Validacion Analitica

8/12/2019 Validacion Analitica

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VALIDACIN DEMETODOLOGAS

BIOANALTICASQF JAIME SASSO AGUIRRE

Bioqumica Aplicada

Tecnologa Mdica

2014


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Los laboratorios clnicos acreditados comparten la responsabilidadde ofrecer servicios con validez tcnica, tomando en cuenta quela informacin que transmiten a los mdicos esfundamentalpara permitirles brindar servicios con la calidad yconfiabilidad que requieren los pacientes.

Laboratorio de

Anlisis

Informacin

Para qu?

Para tomardecisiones


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Durante la evaluacin de la competencia tcnica de loslaboratorios clnicos, la demostracin de la VALIDACIN y

VERIFICACINde los procedimientos de examen requiere laaplicacin de criterios tcnicos uniformes y consistentes.

Requisitos de dicha InformacinQue sea correcta

Que sea comparable con otros laboratorios


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VALIDACION DE METODOS BIOANALITICOS:Confirmacin mediante el suministro de evidencia objetiva deque se han cumplido los requisitos del mtodo para unautilizacin o aplicacin especfica prevista.

VERIFICACIN DE METODOS BIOANALITICOS:La verificacin consiste en evaluar el desempeo del mtodopara demostrar que cumple con los requisitos para el uso

previsto y que fueron especificados como resultado de suvalidacin.


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Un laboratorio clnico acreditado o en proceso de

acreditacin debe demostrar que tiene competenciatcnica para realizar las actividades de validaciny verificacin de los procedimientos de examencuantitativo establecidos en su alcance de acreditacin.

Los datos de la validacin los informa el fabricante enlos instructivos de uso. No obstante, previo a su uso ellaboratorio debe verificar que puede aplicarcorrectamente los mtodos ya validados por elfabricante, bajo sus condiciones propias de operacin(equipo, calibradores, analistas, etc.) generandoevidencias objetivas, para confirmar su aplicacincorrecta.


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Antes de realizar la validacin y/o verificacin en la

rutina del laboratorio, debe llevarse a cabo la:calibracin analtica de los equipos.

La validacin y/o verificacin de un procedimiento delexamen depende de los cambios realizados, por lo quedebe repetirse cuando existan cambios mayores.

Se consideran cambios mayores, el cambio de equipoy mantenimiento mayor de equipo, entre otros. Seconsideran cambios menores, la modificacin deltamao de muestra, cambio de analista y sustitucin dereactivos, entre otros.


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Si la informacin no se encuentra completa en losinsertos, el laboratorio debe presentar evidenciadocumentada y actualizada de que la ha solicitado al

fabricante.

En el caso de realizar modificaciones a mtodosestablecidos o ya validados por el fabricante o cuando seutilicen mtodos desarrollados por el propio laboratorio

(internos), ste debe realizar la validacin completadel mtodo y presentar las evidenciascorrespondientes, incluyendo el procedimiento queutiliz para realizarla.

El laboratorio debe realizar la verificacin de losprocedimientos de examen seleccionados antes deponerlos en uso y evidenciar si stos cumplen con lascaractersticas de desempeo en las condiciones dellaboratorio.


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VALIDACIN COMPLETALa validacin completa es importante:

Durante el desarrollo y la aplicacin de un nuevo mtodo debioanlisis.

VALIDACIN PARCIALEvala modificaciones de los mtodos de bioanlisis ya validados.

Las modificaciones o cambios tpicos que se incluyen en esta

categora son:

Transferencias de mtodos bioanalticos entre laboratorios o

analistas.

Cambio en la metodologa de anlisis

Cambio del anticoagulante en fluido biolgico.

Cambio en la matriz dentro de la especie Cambio en los procedimientos de procesamiento de la muestra.

Cambio en el rango de concentracin.


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VALIDACIN DE LA METODOLOGA

Parmetros de Validacin

1. Linealidad (intervalo analtico)2. Selectividad/Especificidad analtica3. Precisin4. Exactitud5. Limite de deteccin y cuantificacin6. Efecto carry-over o de arrastre7. Estabilidad analtica

Inf. Proporcionada por el Fabricante


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1.- LinealidadDenominada normalmente curva patrn o curva decalibracin. La linealidad de un mtodo es su capacidad paraobtener (dentro de un cierto intervalo) resultados que sondirectamente proporcionales a la concentracin en la

muestra de la sustancia que se pretende analizar.

