Alta Performance (HPLC), según IUPAC, “La

Cromatografía es un método, en la cual los componentes se distribuyen en dos

fases, una de las cuales estacionaria, mientras la otra movil. Entre los principios

activos cuantificados por el método de HPLC se encuentra la dexametasona, el

cual es un glucocorticoide semisintético que se absorbe rápidamente después de

su administración oral. Su mecanismo de acción antiinflamatorio (esteroideo) se

da al disminuir o prevenir las respuestas del tejido a los procesos inflamatorios,

reduciendo así la manifestación de los síntomas de la inflamación sin tratar la

causa subyacente. Inhibe la acumulación de las células inflamatorias, incluyendo

los macrófagos y los leucocitos, en las zonas de inflamación 9.

También inhiben la fagocitosis, la liberación de enzimas lisosomales y la síntesis

y/o liberación de diversos mediadores químicos de la inflamación. Aunque no se

conoce por completo el mecanismo exacto, las acciones que pueden contribuir

significativamente a estos efectos incluyen el bloqueo de la acción del factor

inhibidor de los macrófagos (MIF), provocando la inhibición de la localización



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macrófaga. También incluyen la reducción de la dilatación y permeabilidad de

los capilares inflamados y la reducción de la adherencia de los leucocitos al

endotelio capilar, provocando la inhibición tanto de la migración de leucocitos

como de la formación de edema. Por último también aumentan la síntesis de

lipomodulina (macrocortina), inhibidor de la liberación de ácido araquidónico a

partir de los fosfolípidos de membrana que es mediada por la fosfolipasa A2, con

la consiguiente inhibición de la síntesis de mediadores de la inflamación

derivados de dicho ácido (prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos). Las

acciones inmunosupresoras también pueden contribuir significativamente al

efecto antiinflamatorio 9,10.

Esta investigación es necesaria debido a que la validación de un método analítico

contribuye a garantizar la calidad del medicamento, así mismo es necesaria

porque proporciona un alto grado de confianza, en el método analítico y en la

calidad de los resultados, además de que permite un conocimiento profundo del

método, así como de sus características de funcionamiento.

PROBLEMA:

¿Cumplen los parámetros de validación del método de cromatografía líquida de

alta resolución (HPLC) para el ensayo de disolución de dexametasona 0,5 mg

tabletas con los criterios de aceptación, establecidos por la asociación española

de farmacéuticos de la industria (AEFI)?

HIPÓTESIS:

Implícita

OBJETIVOS:

- Objetivo general:

- Validar el método por cromatografía líquida de alta resolución

(HPLC) para el ensayo de disolución de dexametasona 0,5 mg

tabletas”.



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- Objetivo específicos:

- Determinar los parámetros de validación: Linealidad,

Precisión, Especificidad, del método por cromatografía líquida

de alta resolución (HPLC) para el ensayo de disolución de

dexametasona 0,5 mg tabletas.

- Evaluar los parámetros de validación mencionados de acuerdo a los

criterios de aceptación, establecidos por la asociación española de

farmacéuticos de la industria (AEFI).



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II. MATERIAL Y MÉTODO

2.1.MATERIAL

2.1.1. MATERIAL DE ESTUDIO

Dexametasona 0,5 mg tabletas

- Presentación: Caja por 100 Tabletas

- Lote: P-1042066

- Cantidad: 01 Caja

Placebo: Corresponden a los excipientes utilizados en la

manufactura del producto Dexametasona 0,5 mg

tabletas, con materias primas aprobadas.

La preparación del placebo fue elaborado por el

responsable del Área de Sólidos - Planta I

2.1.2. ESTÁNDAR SECUNDARIO:

-Nombre: DEXAMETASONA ACETATO

-Proveedor: ANUH PHARMA LTD

-Tipo: Estándar Secundario Tipo A

-N° Análisis: S-57/15

-Potencia: 98,275 % t/c

-Fecha de expira: 03-2017

2.1.3. MATERIALES DE LABORATORIO:

- Material de vidrio de uso común en el laboratorio

- Viales para HPLC

- Tapas y láminas para viales

- Portafiltros de plástico para viales



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- Filtros de nylon de 0,2 um de porosidad

- Jeringas de plástico: 5mL, 10mL, 20mL

2.1.4. SOLVENTES Y REACTIVOS:

- Agua Purificada (Norma USP)

- Acetonitrilo (Grado HPLC)

- Lauril sulfato de sodio (Grado reactivo)

- Metanol (Grado HPLC)

2.1.5. PRODUCTOS DE LIMPIEZA

- Detergente

- Alcohol etílico 96°

2.1.6. EQUIPOS

2.1.6.1.EQUIPOS DE OFICINA

- Calculadora científica

- Computadora

- Impresora

2.1.6.2.EQUIPOS DE LABORATORIO

CÓDIGO EQUIPO OBSERVACIONES

CC-CL-101 CROMATOGRAFO

LÍQUIDO LACHROM

ELITE DAD

MÓDULOS:

Bomba: L-2130

Inyector automático: L-2200

Horno: L-2350

Detector DAD: L-2455

Detector Conductividad: L-2470



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ID-HP-01 HPLC AGILENT 1100

MODULOS

Bandeja: N/A

Desgasificador de vacío: G1379A

Bomba cuaternaria: G1310A

Automuestreador Líquido:

G1313A

Compart. Columna

Termostatizado: G1316A

Detector de Arreglo de Diodos:

G1315B


LÍQUIDO LACHROM

MERCK HITACHI

DAD

MÓDULOS

Bomba:L-7100

Inyector automático:L-7200

Horno: L-7350

Detector DAD: L7455


LÍQUIDO LACHROM

MERCK HITACHI UV

MÓDULOS

Bomba:L-7100

Inyector automático:L-7200

Horno: L-7350

Detector UV: L-7400

CC-UC-103 CROMATOGRAFO

LÍQUIDO LACHROM

ULTRA HITACHI

MÓDULOS

Autosampler: L:2200U

Pump A: L-2160U

Pump B: L-2160U

Horno: L-2300

Detector UV-VIS: L-2420U

CC-CL-147 CROMATÓGRAFO

LÍQUIDO ULTIMATE

3000 DIONEX

MÓDULOS

Pump: LPG-3400SD

Autosampler: WPS-3000TSL



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Column compartment: TCC-3000

SD

UV Detector: VWD-3100

EC Detector: ECD 3000 RS

CC-CL-55 CROMATÓGRAFO

LÍQUIDO LACHROM

ELITE UV

MÓDULOS

Bomba: L-2130

Inyector automático: L-2200

Horno : L-2300

Detector UV: L-2400

Detector IR: L-2490

CC-DI-141 DISOLUTOR

ELECTROLAB

Modelo: DISOLUTION TESTER

Serie: 1304158

CC-BL-58

BALANZA

ANALITICA OHAUS

ADVENTURER

Modelo: AR2140

Serie: K171 1227140153 P

Alcance: 210 g

CC-BL-70

BALANZA

ANALITICA OHAUS

DISCOVERY

Modelo: DV215CD

Serie: 1129322623

Alcance: 81 g y 210 g

Tipo: electrónica

CC-CE-112 CENTRIFUGA

HETTICH

Modelo: ROTOFIX 32A

Serie: 0013068

Fecha Calibración: 22-10-15

CC-BU-66 EQUIPO

ULTRASONIDO Modelo: 5510E-DTH



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BRANSON 5510 Serie: ENC 100733933G

C-122/15

COLUMNA

CROMATOGRAFI

CA

Marca: Merck

Dimensiones: 125 mm x 4 mm

Porosidad: 5 um

Tipo: LiCrospher 100 RP-

18endcapped

Lote: F1839333

Serie: 425452

2.2. MÉTODO ANALÍTICO A VALIDAR:

2.2.1. DISOLUCIÓN DE DEXAMETASONA

Método : Cromatografía Líquida (HPLC)

Referencia : Técnica Propia

Especificación: No menos de 70% (Q) en 45 minutos.

