7/24/2019 Virologia Lectura 1

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1. Antecedentes

El rotavirus es la principal causa de gastroenteritis en

niños de 6-24 mes de edad. Por 5 años de edad, casi

todos los niños tendrán un episodio de gastroenteritis

por rotavirus, el 20 va a visitar una cl!nica, un 1,5

sera "ospitali#ado, $ apro%imadamente el 0,& morirá.'os niños en pa!ses más po(res representan el )2 de

las muertes por rotavirus

'os rotavirus son virus A*+ sin envoltura ue consiste

en una ncleo interior es/rico $ dos cápside e%terna.

iete serogrupos A-3 dentro del g/nero *otavirus

"an sido identiicados, siendo el serogrupo A los más

comnmente asociados con la diarrea

Aunue las vacunas de rotavirus "umanos muestran

una e%celente eicacia en la prevencin de laenermedad por rotavirus grave más del 53, la

ineccin carga tasa $ las enermedades asociadas con

la ineccin por rotavirus son todav!a altas. Por lo

tanto, el diagnstico preciso de la ineccin por 

rotavirus sigue siendo necesario para la gestin cl!nica

adecuada del paciente $ para control de la enermedad.

'os rotavirus se desprenden en gran cantidad en las

"eces. Por lo tanto, el diagnstico de la ineccin sigue

normalmente encontrar el virus en las "eces del niño

En los entornos del la(oratorio cl!nico el diagnstico

se lleva a ca(o normalmente usando prue(as de

aglutinacin de láte%, prue(as de inmunocromatogra!a

o en#ima inmunoensa$os ligados. arias compañ!as

"an desarrollado comercialmente ensa$os disponi(les

 para la deteccin de rotavirus. in em(argo, puesto

 pueden e%istir discrepancias entre el rendimiento de la

 prue(a anunciada por el a(ricante $ los resultados

o(tenidos por las evaluaciones independientes, la

evaluacin por partes independientes es una necesidad

2. 7(8etivos

En este estudio, la evaluacin de una novela, segunda

generacin, comercial prue(as de láte% Pastore%9:

*otavirus prue(a de aglutinacin de láte%, ;io*ad,

:arnes-'a-<ouette, =rancia3, para la deteccin de

rotavirus grupo A en muestras ecales "umanas se

inorm.

&. Estudio de diseño

'a prue(a de aglutinacin de láte% Pastore%9:

rotavirus se (asa en part!culas de láte% recu(iertas con

anticuerpo anti-rotavirus ue son aglutinadas en

 presencia de "eces ue contienen ant!geno de

rotavirus. 'os ensa$o inclu$e láte% de control negativo

 para ser utili#ado en paralelo para controlar para

reacciones de aglutinacin no espec!icos. >n panel de

166 muestras ecales recogida de los niños ?5 años de

edad se utili# con diarrea aguda esporádica. 9odas las

muestras se ensa$aron para rotavirus por E'@A.

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etenta $ oc"o de las muestras se tomaron como

rotavirus positivos desde ue dieron como resultado

positivo al menos dos veces por un E'@A rotavirus

comercial Propec99:, 7%oid 'td, ;asingstoe,

*eino >nido3. Entre los )) rotavirus muestras

negativas, 15 ueron positivos para astrovirus como se

determina por un E'@A comercial, 20 ueron

positivos para el norovirus, determinado por *9-P<* $

11 ueron negativos para todos los patgenos ent/ricos

pro(ado. 'as muestras seleccionadas tam(i/n ueron

anali#adas por PAE $ rotavirus genomas visuali#ados

por tincin con plata. e recogieron muestras $ se

almacen a -B0 C< "asta su transormacin.

Para la prue(a de láte%, las muestras se procesaron de

acuerdo con las instrucciones del a(ricante.

;revemente, suspensiones ecales 1D10 se prepararon

en el tampn de muestra dilu$ente proporcionado conla prue(a. espu/s de me#clar vigorosamente por 

vrtice, las muestras se clariicaron por centriugacin

a (a8a velocidad &.000 g durante 5 min3. Fuince ul

so(renadante se añadieron dentro de los c!rculos de la

tar8eta de aglutinacin, donde una gota de reactivo de

láte% o láte% control negativo ueron dispensadas

previamente.

'as muestras se me#claron con el láte% en un

movimiento circular usando aplicadores separados

provistos de la prue(a. 9ar8etas "icieron girar 

suavemente manualmente durante 5 minutosG acontinuacin, se registr la aparicin de cualuier 

aglutinacin visi(le en un intervalo de 5-B minutos.

'as muestras se consideraron positivos slo si se

o(serv aglutinacin en el c!rculo prue(a de láte%, $

no en el c!rculo de control negativo. 'os datos ueron

anali#ados utili#ando el sotHare P Estad!sticas 1B

"ttpDIIi(m-spss-statistics.sotonic.com3 para generar 

intervalos de conian#a del 5 @<3. 'a

reproduci(ilidad entre los resultados o(tenidos por las

dierentes prue(as se anali# calculando el valor 

appa.