Se debe demostrar la relacin entre la concentracin delanalito y la respuesta del detector, y esta respuesta debeestar bien definida y ser reproducible. Para ello, se debe

utilizar como curva de calibrado el modelo mas simple quedescriba la relacin entre la concentracin del analito y larespuesta del detector.


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1.- Linealidad

El ensayo de linealidad involucra una serie de muestras de concentracinconocida.

La linealidad es obtenida al trazar la mejor lnea recta que toque la

mayor cantidad de puntos.

Debe considerarse que dicha verificacin debe tocar los puntosde decisin clnica, entendindose stos por ej. como lasconcentraciones o actividades de los analitos donde el mdico decide entreadministrar o no algn tratamiento teraputico.

Para preparar las disoluciones debe emplearse material de referenciacertificado.


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1.- Linealidad

Procedimiento:1.Preparacin de los patrones de calibracin en la misma la misma matriz que las

muestras a cuantificar.2.Se debe preparar un mnimo de 6 muestras distribuidas uniformemente a lo largo del

rango de concentraciones.

3.Evaluacin de un mnimo de tres curvas de calibrado. Estas curvas se realizarn en

diferentes das (1 curva/1 da). Siempre que sea posible, se realizarn mediante

pesadas independientes para eliminar el posible error sistemtico que podra arrastrar la

pesada.


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1.- Linealidad

Calcular la ecuacin de la recta para los puntos dados, as como elcoeficiente de correlacin. La grfica resultante deber ser lineal,con un coeficiente de correlacin de por lo menos del 0,99.

Este clculo puede realizarse empleando las herramientas deanlisis de datos del programa Excel, o bien, cualquier programa deestadstica con el que cuente el laboratorio.

Nota: El coeficiente de correlacin permite estimar la relacinentre dos propiedades y de esta manera si los puntosexperimentales siguen una funcin lineal.


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Material Certificado

Patrones primarios y secundarios

Un patrn primario es un compuesto de elevada pureza quesirve como material de referencia.

Los requisitos ms importantes para un patrn primario son lossiguientes:Alto grado de pureza.Estabilidad atmosfrica.Ausencia de agua de hidratacin, para que la composicindel slido no cambie con las valoraciones de humedad.Solubilidad razonable en el medio de valoracin.

Un patrn secundario es un compuesto cuya pureza se haestablecido mediante anlisis qumicos y que sirve como materialde referencia en los mtodos de anlisis por valoracin.


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Patrones primarios


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Preparacin de SolucionesPara preparar disoluciones patrn para distintos nivelesde concentracin, se debe modificar/ cambiar/adecuar elprotocolo de preparacin de las diluciones de manera

correspondiente al nmero de niveles involucrados.

Solucin Stock Madre (Working Standard Solution)

Nmero de mediciones por dilucinEs importante que se preparare un volumen mnimo pordilucin que garantice realizar las replicas programadas.


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2.- SelectividadComprobacin que los compuestos medidos son los analitos de inters y que sucuantificacin no se ve afectada por la presencia de otras sustancias presentes enla matriz de la muestra.

Procedimiento: Analizar 6 blancos de procedencias distintas. (Incluir plasma

hemolizado y lipmico)

Criterio de aceptacin:Las respuestas de las seales interferentes debern sermenores al 20% de la respuesta del limite de cuantificacin.

Blanco LLOQ


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3.- ExactitudCapacidad del mtodo analtico para proporcionar resultados lo mas prximosposible a los valores que son aceptados convencionalmente como verdaderos oreales.

La exactitud debe valorarse en dos niveles: intra-da, representativa de la

variabilidad obtenida en las mismas condiciones de trabajo, e inter-da,representativa de la variabilidad obtenida en diferentes series analticas.

Procedimiento:Para ello, se prepararan al menos cinco muestras en 3 tres niveles de concentracion(baja, media y alta) dentro del rango establecido:

nivel bajo: inferior o igual a tres veces el limite de cuantificacion inferiornivel medio: la mitad del rango de concentracionnivel alto: entre el 75-90% del patron de calibrado de mayor concentracion


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3.- Exactitud

La veracidad de un mtodo de medicin es de interscuando es posible disponer del valor verdadero delmensurando sujeto a medicin.

El valor verdadero no se conoce exactamente en algunosmtodos de medicin, pero es posible contar con un valorde referencia certificado para el mensurando sujeto amedicin; por ejemplo si se dispone de materiales de

referencia adecuados, se establece el valor de referenciacon base a otro mtodo de medicin o mediante lapreparacin de una muestra conocida.


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3.- Exactitud

Evaluacin de la veracidad a travs de la valoracin de unmaterial de referencia certificado.

