Manual de

Prácticas RBH

Realizar Biometría Hemática

INTRODUCCIÓN

Durante este semestre hemos aprendido muchas cosas dentro del área de la biometría hemática, así como algunos de los exámenes que se realizan dentro de esta área.

La Hematología es la especialidad médica que se dedica al tratamiento de los pacientes con enfermedades hematológicas, para ello se encarga del estudio e investigación de la sangre y los órganos hematopoyéticos (médula ósea, ganglios linfáticos, bazo, etc.) tanto sanos como enfermos.

La hematología es la rama de la ciencia médica que se encarga del estudio de los elementos formes de la sangre y sus precursores, así como de los trastornos estructurales y bioquímicos de estos elementos, que puedan conducir a una enfermedad.

La hematología es una ciencia que comprende el estudio de la etiología, diagnóstico, tratamiento, pronóstico y prevención de las enfermedades de la sangre y órganos hemolinfoproductores. Los especialistas en este dominio son llamados hematólogos.

Las enfermedades hematológicas afectan la producción de sangre y sus componentes, como los glóbulos rojos, glóbulos blancos, la hemoglobina, las proteínas plasmáticas, el mecanismo de coagulación (hemostasia), etc.

ÍNDICE

PRACTICAS

1. Preparación de anticoagulantes

2. Obtención de muestras

3. Determinación de hematocrito

4. Cuantificación de hemoglobina

5. Elaboración de frotis sanguíneo

6. Recuento de leucocitos

7. Recuento de glóbulos rojos

8. Recuento de plaquetas

9. Recuento de reticulocitos

10. Grupo sanguíneo

11. Clasificación de anemias

12. Velocidad de sedimentación globular

Anexo: Lista de reactivos

Practica no 1

CONOCIMIENTO DEL MATERIAL DE LABORATORIO PARA LA MATERIA DE BIOMETRÍA HEMÁTICA

1) Fundamento:

2) Objetivo:

Al terminar la práctica el alumno será capaz de:

El alumno conocerá el material de laboratorio que se utiliza frecuentemente en el área de biometría hemática.

3) Generalidades:

El laboratorio cuenta con las instalaciones y el material necesario para facilitar y mejorar la calidad de las observaciones. Generalmente cuenta con un anexo donde se guardan las sustancias y aparatos.

Tiene instalación eléctrica, hidráulica y de gas adaptada a la mesa de trabajo; además de contar con buena ventilación e iluminación.

El Laboratorio clínico es el lugar donde los profesionales de laboratorio de diagnóstico clínico (Tecnólogo Médico, Técnicos Superiores de Laboratorio Clínico, Bioquímicos, Químicos Farmacobiólogos (QFB), Bioanálistas y Médicos) realizan análisis clínicos que contribuyen al estudio, prevención, diagnóstico y tratamiento

de los problemas de salud de los pacientes. También se le conoce como Laboratorio de Patología clínica.

El material se puede clasificar en material de cristalería, aparatos y reactivos.

Se debe procurar conocer las características generales de los materiales de un laboratorio en el área de biometría hemática, así como los cuidados necesarios para mantenerlos en buen estado.

La Hematología es la especialidad médica que se dedica al tratamiento de los pacientes con enfermedades hematológicas, para ello se encarga del estudio e investigación de la sangre y los órganos hematopoyéticos (médula ósea, ganglios linfáticos, bazo, etc) tanto sanos como enfermos.

La hematología es la rama de la ciencia médica que se encarga del estudio de los elementos formes de la sangre y sus precursores, así como de los trastornos estructurales y bioquímicos de estos elementos, que puedan conducir a una enfermedad.

La hematología es una ciencia que comprende el estudio de la etiología, diagnóstico, tratamiento, pronóstico y prevención de las enfermedades de la sangre y órganos hemolinfoproductores. Los especialistas en este dominio son llamados hematólogos.

Las enfermedades hematológicas afectan la producción de sangre y sus componentes, como los glóbulos rojos, glóbulos blancos, la hemoglobina, las proteínas plasmáticas, el mecanismo de coagulación (hemostasia), etc.