4. *esultados

Pastore%9: *otavirus prue(a de aglutinacin de láte%

detectado como positivo 6B de B) muestras positivas

 por rotavirus. Además, la prue(a dio una reaccin

 positiva con 2 2,&3 de las )) muestras negativas de

rotavirus. 'as 1& muestras con resultados discrepantes

entre la prue(a de E'@A $ el láte% se anali#aron por PAE. iete de los 11 muestras positivas por E'@A $

negativo por el láte% se conirmaron como positivos

 por PAE.

:ientras tanto, las 2 muestras positivas por el ensa$o

de láte% $ negativo por E'@A resultaron negativas por 

PAE. Por lo tanto, la sensi(ilidad glo(al calculada $

la especiicidad de la prue(a de aglutinacin de láte%

Pastore%9: *otavirus es )5, J@< del 5, B),1B-

&,62K $ el B,B J@< del 5, 4,61 a 100,12K,

respectivamente, con una eiciencia del 2,2.

;asándose en estos resultados, los valores predictivos positivos $ negativos para la prue(a son B,1 $

)),B, respectivamente. 'os resultados se resumen en

la 9a(la 1. +inguna de las muestras positivas

calicivirus $ astrovirus ueron detectados como

 positivos por el ensa$o de láte%, lo ue sugiere ue

Pastore%9: *otavirus prue(a de aglutinacin de láte%

no produce reaccin cru#ada con cualuiera de estos

dos virus. Por otra parte, las muestras ecales positivos

 para Esc"eric"ia coli n L 23, "igella sp. n L 23 $

almonella sp. n L 23 ueron pro(ados por duplicado,

$ ninguna de las muestras result en una reaccin

 positiva. >n mu$ (uen resultado se o(tuvo entre la

 prue(a de láte% $ los resultados de E'@A valor appa

L 0,)43.

<on el in de evaluar el l!mite de deteccin de la

 prue(a de aglutinacin de láte% rotavirus Pastore%9:,

die# diluciones seriadas do(les de una muestra de cepa

de rotavirus *"esus cultivadas en c/lulas :A104, con

un t!tulo de 1%10)>== I ml se ensa$aron en paralelo

 por el E'@A comercial $ la prue(a de aglutinacin de

láte% rotavirus Pastore%9:. :ientras ue la prue(aE'@A dio clara reaccin positiva a los I las diluciones

ml 1M10B $ 1M106 u, $ una reaccin l!nea de rontera

en 1M105 u I dilucin ml, la prue(a de aglutinacin de

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láte% rotavirus Pastore%9: dio una reaccin positiva

slo en la dilucin de 1M10B u I ml, lo ue indica ue

la prue(a de aglutinacin de láte% rotavirus

Pastore%9: es unas cien veces menos sensi(le ue la

prue(a E'@A comercial.

5. iscusin

arias prue(as comerciales de aglutinacin de láte%

para la deteccin de rotavirus en "eces están

disponi(les en el mercado A((ot, 7rion iagnostica,

;iom/rieu% $ ;@7*A3 o se están desarrollando. En

general, ensa$os de aglutinacin de láte% para el

diagnstico de rotavirus son rápidos 5-10 min3, de

(a8o costo $ no reuieren euipo especiali#ado.

in em(argo, la especiicidad de los ensa$os de láte%para la deteccin de patgenos ecales "a mostrado

de(ilidad, presumi(lemente de(ido a las aglutininas no

espec!icas presentes en las "eces. En este estudio, la

prue(a de aglutinacin rotavirus Pastore%9: láte%

mostr una mu$ (uena especiicidad $ valor predictivo

negativo $ no pudo detectar muestras conocidas

positivo para otros virus o (acterias ent/ricas comunes.

Además, se o(tuvo una (uena especiicidad $ una

(uena concordancia entre el láte% $ los resultados de

las prue(as de E'@A. Por otro lado, aunue el l!mite

de deteccin de la prue(a de aglutinacin de láte%rotavirus Pastore%9: era apro%imadamente 10-100

veces menos sensi(le ue el de E'@A comercial

utili#ado, esto puede no representar una desventa8a

marcada dada la alta carga viral de rotavirus en

muestras cl!nicas. >na limitacin de esta evaluacin es

ue se llev a ca(o (a8o condiciones relativamente

ideales de la(oratorio $ por un operador e%perto, (ien

amiliari#ado con la prue(a de aglutinacin. Por lo

tanto, el rendimiento de esta prue(a en condiciones de

campo o con personal menos =amiliari#ado es

desconocida.

En resumen, estos resultados sugieren ue la

Pastore%9: *otavirus prue(a de aglutinacin de láte%

nueva generacin puede ser usado como una (uena

alternativa para el diagnstico de rotavirus en entornos

cl!nicos $ epidemiolgicos.

Financiamiento

Este tra(a8o ue parcialmente inanciado por el

<7+A<N9 :/%ico3 su(vencin los nmeros 10&B)&

$ 154B6B a O.A.@.'. $ A.'.., respectivamente.

Conflicto de intereses

 +inguno declarado.

La aprobación ética

 +o reuerido.

Reconocimiento

'as prue(as de aglutinacin de láte% Pastor 9:

rotavirus utili#ados en este estudio ueron

 proporcionados por ;@7*A-:/%ico.