VERIFICACIÓN DE LA APTITUD DE LAS PRUEBAS DE RECUENTO ...

VERIFICACIÓN DE LA APTITUD DE LAS PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO Y PRUEBAS DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS PARA

PRODUCTOS TERMINADOS ELABORADOS EN ANGLOPHARMA S.A

LAURA MARGARITA PERILLA JIMÉNEZ

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA CARRERA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

2013

Artículo 23 de la Resolución No. 13 de Junio de 1946

"La universidad no se hace responsable de los conceptos emitidos por sus alumnos en sus proyectos de grado.

Sólo velará porque no se publique nada contrario al dogma y la moral católica y porque los trabajos no contengan ataques o polémicas puramente personales. Antes bien, que se vea en ellos el anhelo de buscar la verdad y la justicia".

Reglamento de la Pontificia Universidad Javeriana

AGRADECIMIENTOS

Al finalizar el trabajo de grado lleno de momentos agradables y con muchas dificultades es inevitable sentir que te invade un alivio al culminar satisfactoriamente un proyecto el cual fue desarrollado con gran esfuerzo, dedicación, mucha paciencia y tolerancia frente a todas las situaciones que jamás se te pasan por la cabeza que van a suceder. Debido a esto, para es muy importante aprovechar este espacio para reconocer y agradecer a todos aquellos que hicieron parte del desarrollo de este trabajo. Debo agradecer de manera especial y sincera a la Dr. Angela María Jara por permitirme realizar este trabajo a su lado el cual fue una verdadera enseñanza para mi vida, por su inmensa paciencia y sobre todo por su lucha constante para poder llevar hasta el final el desarrollo de este estudio, junto a ella debo agradecer a Katerine Riveros por su diaria colaboración y preocupación para obtener siempre los mejores resultados. Por otro lado debo agradecer Anglopharma S.A por abrirme las puertas de su empresa y darme la confianza para realizar un trabajo que espero permita a la compañía ser cada vez mejor. A la Dr. Janeth Arias por su colaboración y ser una excelente guía a lo largo del desempeño del trabajo. Por último, y no por ello menos importantes, debo agradecer a mis padres, hermanos, amigas, amigos y a Trufa por su paciencia, apoyo constante e incondicional al desarrollar este proyecto y ser siempre los cimientos más fuertes en mi vida.

INDICE

RESUMEN 1

INTRODUCCIÓN 2 JUSTIFICACIÓN Y PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 3

REFERENTES CONCEPTUALES – MARCO TEÓRICO 5

OBJETIVOS 6 METODOLOGÍA

1. MICROORGANISMOS 7 2. MEDIOS DE CULTIVO 8 3. REACTIVACIÓN DE LA CEPA 11 4. PRODUCTOS A EVALUAR 12 5. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA 13 6. RECUENTO DE MESÓFILOS AEROBIOS 14 7. RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS 14 8. PRUEBA PRESENCIA/AUSENCIA 15 9. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN 18

RESULTADOS 19

DISCUSIÓN DE RESULTADOS 20 CONCLUSIONES 22

BIBLIOGRAFIA 23

ANEXO 1 25 1. ION K ELIXIR 31,2% 25 2. AMETREX JARABE 3% 26 3. NAPROXENO SUSPENSIÓN 3% 27 4. CALYMAG SUSPENSIÓN MENTA 29 5. TEOLIXIR ELIXIR 30

ANEXO 2 33

1. PIROXICAM GEL 0,5% 33 2. HIDROCORTISONA CREMA 1% 34

ANEXO 3 37

1. CLOTRIMAZOL TABLETA VAGINAL 100 MG% 37 ANEXO 4 40

1. VERAN D CÁPSULAS 20 MG 40

Verificación de la aptitud de las pruebas de recuento microbiano y pruebas de microorganismos específicos para productos terminados elaborados en

Anglopharma S.A 1

RESUMEN En este estudio se demostrara mediante las pruebas de enumeración y recuperación de microorganismos especificos que el método, para análisis microbiológico de productos no estériles, de la USP vigente, es apropiado para analizar los productos terminados de naturaleza semisólida, líquida, productos de uso vaginal y cápsulas de gelatina dura elaborados en Anglopharma S.A. Para evaluar la confiabilidad de las técnicas en los productos de naturaleza semisólida (Piroxicam gel 0,5% y Hidrocortisona crema 1%), líquida (Ión K elixir 31,2%, Calymag suspensión menta, Naproxeno suspensión 3%, Ametrex jarabe 3% y Teolixir elixir 80 mg/15 mL), productos vaginales (Clotrimazol tableta vaginal 100 mg) y cápsulas de gelatina dura (Veran D cápsulas 20 mg) se realizaron recuentos de mesófilos aerobios, mohos, levaduras y se realizaron pruebas de presencia/ausencia. Los recuentos y las pruebas de presencia/ausencia se realizaron con cepas liofilizadas ATCC Accu-shot y Ez-CFU las cuales son Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseuodomonas aeruginosa, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis y Salmonella Typhimurium, cada microorganismo se utilizo dependiendo lo establecido, en la USP37 capítulo <61>, para cada producto. Para poder demostrar la aptitud de las pruebas de recuento microbiano y de microorganismos especificos de cada lote de cada producto se debía obtener un porcentaje de recuperación entre 50%-200%, siendo a partir del 70% un porcentaje de recuperación bueno y se debía observar la presencia de los microorganismos inoculados verificando que las caracteristicas del microorganismo tanto macroscópicamente como microscópicamente correspondían a la cepa desafiada. Los resultados obtenidos fuerons conformes a los criterios de aceptación establecidos. De acuerdo al estudio realizado, se pudo demostrar mediante las pruebas de enumeración y recuperación de los microorganismos especificos, que el método para el análisis microbiológico de productos no estériles de la USP vigente es apropiado para analizar los productos terminados de naturaleza semisólida, líquida, vaginales y cápsulas de gelatina dura elaborados en Anglopharma S.A. Palabras claves: Liofilización, Recuentos, patógenos, mohos, levaduras, bacterias.

2 INTRODUCCIÓN Anglopharma S.A es una compañía Colombiana que inicio su proceso de producción en el año 1984 y desde entonces se ha dedicado a fabricar, envasar y distribuir medicamentos para el consumo humano (Anglopharma S.A.). Es una compañía que se encuentra certificada por ISO 9001:2008 y Buenas práticas de manufactura (BPM). Para el el desarrollo de sus protocolos se rige a la USP (Convención de la Farmacopea de Estados Unidos). La USP es una entidad fundada en 1820, que tiene como fin establecer ciertos parámetros para asegurar la calidad, pureza y confiabilidad de productos como medicamentos, suplementos dietarios e ingredientes alimenticios (USP). Estos parámetros establecidos por la USP son controlados por la entidad Administración de Drogas y Alimentos, la cual esta encargada de vigilar que estos se cumplan en Estados Unidos y 140 países más. (USP, 2013) En Colombia los laboratorios farmaceuticos como Anglopharma S.A, deben seguir los protocolos y normas establecidos en la USP y quien se encarga de verificar el cumpliento de estas es el INVIMA. La compañia cumple con la normatividad establecida, con el fin de continuar con su proceso operacional garantizando la calidad final de sus productos. Esta compañía cuenta con un area de Control de Calidad a nivel fisico-químico y microbiológico, las cuales se encargan de verificar el estado de las materias primas, productos terminados, material de envase primario, entre otros y aprobarlos o rechazarlos garantizando con los resultados obtenidos el cumplimiento de las normas ISO 9001:2008 y Buenas Practicas de Manufactura (BPM). Cada protocolo, tanto a nivel fisico-quÍmico como microbiológico, debe contar con unos criterios de aceptación para aprobar o rechazar un producto y que a su vez el resultado obtenido en el análisis diario sea confiable y garantizado, por lo cual Anglopharma S.A decidió realizar el presente estudio con el objetivo de demostrar mediante pruebas de enumaración y recuperación de los microorganimos especificos, que el método para analisís microbiológico de productos no estériles, de la USP vigente son apropiados para analizar los productos terminados de naturaleza semisólida, líquida, productos vaginales y cápsulas de gelatina dura elaborados en Anglopharma S.A.


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JUSTIFICACIÓN Y PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Los medicamentos no estériles son productos suceptibles a contaminación con microorganismos como bacterias, mohos, levaduras, entre otros. La contaminación puede producirse debido a materias primas en mal estado, una calidad higiénica deficiente en el proceso de fabricación por operarios, ambientes, superficies, agua, en el proceso de envasado o empaquetado (Gennaro, 2003). Productos contaminados con microorganismos pueden acarrear daños a la industria generando altos costos debido a que los microorganismos pueden degradar el principio activo del producto o los excipientes alterando la composición del medicamento; lo cual puede generar que se realicen devoluciones, reprocesos o destruccion del medicamento, donde se ve afectado el nombre de la empresa generando desconfianza en el consumidor y en algunas ocasiones hasta procedimientos legales. (Fjeld, 2011) Al consumidor puede generar enfermedades o intoxicaciones al estar presente un microorganismo patógeno. Este estudio debe garantizar que la técnica junto con los medios de cultivo son capaces de permitir el crecimiento y recuperación de los microorganismos, y así mismo que los medios de cutltivo especificos recuperen microorganismos especificos, de lo contrario no puede ser utilizada para realizar el control de calidad microbiológico de producto terminado. (Fjeld, 2011) Para garantizar la calidad microbiológica de un producto no estéril en este caso de naturaleza semisólida, líquida, cápsulas de gelatina dura y de uso vaginal, se requieren de especificaciones detalladas donde se especifiquen los límites y criterios de aceptación del producto final (Gennaro, 2003).