4) Material:

Aguja Dedal Tubo con EDTA Gradilla

Placa de vidrio Tubos de ensaye Aplicador de madera

Suero Anti A Suero Anti B suero Anti AB

Suero Anti D Solución salina Pipetas graduadas

Pipeta Pasteur Centrifuga Baño María

Lector de hematocrito Microcentrifuga Tubo de Wintrobe

Tubo capilar Espectrofotómetro Pipeta de Sahli

Celdas para espectrofotómetro Portaobjetos Cubreobjetos

Colorante May Greenwald Colorante Giemsa Colorante de Wright

Aceite de inmersión Agua destilada Pipetas de Thoma

Cámara de Neubauer

Microscopio Azul de metileno Azul de cresil brillante

Diluyente de turk

5) Bibliografía:

Práctica no. 2

PREPARACIÓN DE ANTICOAGULANTES

1) Fundamento:

2) Objetivo:

Al terminar la práctica, el alumno será capaz de:

Preparar correctamente los principales anticoagulantes de importancia en hematología.

Seleccionar el anticoagulante más adecuado para cada determinación.

3) Generalidades:4) Equipo: Balanza analítica5) Material:a) Biológico: ningunob) De laboratorio:

1. Oxalato de amonio2. Oxalato de potasio3. Citrato disódico4. Dextrosa5. Ácido etilen diamino tetraacético (E.D.T.A.)6. Heparina7. Agua destilada8. Tubos de ensaye de 13 x 100 mm con tapón9. Matraces aforados de 100 ml10. Tubos de centrifuga graduados de 5 ml11. Pipetas serológicas de 5 ml6) Procedimiento:

6.1 Oxalatos

6. 2 Citratos

6.3 E.D.T.A.

6.4 Heparina:

7) Comentarios:8) Resultados:9)10) Bibliografía:

www.biol.unlp.edu.ar/hematologia/guia1.doc

Practica no. 3

OBTENCIÓN DE MUESTRAS

1) Fundamento:

2) Objetivos

Al terminar la práctica, el alumno será capaz de:

Justificar la indicación de los métodos de obtención de muestras. Obtener correctamente muestras capilares y venosas de calidad analítica.

3) Generalidades:

SE DEBEN MENCIONAR INFORMACIÓN RELACIONADA CON:

Punción venosa Punción capilar Punción arterial

4) Equipo:

Ninguno

5) Material:a) Biológico: ningunob) De laboratorio:

1. Torundas de algodón2. Lancetas estériles3. Tubos capilares con heparina 4. Tubos capilares sin heparina5. Alcohol etílico6. Jeringas de 10 ml. Desechables con aguja de 20 x 32 mm.7. Tubos con anticoagulante8. Tubo de látex con ligadura.9. Maneral y agujas vacutainer desechables calibre 20 x 32 mm.10. Tubos vacutainer tapón lavanda (E.D.T.A)11. Tubos vacutainer tapón azul claro (citrato de sodio).12. Gradilla

6) Procedimiento:

6.1 Punción capilar

6.2 Punción venosa

7) Comentarios

8) Resultados

9) Bibliografía:

http://www.zubizarreta.org.ar/docs/MUESTRAS2.pdf

http://www.eccpn.aibarra.org/temario/seccion2/capitulo33/capitulo33.htm

Practica no. 4

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO

1) Fundamento:

2) Objetivos:

Al terminar la práctica el alumno será capaz de: Identificar la importancia y utilidad clínica de la determinación de

hematocrito. Ejecutar correctamente la determinación de hematocrito usando macro y

micrométodo.

Justificar las ventajas y desventajas de ambos métodos.

3) Generalidades:

4) Equipo:a) Lector de hematocrito.b) Centrifuga.c) Microcentrífuga.

5) Material:a) Biológico1. Sangre obtenida con E.D.T.Ab) De laboratorio:1. Tubos de Wintrobe.2. Jeringas de 5 ml con cánula larga de metal.3. Pipetas Pasteur de punta larga, con bulbo.4. Mechero de Bunsen.5. Gradilla.6. Gradilla de Wintrobe.7. Regla de plástico.8. Tubos capilares sin heparina.9. Barra de plastilina.