Criterios de aceptación según USP Vigente Técnica General

<711>

CONDICIONES DE DISOLUCIÓN

Medio de disolución : Sodio Lauril Sulfato 0,5 % (w/v) en agua

Volumen : 500 mL

Aparato 2 (paletas) : 100 rpm

Tiempo : 45 minutos

SISTEMA CROMATOGRÁFICO

Equipos:

- Cromatógrafo Líquido LaChrom Merck Hitachi UV-VIS

- Cromatógrafo Líquido LaChrom Merck Hitachi DAD

- Cromatógrafo Líquido LaChrom Elite UV-VIS



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- Cromatógrafo Líquido LaChrom Elite DAD

- Cromatografo Líquido Thermo Ultimate 3000 DIONEX

- Cromatografo Líquido LaChrom Ultra UV-VIS

Columna Cromatográfica: L1 (5 m); 125 mm x 4,0 mm

CONDICIONES CROMATOGRÁFICAS

Longitud de Onda : 254 nm

Flujo : 1 mL/min

Volumen de inyección: 100 L

DSRiny : No mayor de 2,0%

REACTIVOS

Fase Móvil: Preparar una mezcla de agua: acetonitrilo

(550:450). Colocar al ultrasonido por 5 minutos. Filtrar por

membrana de nylon de 0,2 m de porosidad, desgasificar en

vacío por 3 minutos.

PROCEDIMIENTO

Preparación del Estándar: Pesar una cantidad equivalente

22,15 mg de Dexametasona acetato (equivalente a 20 mg de

Dexametasona) estándar de referencia tal cual, transferirlo a

una fiola de 200 mL. Agregar aproximadamente 100 mL de

metanol, sonicar por 5 minutos, llevar a volumen con medio

de disolución y mezclar. Transferir 1,0 mL de la solución

anterior a una fiola de 100 mL, completar a volumen con

medio de disolución y mezclar. Filtrar por membrana de

nylon de 0,2 µm de porosidad, descartando los primeros 5

mililitros. (Concentración aproximada: 0,001mg/mL).

Preparación de la Muestra: Transcurrido el tiempo de

disolución, de cada vaso de disolución muestrear 25 mL

(utilizando una jeringa de 25 mL de capacidad). Filtrar, sin



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realizar diluciones por membrana de nylon de 0,2 µm de

porosidad, descartando los primeros 5 mililitros.

(Concentración aproximada: 0,001mg/mL).

CÁLCULOS

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×

𝑃𝑜𝑡. %𝑡/𝑐

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

Donde:

X : Porcentaje de Dexametasona disuelto

A mp : Lectura de Área de la muestra problema

A St : Lectura de Área del estándar

Wst : Peso del estándar en mg

Pot.%t/c : Potencia química del estándar en porcentaje

tal cual.

392,47/434,51: Factor de conversión de Dexametasona

acetato a Dexametasona.



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PARÁMETROS A EVALUAR 2

Parámetros de Desempeño

Analítico

Categoría

I

Categoría II

Categoría

III

Categoría

IV Análisis

Cuantitativos

Pruebas

de

Límite

Exactitud SI SI * SI** NO

Precisión

Repetibilidad SI SI NO SI NO

Precisión

Intermedia SI# SI# NO SI# NO

Especificidad SI SI SI SI** SI

Límite de Detección NO NO SI * NO

Límite de Cuantificación NO SI NO * NO

Linealidad SI SI NO SI** NO

Intervalo SI SI * * NO

* Puede requerirse, dependiendo de la naturaleza del método.

** Puede no ser necesaria en algunos casos. # En casos donde la reproducibilidad ha sido realizada, la Precisión Intermedia no es necesaria.

Los parámetros a evaluar según la categoría (III) (Disolución) fueron los

siguientes:

Linealidad, Precisión (Precisión Intermedia y Repitibilidad) y

Especificidad:

ESPECIFICIDAD:

- El método debe ser específico para diferenciar Dexametasona

de sus demás excipientes.

LINEALIDAD:

- Calculo de la recta de regresión.

- Representación gráfica de la recta de regresión.



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- Coeficiente de correlación R (≥0,99)

- Test estadístico de la pendiente

- Test estadístico del intercepto

- Test estadístico del coeficiente de correlación

- Determinación de coeficiente de variación del Factor Respuesta

F (≤ 5%)

PRECISIÓN:

- Repetibilidad

o Coeficiente de variación del análisis (< 3 %)

o Prueba de Normalidad Anderson Darling ( p value >

0,05)

- Precisión Intermedia-Diferente Analista

o Prueba de Normalidad Anderson Darling ( p value >

0,05)

o Prueba de ANOVA: Comparación de medias.

Supuestos:

Test estadístico de Barlett

Prueba de Normalidad Anderson- Darling para

Residuales

( p value > 0,05)



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ESPECIFICACIONES Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN11

PARÁMETRO ESPECIFICACIÓN

ESPECIFICIDAD El método debe ser específico para diferenciar Dexametasona de sus

demás excipientes.

LINEALIDAD

Coeficiente de correlación > 0,9900

Ecuación de la recta de regresión: y = a + bx (Regresión lineal – Método

de los mínimos cuadrados)

Coeficiente de variación de la pendiente < 2%

Test T-Student (para la pendiente): Texp > Ttabla

Test T-Student (para el intercepto): Texp > Ttabla

Test T-Student (para el coeficiente de correlación): Texp > Ttabla

Coeficiente de variación del Factor Respuesta < 5%

PRECISIÓN

Precisión del Sistema Instrumental: RSD < 1%

Ensayo de Repetibilidad: RSD < 3%

Ensayo de Repetibilidad: Test de Normalidad Anderson-Darling: p-value

> 0,05

Precisión Intermedia diferente analista: RSD < 3%

Precisión Intermedia diferente analista: Test de Normalidad Anderson-

Darling: p-value > 0,05

Precisión Intermedia diferente analista: Test de Análisis de Varianz

a ANOVA: p-value > 0,05 (entre analistas)

Supuestos de ANOVA:

* Test de Normalidad Anderson-Darling para Residuales: p-value > 0,05

* Test de Bartlett para homogeneidad de varianzas: p-value > 0,05

Precisión Intermedia diferente equipo: RSD < 3%

Precisión Intermedia diferente equipo: Test de Normalidad Anderson-



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Darling: p-value > 0,05

Precisión Intermedia diferente equipo: Test de Análisis de Varianza

ANOVA: p-value > 0,05 (entre equipos de precisión y precisiones

intermedias)

Supuestos de ANOVA:

* Test de Normalidad Anderson-Darling para Residuales: p-value > 0,05

* Test de Bartlett para homogeneidad de varianzas: p-value > 0,05

DETERMINACIÓN DE LA ESPECIFICIDAD 11

o Se analizó por separado el estándar y placebo según

procedimiento analítico.

o Se realizó 01 ensayo de disolución utilizando 06

muestras de placebo siguiendo las condiciones del

procedimiento analítico.

o Se demostró ausencia de respuesta en el blanco de la

matriz.

o Se verificó en los cromatogramas que a 254 nm de

longitud de onda no existe interferencia de excipientes.

EVALUACIÓN:

El método debe ser específico para diferenciar

Dexametasona de sus demás excipientes.

ESTUDIO DE LA LINEALIDAD 11

El estudio de linealidad del método se realizó con soluciones

preparadas a partir del principio activo Dexametasona (como



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Dexametasona acetato), que contenian concentraciones de 50%,

75%, 100%, 125% y 150% de la concentración final (0,001 mg

/mL).

Preparación de la solución Stock de Dexametasona:

Se transfirió aproximadamente 17,3 mg de Dexametasona

acetato (equivalente a 14,2 mg de Dexametasona) estándar de

referencia tal cual pesados con exactitud, a una fiola de 50 mL,

agregar 25 mL de metanol, se sónico por 5 minutos, se dejó

enfriar, y se llevó a volumen con metanol y mezclar.

Concentración aproximada: 0,284 mg de Dexametasona /mL

Preparación de la Solución Intermedia:

Se transfirió 1,0 mL de la solución stock de Dexametasona a

una fiola de 50 mL, se completó a volumen con metanol y se

mezcló.

Preparación de las muestras:

Muestra 50 %: Se transfirió 2,0 mL de la solución intermedia

a una fiola de 25 ml se completó a volumen con medio de

disolución y se realizó el mezclado.