4 REFERENTES CONCEPTUALES-MARCO TEORICO Evaluación de la confiabilidad de las técnicas microbiológicas La confibialidad de una técnica es cuando los datos están exentos de un error y son consistentes. Esta se puede asegurar con una prueba, una prueba repetida, formas equivalentes y consistencia interna. (McDaniel et all 2005) Recuento de microorganismos Para realizar el estudio se debe trabajar con microorganismos de una concentración conocida inferior a 100 UFC/mL en 0,1 mL, para lo cual se pueden obtener cepas de referencia ATCC o se puede realizar una curva de calibración para cada microorganismo. Las cepas de referencia certificadas garantizan que son cultivos puros indicando que no presentan contaminación, que los microorganismos no mutaron ya que no se han alterado las caracteristicas de cada microorganismo, por otro lado se han realizado pruebas bioquímicas y pruebas moleculares para cada microorganismo (Montoya M). Para garantizar que el microorganismo siga cumpliendo con estas caracteristicas, no se deben realizar más de cuatro pases a partir de la cepa de referencia. (Montoya M) Por el contrario, al realizar una curva de calibración con un Patrón de McFarland o por espectrofotometria, su preparación va a ocupar mas tiempo para realizar el estudio y no va garantizar la concentración del microorganismo, por otro lado por este método no se garantiza un cultivo libre de contaminación y el uso de este debe ser en menos tiempo (Fjeld, 2011). Debido a esto de se decidio utilizar cepas ATCC, obtenidas de Microbiologics, donde se trabajaron los siguientes productos:

• EZ-ACCU SHOT : Es una preparación de cepas liofilizadas las cuales se utilizan para pruebas cuantitativas para verificar el crecimiento del microorganismo en diferentes medios de cutlivo. Cada pellet esta diseñado para arrojar un recuento de 10-100 UFC por 0,1 mL y tiene una estabilidad de ocho horas. (Microbiologics, 2010)

• EZ-CFU: Son cepas liofilizadas las cuales se utilizan para pruebas cuantitativas con el

fin de verificar el crecimiento del microorganismo. Se requiere realizar dilución en Buffer fosfato pH 7,2 antes de utilizar la cepa, con el fin de que en 0,1 mL de inoculo se encuentran de 10-100 UFC. (Microbiologics, 2010)

Recuento de mesófilos aerobios: Son microorganismos que tienen la capacidad de crecer en condiciones aerobias y temperaturas de 20 a 40 ºC, los cuales pueden incluir tanto especies patógenas como no patógenas. Este recuento se realiza con el fin de determinar la carga bacteriana en una muestra determinada, la calidad del producto, condiciones higiénicas y manipulación del producto durante la elaboración. El recuento se puede realizar en superficie y en profundidad. (Ellner, 2000) (Pascual et all 2000)


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Recuento de mohos y levaduras: Este recuento se realiza debido a que microorganismos como los mohos no solo generan el deterioro de los productos sino que pueden producir toxinas que al ser ingeridas por el humano y animales generan toxicidad, por otro lado las levaduras no generan daño en si al consumidor pero si al producto. El recuento se realiza con el fin de poder determinar la carga microbiológica de mohos y levaduras en el producto a investigar con una muestra representativa y así verificar la calidad del producto. (Pascual et all 2000)

6 OBJETIVOS Objetivo General Demostrar mediante las pruebas de enumeración y recuperación de los microorganismos especificos, que el método para análisis microbiológico de productos no estériles, de la USP vigente es apropiado para analizar los productos terminados de naturaleza semisólida, líquida, productos de uso vaginal y cápsulas de gelatina dura elaborados en Anglopharma S.A. Objetivos Específicos

• Realizar el recuento microbiano de mesófilos, mohos y levaduras para productos no estériles de naturaleza semisólida, líquida, productos vaginales y cápsula de gelatina dura.

• Verificar por pruebas de Ausencia/Presencia los microorganismos específicos para productos no estériles de naturaleza semisólida, líquida, productos vaginales y cápsula de gelatina dura.

• Verificar la aptitud del método según los criterios de aceptación y requisitos establecidos.


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METODOLOGÍA La metodología se fundamenta en el Capitulo <61> Examen microbiológico de productos no estériles. Pruebas de recuento microbiano de la USP 37 del año 2013. 1. Microorganismos Los microorganismos utilizados para el presente estudio son los establecidos por la USP vigente para cada tipo de producto evaluado. Los microorganismos que se van a utilizar para demostrar la aptitud del método son los siguientes:

• Mesófilos aeróbios Escherichia coli: ATCC 8739 Es una bacteria encontrada en las heces humanas y animales debido a que es microbiota natural del intestino grueso y delgado. Son bacilos Gram negativos, aerobio, móvil debido a sus flagelos peritricos y puede producir microcápsula. Su temperatura óptima de crecimiento es de 37 ºC. Por otro lado sus reacciones bioquímicas características son indol postivo, puede producir toxinas y es resistente a antibióticos. Su presencia indica contaminación por heces, ya que es el principal indicador de contaminación fecal. (Romero, 2007) (Castillo, 2005)

Staphylococcus aureus: ATCC 6538 Es un microorganismo que vive en las mucosas de humanos y animales. Son cocos Gram positivos, inmóviles y no forman esporas. Este microorganismo crece a temperaturas de 15-45 ºC. S. aureus es un microorganismo coagulasa positivo. Causa gran cantidad de infecciones en la piel como acné, infecciones en los folículos de los bellos entre otros, por otro lado también puede producir toxinas una vez se encuentre la infección en la piel y su presencia indica higiene defectuosa (Freeman et all 2006) (Pascual et all 2000). Pseudomonas aeruginosa: ATCC 9027 Es un microorganismo que puede encontrarse en gran diversidad de habitats como del suelo, agua, flores, frutas entre otros .(Paterson et all 2009) Son bacilos medianos Gram negativos, oxidasa positivo, su crecimiento se da en temperaturas de 37-42ºC. Las bioquimicas del microorganismo son citrato positivo, oxidasa positivo, L-arginina positivo, L-lisina descarboxilasa negativo, L-ornitina descarboxilasa negativo y no fermenta carbohidratos (Paterson et all 2009). Es un patógeno oportunista muy agresivo, presenta pilis los cuales facilitan su adherencia, sobrevive a ambientes desfavorables y es resistente a gran variedad de antibióticos (Forbes, 2007). Salmonella Typhimurium: ATCC 14028 Este es un microorganismo que se encuentra en el tracto gastrointestinal de mamiferos, aves, réptiles entre otros, y esta asociado a deficiencia en la calidad higiénica, ha

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causado salmonelosis por transferencia de alimentos contaminados a partir de leche, huevos, alimentos crudos o por deficiencia higiénica del manipulador (Durango, 2004). Hace parte de la familia de Enterobacterias, bacilos Gram negativos, móviles por flagelos perítricos, anaerobios facultativos, no producen esporas y tiene una temperatura óptima de crecimiento 35-37ºC. Es fermentadora de glucosa, no produce indol, no degradan urea, descarboxilan lisina y ornitina. Este microorganismo causa gastroenteritis aguda, cefaleas, diarreas, vómito, fiebre, entre otros. (Caffer, 2001) (Cabello, 2007)

• Mohos Aspergillus brasiliensis: ATCC 16404 Es un hongo microscópico filamentoso el cual se encuentra en el suelo, se pueden encontrar las esporas del moho en el polvo el cual es inhalado por el hombre y causa las enfermedades. La microscopia de A. brasiliensis son hifas tabicadas, conidióforos, fialides y conidios, puede crecer a temperaturas de 25 ºC a 30 ºC. La macroscopia por el cual se distingue el hongo es que en el anverso del medio de cultivo se observan colonias negras lanosas cuando esta maduro pero su pigmentación inicial es de color blanca y se torna amarillo terminando en negro y el reverso es de color beige sin pigmentos difusibles en el medio. Causa enfermedades en animales y humanos por tres formas diferentes: Hipersensibilidad causando desde rinitis hasta asma severa, Intoxicación debido aque se ingiere micotoxinas producidas por el hongo y por último Micosis la cual hace referencia a infección por invasión a organos o tejidos por parte del hongo como las aspergilosis pulmonar, queratitis, cutánea entre otros. (Koneman et all 2009) (Palacios et all 2005) (Méndez, 2012)

• Levaduras Candida albicans: ATCC 10231 Es un microorganismo que se puede encontrar en el tracto gastrointestianal y urogenital de hombres y mujeres, cavidad oral y en algunas ocasiones en piel y mucosas. Es una levadura asexual aunque algunas pueden ser sexuales, son parte de la microbiota bucal, pero también puede encontrarse en el tracto gastrointestinal, es acidófilo y acidogeno. El crecimiento de las colonias se observa en 24 horas en los medios de cultivo, las cuales son blancas, su consistencia es patosa o cremosa y son brillantes. Su temperatura de incubación es de 25 a 37ºC. La característica más importante para diferenciar a C. albicans es la producción de tubo germinal, clamidosporas y blastoconidios. Esta levadura causa candidiasis a nivel genitourinario, piel, organos y sangre. (Negroni, 2009) (Koneman et all 2008) (Agoulvant, 2007)

2. Medios de cultivo Para cada técnica y metodología a desarrollar se utilizan diferentes medios de cultivos armonizados que son especificados en la USP37.


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A continuación en la Tabla 1 se encuentran los medios de cultivo utilizados para el pre-enrriquecimiento de los microorganismos, la preparación de la muestra, y los medios utilizados para el recuento de microorganismos mesófilos, mohos y levaduras. Tabla 1. Medios de cultivo para preparación de muestra, pre-enrriquecimiento de microorganismos y recuento de mesófilos aerobios, mohos y levaduras.