6) Procedimiento:

6.1. Macrometodo de wintrobe:

1. Mezclar la sangre por inversión por lo menos durante cinco minutos. NO AGITARLA.

2. Llenar un tubo de Wintrobe hasta la marca “0-10” usando una jeringa con cánula larga o una pipeta Pasteur. Es importante vigilar que no se formen burbujas en la columna de sangre o en el fondo del tubo al llenarlo. Esto se logra haciendo resbalar la sangre por las paredes del tubo, iniciando en el fondo y sacando la canícula a medida que se va llenando.

3. Centrifugar el tubo a 3000 rpm durante 30 minutos (para un radio de centrifuga de 22 cm, que da una fuerza centrífuga relativa de 2200 G). La velocidad de centrifugación se deberá ajustar al radio de la centrifuga, considerando que siempre se deberá tener una fuerza centrífuga, relativa mayor a 2000 G.

4. Leer el límite superior de la columna de eritrocitos, inmediatamente por debajo de la capa gris de leucocitos, en la columna de la derecha (escala ascendente de 0 a 10 cm.)

5. El resultado se informa en milímetros por ciento.Ventajas:

Es un método estandarizado. Sencillo de realizar y de fácil lectura.

Desventajas: El plasma atrapado entre células es de alrededor del 3% del volumen. Puede dar resultados inconstantes debido a que cuando existen

alteraciones morfológicas, el plasma que queda atrapado entre las células se incrementa.

6.2 Micrometodo:

1. Mezclar la sangre por inversión por lo menos durante cinco minutos. NO AGITARLA

2. Llenar los dos terceras partes de un tubo capilar por el lado no marcado.3. Sellar el extremo opuesto (marcado con una banda azul) con la flama del

mechero. Esto se hace girando el tubo capilar para lograr que el sellado uniforme y el fondo quede redondeado y no en punta. Una alternativa más práctica para el sellado es obturar el extremo distal con plastilina.

4. Centrifugar en la microcentrifuga a 12,000 rpm durante 5 a 8 minutos.5. Se lee, usando una regla o el lector para microhematocrito, las alturas del

volumen de eritrocitos y el volumen total de la muestra. Calcular el microhematocrito de la siguiente manera:

HEMATOCRITO: ALTURA DE ERITROCITOS (mm) X 100

ALTURA DEL VOLUMEN TOTAL (mm)

Ventajas: El plasma atrapado entre las células es mínimo (1%). Resultados muy reproducibles.

Desventajas: Relativamente más difícil de realizar, sobre todo el sellado y dominar la

lectura.

7) Valores de referencia:

Al igual que la hemoglobina y eritrocitos; se modifican con la edad, sexo y altura sobre el nivel del mar. En la Cd. De Xalapa, Ver. A 1400 m sobre el nivel del mar son los que se observan en la tabla:

TABLAHEMATOCRITO

VALORES DE REFERENCIA

EDAD SEXO VALORES(porcentaje)

RECIEN NACIDO F/M 44 A 621 MES A DOS AÑOS F/M 33 A 37

3 A 10 AÑOS F/M 37 A 4511 A 60 AÑOS FEM 36 A 4811 A 60 AÑOS MASC. 42 A 54

MAS DE 60 AÑOS F/M 37 A 45

En la siguiente tabla se muestran los valores promedio de hematocrito diferentes alturas sobre el nivel del mar:

TABLAHEMATOCRITO

VALORES A DIFERENTES ALTITUDES. ALTURA EN METROS MUJERES HOMBRES

(Porcentaje) (Porcentaje) MEDIA RANGO MEDIA RANGO

NIVEL DEL MAR 43.9 37.5 A 50.2 49.3 45.4 A 56.21000 42.4 37.4 A 47.4 48.1 43.0 A 53.21860 45.0 39.1 A 50.9 51.3 45.1 A 57.62270 44.6 32.2 A 50.0 51.5 46.3 A 56.72670 46.9 40.7 A 53.1 53.0 46.5 A 59.5

8) Comentarios:

Por su estandarización y reproducibilidad de resultados, el hematocrito ha sido considerado el mejor parámetro para evaluar la anemia cuando se hace por métodos manuales.