Se preparó por duplicado.


a una fiola de 25 mL se completó a volumen con medio de

disolución y se realizó el mezclado mezclar.



a una fiola de 25 mL se completó a volumen con medio de




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disolución y se realizó el mezclado mezclar.






Procedimiento de análisis: Las muestras preparadas fueron

inyectadas por duplicado y siguiendo las condiciones

cromatográficas indicadas en el método analítico.

ESTUDIO DE LA PRECISIÓN 11

ENSAYO DE REPETIBILIDAD

Preparación del estándar: Se realizó el proceso según

procedimiento analítico. Preparar por duplicado.

1er Estándar aplica para los Ensayos 1, 2, 3.

2do Estándar aplica para los Ensayos 4, 5, 6.

Concentración final de Dexametasona: 0,001 mg/mL

Preparación de las muestras:

Se realizaron 06 ensayos de disolución con 06 muestras cada

uno siguiendo las condiciones del procedimiento analítico.

EVALUACIÓN:

- Coeficiente de variación del análisis (< 3 %)



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- Prueba de Normalidad Anderson Darling (p value > 0,05)

PRECISIÓN INTERMEDIA 11

DIFERENTE ANALISTA: La disolución del método se

realizó según el método analítico, por otro analista. El cual

preparó 01 disolución con 06 muestras. Y fueron inyectadas

por duplicado.

EVALUACIÓN:

Prueba de Normalidad Anderson Darling ( p value > 0,05)

Prueba de ANOVA: Comparación de medias.

Hipótesis Nula: Ho ; Hipótesis Alterna: H1

Ho: Las medias de repetibilidades de Precisión y Precisión

Intermedia diferente analista no tienen diferencia

significativa. Son estadísticamente iguales.

H1: Al menos una de las medias muestrales presenta

diferencia significativa. No es estadísticamente homogénea al

resto de medias.

Si: p-value > 0,05 Se acepta Hipótesis nula

p-value < 0,05 Se rechaza Hipótesis nula.

Supuestos Prueba de ANOVA:

° Test estadístico de Barlett

° Prueba de Normalidad Anderson- Darling para

Residuales

( p value > 0,05)



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DIFERENTE EQUIPO: La disolución del método se realizó

según el método analítico, en otros equipos se preparó

sextuplicado. Inyectar por duplicado.

EVALUACIÓN:

-Prueba de ANOVA: Comparación de medias.


Ho: Las medias de Precisión y Precisiones

Intermedias no tienen diferencia significativa. Son

estadísticamente iguales.

H1: Al menos una de las medias presenta diferencia

significativa. No es estadísticamente igual al resto de

medias.



Condiciones para la prueba de ANOVA:

a) Los datos deben presentar distribución normal.

Prueba de Normalidad Anderson-Darling


Ho: Los datos de Precisión Intermedia presentan

distribución Normal

H1: Los datos de Precisión Intermedia no

presentan distribución Normal.

Si: p-value > 0,05 Se acepta Hipótesis

nula



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b) Los datos deben presentar varianzas iguales.

Prueba de Varianzas iguales ANOVA


Ho: Las varianzas de los grupos no tienen

diferencia significativa.

H1: Al menos una de las varianzas muestrales

presenta diferencia significativa



c) Los residuales de cada grupo de muestras presentan

distribución normal.


H0: Los residuos de las muestras de Precisión y

Precisión intermedia presentan distribución

normal.

H1: Los residuos de las muestras de Precisión y

Precisión Intermedia no presentan distribución

normal.

Si p value > 0,05 Se acepta Hipótesis

nula.

Si p value < 0,05 Se rechaza Hipótesis nula.



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ANÁLISIS ESTADÍSTICO

El análisis estadístico se realizó utilizando el programa estadístico Minitab

17 y Microsoft Excel 2010, las fórmulas utilizadas se presentan los Anexos.



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III. RESULTADOS:

- ESPECIFICIDAD

Tabla 1: Datos obtenidos de especificidad del Método para el

ensayo de disolución de Dexametasona 0,5 mg Tabletas

Fuente: Datos obtenidos de la verificación de especificidad a una absorbancia de 254 nm

(Ver Anexo N°1)

Interpretación: El método es selectivo para diferenciar el principio

activo Dexametasona acetato de sus demás excipientes.

N° MATERIA PRIMA ÁREA

1 Placebo 1 0

2 Placebo 2 0

3 Placebo 3 0

4 Placebo 4 0

5 Placebo 5 0

𝟔 Placebo 6 0

�̅� Placebo 0

DSR % Placebo 0



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- LINEALIDAD

Fuente: Datos obtenidos siguiendo el procedimiento de linealidad a 50%, 75 %, 100%, 125 % y

150 % de la concentración de la concentración final (0,001 mg/mL) (Ver Anexo N°2)

Gráfico 1: Curva de calibración de los datos obtenidos de

linealidad del método para el ensayo de disolución de

Dexametasona 0,5 mg Tabletas

Interpretación: El coeficiente de determinación obtenido

(R2=0,9989), del cual se deriva el coeficiente de correlación:

R=0,9995 siendo este valor mayor al especificado (0,9900),

cumpliendo dicho parámetro.

y = 2419x + 0.1449R² = 0.9989

0.00000

1.50000

3.00000

4.50000

0.000 0.001 0.001 0.002 0.002

ÁR

EA

CONCENTRACIÓN (mg/mL)

CURVA DE CALIBRACIÓNDEXAMETASONA



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Tabla 3: Desviación estándar relativa del término

independiente(a) obtenido de la curva de calibración del método

de linealidad.

Fuente: Datos obtenidos de la significancia del intercepto(a) (Ver Anexo N°3)

Tabla 4: Desviación estándar relativa de la pendiente (b),

obtenido de la curva de calibración del método de linealidad.

Fuente: Datos obtenidos de la significancia del intercepto (b) (Ver Anexo N°3)

Desviación estándar relativa del termino independiente (a)

t tabla(para n-2 grados de

libertad y p=0,05) 2,101

t exp ˃ t tabla

t exp 7,159

t exp (0,102342 – 0,187366)

Desviación estándar relativa de la pendiente (b)



t exp ˃ t tabla

t exp 127,92

t exp (2379,28 – 2458,75)



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Tabla 5: Test Estadístico del coeficiente de correlación(R),

obtenido de la curva de calibración del método de linealidad.

Fuente: Datos obtenidos del test estadístico del coeficiente de correlación (Ver Anexo N°3)

Tabla 6: Factor respuesta, de los datos obtenidos de linealidad

del Método para el ensayo de disolución de Dexametasona 0,5 mg

Tabletas

Factor respuesta

f= promedio Sf=73,721 CVf(%)Menor o igual

de 5 % CVf(%)= 2,852

Fuente: Datos obtenidos del factor de respuesta (Ver Anexo N°3)

Desviación estándar relativa del termino independiente (b)



t exp ˃ t tabla, Se

rechaza Ho t exp 90,477



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- PRECISIÓN

REPETIBILIDAD

Tabla 7: Ensayo de repetibilidad para la disolución de


Fuente: Datos obtenidos del reporte de los 6 ensayos de disolución (Ver Anexo N°4)

Interpretación: El coeficiente de variación obtenido al realizar

las 6 repeticiones del ensayo de disolución es 1,111%

encontrándose este valor dentro de especificación (CV máximo=3

%)

N° PRECISIÓN %

1 Repetibilidad - 1 93,950





𝟔 Repetibilidad - 6 94,937

PROMEDIO 95,214

CV(%) 1,111 %



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Fuente: Datos obtenidos del reporte de los 6 ensayos de disolución (Ver Anexo N°4)

Gráfico 2: Prueba de Normalidad Anderson-Darling para los

datos obtenidos de las 6 repeticiones del ensayo de disolución de




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- PRECISIÓN INTERMEDIA DIFERENTE ANALISTA

Tabla 8: Resultados obtenidos por diferente analista para el

ensayo de disolución de Dexametasona 0,5 mg Tabletas

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 2,41459 93,756

2 DIS 2 2,42988 94,349

3 DIS 3 2,52223 97,935

4 DIS 4 2,46229 95,608

5 DIS 5 2,43331 94,483

𝟔 DIS 6 2,46525 95,723

�̅� 95,309

DSR 1,569 %

Fuente: Datos obtenidos del reporte del diferente analista para el ensayo de disolución (Ver

Anexo N°5)



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Fuente: Datos obtenidos del reporte del diferente analista para el ensayo de disolución (Ver

Anexo N°5)

Gráfico 3: Diagrama de cajas para los datos obtenidos de las 6

repeticiones y los resultados del diferente analista para el ensayo

de disolución de Dexametasona 0,5 mg Tabletas

P. IN

TERM

EDIA

DIF

. AN

ALISTA

REP6

REP5

REP4

REP3

REP2

REP1

98

97

96

95

94

93

Dato

s

Gráfica de caja de REP1 , REP2, ...