Nombre Abreviatura Microorganismo Observaciones

Caldo Cloruro Sódico-Peptona CCS NA

Se utiliza como diluyente para preparar las muestras a analizar.

Caldo Casoy CC NA

Se utiliza como caldo de pre-enrriquecimiento para los microoganismos y en algunas ocasiones como diluyente para preparar muestras.

Agar Tripticasa de soya TSA Mesófilos aerobios

Se utiliza para el recuento de mesófilos aerobios.

Agar Dextrosa-Sabouraud SDA Mohos y

Levaduras

Se utiliza para el recuento de mohos y levaduras.

(USP, 2013) En la Tabla 2 se encuentran enunciados los medios de cultivo utilizados para la determinación de microroganismos especificos junto con las pruebas confirmatorias dependiendo si el microorganismo lo requiere o no. Tabla 2. Medios de cultivo para microorganismos especificos y pruebas confirmatorias

Nombre Abreviatura Microorganismo Observaciones Prueba confirmatoria

Agar Manitol Salado

AMS Staphylococcus aureus

Colonias de color amarillo.

Coagulasa: Para esta prueba se toma plasma de conejo liofilizado y se le agrega EDTA para reconstituirlo. Se pone en contacto con el microorganismo de interés y se debe observar la formación de un coagulo. (MacFaddin J, 2003)

Agar Acet Pseudomonas Colonias de color Oxidasa: Se toma una tira

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Cetrimida aeruginosa verde.

de oxidasa se pone en contacto con una colonia de interés. Positivo: Coloración purpura Negativo: Coloración amarilla (MacFaddin J, 2003)

Agar MacConkey AMack Escherichia coli

Colonias rosadas con precipitado de sales biliares alrededor de la colonia.

Indol: Esta prueba se realiza poniendo 2 o 3 colonias en caldo Triptofano y posterior se le agrega el Reactivo de Kovacs. Prueba positiva: Formación de un anillo en la parte superior del caldo de color rojo fucsia. Prueba negativa: No se observa formación del anillo del color indicado. (MacFaddin J, 2003)

Caldo MacConkey CMack Escherichia coli

Se utiliza como enrriquecimiento para el microorganismo, y su crecimiento se evidencia como turbidez en el medio.

NA

Agar Dextrosa

Sabouraud SDA Candida albicans

Se observa el crecimiento de colonias blancas

NA

Caldo Dextrosa

Sabouraud SDB Candida albicans

Se utiliza como enriquecimiento para el microorganismo, y su crecimiento se evidencia como turbidez en el medio.

NA

Caldo Rappaport Vassiliadis

CRV Salmonella typhimurium

Medio de enrriquecimiento selectivo .

NA


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Agar XLD AXLD Salmonella typhimurium

Medio selectivo y diferencial donde las colonias de Salmonella se observan de color rojo con centro negro por producción de H2S.

NA

(USP, 2013) 3. Reactivación de la cepa Preparación Buffer Fosfato

Solución Amortiguadora de Fosfato -Pesar 2,7 gramos de fosfato monobásico de potasio y completar a 100 mL con agua purificada. - A partir de una solución de NaOH 1 M tomar 10 mL y diluirlo en 50 mL de agua con el fin de obtener el NaOH a 0,2 M. Buffer pH 7,2 - Tomar 50 mL de la solución de fosfato monobásico de postasio y ponerla en un matraz volumétrico de 200 mL y agregar 34.7 mL de NaOH 0.2 M, con el fin de obtener un pH 7.2 y posterior agregar agua purificada para completar el volumen. Esterilizar en autoclave a 121ºC por 15 minutos.

EZ-CFU Antes de utilizar las pastillas liofilizadas y los fluidos hidratantes del microorganismo de interés se deben poner atemperar 30 minutos. Posterior al proceso de atemperamiento se procede a realizar la reactivación de la cepa la cual consisten en:

• Se toman dos pastillas liofilizadas y se agregan al fluido hidratante, se agitan homogeneamente y se llevan a incubación a 33ºC durante 30 minutos.

• Posterior al tiempo de incubación se toma una alicuota de 1 mL del homogenizado y se agrega en 9 mL del Buffer fosfato pH 7.2. La resuspensión de la cepa debe utilizarse dentro de los primeros treinta (30) minutos para garantizar la viabilidad del microorganismo.

EZ-CFU One Step Antes de utilizar las pastillas liofilizadas y los fluidos hidratantes del microorganismo de interés se deben poner atemperar 30 minutos. Posterior al proceso de atemperamiento se procede a realizar la reactivación de la cepa la cual consiste en:

• Se toman dos pastillas liofilizadas y se agregan al fluido hidratante se agitan homogeneamente y se llevan a incubación a 33ºC durante 30 minutos. La resuspensión de la cepa debe utilizarse dentro de los primeras ocho (8) horas para garantizar la viabilidad del microorganismo.

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ACCU-SHOT Antes de utilizar las pastillas liofilizadas y los fluidos hidratantes del microorganismo de interés se deben poner atemperar 30 minutos. Posterior al proceso de atemperamiento se procede a realizar la reactivación de la cepa la cual consiste en:

• Se toma el pellet de la cepa liofilizada y se agrega al fluido hidratante de 1,2 mL y seagita homogeneamente. La resuspensión de la cepa debe utilizarse dentro de los primeras ocho (8) horas para garantizar la viabilidad del microorganismo.

4. Productos a evaluar

Productos Semisólidos Los productos de naturaleza semisólida a evaluar son Piroxicam gel 0,5% e Hidrocortisona.

Piroxicam gel 0.5 %: Es un medicamento fabricado en Anglopharma S.A, el cual es un antiinflamatorio. Registro sanitario INVIMA 000875-R1. (PLM, 2013). Hidrocortisona crema 1%: Es un medicamento fabricado en Anglopharma S.A él cual sirve como terapia corticosteroide de la piel, viene en crema con 1% de hidrocortisona en un tubo de 15 g. Registro sanitario INVIMA 0009300. (PLM, 2013)

A tres lotes diferentes de cada producto se les realiza el recuento de mesófilos aerobios utilizando como microorganismo a Staphylococcus aureus, el recuento de mohos con Aspergillus brasiliensis y el recuento de levaduras con Candida albicans. Para las pruebas de Ausencia/Presencia se utilizaran como microorganismos específicos a Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa.

Productos líquidos Los productos de naturaleza líquida a evaluar son Ión K elixir 31,2%, Calymag suspensión menta, Naproxeno suspensión 3%, Ametrex jarabe 3% y Teolixir elixir 80mg/15mL.

Ametrex jarabe 3%: Este un medicamento analgésico, utilizado para estados febriles y aliviar dolores leves o moderados. Este jarabe viene con 150 mg de acetaminofén por 5 mL, el frasco viene en presentaciones de 120 mL y 60 mL. Registro sanitario INVIMA: 2010M-011381-R (Anglopharma S.A.)

Calymag suspensión menta: Este es un producto fabricado en Anglopharma S.A, el cual tiene efecto antiácido y antiflatulento. Este viene en frasco por 360 mL. Esta compuesto por hidróxido de aluminio, hidróxido de magnesio y simeticona. Registro sanitario INVIMA: 2010M-011213-R2 (Anglopharma S.A)

Ion K elixir 31,2%: Medicamento fabricado en Anglopharma S.A, el cual se utiliza contra las hipopotasemias, se prescribe para terapias prolongadas con diuréticos, corticosteroides, sueros salinos o glucosados. Viene un frasco con gluconato de potasio por 180 mL. Registro sanitario INVIMA 0006013 (PLM 2013)


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Naproxeno suspensión 3%: Medicamento antiinflamatorio y analgésico fabricado en Anglopharma S.A, él cual trae 3% de naproxeno. El frasco viene con 80 mL del producto. Registro sanitario INVIMA 0006403 (PLM 2013) Teolixir elixir 80 mg/15 mL: Es un medicamento broncodilatador antiasmático fabricado en Anglopharma S.A, el cual trae 80 mg de teofilina. Registro sanitario INVIMA 005999 (PLM 2013). A tres lotes diferentes de cada producto se les realiza el recuento de mesófilos aerobios utilizando como microorganismo a Escherichia coli, para el producto Teolixir elixir se realizara también recuento de Salmonella Typhimurium, el recuento de mohos con Aspergillus brasiliensis y el recuento de levaduras con Candida albicans. Para las pruebas de Ausencia/Presencia se utilizara como microorganismo específico a Escherichia coli, y al producto Teolixir elixir se utilizara como microorganismos especifico a Salmonella Typhimurium y Escherichia coli. Productos de uso vaginal El producto de uso vaginal a evaluar es Clotrimazol tableta vaginal 100 mg. Clotrimazol tableta vaginal 100 mg: Este es un antimicótico de uso vaginal contra la candidiasis vulvovaginal el cual es fabricado en Anglopharma S.A. Esta compuesto por 100 mg de clotrimazol. Registro sanitario INVIMA: 2006M-0003437 (Anglopharma S.A.) A tres lotes diferentes de este producto se les realiza el recuento de mesófilos aerobios utilizando como microorganismo a Staphylococcus aureus, el recuento de mohos con Aspergillus brasiliensis y el recuento de levaduras con Candida albicans. Para las pruebas de Ausencia/Presencia se utilizara como microorganismos específicos a Candida albicans, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Productos cápsula de gelatina dura El producto a evaluar de cápsula de gelatina dura es Veran D cápsulas. Veran D 20 mg: Es un medicamento que sirve como antiinflamatorio no esteroide, tiene propiedades analgésicas, antipiréticas y antirreumáticas. Este viene en cápsulas por 20 mg de piroxicam. Registro sanitario INVIMA M-012918- R1. (Anglopharma S.A 2009) (PLM 2013) A tres lotes diferentes del producto se les realiza el recuento de mesófilos aerobios utilizando como microorganismo a Escherichia coli, el recuento de mohos con Aspergillus brasiliensis y el recuento de levaduras con Candida albicans. Para las pruebas de Ausencia/Presencia se utilizara como microorganismo específico a Escherichia coli.