TUBO DE WINTROBE

TUBO DE

WINTROBE

Equipo de Wintrobe

MICROHEMATOCRITO

9) Resultados:

10) Bibliografía:

http://www.mailxmail.com/curso-analisis-clinicos-rutina/valor-hematocrito

http://es.wikipedia.org/wiki/Hematocrito

Practica no. 5

CUANTIFICACIÓN DE HEMOGLOBINA

1) Fundamento:

2) Objetivos:

Al terminar la práctica, el alumno será capaz de:

Identificar la importancia y utilidad clínica de la cuantificación de hemoglobina.

Cuantificar con precisión y exactitud la hemoglobina en muestras sanguíneas.

3) Generalidades:

4) Equipo:A) EspectrofotómetroB) Reloj de laboratorio

5) Material:A) Biológico:1. Sangre obtenida con E.D.T.A.B) De laboratorio:1. Pipetas de Sahli con boquilla2. Pipetas volumétricas de 5 ml. 3. Tubos de ensayo de 13 x 100 mm 4. Celdas para espectrofotómetro5. Gradilla6. Papel milimétrico7. Diluyente de Drabkin (Solución de cianometa). 8. Solución patrón de hemoglobina de 60 mg/dl. 9. Pipetas serológicas de 1 ml.10. Pipetas serológicas de 5ml.Debido a la cuantificación se realizara comparando lecturas fotométricas con

las obtenidas de una solución patrón, primero debemos realizar una curva de calibración:6.1 Curva de calibración:

1. preparar una serie de tubos de la siguiente manera:Tubo Estándar de

HemoglobinaSolución de

DrabkinConcentración

deHB (Gr/ dl.)

1 5.0 ml. 0.0 ml. 15.02 4.0 ml. 1.0 ml. 12.03 3.0 ml. 2.0 ml. 9.04 2.0 ml. 3.0 ml. 6.05 1.0 ml. 4.0 ml. 3.06 0.0 ml. 5.0 ml. 0.0

2. Mezclar cada tubo por inversión y dejar reposar durante 10 minutos.3. Leer transmitancia a una longitud de onda de 450 nm ajustando a 100% con

el tubo # 6 (blanco de cianometa).

4. Hacer la curva en papel milimétrico graficando concentración contra transmitancia. Una curva de calibración correcta debe ser una línea recta uniendo todos los puntos.

5. Cálculos:Se utiliza la formula siguiente:

S X D = gr. DE HEMOGLOBINA/dl. 1000

Donde:S= CONCENTRACIÓN DEL ESTÁNDAR (60 mg/dl)

D= FACTOR DE DILUCIÓN DE LA MUESTRA (251)

La concentración del estándar puede variar de lote, por lo que es indispensable verificarla y en su caso, substituirla en la formula

En cuanto al factor de dilución se obtiene de la siguiente manera:SOL. DE CIANOMETA………5.00 ML

MUESTRA DE SANGRE…… 0.02 ML Al dividir 5.02= 251

VOLUMEN TOTAL…………..5.02 ML 0.02

La división entre 100 transforma los miligramos del estándar en gramos.Substituyendo en la formula, tenemos:TUBO # 1.- 60 x 251 = 15.0 gr. De HB/dl

1000

TUBO # 2.- (60/1.25) X 251 = 12.0 gr. De Hb/dl

1000

TUBO # 3.- (60/1.66) X 251 = 9.0 gr. De Hb/dl

1000

TUBO # 4.- (60/2.50) x 251= 6.0 gr. de Hb/dl

1000

TUBO # 5.- (60/5.00) x 251= 3.0 gr. de Hb/dl

1000

TUBO # 6.- (60/0.00) x 251= 0.0 gr. De Hb/dl

1000

6.2 CUANTIFICACIÓN DE HEMOGLOBINA:

Una vez obtenida la curva de calibración, podemos proceder a medir la hemoglobina en muestras de sangre de la siguiente manera:

1. Usando pipeta volumétrica, pipetear 5.0 ml de la solución de Drabkin en un tubo de ensayo de 13 x 100 mm.

2. Agregar 0.02 ml. De sangre con la pipeta de Sahli.3. Mezclar por inversión y dejar reposar durante 10 min.4. Leer transmitancia a 540 nm. Ajustando al 100% con blanco de cianometa.5. Convertir el porcentaje de transmitancia en gramos de hemoglobina por

decilitro usando la curva de calibración.6. Un método alterno para la cuantificación sin usar la curva de calibración,

puede ser el uso de una solución patrón para obtener un FACTOR DE CALIBRACIÓN.

OBTENCIÓN DE UN FACTOR DE CALIBRACIÓN:

Se obtiene de la siguiente manera: FACTOR = CONCENTRACIÓN DEL ESTÁNDAR ABSORBANCIA

Una vez obtenido este, la concentración de hemoglobina en una muestra se obtiene de la manera siguiente:

[ ] HEMOGLOBINA = ABSORBANCIA X FACTOR

7) Valores de referencia:

Se modifican con la edad, sexo y altura sobre el nivel del mar. En la tabla, se muestran los valores para la ciudad de Xalapa, Ver, que tiene una altura media de 1400 m sobre el nivel del mar.

TABLAHEMOGLOBINA

VALORES DE REFERENCIAEDAD SEXO VALORES

Recién nacido F/M 12.8 a 18.0 gr/dl.1 mes a 2 años F/M 11.0 a 13.0 gr/dl.

3 a 10 años F/M 12.0 a 14.5 gr/dl.11 a 60 años FEM. 12.0 a 16.0 gr/dl.11 a 60 años MASC. 14.0 a 18.0 gr/dl.

Mas de 60 años F/M 12.5 a 14.5 gr/dl.

En la siguiente tabla, se muestran los valores promedio de la hemoglobina a

diferentes alturas sobre el nivel del mar.8) Comentarios:

9) Resultados:

a) Muestras sanguíneas

TABLAHEMOGLOBINA

VALORES A DIFERENTES ALTITUDESALTURA EN METROS MUJERES

Gr/dlMEDIA RANGO

HOMBRESGr/dl

MEDIA RANGO

NIVEL DEL MAR 14.1 11.86 A 16.34

16.0 13.64 A 18.36

1000 13.8 11.90 A 15.70

15.8 13.96 A 17.64

1860 14.5 12.74 A 16.26

16.8 14.64 A 18.96

2220 14.6 12.64 A 16.56

17.4 15.56 A 19.24

2670 15.30 13.10 A 17.50

17.6 15.24 A 19.

10) Bibliografía:

http://es.wikipedia.org/wiki/Hemoglobina

Práctica no. 6

ELABORACIÓN DE FROTIS SANGUÍNEO

1) Fundamento:

2) Objetivos:

Al terminar la práctica el alumno será capaz de: Realizar correctamente los extendidos sanguíneos usando diferentes

técnicas. Seleccionar la técnica adecuada identificando sus ventajas y desventajas.

3) Generalidades:

El extendido de sangre periférica

4) Equipo:

Ninguno5) Material:

a) Biológico:1. Sangre venosa obtenida con EDTAb) De laboratorio1. Portaobjetos2. Cubreobjetos

6) Procedimiento:6.1 Frotis en cubreobjetos:

6.2 Frotis en portaobjetos:

6.2.1Frotis longitudinal:

6.2.2 Frotis transversal:

1) Comentarios:

2) Resultados: Frotis en portaobjetos (longitudinal)

10) Bibliografía:

http://www.encolombia.com/medicina/alergia/alergia12203-alteraciones1.htm

http://190.67.86.83/projects/PBacteriologia/pdf/ESP.pdf

TINCIONES

1) Fundamento:

2) Objetivos:

Al terminar la práctica, el alumno será capaz de: Realizar correctamente las tinciones de Wright y May Greenwald-Giemsa. Identificar sus características tintoriales.

3) Generalidades:

4) Equipo:a) Reloj de laboratorio.