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Tabla 9: Análisis estadístico ANOVA para los datos obtenidos de

las 6 repeticiones y para los datos obtenidos por diferentes

analistas para el ensayo de disolución de Dexametasona 0,5 mg

Tabletas

Fuente: Datos obtenidos del reporte del diferente analista para el ensayo de disolución

(Ver Anexo N°5)



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- PRECISIÓN INTERMEDIA DE DIFERENTE EQUIPO

Fuente: Datos obtenidos del reporte de los diferentes equipos HPLC para el ensayo de disolución

(Ver Anexo N°6)

Gráfico 4: Diagrama de cajas para los datos obtenidos de las 6

repeticiones y los resultados en diferente equipos HPLC para el

ensayo de disolución de Dexametasona 0,5 mg Tableta

P. IN

TERM

EDIA

CC-C

L-55

P. IN

TERM

EDIA

CC-C

L-10

1

P. IN

TERM

EDIA

CC-U

C-103

P. IN

TERM

EDIA

CC-C

L-13

P. IN

TERM

EDIA

CC-C

L-30

P. IN

TERM

EDIA

ID-H

P-01

REP6

REP5

REP4

REP3

REP2

REP1

98

97

96

95

94

93

92

Dato

s




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Tabla 10: Análisis estadístico ANOVA para los datos obtenidos

de las 6 repeticiones y para los datos obtenidos de los diferentes

equipos HPLC para el ensayo de disolución de Dexametasona 0,5

mg Tabletas

Fuente: Datos obtenidos del reporte de los diferentes equipos HPLC para el ensayo de

disolución (Ver Anexo N°6)



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IV. DISCUSIÓN

El primer parámetro de validación a evaluar siguiendo la recomendación de

las referencias bibliográficas consultadas, fue la especificidad del método,

siendo la capacidad de evaluar inequívoca el analito en presencia de aquellos

componentes cuya presencia resulta previsible, tales como impurezas,

productos de degradación y componente de la matriz4.

Se puede apreciar en la Tabla 1 que el placebo no presenta respuesta del

equipo a una longitud de onda de 254 nm, expresado como área 0, los

cuales fueron obtenidos de los cromatogramas (Anexo N°1) , demostrando

así que el método de disolución es específico para diferenciar el principio

activo Dexametasona acetato de sus demás excipientes

El siguiente parámetro evaluado fue la Linealidad, siendo su capacidad para

obtener resultados de prueba que sean proporcionales ya sea directamente, o

por medio de una transformación matemática bien definida, a la

concentración de analito en muestras dentro de un intervalo dado 4.

En el gráfico 1, se puede apreciar que a concentraciones del 50%, 75 %, 100

% , 125 % y 150 % de la concentración final (0,001 mg/mL) comparadas

con sus áreas respectivas (Anexo N°2), presentan un coeficiente de

correlación R=0,9995, el cual nos indica el grado de relación entre la

variable x(concentración) y la variable y (respuesta), siendo este valor mayor

que el especificado (R=0,9900) cumpliendo dicho parámetro.

En la tabla 3 se muestra el resultado de la desviación estándar relativa del

término independiente(a), al cual se aplica el estadístico t-student obteniendo

como resultado t exp(7,159) ˃ t tabla(2,101) para n-2 grados de libertad y

p=0,05, expresando así que es diferente de 0 y no pasa por el origen de las

coordenadas, el intervalo obtenido de (0,102342 – 0,187366), es un criterio

de aseguración utilizado, debido a que en rutina al realizar la curva de



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calibración no siempre el valor obtenido del intercepto es el mismo que el

obtenido en la validación pero si debe encontrarse dentro de este rango.

En la Tabla 4 se expresan los resultados de la desviación estándar relativa

de la pendiente (b), al cual se aplica el estadístico t-student obteniendo como

resultado t exp(127,92) ˃ t tabla(2,101) para n-2 grados de libertad y p=0,05,

demostrando así la correlación lineal significativa, siendo la pendiente (b)

significativamente diferente de cero (b≠0), si fuera b=0 significaría que la

recta es paralela al eje de las abscisas y no habría regresión.

En la Tabla 5 se presenta los resultados obtenidos del test estadístico al

coeficiente de correlación(R), al cual se aplica el estadístico t-student

obteniendo como resultado t exp(90,477) ˃ t tabla(2,101) para n-2 grados de

libertad y p=0,005, rechazando así la hipótesis nula (r=0), (R no debe ser

significativamente diferente de uno) existiendo una correlación lineal

significativa.

En la Tabla 6, se expresa el Factor de respuesta obtenidos los datos a

diferentes concentraciones siendo este CVf(%)= 2,852, siendo este valor

menor que el límite especificado(CVf(%)Menor o igual de 5 %).

Con respecto al parámetro de Precisión que mide el grado de concordancia

entre los resultados de las pruebas individuales cuando se aplica el

procedimiento repetidamente a múltiples muestreos de una muestra

homogénea, expresada en repetibilidad y precisión intermedia, al evaluar la

repetibilidad, en la tabla N°7 se observan los datos obtenidos de la 6

repeticiones del ensayo, se obtiene un Coeficiente de Variación de 1,111%

encontrándose este valor dentro de especificación (CV máximo =3 %),

siendo esto una medida de dispersión que describe la cantidad de

variabilidad en relación con la media. En el Gráfico 2 se muestra la prueba

de Normalidad Anderson-Darling para los datos obtenidos de las 6



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repeticiones, en la gráfica se puede observar que las 6 repeticiones tienen un

p-value > 0,05, aceptándose la hipótesis nula , concluyendo así que el

análisis presenta distribución normal cumpliendo con el requisito de

repetibilidad.

En la tabla 8 se tiene datos con respecto a la precisión intermedia diferente

analista, la Gráfica 3 corresponde a un diagrama de cajas el cual es el

resultado de realizar la prueba ANOVA esta prueba tiene como requisito que

los grupos de muestra presenten distribución normal, deben tener varianzas

homogéneas y los residuales en conjunto de las muestras presenten

distribución normal, (Anexo 5) en los cuales los grupos de resultado

cumplen, solo al realizar la prueba de varianzas iguales por el método de

Barlett se obtuvo que el p-value ˂ 0,05 (0,002 ˂ 0,05); hay suficiente

probabilidad estadística para rechazar la hipótesis nula y aceptar la hipótesis

alterna. Esto se interpreta que al menos una de las varianzas presenta

diferencia significativa al resto de varianzas. No es estadísticamente

homogénea con las demás, pero el método de ANOVA es robusto en este

criterio y se puede aplicar así no presenten varianzas iguales.

En la tabla 9, se presenta el análisis estadístico ANOVA para los datos

obtenidos de las 6 repeticiones y para los datos obtenidos del diferente

analista obteniendo un p-value ˃ 0,05 (0,063 ˃ 0,05); hay suficiente

probabilidad estadística para aceptar la Hipótesis Nula, demostrándose así

que las concentraciones de las repetibilidades de Precisión y Precisión

Intermedia diferente Analista no tienen diferencia significativa. Son

estadísticamente homogéneos.



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La Tabla 10, tiene información obtenida del análisis estadístico ANOVA

para las 6 repeticiones y para los dato obtenidos por los diferente equipos

HPLC siendo el p-value ˃ 0,05 (0,071 ˃ 0,05), podemos decir que hay

suficiente probabilidad estadística para aceptar la Hipotesis Nula., por los

tanto las concentraciones de las repetibilidades de Precisión y Precisión

Intermedia diferente. Equipo no tienen diferencia significativa. Son

estadísticamente homogéneas.