14 5. Preparación de la muestra Para la preparación de la muestra se toman 10 g o mL en total de las tres muestras de cada lote del producto a evaluar y se agregan a 90 mL de Caldo Cloruro Sódico con Polisorbato con el fin de mantener la proporción 1:10. Para el teolixir elixir se utiliza como diluyente Caldo Casoy debido a que adicionalmente se realiza prueba de presencia/ausencia de Salmonella Typhimurium. 6. Recuento de mesófilos aerobios Se toma un mililitro de la muestra (ver preparación de la muestra) y se transfiere a una caja de Petri vacía para el recuento en profundidad y posterior se le agrega 0,1 mL de la suspensión de la cepa reactivada (ver reactivación), se hace por duplicado.

- Se realiza un control positivo el cual contiene 1 mL del diluyente y 0,1 mL de la suspensión de la cepa reactivada, se realiza por duplicado. - Un control negativo el cual solo contiene 1 mL del diluyente. Se realiza por duplicado. Agregar Agar TSA fundido a una temperatura no superior a 45ºC después de haber realizado el paso anterior. Incubar a 30-35 ºC durante 3 o 4 días. Por último se realiza el recuento y se hace coloración de Gram. De acuerdo a los recuentos obtenidos se va a aplicar la siguiente formula:

% de Recuperación: de la muestra más cepa x 100

del control positivo 7. Recuento de mohos y levaduras Se toma un mililitro de la muestra (ver preparación de la muestra) y se transfiere a una caja de Petri vacía para el recuento en profundidad y posterior se le agrega 0,1 mL de la suspensión de la cepa reactivada (ver reactivación), se hace por duplicado.

- Se realiza un control positivo el cual contiene 1 mL del diluyente y 0,1 mL de la suspensión de la cepa reactivada, se realiza por duplicado. - Un control negativo el cual solo contiene 1 mL del diluyente. Se realiza por duplicado. Agregar Agar SDA fundido a una temperatura no superior a 45ºC después de haber realizado el paso anterior. Incubar a 20-25 ºC durante 5 a 7 días. Por último se realiza el recuento y se hace coloración de Gram.


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De acuerdo a los recuentos obtenidos se va a aplicar la siguiente formula:

% de Recuperación: de la muestra más cepa x 100

del control positivo 8. Prueba Presencia/Ausencia Pseudomonas aeruginosa

- A partir de la muestra (ver preparación), se toman 5 mL y se transfieren a 50 mL de Caldo Casoy y se agrega 0,1 mL de la cepa de los microorganismos específicos respectivos para cada producto a evaluar.

Se realiza un control positivo al cual se transfiere 5 mL del diluyente en vez de la muestra y 0,1 mL de la cepa reactivada a 50 mL de Caldo Casoy.

Se realiza un control negativo al cual se transfiere 5 mL del diluyente a 50 mL de Caldo Casoy. No se adiciona microorganismo.

Transferir 5 mL de la muestra preparada

Agregar 0,1 mL de la cepa reactivada

Incubar 30-35 ºC durante 24-48 horas.

50 mL Caldo Casoy

Transferir 5 mL de caldo casoy



50 mL Caldo Casoy



16

Posterior al tiempo de incubación:

- Se realiza un subcultivo en Agar Cetrimida de la muestra de Caldo Casoy. - Se realiza un subcultivo en Agar Cetrimida del control positivo de Caldo Casoy. - Se realiza un subcultivo en Agar Cetrimida del control negativo de Caldo Casoy. - Incubar la muestra, control positivo y control negativo de 30-35ºC durante 24-48

horas. Staphylococcus aureus







50 mL Caldo Casoy




50 mL Caldo Casoy



50 mL Caldo Casoy


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- Se realiza un subcultivo en Agar Manitol Salado de la muestra de Caldo Casoy. - Se realiza un subcultivo en Agar Manitol Salado del control positivo de Caldo Casoy. - Se realiza un subcultivo en Agar Manitol Salado del control negativo de Caldo Casoy. - Incubar la muestra, control positivo y control negativo de 30-35ºC durante 24-48

horas. Escherichia coli:







50 mL Caldo Casoy




50 mL Caldo Casoy



50 mL Caldo Casoy

18

Posterior al tiempo de incubación :

- Se transfieren 5 mL de Caldo Casoy con la muestra a 50 mL de Caldo MacConkey.

Muestra + Cepa

Se transfiere 5 mL del control positivo de Caldo Casoy a 50 mL de Caldo MacConkey. Control Positivo

- Se transfiere 5 mL del control negativo de Caldo Casoy a 50 mL de Caldo MacConkey. Control negativo

- Incubar muestra, control positivo y control negativo de 40 a 45 ºC durante 24-48 horas. Posterior al tiempo de incubación:

- Se realiza un subcultivo en Agar MacConkey de la muestra de Caldo MacConkey. - Se realiza un subcultivo en Agar MacConkey del control positivo de Caldo

MacConkey. - Se realiza un subcultivo en Agar MacConkey del control negativo de Caldo

MacConkey. - Incubar la muestra, control positivo y control negativo de 30-35ºC durante 24-48

horas.


Anglopharma S.A 19

Salmonella Typhimurium: De acuerdo a la metodología para Salmonella el medio de enrriquecimiento de la muestra es el caldo casoy debido a que no requiere de dilución previa en Caldo Cloruro Sódico .

- Se realizo la preparación de la muestra añadiendo 10 mL en total tomando de las tres muestras de cada lote del producto a evaluar en 90 mL de Caldo Casoy, a la cual se le añadio 0,1 mL de la cepa.

- Se realizo un control positivos al cual se agregan 10 mL de Caldo Casoy a 90 mL de Caldo Casoy y se añadio 0,1 mL de la cepa.

- Se realizo un control negativo al cual se agregan 10 mL de Caldo Casoy a 90 mL de

Caldo Casoy. No se adiciona microorganismo.

.

Transferir 10 mL en total de las tres muestras del lote



90 mL Caldo Casoy

Transferir 10 mL de Caldo Casoy



90 mL Caldo Casoy

Transferir 10 mL en total de las tres muestras del lote


90 mL Caldo Casoy

20


- Se agregan 0,1 mL de la muestra en Caldo Casoy a 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis.

- Se agregan 0,1 mL del control positivo de Caldo Casoy a 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis.

- Se agregan 0,1 mL del control negativo a 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis - Se incuba la muestra, el control positivo y el control negativo por 24 horas de 30-35º.


- Se realiza un subcultivo en Agar XLD de la muestra de Caldo Rappaport Vassiliadis. - Se realiza un subcultivo en Agar XLD del control positivo de Caldo Rappaport

Vassiliadis. - Se realiza un subcultivo en Agar XLD del control negativo de Caldo Rappaport

Vassiliadis. - Incubar la muestra, control positivo y control negativo de 30-35ºC durante 24-48

horas.

Candida albicans - Se realizo la preparación de la muestra añadiendo 10 g en total tomando de las tres

muestras de cada lote del producto a evaluar en 90 mL de Caldo Dextrosa Sabouraud, a la cual se le añadio 0,1 mL de la cepa.

-

- Se realizo un control positivos al cual se agregan 10 mL de Caldo Dextrosa Sabouraud

a 90 mL de Caldo Dextrosa Sabouraud y se añadio 0,1 mL de la cepa. -

- Se realizo un control negativo al cual se agregan 10 mL de Caldo Dextrosa Sabouraud a

90 mL de Caldo Dextrosa Sabouraud. No se adiciona microorganismo.

Transferir 10 g en total de las tres muestras del lote



90 mL Caldo Dextrosa Sabouraud

Transferir 10 mL de Caldo Dextrosa Sabouraud





Anglopharma S.A 21

-


- Se realiza un subcultivo en Agar Dextrosa Sabouraud de la muestra de Caldo Dextrosa Sabouraud

- Se realiza un subcultivo en Agar Dextrosa Sabouraud del control positivo de Caldo Dextrosa Sabouraud.

- Se realiza un subcultivo en Agar Dextrosa Sabouraud del control negativo de Caldo Dextrosa Sabouraud.

- Incubar la muestra, control positivo y control negativo de 30-35ºC durante 24-48 horas.

Se verifica la Presencia o la Ausencia del microorganismo y si el microorganismo lo requiere, se realizan pruebas de confirmación. Ver Tabla 2.

- Presencia: Crecimiento del microorganismo de interés con las caracteristicas para cada medio de cultivo.

- Ausencia: No se observo crecimiento, o no se observo crecimiento del microorganismo con las caracteristicas para cada medio.

9. Criterios de aceptación La verificación de la aptitud del método se considera satisfactoriamente calificado o verificado si:

• Las coloraciones de Gram y la morfología de la colonia corresponden a los microoganismos inoculados.

• No hay crecimiento en los controles negativos. • El número promedio de UFC recuperadas en las cajas de petri de muestra no difieren

en mas de un factor de 2 (es decir 50-200%) del promedio de UFC recuperadas en las cajas de petri de los controles positivos para cada microorganismo usado.

Estos criterios aceptación estan de acuerdo al capitulo <61> de la USP 37 de 2013.