5) Material:a) Biológico:

1. Extensiones sanguíneas b) De laboratorio:

1. Puentes de vidrio para tinción.2. Pipetas Pasteur.3. Amortiguador de fosfatos de PH 6.8 A 7.0. 4. Solución colorante de May Greenwald.5. Solución colorante de Giemsa.6. Solución colorante de Wright.7. Amortiguador para colorante de Wright.8. Pipetas serológicas de 5 ml.

6) Procedimiento:

6.1 Método panóptico de Pappenheim (May Greenwald- Giemsa):

1. cubrir el frotis con la solución de May Greenwald durante dos minutos para producir la fijación.

2. Sin volcar, agregar igual cantidad de agua destilada, dejándola 30 segundos. Los colorantes neutros como este, cuando están disueltos en alcohol metílico carecen de propiedades tintoriales. Al agregar el agua precipitan y entonces actúan, inactivándose cuando han precipitado por completo.

3. Volcar y lavar al chorro de agua.4. Se prepara una solución acuosa de colorante de Giemsa a razón de 6 gotas

de colorante por 2 ml del amortiguador de fosfatos o de agua corriente para cada laminilla a teñir. Se cubre la preparación y se deja 10 min.

5. Volcar. Lavar con agua corriente y dejar secar.Ventajas:

Fácil de estandarizar tiempos. No se afecta mucho por el PH del agua o amortiguador.

Desventajas: Ninguna.

6.2 Método de Wright:

1. Cubrir el frotis con colorante de Wright durante 4 a 8 minutos.

2. Sin volcar, agregar una cantidad igual del amortiguador de Wright soplando ligeramente para mezclar ambos líquidos. Dejar actuar de 6 a 10 min. Se formara una superficie de brillo metálico.

3. Volcar. Lavar con agua corriente y dejar secar.Ventajas:

Por ser la tinción más usada, es relativamente más fácil estandarizar la interpretación de los colores observados.

Desventajas: Es fácilmente afectada por el PH del agua y amortiguador. Se modifica la tinción al envejecer el colorante. Relativamente más difícil estandarizar tiempos.

7) Comentarios:

Los tiempos mencionados anteriormente, dependerán del grueso de la tinción, el PH del agua, la calidad de los colorantes, su tiempo de maduración y la frecuencia de su preparación, por lo que deben ajustarse en cada laboratorio.Con la tinción de Pappenheim, las células se tiñen de la siguiente manera:

Núcleo: violeta rojizo. Linfocitos: citoplasma de azul luminoso. Los gránulos azurofilos en rojo

purpureo. Gránulos neutrofilos: en rosa pardusco. Gránulos eosinofilos: en naranja pardusco o rojo ladriilo. Gránulos basofilos: en azul obscuro con tonalidad violácea. Eritrocitos: rosado. Plaquetas: azul con cuerpo rojizo. Monocitos: citoplasma azul grisáceo.

Con la de Wright, la coloración observada será: Núcleo: violeta purpura. Linfocitos: citoplasma en azul palido. Gránulos azurofilos en rojo purpura. Gránulos neutrofilos: en color purpura. Gránulos eosinofilos: en naranja brillante. Gránulos basofilos: en azul obscuro, intensamente teñidos. Eritrocitos: rojo pálido o rosado Plaquetas: en azul con cuerpo rojo o purpura. Monocitos: citoplasma gris.

Para el buen estudio morfológico, es necesario contar con un buen frotis y con una buena tinción, de otra manera, se pueden escapar muchos detalles de la morfología que podrían ser importantes para el diagnostico. Es importante probar las tinciones con diferentes tiempos hasta obtener el resultado esperado. En algunas ocasiones, se obtienen tonos muy azules en los eritrocitos y en los

citoplasmas celulares, en este caso, hay que revisar el PH del agua de lavado, que puede ser la responsabilidad de eso.