La veracidad de un mtodo analtico se puede estimar por medio del

error relativo, para lo cual se utiliza un material de referencia certificado(MRC), un calibrador o un suero con un valor conocido del analito,considerando el valor asignado a ste como el valor verdadero.

El clculo del porcentaje de error relativo, se puede estimar mediante

el clculo inicial de la media aritmtica, aplicando la siguiente frmula:


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4.- Precisin

Grado de concordancia entre los valores de una serie repetida de ensayos,utilizando una muestra homognea, bajo condiciones establecidas.

Debe valorarse a dos niveles: intra-da, representativa de la variabilidad

obtenida en las mismas condiciones de trabajo, e inter-da, representativade la variabilidad obtenida en diferentes series analticas.

Procedimiento:Deben realizarse como mnimo tres ensayos en das diferentes (1 ensayo/1dia). Para ello, se prepararan al menos cinco muestras en tres niveles de

concentracion (baja, media y alta) dentro del rango establecido:nivel bajo: inferior o igual a tres veces el limite de cuantificacion inferiornivel medio: la mitad del rango de concentracionnivel alto: entre el 75-90% del patron de calibrado de mayorconcentracion


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4.- Precisin

La precisin usualmente se especifica en trminos dedesviacin estndar o desviacin estndar relativa.

Para identificar la precisin en los procedimientosanalticos se deben realizar mediciones repetidas yaplicar algunos conceptos estadsticos fundamentalescomo el clculo de la media (X), la desviacin

estndar(DE), la desviacin estndar relativa(DER) yel coeficiente de variacin(%CV).


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5.- Lmite Inferior de CuantificacinEs aquel valor de concentracin mnimo que puede obtenerse con

una imprecisin y una inexactitud aceptable.

Concentracin mnima de un analito en la matriz de una muestra que

puede ser detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajocondiciones analticas especficas.

Lmite de Deteccin


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6.- Efecto carry-over o de arrastre


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7.- EstabilidadLa estabilidad del frmaco en un fluido biolgico depende de las condiciones dealmacenamiento, las propiedades fisico-quimicas del frmaco, la matriz biolgicaen la que se encuentra, el recipiente de envasado y las manipulaciones a las quepueda estar sometido durante la preparacin de una muestra.

En este apartado van a detallarse los estudios de estabilidad que debenconsiderarse en un protocolo estndar de validacin:

1.Estabilidad de la muestra tras varios ciclos decongelacion/descongelacion2.Estabilidad de la muestra a Tambiente

3.Estabilidad de la muestra en congelacin4.Estabilidad de la muestra en el inyector automtico5.Estabilidad de las disoluciones patrn


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Desarrollo del

Mtodo Analtico

Revisin Bibliogrfica

Adaptacindel Mtodo

Desarrollo de unNuevo Mtodo

Pre-Validacin

Validacin y

Estabilidad

MTODOVALIDADO

Obtencin del

Fluido Biolgico

Disponible No-DisponibleObtencin

del Plasma

Congelamiento

Transporte

Recepcin

Almacenamiento

ANLISIS SECUENCIAL PARA EL DESARROLLO DE UN MTODO BIOANALTICO


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The final validation report caninclude the following:

1. A description of the assay, including reference standard, critical reagents, and theregression used for analysis.

2. The dates that the validation was conducted and last updated.

3. The location of stored data.

4. The names of analysts who conducted the validation.

5. A description of the parameters tested and the methods used to perform the

experiments.

6. A summary of the standard curve back-calculated values, including overall statistics

of accuracy and precision.

7. A summary of all the validation samples (QC samples run during validation) used in

the conduct of the validation, including overall statistics on accuracy and precision

(intra-assay and interassay)

8. .Summary tables for each of the parameters included in the validation (eg, dilutionallinearity, stability, specificity, selectivity)

9. Deviations from the validation plan.

10. A conclusion, including that the validation passed/failed and the final acceptance

criteria to be applied during sample analysis

Key Elements of Bioanalytical Method Validation for MacromoleculesThe AAPS Journal 2007; 9 (2) Article 17


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www.globalbioanalysisconsortium.org

Misin:El Consorcio Global de Bioanlisis (GBC) es una organizacin

mundial integrada por representantes de las sociedades cientficas,

con la misin de armonizar y fusionar las guas bioanalticas

existentes o para crear un documento de consenso unificado que

pueda ser presentado a los organismos reguladores / autoridades

de salud en varios pases.


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jsasso@ift cl

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