Transferir 10 mL de Caldo Dextrosa Sabouraud



22 RESULTADOS Los resultados obtenidos para el recuento de mesófilos aerobios, mohos y levaduras, y los microorganismos especificos a partir de la metodología desarrollada para los productos de naturaleza líquida, se encuentran enunciados en el Anexo 1:

• Ion K elixir 31,2% • Ametrex jarabe 3% • Naproxeno suspensión al 3% • Calymag suspensión menta • Teolixir elixir 80 mg/15 mL

Para los resultados obtenidos en el recuento de mesófilos aerobios, mohos y levaduras y los microorganismos especificos a partir de la metodología desarrollada para los productos de naturaleza semisólida, se encuentran enunciado en el Anexo 2:

• Hidrocortisona crema al 1% • Piroxicam gel 0,5%

Los resultados obtenidos en el recuento de mesófilos aerobios, mohos y levaduras y los microorganismos especificos a partir de la metodología desarrollada para el producto de naturaleza sólida de uso vaginal, se encuentra enunciado en el Anexo 3:

• Clotrimazol tableta vaginal 100 mg Por último, los resultados obtenidos para el recuento de mesófilos aerobios, mohos y levaduras y los microorganismos especificos a partir de la metodología desarrollada para el producto de cápsula de gelatina dura, se encuentra enunciado en el Anexo 4:

• Veran D cápsulas 20 mg


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DISCUSIÓN DE RESULTADOS Se realizó la metodología establecida con el fin de verificar si la técnica es confiable para el análisis microbiológico de productos terminados no estériles de naturaleza semisólida, líquida, cápsulas de gelatina dura y de uso vaginal fabricados en Anglopharma S.A. Para los productos de naturaleza líquida se desarrollo la ténica establecida a 5 productos, los cuales fueron Ion K elixir, Ametrex jarabe, Naproxeno suspensión, Teolixir elixir y Calymag suspensión menta cada uno con tres lotes, para un total de 15 muestras analizadas. Estos cinco productos evaluados se escogieron debido a la alta rotación y fabricación que se presenta en la empresa. Los resultados se encuentran enunciados en el Anexo 1, donde se pueden observar los porcentajes de recuperación obtenidos para el recuento de mesófilos aerobios, mohos y levaduras de cada producto y las pruebas para microorganismos especificos. De acuerdo, a los porcentajes de recuperación obtenidos para mesófilos aerobios, mohos y levaduras, se puede observar que los 5 productos evaluados se encuentran dentro de los criterios de aceptación establecidos en la USP 37, debido a que los promedios de las muestras no difieren en mas de un factor de dos con respecto a los controles positivos, dando como resultado un porcentaje de recuperación superior al 50% e inferior a 200%. Por otro lado, para las pruebas de microorganismos especificos se recuperaron los microorganismos evaluados para cada producto, cumpliendo con los criterios de aceptación establecidos donde se observo la Presencia de los microorganismos. En agar MacConkey se observaron colonias de color rojo por la fermetanción de la lactosa la cual baja el pH del medio precipitando las sales biliares, las cuales se identificaron por un halo rosado difuso alrededor de la colonia, al observar la coloración de Gram se identificaron bacilos cortos Gram negativos, se realizo la prueba de Indol la cual resulto positiva para este microorganismo ya que se observo la formación de una coloración rojo cereza la cual se forma debido a que el microorgnismo hidroliza y desamina el triptofano produciendo indol el cual reacciona con el reactivo de Kovacs, estos resultados se compararon con la literatura garantizano la recuperación de Escherichia coli (Koneman et all, 2008) (Pascual, 2000). En el agar XLD se observo el crecimiento de colonias negras debido a la producción de H2S y al realizar la tinción de las colonias se observaron bacilos Gram negativos, las cuales son caracteristicas de Salmonella Typhimurium que al ser comparadas con la literatura corroboro la presencia del microorganismo en estudio (BD, 2013). Al obtener estos resultados, indica que las pruebas de enumeración que se realiza para el control de calidad microbiológico en Anglopharma S.A, es la apropiada para la recuperación de Escherichia coli para los productos Ion K elixir, Ametrex jarabe, Naproxeno suspensión, Teolixir elixir y Calymag suspensión menta, además garantiza la recuperación de Salmonella Typhimurium para Teolixir elixir, para el recuento de mesófilos aerobios y como microorganismo especifico. Por otro lado, garantiza la recuperación de Aspergillus brasiliensis para el recuento de mohos y Candida albicans para el recuento de levaduras para los productos Ion K elixir, Ametrex jarabe, Naproxeno suspensión, Teolixir elixir y Calymag suspensión menta. Al haber obtenido satisfactoriamente la recuperación de estos microorganismos indica que estos medicamentos son suceptibles a contaminación por microorganismos patógenos como Esherichia coli, Salmonella Typhimurium, Candida albicans y Aspergillus brasiliensis por lo cual se

24 recomienda monitorear estos microorganismos en cada lote de cada producto analizado, como lo especifica la USP. Los resultados de los productos de naturaleza semisólida, los cuales fueron Piroxicam gel e Hidrocortisona crema, se encuentran enunciados en el Anexo 2. A cada producto se le analizaron tres lotes, para un total de 6 muestras analizadas. Estos productos se escogieron debido a la alta rotación y fabricación en la empresa. Como se puede observar, los resultados obtenidos para el porcentaje de recuperación de recuento de mesófilos aerobios, mohos y levaduras de los dos productos analizados se encuentran dentro de los criterios de aceptación establecidos por la USP 37 los cuales fueron enunciados anteriormente. Por otro lado, se puede observar que en las pruebas para microorganismos especificos se recuperaron satisfactoriamente los microorganismos en estudio para cada producto los cuales fueron Staphylococcus auerus y Pseudomonas aeruginosa. Se garantiza la presencia de los microorganismos debido a las caracteristicas que presentaron en los respectivos medios de cultivo, donde Staphylococcus aureus en agar manitol salado presento crecimiento de colonias amarillas por fermentación del manitol, al realizar la coloración Gram se observaron cocos Gram positivos y como prueba especifica se realizo coagulasa a la colonias presuntivas dando positivo para la prueba, al comparar los resultados con la literatura se corroboro la presencia de Staphylococcus aureus. (Hernandez et all, 2003) Pseudomonas aeruginosa presento colonias de color azul verdoso en agar cetrimida debido a los componentes del medio, los cuales promueven la formación de pigmentos como la piocianina, en la coloración de Gram se observaron bacilos Gram negativos y por último se realizo la prueba de oxidasa la cual dio positivo para el microorganismo, al comparar los resultados obtenidos con la literatura se corroboro que el microorganismo presente era P. aeruginosa (Pascual M, 2000). Al analizar los resultados obtenidos, se determino que las pruebas de enumeración y recuperación son la apropiadas para el control de calidad microbiológico, para los productos de naturaleza semisólida, Piroxicam gel e Hidrocortisona crema fabricados en Anglopharma S.A y que garantiza la recuperación de Staphylococcus aureus para recuento de mesófilos aerobios y para la prueba de microorganismos especificos junto con Pseudomonas aeruginosa. Adicionalmente, garantiza la recuperación de Aspergillus brasiliensis para el recuento de mohos y Candida albicans para el recuento de levaduras; además los medios de cultivo evaluados para realizar la prueba garantizan la recuperación de estos microorganismos tanto para los recuentos de mesófilos aerobios, mohos y levaduras como para los microorganismos especificos, proporcionando los nutrientes necesarios para su desarrollo. Por lo tanto, se deduce que al haberse observado satisfactoriamente el crecimiento de estos microorganismos, se deben monitorear en cada lote de Hidrocortisona crema y en cada lote de Piroxicam gel puesto que los productos son suceptibles a contaminación por estos microorganismos patógenos. Para el análisis de productos de naturaleza sólida de uso vaginal se escogió el produto Clotrimazol tableta vaginal, al cual se analizaron tres lotes diferentes. En el Anexo 3 se pueden observar los resultados de los porcentajes de recuperación para Staphylococcus aureus para el recuento de mesófilos aerobios, Aspergillus brasiliensis para el recuento de mohos y Candida albicans para el recuento de levaduras y los resultados obtenidos para las pruebas de microorganismos especificos las cuales se realizaron con los microorganismos Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans. Como se puede observar, los porcentajes de recuperación de Staphylococcus aureus para los tres lotes analizados de Clotrimazol tableta vaginal, se encuentran dentro de los criterios de