8) Resultados:

9) Bibliografía:

http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3nhttp://190.67.86.83/projects/PBacteriologia/pdf/ESP.pdf

MORFOLOGÍA ERITROCITARIA OBSERVACIÓN DE EXTENDIDOS

1) Fundamento:

2) Objetivos:

Al terminar la práctica, el alumno será capaz de:

Describir las principales características morfológicas normales de los eritrocitos

Identificar en los extendidos, las alteraciones morfológicas de los eritrocitos Correlación la presencia de alteraciones con las patologías en las que se

presentan.

3) Generalidades:

4) Equipo: a) Microscopiob) Proyector de diapositivasc) Video microscopio5) Material:a) Biológico:1. Extensiones de sangre periférica con morfología eritrocitaria normal

(teñidas)2. Extensiones de sangre periférica con morfología eritrocitaria anormal

(teñidas)b) De laboratorio: 1. Aceite de inmersión 2. Diapositivas de sangre periférica de eritrocitos normales y patológicos

6) Procedimiento:

Se revisará primero la morfología normal usando diapositivas y video microscópico; posteriormente se estudiará la morfología anormal con los mismos métodos y finamente se revisarán al microscopio extensiones con morfología normal y anormal, en las que se identificarán las características, tanto normales como anormales. Desde luego, se deberá consultar cualquier duda con el maestro.6.1 Características Morfológicas del Eritrocito Normal:

6.2 Alteraciones Morfológicas de los Eritrocitos:

6.2.1 Alteraciones en la Forma:

6.2.2 Alteraciones en el Tamaño

6.2.3 Alteraciones en la Coloración:

6.3 Inclusiones:

6.3 Comentarios:

7. Resultados:

8. Bibliografía:

http://es.wikipedia.org/wiki/Frotishttp://html.rincondelvago.com/biometria-hematica.htmlhttp://es.scribd.com/doc/37697369/Estudio-de-las-alteraciones-en-la-morfologia-eritrocitariahttp://www.accionmedica.com/documentos/libros/manual_citologia.pdfhttp://espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid=20090301103711AAeHxfLhttp://www.fac.org.ar/tcvc/llave/tl337/tl337.PDFhttp://www.metabase.net/docs/unan-leon/07430.htmlhttp://www.tesisenxarxa.net/TDX/TDX_URV/TESIS/AVAILABLE/TDX-0226108-095651//TPHG1de2.pdf

HEMATOPOYESISOBSERVACIÓN DE EXTENDIDOS

1) Fundamento:

2) Objetivos:Al terminar la práctica, el alumno será capaz de:

Describir las principales características morfológicas de las células sanguíneas en sus diferentes etapas de maduración.

Describir las etapas de la hematopoyesis. Identificar en los extendidos, las células hemáticas en sus diferentes etapas

de maduración.

3) Generalidades:

4) EQUIPO: Microscopio. Proyector de diapositivas. Video microscopio.

5) MATERIAL:a) Biológico:1. Extensiones de sangre periférica normal (teñidas)2. Extensiones de médula ósea normal (teñidas)

b) De laboratorio:1. Aceite de inmersión.2. Diapositivas de sangre periférica y médula ósea normales.

6) PROCEDIMIENTO:Inicialmente, el maestro mostrará en diapositivas y en el video microscopio

las diferentes etapas de maduración de las células hemáticas para que posteriormente se observen al microscopio las extensiones, usando los objetivos seco fuerte e inmersión e identificándolas de acuerdo a las características citológicas que adelante se describen y consultando con el maestro las dudas que surjan al respecto.

6.1 Características citológicas de las células hemáticas:

Procesos de reproducción:

Proceso de maduración

10) BIBLIOGRAFÍA:

http://es.wikipedia.org/wiki/Hematopoyesis

Práctica no 7

RECUENTO DE LEUCOCITOS

1) Fundamento:

2) Objetivos:

Al terminar la práctica el alumno será capaz de:

Ejecutar correctamente el recuento de leucocitos. Identificar la utilidad clínica del recuento de leucocitos. Describir el fundamento del método.3) Generalidades:

Los leucocitos o glóbulos blancos son células que están principalmente en la sangre y circulan por ella con la función de combatir las infecciones o cuerpos extraños; pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del propio cuerpo. Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo humano.