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V. CONCLUSIÓN

La validación del método analítico de disolución de Dexametasona 0,5

mg tabletas cumple con los parámetros de especificidad, linealidad,

precisión (repetibilidad y precisión intermedia) de acuerdo a los criterios

de aceptación, establecidos por la asociación española de farmacéuticos

de la industria (AEFI).



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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Morillas P. y col. Eurolab España Guía Eurachem: La adecuación al uso de

los métodos analíticos – Una Guía de laboratorio para la validación de

métodos y temas relacionados (2016). [Internet]. Perú: MINSA; 2016.

[citado el 22 de Dic. de 2016]. Disponible en:

https://www.eurachem.org/images/stories/Guides/pdf/MV_guide_2nd_ed_E

S.pdf

2. Resolución Ministerial 167-2016. Reglamento que regula la información

mínima del documento que debe contener la validación de técnicas analíticas

propias [Internet]. Perú: MINSA; 2016. [citado el 22 de Dic. de 2016].

Disponible en:

ftp://ftp2.minsa.gob.pe/normaslegales/2016/RM_167-2016-.pdf

3. Manual de buenas prácticas de laboratorio para el control de calidad de

productos farmacéuticos [Internet]. Perú: MINSA; 2013. [citado el 22 de

Dic. de 2016]. Disponible en:

ftp://ftp2.minsa.gob.pe/normaslegales/2013/RM485_2013_MINSA.pdf

4. Farmacopea De Los Estados Unidos De América, USP 38 – NF 33. Estados

Unidos. (2015). p. 1581-1587

5. Fernández A., García R., Lara M., y col. Ensayo de disolución para las

tabletas de pentoxifilina 400 mg de liberación controlada. Rev Cubana

Farm [Internet]. 2004, Ago [citado el 20 de Dic. de 2016]; 38(2): 1-1.

Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-

75152004000200001&lng=es.

6. García M., Martínez L., Iraizoz A., Martínez V., y col. Método analítico

para la cuantificación y ensayo de disolución de Risperidona tabletas 3 mg.

Rev Cubana Farm [Internet]. 2009 Dic [citado el 20 de Dic. de

2016]; 43(4): 31-44. Disponible en:

http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-

75152009000400004&lng=es.



https://www.eurachem.org/images/stories/Guides/pdf/MV_guide_2nd_ed_ES.pdf

https://www.eurachem.org/images/stories/Guides/pdf/MV_guide_2nd_ed_ES.pdf

ftp://ftp2.minsa.gob.pe/normaslegales/2016/RM_167-2016-.pdf

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7. Pérez E. Prueba de disolución “in vitro” de tabletas de acetaminofén,

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las Sedes Regionales; [citado el 22 de Dic. de 2016]. Disponible en:

http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=66638602002.

8. Quattrocchi O., Andrizzi S., Laba R. Introducción a la HPLC Aplicación y

Práctica. 2da ed. Argentina: Buenos Aires; 1992. Capítulo 10, Análisis

Cuantitativo; 302-326

9. Vademécum. Dexametasona. [Internet]; [citado el 20 de Dic. de 2016]

Disponible en:

http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma04/d009.htm

10. Catálogo de medicamentos genéricos intercambiables. Dexametasona

[Internet] [citado el 19 de Dic. de 2016] Disponible en:

http://www.facmed.unam.mx/bmnd/gi_2k8/prods/PRODS/Dexametasona%2

0Iny.html

11. Castro C., Gascón F., Pujol F., Sans R., Pla V. Validación de métodos

analíticos. Asociación española de farmacéuticos de la industria (AFEI),

Madrid; 2001. Comisión de normas, buena fabricación y control de la

calidad[Internet] [citado el 19 de Dic. de 2016] Disponible en:

https://es.scribd.com/doc/79379169/Validacion-de-Metodos-Analiticos-

Asociacion-Espanola-de-Farmaceuticos-de-la-Industria

12. Validación de métodos y determinación de la incertidumbre de la medición:

“Aspecto generales sobre la validación de métodos” [Internet]. Chile:

Instituto de Salud Pública; 2010. [citado el 22 de Dic. de 2016]. Disponible

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http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento_tecnico/2010/12/Guia%20

T%C3%A9cnica%201%20validaci%C3%B3n%20de%20M%C3%A9todos

%20y%20determinaci%C3%B3n%20de%20la%20incertidumbre%20de%20

la%20medici%C3%B3n_1.pdf



http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma04/d009.htm



http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento_tecnico/2010/12/Guia%20T%C3%A9cnica%201%20validaci%C3%B3n%20de%20M%C3%A9todos%20y%20determinaci%C3%B3n%20de%20la%20incertidumbre%20de%20la%20medici%C3%B3n_1.pdf




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ANEXOS



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43

ANEXO 1: ESPECIFICIDAD DEL MÉTODO:

ANÁLISIS DEL ESTÁNDAR

Nombre: DEXAMETASONA ACETATO

N° Análisis: S-57/15

Potencia: 98,275 % t/c

Fecha de expira: 03-2017

Peso: 22,63 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 =22,63

200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 100,4394440551

N° MATERIA PRIMA AREA

1 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP1 2,62563

2 STD DEXAMETASONA


3 STD DEXAMETASONA


4 STD DEXAMETASONA


5 STD DEXAMETASONA


�̅� STD DEXAMETASONA 2,600548

DSR STD DEXAMETASONA 0,746 %



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

44

Se verificó que la materia prima Dexametasona presentara absorbancia a 254

nm de longitud de onda (Ver cromatogramas del estándar y placebo)

N° MATERIA PRIMA AREA

1 Placebo 1 0

2 Placebo 2 0

3 Placebo 3 0

4 Placebo 4 0

5 Placebo 5 0

𝟔 Placebo 6 0

�̅� Placebo 0

DSR Placebo 0

ESPECIFICACIÓN: El método es selectivo para diferenciar el principio

activo DEXAMETASONA ACETATO de sus demás excipientes

RESULTADO: CONFORME



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

45



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

46



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

47



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

48



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

49

ANEXO 2: LINEALIDAD

2.1 ANÁLISIS DEL ESTÁNDAR





Peso: 17,76 mg

% TEÓRICO VOLUMEN (mL) CONCENTRACIÓN ( mg/mL )

50 2 0,000504

75 3 0,000757

100 4 0,001009

125 5 0,001261

150 6 0,001513

𝑚𝑔/𝑚𝐿 =17,76

50×

1

50 ×

𝑉𝑜𝑙(𝑚𝐿)

25×

98,275

100×

392,47

434,51



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

50

2.2. Datos obtenidos de Linealidad del Método para el ensayo de disolución de Dexametasona 0,5 mg Tabletas

MUESTRA CONCENTRACIÓN

FINAL ( X )

ÁREA

( Y ) XY X2 Y2 F ( Y/X )

50%-1 0,000504 1,35312 0,000682 0,00000025 1,830934 2684,761905

50%-1 0,000504 1,34048 0,000676 0,00000025 1,796887 2659,682540

50%-2 0,000504 1,34279 0,000677 0,00000025 1,803085 2664,265873

50%-2 0,000504 1,34744 0,000679 0,00000025 1,815595 2673,492063

75%-1 0,000757 2,00945 0,001521 0,00000057 4,037889 2654,491413

75%-1 0,000757 2,03091 0,001537 0,00000057 4,124595 2682,840159

75%-2 0,000757 2,02821 0,001535 0,00000057 4,113636 2679,273448

75%-2 0,000757 2,02654 0,001534 0,00000057 4,106864 2677,067371

100%-1 0,001009 2,54020 0,002563 0,00000102 6,452616 2517,542121

100%-1 0,001009 2,54744 0,002570 0,00000102 6,489451 2524,717542

100%-2 0,001009 2,56857 0,002592 0,00000102 6,597552 2545,659068

100%-2 0,001009 2,57449 0,002598 0,00000102 6,627999 2551,526264

125%-1 0,001261 3,18125 0,004012 0,00000159 10,120352 2522,799366

125%-1 0,001261 3,18065 0,004011 0,00000159 10,116534 2522,323553

125%-2 0,001261 3,17965 0,004010 0,00000159 10,110174 2521,530531

125%-2 0,001261 3,17994 0,004010 0,00000159 10,112018 2521,760508

150%-1 0,001513 3,81985 0,005779 0,00000229 14,591254 2524,686054

150%-1 0,001513 3,81126 0,005766 0,00000229 14,525703 2519,008592

150%-2 0,001513 3,82056 0,005781 0,00000229 14,596679 2525,155321

150%-2 0,001513 3,82034 0,005780 0,00000229 14,594998 2525,009914

SUMA TOTAL 0,020176 51,70314 0,058313 0,00002290 148,564814 51697,593605

PROMEDIO 0,001009 2,58516 ----- ---- ---- 2584,879680



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

51

ANEXO 3: CÁLCULO DE LA RECTA DE REGRESIÓN

Ecuación de la recta:

𝑦 = 𝑏𝑥 + 𝑎

Siendo:

b= Valor de la pendiente

a= Término independiente

n=20

Fórmula para hallar:

𝑎 =∑ 𝑋2 ∑ 𝑌 − ∑ 𝑋 ∑ 𝑋𝑌

𝑛 ∑ 𝑋2 − (∑ 𝑋)2

𝑎 = 0,1448543007

𝑏 =𝑛 ∑ 𝑋𝑌 − ∑ 𝑌 ∑ 𝑋

𝑛 ∑ 𝑋2 − (∑ 𝑋)2

𝑏 = 2419,015364

COEFICIENTE DE CORRELACIÓN

𝑅 =𝑛 ∑ 𝑋𝑖𝑌𝑖 − ∑ 𝑋𝑖 ∑ 𝑌𝑖

√[𝑛 ∑ 𝑋𝑖2 − (∑ 𝑋𝑖)2][𝑛 ∑ 𝑌𝑖

2 − (∑ 𝑌𝑖)2]

𝑅 = 0,9995

COEFICIENTE DE DETERMINACIÓN

𝑅2 = 0,9989



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

52

ESPECIFICACIÓN:

El Coeficiente correlación mínimo es: 0.9900

RESULTADO: Conforme

Determinando la desviación estándar (𝑺𝒃) de la pendiente “b”:

𝑆𝑏 = √𝑆2𝑏

𝑆2𝑏 =𝑆𝑋,𝑌

2

∑ 𝑋𝑖2 −

(∑ 𝑋𝑖)2

𝑛

𝑆𝑋,𝑌2 =

∑ 𝑌𝑖2 − 𝑎 ∑ 𝑌𝑖 − 𝑏 ∑ 𝑋𝑖𝑌𝑖

𝑛 − 2

𝑆𝑏 = 18,91058387

DESVIACIÓN ESTÁNDAR RELATIVA (S REL.) DE LA

PENDIENTE b

𝑆𝑏 𝑅𝐸𝐿% =𝑆𝑏

𝑏 𝑥 100 = 0,782 %

Límites de confianza de la pendiente:

𝐵 = 𝑏 ± 𝑡𝑠𝑏

Donde

t tabla = 2,101 para n-2 grados de libertad y p=0,05

B= Limites (inferior y superior , respectivamente)

B= 2379,28 a 2458,75

Test de t=

𝑇𝑒𝑥𝑝 =|𝑏|

𝑆𝑏

Planteamiento de hipótesis:

𝐻0: 𝐻𝑖𝑝ó𝑡𝑒𝑠𝑖𝑠 𝑁𝑢𝑙𝑎 𝐻1: 𝐻𝑖𝑝ó𝑡𝑒𝑠𝑖𝑠 𝐴𝑙𝑡𝑒𝑟𝑛𝑎

𝐻0: La pendiente (b) es igual a cero.

𝐻1: La pendiente (b) es significativamente diferente de cero.

Si:



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

53

𝑇𝑒𝑥𝑝 < 𝑇𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 → Se acepta Hipótesis Nula

𝑇𝑒𝑥𝑝 > 𝑇𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 → Se rechaza Hipótesis Nula. Se acepta Hipótesis Alterna.

𝑇𝑒𝑥𝑝 =|2419,015364|

18,91058387= 127,92

Por lo tanto: 𝑇𝑒𝑥𝑝 > 𝑇𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 para p= 0,05

Se rechaza la Hipótesis Nula. Se acepta la Hipótesis Alterna

Determinando la desviación estándar (𝑺𝒂) del intercepto “a”:

𝑆𝑎 = √𝑆2𝑏 ∑ 𝑋𝑖

2

𝑛

𝑆𝑎 = 0,0202342

DESVIACIÓN ESTÁNDAR RELATIVA (S REL.) DE LA

PENDIENTE a

𝑆𝑎 𝑅𝐸𝐿% =𝑆𝑎

𝑎 𝑥 100 = 13,969 %

Límites de confianza de la pendiente:

𝐴 = 𝑎 ± 𝑡𝑠𝑎

Donde


A= Limites (inferior y superior , respectivamente)

A= 0,102342 a 0,187366

Test de t=

𝑇𝑒𝑥𝑝 =|𝑎|

𝑆𝑎

𝑇𝑒𝑥𝑝 =|0,1448543007|

0,0202342= 7,159

Por lo tanto: 𝑇𝑒𝑥𝑝 > 𝑇𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 para p= 0,05

Se rechaza la Hipótesis Nula. Se acepta la Hipótesis Alterna



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

54

Prueba T-Student para el Coeficiente de correlación “R”:

𝑇𝑅 =|𝑅|√𝑛 − 2

√1 − 𝑅2

Planteamiento de hipótesis:

𝐻0: 𝐻𝑖𝑝ó𝑡𝑒𝑠𝑖𝑠 𝑁𝑢𝑙𝑎 𝐻1: 𝐻𝑖𝑝ó𝑡𝑒𝑠𝑖𝑠 𝐴𝑙𝑡𝑒𝑟𝑛𝑎

𝐻0: El Coeficiente de correlación (R) es igual a cero. No existe relación

lineal entre las variables X e Y.

𝐻1: El Coeficiente de correlación (R) no difiere significativamente de

uno. Existe relación lineal entre las variables X e Y.

Si:

𝑇𝑅 < 𝑇𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 → Se acepta Hipótesis Nula

𝑇𝑅 > 𝑇𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 → Se rechaza Hipótesis Nula. Se acepta Hipótesis Alterna.

𝑇𝑅 =4,240309

0,046866

𝑇𝑅 = 90,477

Donde


𝑇𝑅 > 𝑇𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 → Se rechaza Hipótesis Nula. Se acepta Hipótesis Alterna.

FACTOR RESPUESTA

El coeficiente de variación de los factores de respuesta (n=20) para las

concentraciones de 50 % - 150 % se obtuvo de la siguiente manera:

Promedio

𝑓 = 2585

Desviación estándar de f

𝑆𝑓 = 73,721

Coeficiente de Variación de f

𝐶𝑉𝑓(%) =𝑆𝑓

𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑓× 100 =

73,721

2585× 100 = 2,852



BIBLIO

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E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

55

Especificación:

Coeficiente de variación de los factores de respuesta ≤ 5 %

Resultado: Conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

56



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

57



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

58

ANEXO 4: REPETIBILIDAD

REPETICIÓN N°1

CÁLCULOS:





Peso: 22,91 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51


200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 101,682177


1 STD DEXAMETASONA ACETATO_REP1 2,58635









BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

59

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 2,38106 93,633

2 DIS 2 2,38303 93,711

3 DIS 3 2,38748 93,886

4 DIS 4 2,38422 93,758

5 DIS 5 2,40195 94,455

𝟔 DIS 6 2,39695 94,258

�̅� 93,950

DSR 0,353 %

REPETICIÓN N°2

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 2,41032 94,784

2 DIS 2 2,41349 94,909

3 DIS 3 2,40300 94,496

4 DIS 4 2,38050 93,965

5 DIS 5 2,42198 95,242

𝟔 DIS 6 2,42784 95,473

�̅� 94,812

DSR 0,568 %



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

60

REPETICIÓN N°3

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 2,45603 96,581

2 DIS 2 2,48315 97,648

3 DIS 3 2,47779 97,437

4 DIS 4 2,45993 96,735

5 DIS 5 2,45021 96,353

𝟔 DIS 6 2,45134 96,397

�̅� 96,858

DSR 0,569%

REPETICIÓN N°4

CÁLCULOS:





Peso: 22,95 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51


200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 101,859710



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

61


1 STD DEXAMETASONA


2 STD DEXAMETASONA


3 STD DEXAMETASONA


4 STD DEXAMETASONA


5 STD DEXAMETASONA




N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 2,41808 96,034

2 DIS 2 2,42772 96,417

3 DIS 3 2,42004 96,112

4 DIS 4 2,40938 95,689

5 DIS 5 2,42610 96,353

𝟔 DIS 6 2,41291 95,829

�̅� 96,072

DSR 0,297 %



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

62

REPETICIÓN N° 5

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 2,38668 94,787

2 DIS 2 2,38478 94,712

3 DIS 3 2,36920 94,093

4 DIS 4 2,37668 94,390

5 DIS 5 2,39192 94,995

𝟔 DIS 6 2,39072 94,948

�̅� 94.654

DSR 0,368 %

REPETICIÓN N° 6

N° MUESTRA AREA %

1 DIS 1 2,37752 94,423

2 DIS 2 2,37129 94,176

3 DIS 3 2,40047 95,335

4 DIS 4 2,41788 96,026

5 DIS 5 2,40465 95,501

𝟔 DIS 6 2,37087 94,159

�̅� 94.937

DSR 0,831 %



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

63

PRECISIÓN DEL MÉTODO

ENSAYO DE REPETIBILIDAD PARA LA DISOLUCIÓN DE

DEXAMETASONA

N° PRECISIÓN %






𝟔 Repetibilidad - 6 94,937

PROMEDIO 95,214

DSR (%) 1,111 %

DETERMINACIÓN DEL COEFICIENTE DE VARIACIÓN

PROMEDIO (�̅�) = 95,214

N° muestras (n) = 6

Desviación estándar (s) = 1,057

𝐶𝑉(%) =𝑆

𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜(�̅�) × 100 = 1,111 %

DETERMINACIÓN DE LOS INTERVALOS DE CONFIANZA

T= 2,571, para 6-1 = 5 grados de libertad, con una significación del 95 %



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

64

Intervalo de confianza individual (95%)

x ± ts = 95,214 ± 2,571 (1,057) = 92,495 a 97,933 %

Intervalo de confianza de la media (95%)

x ± ts /√ n = 95,214 ± 2,571 (1,057)/√ 6 = 94,104 a 96,324 %

Especificación:

El coeficiente de variación máximo es 3 %

Resultado: Conforme

Prueba de Normalidad Anderson – Darling:

Planteamiento de Hipótesis:

Ho= Hipótesis Nula, Las concentraciones de repetibilidad de precisión presentan

distribución normal

H1= Hipótesis alterna, Las concentraciones de repetibilidad de precisión no presentan

distribución normal

Si: p-value > 0,05 - Se acepta Hipótesis nula

p-value < 0,05 - Se rechaza Hipótesis nula. Se acepta Hipótesis

alterna.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

65



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

66



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

67



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

68



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

69



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

70



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

71

ANEXO 5: PRECISIÓN INTERMEDIA DIFERENTE ANALISTA

CÁLCULOS:





Peso: 22,69 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51


200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 100,705744


1 STD DEXAMETASONA


2 STD DEXAMETASONA


3 STD DEXAMETASONA


4 STD DEXAMETASONA


5 STD DEXAMETASONA






BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

72

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 2,41459 93,756

2 DIS 2 2,42988 94,349

3 DIS 3 2,52223 97,935

4 DIS 4 2,46229 95,608

5 DIS 5 2,43331 94,483

𝟔 DIS 6 2,46525 95,723

�̅� 95,309

DSR 1,569 %

PRUEBA DE NORMALIDAD ANDERSON – DARLING


Ho: Hipótesis Nula , H1: Hipótesis Alterna

Ho: Las concentraciones de Precisión Intermedia dif. Analista presentan

distribución Normal.

H1: La concentraciones de Precisión Intermedia dif. Analista no presentan


Si:

p-value ˃ 0,005 – Se acepta Hipótesis nula

p- value ˂ 0,05 – se rechaza Hipótesis nula. Se acepta Hipótesis alterna



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

73

Realizando el test estadístico correspondiente obtenemos que:

Al ser p-value ˃ 0,05 (0,325 ˃ 0,05; hay suficiente probabilidad estadística

para aceptar la Hipótesis Nula:

Por lo tanto:

Las concentraciones de Precisión Intermedia dif. Analista presentan


RESULTADO: Conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

74

TEST ESTADISTICO DE ANALISIS DE VARIANZA(ANOVA):

COMPARACIÓN DE PRECISIÓN (REPETIBILIDADES) Y

PRECISION INTERMEDIA DIF. ANALISTA:

Para realizar el Análisis de Varianza, se debe tener y verificar los siguientes

supuestos:

1. Los grupos de muestras deben presentar distribución Normal.

2. Los grupos de muestras deben tener varianza homogéneas. Test de

Barlett.

3. Los residuales en conjunto de las muestras deben presentar distribución

Normal.

Planteando Hipótesis:

1. Las pruebas de Normalidad se realizaron en cada repetibilidad del

ensayo de Precisión y Precisión Intermedia dif. Analista.

2. TEST ESTADÍSTICO DE BARLETT:

Comparación de varianzas de las repetibilidades de Precisión y

Precisión Intermedia dif. Analista.



Ho: Las varianzas de las repetibilidades de Precisión y Precisión

Intermedia dif. Analista no tienen diferencia significativa. Son




BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

75

H1: Al menos una de las varianzas presenta significativa al resto de

varianzas. Noes estadísticamente homogénea con las demás.

Si:


p-value ˂ 0,05 – Se rechaza Hipótesis nula. Se acepta Hipótesis

alterna.

P. INTERMEDIA DIF. ANALISTA

REP6

REP5

REP4

REP3

REP2

REP1

6543210

Valor p 0.002

Prueba de Bartlett

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para Desv.Est.

Prueba de varianzas iguales: REP1 , REP2, REP3, REP4, REP5, REP6,...



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

76


Al ser p-value ˂ 0,05 (0,002 ˂ 0,05); hay suficiente probabilidad estadística

para rechazar la hipótesis nula y aceptar la hipótesis alterna.

Al menos una de las varianzas presentan diferencia significatica al resto de

varianzas. No es estadísticamente homogénea con las demás.

3. PRUEBA DE NORMALIDAD ANDERSON- DARLING( PARA

RESIDUALES):





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

77

Ho: Los residuales de las muestras en conjunto presentan distribución

Normal.

H1: Los residuales de las muestras en conjunto no presentan


Si:



alterna.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

78


Al ser p-value ˃ 0,05 (0,101 ˃ 0,05); hay suficiente probabilidad estadística

para aceptar la Hipótesis Nula.

Por lo tanto:

Los residuales de las muestras en conjunto presentan distribución Normal.

TEST ESTADÍSTICO DE ANÁLISIS DE VARIANZA (ANOVA):





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

79

Ho: Las medias de las repetibilidades de Precisión y Precisión Intermedia

dif. Analista no tienen diferencia significativa. Son estadísticamente

homogéneas.

H1: Al menos una de las medias muestrales presenta diferencia significativa.

No es estadísticamente homogéneas al resto de medias.

Si:


p-value ˂ 0,05 – Se rechaza Hipótesis nula. Se acepta Hipótesis alterna.

P. IN

TERM

EDIA

DIF

. ANALIS

TA

REP6

REP5

REP4

REP3

REP2

REP1

98

97

96

95

94

93

Dato

s




BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

80



para aceptar la Hipotesis Nula.