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aceptación establecidos, adicionalmente se realizo con este microorganismo y con Pseudomonas aeruginosa la prueba para microorganismos especificos, obteniendo la recuperación satisfactoria de los dos microorganismos por la técnica establecida. Estos resultados indican que la técnica garantiza la recuperación de Staphylococcus aureus por lo cual se recomienda realizar el monitoreo de este microorganismo para el recuento de mesófilos aerobios y junto a Pseudomonas aeruginosa como microorganismos especificos. Para los microorganismos Candida albicans y Aspergillus brasiliensis se obtuvieron porcentajes de recuperación de 0% lo cual indica que el principio activo clotrimazol no permite el crecimiento y recuperación de estos microorganismos, además en la prueba para microorganismos especificos no se recupero Candida albicans. En los controles positivos se observo el crecimiento de los microorganismos tanto en el recuento de levaduras y en el de mohos como en la prueba para microorganismos especificos, los cuales al comparar con la literaturatura presentaron las caracteristicas macroscópicas propias de cada microorganismo en el medio de cultivo, al obsevar la coloracion de Gram se evidenciaron levaduras en gemación para Candida albicans y se observo en la coloración de azul de lactofenol para Aspergillus brasiliensis conidios hialinos, conidioforos e hifas hialinas. (Mier, et all 2002) (Koneman, et all 2008) El clotrimazol es un antifúngico sintético del grupo de los azoles, el cual actúa sobre la producción de ergosterol de la membrana celular del hongo debido a que inactivan la enzima C-14-alfa-dimetilasa, la falta de ergosterol ocasionara que el hongo deje de crecer aumentando la permeabilidad de la membrana y se acumulen esteroles tóxicos (Gregori B, 2005). De acuerdo a esta información y los resultados obtenidos, se recomienda realizar un monitoreo aleatorio de los lotes de Clotrimazol tableta vaginal para los microorganismos Aspergillus brasiliensis y Candida albicans. Por último, se realizo el análisis a un producto de cápsula de gelatina de Anglopharma S.A el cual fue Veran D cápsulas, de los cuales se tomaron tres lotes de cada producto para realizar el estudio. Los resultados obtenidos para este estudio se encuentran enunciados en el Anexo 4, donde se pueden evidenciar los porcentajes de recuperación obtenidos para el recuento de mesófilos aerobios el cual se realizó con Escherichia coli además este microorganismo también se utilizo para la técnica de microorganismos especificos, por otra parte se pueden observar los porcentajes de recuperación de Aspergillus brasiliensis para el recuento de mohos y Candida albicans para el recuento de levaduras. Como se puede evidenciar, se recuperaron satisfactoriamente los microorganismos en estudio indicando que la técnica y los medios de cultivo proporcionan las condiciones para el desarrollo adecuado de los microorganismos patógenos evaluados, por otro lado el producto es suceptible a contaminación por los microorganismos evaluados, por lo cual se recomienda realizar un montireo a cada lote de Veran D cápsulas con el fin de verificar la calidad microbiológica del producto con respecto a estos microorganismos patógenos, como lo especifica la USP.

26 CONCLUSIONES

• Se pudo demostrar mediante las pruebas de enumeración y recuperación de los microorganismos específicos, que el método para el análisis microbiológico de productos no estériles de la USP vigente, es apropiado para analizar los productos terminados de naturaleza semisólida, líquida, de uso vaginal y cápsulas de gelatina dura elaborados en Anglopharma S.A.


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Anexo 1

PRODUCTO: ION K ELIXIR 31,2%

1. Método de recuento de Mesófilos aerobios 1.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 3. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Ion K elixir

Producto Lote Microorganismo <100 UFC/0,1 mL

X UFC del mo* la muestra X 100

X en UFC del mo del Control +)

Porcentaje de recuperación Concepto

Ion K elixir 1301 Escherichia coli 30 UFC/36 UFC x 100 83% Cumple Ion K elixir 1302 Escherichia coli 19 UFC/21 UFC x 100 90% Cumple Ion K elixir 1306 Escherichia coli 33 UFC/30 UFC x 100 110% Cumple Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 2. Método de recuento de Mohos 2.1 Cepa utilizada: Nombre: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Fecha de expiración: 13-12-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 4. Porcentaje de recuperación del recuento de Mohos en Ion K elixir





Ion K elixir 1301 Aspergillus brasiliensis 26 UFC/26 UFC x 100 100% Cumple Ion K elixir 1302 Aspergillus brasiliensis 35 UFC/30 UFC x 100 116% Cumple Ion K elixir 1306 Aspergillus brasiliensis 27 UFC/29 UFC x 100 93% Cumple Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 3. Método de recuento de Levaduras 3.1 Cepa utilizada: Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 5. Porcentaje de recuperación del recuento de levaduras en Ion K elixir





Ion K elixir 1301 Candida albicans 19 UFC/18 UFC x 100 105% Cumple Ion K elixir 1302 Candida albicans 34 UFC/31 UFC x 100 109% Cumple Ion K elixir 1306 Candida albicans 32 UFC/33 UFC x 100 96% Cumple Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200%

30 4. Pruebas de microorganismos especificos 4.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 6. Reporte de Presencia/Ausencia de Escherichia coli como microorganismo especifico en Ion K elixir

Producto Lote Microorganismo Presencia/Ausencia Coloración de Gram Prueba

confirmatoria Concepto

Ion K elixir 1301 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple Ion K elixir 1302 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple Ion K elxiir 1306 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple

PRODUCTO: AMETREX JARABE 3%

1. Método de recuento de Mesófilos aerobios 1.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 7. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Ametrex jarabe 3%





Ametrex jarabe 3% 1311 Escherichia coli 29 UFC/23 UFC x 100 126% Cumple Ametrex jarabe 3% 1313 Escherichia coli 35 UFC/30 UFC x 100 116% Cumple Ametrex jarabe 3% 1314 Escherichia coli 34 UFC/30 UFC x 100 113% Cumple

Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 2. Método de recuento de Mohos 2.1 Cepa utilizada: Nombre: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Fecha de expiración: 13-12-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 8. Porcentaje de recuperación del recuento de Mohos en Ametrex jarabe 3%


X UFC del mo la muestra X 100



Ametrex jarabe 3% 1311 Aspergillus brasiliensis 36 UFC/32 UFC x 100 112% Cumple Ametrex jarabe 3% 1313 Aspergillus brasiliensis 31 UFC/30 UFC x 100 103% Cumple Ametrex jarabe 3% 1314 Aspergillus brasiliensis 30 UFC/29 UFC x 100 103% Cumple

Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200%


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3. Método de recuento de Levaduras 3.1 Cepa utilizada: Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 9. Porcentaje de recuperación del recuento de levaduras en Ametrex jarabe 3%.





Ametrex jarabe 3% 1311 Candida albicans 20 UFC/17 UFC x 100 117% Cumple Ametrex jarabe 3% 1313 Candida albicans 30 UFC/28 UFC x 100 107% Cumple Ametrex jarabe 3% 1314 Candida albicans 29 UFC/26 UFC x 100 111% Cumple

Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 4. Pruebas de microorganismos especificos 4.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 10. Reporte de Presencia/Ausencia de Escherichia coli como microorganismo especifico en Ametrex jarabe 3%

Producto Lote Microorganismo Presencia/Ausencia Coloración de Gram Prueba

confirmatoria Concepto

Ametrex jarabe 3% 1311 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple



PRODUCTO: NAPROXENO SUSPENSIÓN AL 3%

1. Método de recuento de Mesófilos aerobios 1.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 11. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Naproxeno suspensión 3%





Naproxeno susp 3% 1302 Escherichia coli 17 UFC/15 UFC x 100 113% Cumple


32



2. Método de recuento de Mohos2.1 Cepa utilizada: Nombre: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Fecha de expiración: 13-12-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL

Tabla 12. Porcentaje de recuperación del recuento de Mohos en Naproxeno suspensión 3%

Producto Lote Microorganismo<100 UFC/0,1 mL



Porcentaje derecuperación Concepto

Naproxeno susp 3% 1302 Aspergillus brasiliensis 38 UFC/37 UFC x 100 102% Cumple




3. Método de recuento de Levaduras3.1 Cepa utilizada: Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL

Tabla 13. Porcentaje de recuperación del recuento de levaduras en Naproxeno suspensión 3%.





Naproxeno susp 3% 1302 Candida albicans 32 UFC/34 UFC x 100 94% Cumple




4. Pruebas de microorganismos especificos4.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL


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Tabla 14. Reporte de Presencia/Ausencia de Escherichia coli como microorganismo especifico en Naproxeno suspensión 3% Producto Lote Microorganismo Presencia/

Ausencia Coloración de Gram Prueba confirmatoria Concepto

Naproxeno susp 3% 1302 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple



PRODUCTO: CALYMAG SUSPENSIÓN MENTA

1. Método de recuento de Mesófilos aerobios 1.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 15. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Calymag suspensión menta





Calymag susp menta 1320 Escherichia coli 18 UFC/19 UFC x 100 95% Cumple Calymag susp menta 1325 Escherichia coli 19 UFC/18 UFC x 100 105% Cumple Calymag susp menta 1329 Escherichia coli 21 UFC/21 UFC x 100 100% Cumple

Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 2. Método de recuento de Mohos 2.1 Cepa utilizada: Nombre: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Fecha de expiración: 13-12-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 16. Porcentaje de recuperación del recuento de Mohos en Calymag suspensión menta





Calymag susp menta 1320 Aspergillus brasiliensis 28 UFC/31 UFC x 100 90% Cumple Calymag susp menta 1325 Aspergillus brasiliensis 32 UFC/28 UFC x 100 114% Cumple Calymag susp menta 1329 Aspergillus brasiliensis 33 UFC/29 UFC x 100 113% Cumple


34 3. Método de recuento de Levaduras 3.1 Cepa utilizada: Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 17. Porcentaje de recuperación del recuento de levaduras en Calymag suspensión menta.





