VI Congreso Nacional Legionella 2015 IPROMA

USO DE LA CAPTURA INMUNOMAGNÉTICA EN LA ELIMINACIÓN DE INTERFERENCIAS EN LA DETECCIÓN DE Legionella sp POR EN LA DETECCIÓN DE Legionella sp POR PCR Y PMA-PCR.

Inmaculada Solís 1, Marta Gallén 1, Miguel Martínez2, Guillermo Rodríguez 21 Iproma, S.L., 2Biótica, S.L.

1

VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015

PROBLEMA

• Resultados no concluyentes en PCR debido a la

presencia de inhibidores en las muestras reales.

• Muestras de agua regenerada, torre de refrigeración


2

y fuentes ornamentales.

SOLUCIÓN

• Separación inmunomagnética (SIM)

CLEANPID


3


4


5


6


Esquema de trabajo

7Proceso de compras

RESULTADOSRESULTADOSRESULTADOSRESULTADOS

Referencia RECUENTO PCRMUESTRA UFC / mL Ct

1 a 26400 38,15

1 b 26600 31,29

2 a 27400 30,59

2 b 28000 29,6

3 a 29000 Inhibición

3 b 34000 Inhibición

4 a 34000 36,74

4 b 29000 39,88

Referencia RECUENTO PCRMUESTRA UFC / mL Ct

10 a 27000 36,33

10 b 30000 37,85

11 a 19000 36,19

11 b 21000 35,05

12 a 9700 31,79

12 b 11000 40,04

13 a 5400 34,92

13 b 6100 36,25


8

4 b 29000 39,88

5 a 30000 37,75

5 b 27000 35,59

6 a 34000 29,38

6 b 32000 33,33

7 a 25000 27,89

7 b 27000 34,46

8 a 16000 25,86

8 b 14000 37,11

9 a 0 34,64

9 b 0 26,28

10 a 27000 36,33

10 b 30000 37,85

14 a 18000 26,51

14 b 22000 31,89


15 b 41000 17,77

16 a 3200 37,49

16 b 2900 Inhibición

17 a 5700 26,36

17 b 6600 38,56

18 a 3400 34,23

18 b 3700 32,7

19 a 0 35,06

19 b 0 32,86


20 b 3900 Negativa

PCR del sobrenadante


9

sobrenadante

RESULTADOS

Referencia PCRMUESTRA Ct

3 a Inhibición

Inhibición

Inhibición

3 b Inhibición

Inhibición

Inhibición9 a 34,64

Referencia PCRMUESTRA Ct

16 a 37,49

22,70

16 b Inhibición

22,28

20 a Inhibición

Negativa

20 b Negativa


10

9 a 34,64

41,47

19,57

9 b 26,28

37,77

19,21

15 a InhibiciónNegativa

26,97

15 b 17,77

Inhibición

26,33

20 b NegativaNegativa

• Mejora de la detección.

• Aumento de la repetibilidad


11


MUESTRA ORIGINAL

FILTRACIÓN

MUESTRA

PCR

12

MUESTRA CONCENTRADA PCR, con

separación de PM

62 muestras concentrados reales + Inoculo


62 muestras reales

13

12% 12% 12% 12% 3% 3% 3% 3%

SIM

Muestra nº 6

Muestra nº 16


PBS Agua

Inhibición 31,26

Inhibición 31,63

38,24 30,39

Inhibición 31,15

Inhibición 32,2

PCR

PMA - PCR

MUESTRA nº 6

14

Inhibición 32,2

Inhibición 30,18

PMA - PCR

PBS Agua

34,02 35,29

32,23 35,64

31,25 33,21

Inhibición 40,73

Inhibición 41,58

Inhibición > 42

PCR

PMA - PCR

MUESTRA nº 16


Comparativa Cleanpid Qiagen

Manipulación Baja Medio - alta

Instrumental Rack magnético Microcentrífuga

15

Coste material 3.0 – 3.5 euros 4.0 – 4.5 Euros

Interferencias 3% 12%

Repetibilidad SI Variable


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