Por lo tanto:

Las concentraciones de las repetibilidades de Precisión y Precisión

Intermedia dif. Analista no tienen diferencia significativa. Son




BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

81

ANEXO 6: PRECISIÓN INTERMEDIA DIFERENTE EQUIPO

(ID-HP-01)

CÁLCULOS:





Peso: 22,75 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51


200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 100,972044


1 STD DEXAMETASONA


2 STD DEXAMETASONA


3 STD DEXAMETASONA


4 STD DEXAMETASONA


5 STD DEXAMETASONA






BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

82

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 149859 95,760

2 DIS 2 149735 94,008

3 DIS 3 150692 93,871

4 DIS 4 151025 94,645

5 DIS 5 151291 94,453

𝟔 DIS 6 150809 95,758

�̅� 94,749

DSR 0,878 %

PRUEBA DE NORMALIDAD ANDERSON-DARLING:



Ho: Las concentraciones de Precisión Intermedia dif, equipo ID-HP-01, presentan


H1: Las concentraciones de Precisión Intermedia dif, equipo ID-HP-01, no presentan


Si:





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

83


Al ser p-value ˃ 0,05 (0,218 ˃ 0,05); hay suficiente probabilidad estadística para aceptar la

Hipótesis Nula.

Por lo tanto:

Las concentraciones de Precisión Intermedia dif. Equipo ID-HP-01, presentan una


RESULTADO: Conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

84

(CC-CL-13)

CÁLCULOS:





Peso: 22,41 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51


200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 99,463011


1 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP1 157197

2 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP2 157350

3 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP3 157510

4 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP4 157216

5 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP5 157229

�̅� STD DEXAMETASONA 157300




BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

85

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 149859 94,758

2 DIS 2 149735 94,679

3 DIS 3 150692 95,284

4 DIS 4 151025 95,495

5 DIS 5 151291 95,663

𝟔 DIS 6 150809 95,358

�̅� 95,206

DSR 0,420 %




Ho: Las concentraciones de Precisión Intermedia dif, equipo CC-CL-13, presentan


H1: Las concentraciones de Precisión Intermedia dif, equipo CC-CL-13, no presentan


Si:





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

86



Hipótesis Nula.

Por lo tanto:

Las concentraciones de Precisión Intermedia dif. Equipo CC-CL-13, presentan una


RESULTADO: Conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

87

(CC-CL-30)

CÁLCULOS:





Peso: 22,61 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51


200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 100,350677


1 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP1 56733

2 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP2 56368

3 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP3 57747

4 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP4 56781

5 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP5 57369





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

88

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 53933 94,946

2 DIS 2 54909 96,663

3 DIS 3 52501 92,424

4 DIS 4 54290 95,573

5 DIS 5 54111 95,259

𝟔 DIS 6 54759 96,399

�̅� 95,211

DSR 1,592 %








Si:





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

89



Hipótesis Nula.

Por lo tanto:



RESULTADO: Conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

90

(CC-UC-103)

CÁLCULOS:





Peso: 22,55 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51


200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 100,084378


1 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP1 299732

2 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP2 295019

3 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP3 295942

4 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP4 295853

5 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP5 299474





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

91

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 284542 95,820

2 DIS 2 287174 96,707

3 DIS 3 286443 96,461

4 DIS 4 278142 93,665

5 DIS 5 276450 93,095

𝟔 DIS 6 282859 95,254

�̅� 95,167

DSR 1,560 %




Ho: Las concentraciones de Precisión Intermedia dif, equipo CC-UC-103, presentan


H1: Las concentraciones de Precisión Intermedia dif, equipo CC-UC-103, no presentan


Si:





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

92



Hipótesis Nula.

Por lo tanto:

Las concentraciones de Precisión Intermedia dif. Equipo CC-UC-103, presentan una


RESULTADO: Conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

93

(CC-CL-101)

CÁLCULOS:





Peso: 22,54 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51


200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 100,039994


1 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP1 284415

2 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP2 283828

3 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP3 286646

4 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP4 286104

5 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP5 287493





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

94

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 273414 95,739

2 DIS 2 274012 95,948

3 DIS 3 270359 94,669

4 DIS 4 270095 94,577

5 DIS 5 272319 95,355

𝟔 DIS 6 270852 94,842

�̅� 95,188

DSR 0,608 %








Si:





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

95



Hipótesis Nula.

Por lo tanto:



RESULTADO: Conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

96

(CC-CL-55)

CÁLCULOS:





Peso: 22,55 mg

𝑋 =𝐴 𝑚𝑝

𝐴 𝑠𝑡×

𝑊 𝑠𝑡

200×

1

100 ×


100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51


200×

1

100 ×

98,275

100×

500

0,5× 100 ×

392,47

434,51

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = 100,084378


1 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP1 709092

2 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP2 711289

3 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP3 708788

4 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP4 707055

5 STD DEXAMETASONA

ACETATO_REP5 709966





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

97

N° MUESTRA ÁREA %

1 DIS 1 678091 95,689

2 DIS 2 676496 95,464

3 DIS 3 673260 95,007

4 DIS 4 678186 95,702

5 DIS 5 679203 95,846

𝟔 DIS 6 672000 94,830

�̅� 95,188

DSR 0,608 %








Si:





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

98



Hipótesis Nula.

Por lo tanto:



RESULTADO: Conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

99


COMPARACIÓN DE PRECISIÓN (REPETIBILIDADES) Y

PRECISIÓN INTERMEDIA DIF. EQUIPO

Para realizar el Análisis de Varianza, se debe tener y verificar los siguientes

supuestos:

4. Los grupos de muestras deben presentar distribución Normal.

5. Los grupos de muestras deben tener varianza homogéneas. Test de

Barlett.

6. Los residuales en conjunto de las muestras deben presentar distribución

Normal.

Planteando Hipótesis:

4. Las pruebas de Normalidad se realizaron en cada repetibilidad del

ensayo de Precisión y Precisión Intermedia dif. Equipo.

5. TEST ESTADÍSTICO DE BARLETT:

Comparación de varianzas de las repetibilidades de Precisión y

Precisión Intermedia dif. Equipo.



Ho: Las varianzas de las repetibilidades de Precisión y Precisión

Intermedia dif. Equipo no tienen diferencia significativa. Son




BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

100

H1: Al menos una de las varianzas presenta significativa al resto de

varianzas. Noes estadísticamente homogénea con las demás.

Si:



alterna.

P. INTERMEDIA CC-CL-55

P. INTERMEDIA CC-CL-1 01

P. INTERMEDIA CC-UC-1 03

P. INTERMEDIA CC-CL-1 3

P. INTERMEDIA CC-CL-30

P. INTERMEDIA ID-HP-01

REP6

REP5

REP4

REP3

REP2

REP1

76543210

Valor p 0.000

Prueba de Bartlett

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para Desv.Est.

Prueba de varianzas iguales: REP1 , REP2, REP3, REP4, REP5, REP6,...



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

101


Al ser p-value ˂ 0,05 (0,000 ˂ 0,05); hay suficiente probabilidad estadística

para rechazar la hipótesis nula y aceptar la hipótesis alterna.

Al menos una de las varianzas presenta diferencia significativa al resto de

varianzas. No es estadísticamente homogénea con las demás.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

102

1. PRUEBA DE NORMALIDAD ANDERSON- DARLING( PARA

RESIDUALES):



Ho: Los residuales de las muestras en conjunto presentan distribución

Normal.

H1: Los residuales de las muestras en conjunto no presentan distribución

Normal.

Si:



alterna.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

103



para aceptar la Hipótesis Nula.

Por lo tanto:

Los residuales de las muestras en conjunto presentan distribución Normal.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

104




Ho: Las medias de las repetibilidades de Precisión y Precisión Intermedia

dif. Analista no tienen diferencia significativa. Son estadísticamente

homogéneas.

H1: Al menos una de las medias muestrales presenta diferencia significativa.

No es estadísticamente homogéneas al resto de medias.

Si:





BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

105


P. IN

TERM

EDIA

CC-C

L-55

P. IN

TERM

EDIA

CC-C

L-10

1

P. IN

TERM

EDIA

CC-U

C-103

P. IN

TERM

EDIA

CC-C

L-13

P. IN

TERM

EDIA

CC-C

L-30

P. IN

TERM

EDIA

ID-H

P-01

REP6

REP5

REP4

REP3

REP2

REP1

98

97

96

95

94

93

92

Dato

s




BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

106


para aceptar la Hipotesis Nula.

Por lo tanto:

Las concentraciones de las repetibilidades de Precisión y Precisión

Intermedia dif. Equipo no tienen diferencia significativa. Son




BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

107



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

108



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

109



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

110



VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO POR CROMATOGRAFÍA …

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