Calymag susp menta 1320 Candida albicans 32 UFC/27 UFC x 100 118% Cumple Calymag susp menta 1325 Candida albicans 28 UFC/27 UFC x 100 103% Cumple Calymag susp menta 1329 Candida albicans 31 UFC/25 UFC x 100 124% Cumple

Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 4. Pruebas de microorganismos especificos 4.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 18. Reporte de Presencia/Ausencia de Escherichia coli como microorganismo especifico en Calymag suspensión menta Producto Lote Microorganismo Presencia/


Calymag susp menta 1320 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple



PRODUCTO: TEOLIXIR ELIXIR 80 mg/15 mL

1. Método de recuento de Mesófilos aerobios 1.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 19. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Teolixir elixir





Teolixir elixir 1309 Escherichia coli 17 UFC/19 UFC x 100 89% Cumple Teolixir elixir 1311 Escherichia coli 17 UFC/16 UFC x 100 106% Cumple Teolixir elixir 1314 Escherichia coli 21 UFC/20 UFC x 100 105% Cumple



Anglopharma S.A 35

1.2 Cepa utilizada: Nombre: Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Fecha de expiración: 14-05-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 20. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Teolixir elixir





Teolixir elixir 1309 Salmonella Typhimurium 38 UFC/34 UFC x 100 111% Cumple Teolixir elixir 1311 Salmonella Typhimurium 35 UFC/31 UFC x 100 112% Cumple Teolixir elixir 1314 Salmonella Typhimurium 34 UFC/30 UFC x 100 113% Cumple Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 2. Método de recuento de Mohos 2.1 Cepa utilizada: Nombre: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Fecha de expiración: 13-12-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 21. Porcentaje de recuperación del recuento de Mohos en Teolixir elixir





Teolixir elixir 1309 Aspergillus brasiliensis 30 UFC/30 UFC x 100 100% Cumple Teolixir elixir 1311 Aspergillus brasiliensis 31 UFC/29 UFC x 100 106% Cumple Teolixir elixir 1314 Aspergillus brasiliensis 22 UFC/25 UFC x 100 88% Cumple

Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 3. Método de recuento de Levaduras 3.1 Cepa utilizada: Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 22. Porcentaje de recuperación del recuento de levaduras en Calymag suspensión menta.





Teolixir elixir 1309 Candida albicans 17 UFC/15 UFC x 100 113% Cumple Teolixir elixir 1311 Candida albicans 37 UFC/33 UFC x 100 112% Cumple Teolixir elixir 1314 Candida albicans 17 UFC/16 UFC x 100 106% Cumple


36 4. Pruebas de microorganismos especificos 4.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Nombre: Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Fecha de expiración: 14-05-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 23. Reporte de Presencia/Ausencia de Escherichia coli como microorganismo especifico en Teolixir elixir Producto Lote Microorganismo Presencia/


Teolixir elixir 1309 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple Teolixir elixir 1311 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple Teolixir elixir 1314 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple Tabla 23. Reporte de Presencia/Ausencia de Salmonella Typhimurium como microorganismo especifico en Teolixir elixir Producto Lote Microorganismo Presencia/Ausencia Coloración de Gram Concepto

Teolixir elixir 1309 Salmonella Typhimurium Presencia Bacilos Gram negativos Cumple Teolixir elixir 1311 Salmonella Typhimurium Presencia Bacilos Gram negativos Cumple Teolixir elixir 1314 Salmonella Typhimurium Presencia Bacilos Gram negativos Cumple


Anglopharma S.A 37

ANEXO 2 PRODUCTO: PIROXICAM GEL 0,5%

1. Método de Recuento de Mesófilos aerobios 1.1 Cepa Utilizada: Staphylococcus aureus ATCC 6358 Fecha de Expiración: 14-08-31 Inóculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 24. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Piroxicam gel 0,5%





Piroxicam gel 0,5% 1305 Staphylococcus aureus 35 UFC/32 UFC x 100 100% Cumple Piroxicam gel 0,5% 1307 Staphylococcus aureus 27 UFC/29 UFC x 100 93% Cumple Piroxicam gel 0,5% 1309 Staphylococcus aureus 34 UFC/35 UFC x 100 97% Cumple Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 2. Método de recuento de Mohos 2.1 Cepa utilizada: Nombre: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Fecha de expiración: 13-12-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 25. Porcentaje de recuperación del recuento de Mohos en Piroxicam gel 0,5%





Piroxicam gel 0,5% 1305 Aspergillus brasiliensis 18 UFC/17 UFC x 100 106% Cumple Piroxicam gel 0,5% 1307 Aspergillus brasiliensis 39 UFC/38 UFC x 100 103% Cumple Piroxicam gel 0,5% 1309 Aspergillus brasiliensis 34 UFC/31 UFC x 100 110% Cumple Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 3. Método de recuento de Levaduras 3.1 Cepa utilizada: Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 26. Porcentaje de recuperación del recuento de levaduras en Piroxicam gel 0,5%.





Piroxicam gel 0,5% 1305 Candida albicans 20 UFC/21 UFC x 100 95% Cumple Piroxicam gel 0,5% 1307 Candida albicans 16 UFC/15 UFC x 100 106% Cumple Piroxicam gel 0,5% 1309 Candida albicans 15 UFC/16 UFC x 100 93% Cumple Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200%

38 4. Pruebas de microorganismos especificos 4.1 Cepa utilizada: Nombre: Staphylococcus aureus ATCC 6358 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Nombre: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Fecha de expiración: 14-02-28 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 27. Reporte de Presencia/Ausencia de Staphylococcus aureus como microorganismo especifico en Piroxicam gel 0,5% Producto Lote Microorganismo Presencia/


Piroxicam gel 0,5% 1305 Staphylococcus aureus Presencia Cocos Gram positivos Coagulasa

positivo Cumple


positivo Cumple


positivo Cumple

Tabla 28. Reporte de Presencia/Ausencia de Pseudomonas aeruginosa como microorganismo especifico en Piroxicam gel 0,5% Producto Lote Microorganismo Presencia/


Piroxicam gel 0,5% 1305 Pseudomonas

aeruginosa Presencia Bacilos Gram negativos Oxidasa positivo Cumple





PRODUCTO: HIDROCORTISONA CREMA AL 1%

1. Método de Recuento de Mesófilos aerobios 1.1 Cepa Utilizada: Staphylococcus aureus ATCC 6358 Fecha de Expiración: 14-08-31 Inóculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 29. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Hidrocortisona crema al 1%





Hidrocortisona crema 1% 1313 Staphylococcus aureus 25 UFC/30 UFC x 100 83% Cumple





Anglopharma S.A 39

2. Método de recuento de Mohos 2.1 Cepa utilizada: Nombre: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Fecha de expiración: 13-12-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 30. Porcentaje de recuperación del recuento de Mohos en Piroxicam gel 0,5%





Hidrocortisona crema 1% 1313 Aspergillus brasiliensis 39 UFC/38 UFC x 100 103% Cumple



Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 3. Método de recuento de Levaduras 3.1 Cepa utilizada: Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 31. Porcentaje de recuperación del recuento de levaduras en Piroxicam gel 0,5%.


X UFC del mo la muestra X 100



Hidrocortisona crema 1% 1313 Candida albicans 21 UFC/27 UFC x 100 77% Cumple



Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 4. Pruebas de microorganismos especificos 4.1 Cepa utilizada: Nombre: Staphylococcus aureus ATCC 6358 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Nombre: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Fecha de expiración: 14-02-28 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL

40 Tabla 32. Reporte de Presencia/Ausencia de Staphylococcus aureus como microorganismo especifico en Hidrocortisona crema 1% Producto Lote Microorganismo Presencia/


Hidrocortisona crema 1% 1313 Staphylococcus aureus Presencia Cocos Gram positivos Coagulasa

positivo Cumple


positivo Cumple


positivo Cumple

Tabla 33. Reporte de Presencia/Ausencia de Pseudomonas aeruginosa como microorganismo especifico en Hidrocortisona crema 1% Producto Lote Microorganismo Presencia/


Hidrocortisona crema 1% 1313 Pseudomonas







Anglopharma S.A 41

ANEXO 3

PRODUCTO: CLOTRIMAZOL TABLETA VAGINAL 100 mg

1. Método de Recuento de Mesófilos aerobios 1.1 Cepa Utilizada: Staphylococcus aureus ATCC 6358 Fecha de Expiración: 14-08-31 Inóculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 34. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Clotrimazol tableta vaginal





Clotrimazol tab. vaginal 1303 Staphylococcus aureus 27 UFC/26 UFC x 100 103% Cumple



Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 2. Método de recuento de Mohos 2.1 Cepa utilizada: Nombre: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Fecha de expiración: 13-12-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 35. Porcentaje de recuperación del recuento de Mohos en Clotrimazol tableta vaginal





Clotrimazol tab. vaginal 1303 Aspergillus brasiliensis 0 UFC/39 UFC x 100 0% Cumple

Clotrimazol tab. vaginal 1304 Aspergillus brasiliensis 0 UFC/41 UFC x 100 0% Cumple

Clotrimazol tab. vaginal 1305 Aspergillus brasiliensis 0 UFC/ 20 UFC x 100 0% Cumple

Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 3. Método de recuento de Levaduras 3.1 Cepa utilizada: Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL

42 Tabla 36. Porcentaje de recuperación del recuento de levaduras en Piroxicam gel 0,5%.





Clotrimazol tab. vaginal 1303 Candida albicans 0 UFC/33 UFC x 100 0% Cumple

Clotrimazol tab. vaginal 1304 Candida albicans 0 UFC/35 UFC x 100 0% Cumple

Clotrimazol tab. vaginal 1305 Candida albicans 0 UFC/ 10 UFC x 100 0% Cumple

Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200% 4. Pruebas de microorganismos especificos 4.1 Cepa utilizada: Nombre: Staphylococcus aureus ATCC 6358 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Nombre: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Fecha de expiración: 14-02-28 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL Tabla 37. Reporte de Presencia/Ausencia de Staphylococcus aureus como microorganismo especifico en Clotrimazol tableta vaginal Producto Lote Microorganismo Presencia/


Clotrimazol tab. vaginal 1303 Staphylococcus aureus Presencia Cocos Gram positivos Coagulasa

positivo Cumple


positivo Cumple


positivos Cumple

Tabla 38. Reporte de Presencia/Ausencia de Pseudomonas aeruginosa como microorganismo especifico en Clotrimazol tableta vaginal Producto Lote Microorganismo Presencia/


Clotrimazol tab. vaginal 1303 Pseudomonas







Anglopharma S.A 43

Tabla 39. Reporte de Presencia/Ausencia de Candida albicans como microorganismo especifico en Clotrimazol tableta vaginal

Producto Lote Microorganismo Presencia/Ausencia

Coloración de Gram Control Positivo Concepto

Clotrimazol tab. vaginal 1303 Candida albicans Ausencia Levaduras en gemación Cumple



44

ANEXO 4 PRODUCTO: VERAN D CAPSULAS 20 mg

1. Método de recuento de Mesófilos aerobios1.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL

Tabla 40. Porcentaje de recuperación del recuento de mesófilos aerobios en Veran D cápsulas 20 mg





Veran D capsulas 1301 Escherichia coli 31 UFC/35 UFC x 100 88% Cumple Veran D capsulas 1302 Escherichia coli 26 UFC/27 UFC x 100 96% Cumple Veran D capsulas 1303 Escherichia coli 27 UFC/ 29 UFC x 100 93% Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200%

2. Método de recuento de Mohos2.1 Cepa utilizada: Nombre: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Fecha de expiración: 13-12-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL

Tabla 41. Porcentaje de recuperación del recuento de Mohos en Veran D cápsulas 20 mg





Veran D cápsulas 1301 Aspergillus brasiliensis 39 UFC/41 UFC x 100 95% Cumple Veran D cápsulas 1302 Aspergillus brasiliensis 18 UFC/18 UFC x 100 100% Cumple Veran D cápsulas 1303 Aspergillus brasiliensis 18 UFC/ 18 UFC x 100 100% Cumple Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200%

3. Método de recuento de Levaduras3.1 Cepa utilizada: Nombre: Candida albicans ATCC 10231 Fecha de expiración: 14-08-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL

Tabla 42. Porcentaje de recuperación del recuento de levaduras en Veran D capsulas 20 mg.





Veran D cápsulas 1301 Candida albicans 37 UFC/39 UFC x 100 94% Cumple Veran D cápsulas 1302 Candida albicans 23 UFC/27 UFC x 100 95% Cumple Veran D cápsulas 1303 Candida albicans 28 UFC/29 UFC x 100 96% Cumple Nota: El criterio de aceptación establecido para el porcentaje de recuperación es de 50-200%.


Anglopharma S.A 45

4. Pruebas de microorganismos especificos4.1 Cepa utilizada: Nombre: Escherichia coli ATCC 8739 Fecha de expiración: 13-07-31 Inoculo: <100 UFC/0,1 mL

Tabla 43. Reporte de Presencia/Ausencia de Escherichia coli como microorganismo especifico en Veran D capsulas 20 mg Producto Lote Microorganismo Presencia/


Veran D cápsulas 1301 Escherichia coli Presencia Bacilos Gram negativos Indol positivo Cumple



*mo: Microorganismo

PUJ– BG Normas para la entrega de Tesis y Trabajos de grado a la Biblioteca General – Mayo de 2010

ANEXO 3 BIBLIOTECA ALFONSO BORRERO CABAL, S.J.

DESCRIPCIÓN DE LA TESIS O DEL TRABAJO DE GRADO FORMULARIO

TÍTULO COMPLETO DE LA TESIS O TRABAJO DE GRADO

Verificación de la aptitud de las pruebas de recuento microbiano y pruebas de microorganismos específicos para productos terminados, elaborados en Anglopharma S.A.

SUBTÍTULO, SI LO TIENE

AUTOR O AUTORES Apellidos Completos Nombres Completos

Perilla Jiménez Laura Margarita

DIRECTOR (ES) TESIS O DEL TRABAJO DE GRADO Apellidos Completos Nombres Completos

Jara Restrepo Ángela María

FACULTAD Ciencias

PROGRAMA ACADÉMICO Tipo de programa ( seleccione con “x” )

Pregrado Especialización Maestría Doctorado x

Nombre del programa académico Microbiología Industrial

Nombres y apellidos del director del programa académico Janeth Arías

TRABAJO PARA OPTAR AL TÍTULO DE:

Microbióloga Industrial PREMIO O DISTINCIÓN (En caso de ser LAUREADAS o tener una mención especial):

CIUDAD AÑO DE PRESENTACIÓN DE LA TESIS O DEL TRABAJO DE GRADO

NÚMERO DE PÁGINAS

Bogotá 2013 TIPO DE ILUSTRACIONES ( seleccione con “x” )

Dibujos Pinturas Tablas, gráficos y diagramas Planos Mapas Fotografías Partituras

x

45

SOFTWARE REQUERIDO O ESPECIALIZADO PARA LA LECTURA DEL DOCUMENTO Nota: En caso de que el software (programa especializado requerido) no se encuentre licenciado por la Universidad a través de la Biblioteca (previa consulta al estudiante), el texto de la Tesis o Trabajo de Grado quedará solamente en formato PDF.

x


MATERIAL ACOMPAÑANTE

TIPO DURACIÓN (minutos) CANTIDAD

FORMATO CD DVD Otro ¿Cuál?

Vídeo Audio

Multimedia Producción electrónica Otro Cuál?

DESCRIPTORES O PALABRAS CLAVE EN ESPAÑOL E INGLÉS Son los términos que definen los temas que identifican el contenido. (En caso de duda para designar estos descriptores, se recomienda consultar con la Sección de Desarrollo de Colecciones de la Biblioteca Alfonso Borrero Cabal S.J en el correo [email protected], donde se les orientará).

ESPAÑOL INGLÉS Liofilización Recuentos Patógenos Mohos Bacterias Levaduras

RESUMEN DEL CONTENIDO EN ESPAÑOL E INGLÉS (Máximo 250 palabras - 1530 caracteres)

En este estudio se demostrara mediante las pruebas de enumeración y recuperación de microorganismos especificos que el método, para análisis microbiológico de productos no estériles, de la USP vigente, es apropiado para analizar los productos terminados de naturaleza semisólida, líquida, productos de uso vaginal y cápsulas de gelatina dura elaborados en Anglopharma S.A. Para evaluar la confiabilidad de las técnicas en los productos de naturaleza semisólida (Piroxicam gel 0,5% y Hidrocortisona crema 1%), líquida (Ión K elixir 31,2%, Calymag suspensión menta, Naproxeno suspensión 3%, Ametrex jarabe 3% y Teolixir elixir 80 mg/15 mL), productos vaginales (Clotrimazol tableta vaginal 100 mg) y cápsulas de gelatina dura (Veran D cápsulas 20 mg) se realizaron recuentos de mesófilos aerobios, mohos, levaduras y se realizaron pruebas de presencia/ausencia. Los recuentos y las pruebas de presencia/ausencia se realizaron con cepas liofilizadas ATCC Accu-shot y Ez-CFU las cuales son Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseuodomonas aeruginosa, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis y Salmonella Typhimurium, cada microorganismo se utilizo dependiendo lo establecido, en la USP37 capítulo <61>, para cada producto. Para poder demostrar la aptitud de las pruebas de recuento microbiano y de microorganismos especificos de cada lote de cada producto se debía obtener un porcentaje de recuperación entre 50%-200%, siendo a partir del 70% un porcentaje de recuperación bueno y se debía observar la presencia de los microorganismos inoculados verificando que las caracteristicas del microorganismo tanto macroscópicamente como microscópicamente correspondían a la cepa desafiada. Los resultados obtenidos fuerons conformes a los criterios de aceptación establecidos. De acuerdo al estudio realizado, se pudo demostrar mediante las pruebas de enumeración y recuperación de los microorganismos especificos, que el método para el análisis microbiológico de productos no estériles de la USP vigente es apropiado para analizar los productos terminados de naturaleza semisólida, líquida, vaginales y cápsulas de gelatina dura elaborados en Anglopharma S.A.

LyophilizationCountPathogensMoldsBacteriumYeast

mailto:[email protected]


In this study it is shown by evidence enumeration and recovery of specific microorganismsmethod for microbiological testing of non-sterile products, USP force, it is appropriate toanalyze finished products semisolid nature, liquid, products vaginal use and hard gelatincapsules manufactured in Anglopharma S.A. To assess the reliability of technical products insemi-solid nature (Piroxicam gel 0.5% Hydrocortisone cream 1%), liquid (31.2% Ion K elixir,suspension Calymag mint, Naproxen suspension 3%, 3% Ametrex syrup Teolixir elixir and 80mg / 15 mL), vaginal products (100 mg vaginal tablet Clotrimazole) and hard gelatin capsules(20 mg capsules Veran D) mesophilic aerobic counts, molds, yeasts and tests wereconducted presence / absence performed. The counts and testing of presence / absencewere conducted with lyophilized strains ATCC Accu-shot and EZ-CFU which are Escherichiacoli, Staphylococcus aureus, Pseuodomonas aeruginosa, Candida albicans, Aspergillusbrasiliensis and Salmonella Typhimurium, each organism was used depending established inthe USP37 chapter <61> for each product. To demonstrate the suitability of testing microbialcount and specific organisms of each batch of each product must obtain a recoverypercentage between 50% -200%, and from 70% a percentage of good recovery and was tobe observed the presence of the inoculated microorganisms verifying that the characteristicsof the microorganism both macroscopically and microscopically strain corresponded tochallenged. The results went conform to the criteria set. According to the study, it wasdemonstrated by testing enumeration and recovery of specific microorganisms, the methodfor microbiological analysis of non-sterile products USP force is appropriate to analyzefinished products semisolid nature, liquid, vaginal and hard gelatin capsules manufactured inAnglopharma S.A.

VERIFICACIÓN DE LA APTITUD DE LAS PRUEBAS DE RECUENTO ...

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