Se llaman glóbulos blancos, ya que éste color es el de su aspecto al microscopio.

Hay diferentes grupos de glóbulos blancos: los llamados polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos y los basófilos) y los mononucleares (los linfocitos y los monocitos).

El origen de todas las formas de leucocitos es a partir de células madres de la médula ósea.

La modificación de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnóstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, cáncer y leucemias, y otros procesos. Por ello el recuento es muy orientativo en diferentes enfermedades. Además el porcentaje de cada grupo de leucocitos nos ofrecerá una mayor información para precisar un diagnóstico.

Cuando en la medición de leucocitos se ven células jóvenes aparecen los neutrófilos en forma de núcleo en forma de bastón (cayados), y un aumento del porcentaje de los glóbulos blancos polimorfonucleares, esto se denomina como desviación "a la izquierda". Este término sugiere infecciones bacterianas agudas.

El estudio de los leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de hematimetría y recuento leucocitario completo.

El conteo de globulos blancos es un examen de sangre para medir el número de estos glóbulos.

Los glóbulos blancos ayudan a combatir infecciones y también se denominan leucocitos. Existen cinco grandes tipos de estos glóbulos:

Basófilos Eosinófilos Linfocitos (células T y células B) Monocitos Neutrófilos

4) Equipo:a) Microscopio

b) Agotador eléctrico de pipetas de Thoma.5) Material:a) Biológico1. Sangre obtenida con EDTAb) De laboratorio

1. Pipetas de Thoma para leucocitos, con boquilla.2. Cámara de Neubauer3. Solución diluyente de Turck4. Gradilla5. Tubos de ensaye de 13 x 100 mm6. Pipetas serológicas de 5 ml

6) Procedimiento:1. Mezclar la sangre por lo menos 5 minutos.2. Con la pipeta de Thoma para leucocitos, aspirar sangre hasta la marca

“0.5”.3. Con la misma pipeta y cuidando que no s salga la sangre, aspirar líquido de

Turck hasta la marca “11”. Es recomendable rotar la pipeta al aspirar y hacerlo manteniéndola en posición vertical para evitar la formación de burbujas, que afectarían la dilución, que en este caso es de 1:20.

4. Eliminar el exceso de diluyente secando la punta con papel absorbente.5. Agitar la pipeta durante 60 segundos en el agitador eléctrico para conseguir

una suspensión uniforme.6. Desechar lasa tres o cuatro primeras gotas de la pipeta, limpiar la punta

con papel absorbente y llenar la cámara de Neubauer.7. Dejar reposar durante 2 minutos para permitir la sedimentación de los

leucocitos.8. Contar los leucocitos encontrados en los cuadros grandes angulares, que

contienen cada uno 16 cuadros medianos. Verificar que la distribución de las células sea homogénea, de lo contrario repetir el procedimiento.

9. Multiplicar el número de leucocitos contados por 50 para obtener el total de glóbulos blancos por mm3 de sangre.

10. La fórmula utilizada para realizar los cálculos es la siguiente:

N x 20 x 10 = N x 50

4

Donde:

N= número de leucocitos contados

20= titulo de dilución

10= corrección de la profundidad de la cámara para ajustar el volumen a 1 mm3

4= total de cuadros grandes contados.

7) Valores de referencia:

En la tabla se muestran los valores de referencia de acuerdo a la edad.

LEUCOCITOS

VALORES DE REFERENCIAEDAD SEXO VALORES (Leuc/mm3)

RECIEN NACIDO F/M 9,000 A 30,0001 MES A 2 AÑOS F/M 6,000 A 18,000

3 A 10 AÑOS F/M 4,000 A 13,60011 A 60 AÑOS F/M 5,000 A 11,000

MAS DE 60 AÑOS F/M 5,000 A 10,000

8) Comentarios:

9) Resultados:

10) Bibliografía:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003643.htm

http://www.tuotromedico.com/temas/leucocitos.htm

Practica no. 8

RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS

1) Fundamento:

2) Objetivos:

Al terminar la práctica, el alumno será capaz de:

Identificar la importancia y utilidad clínica del recuento de eritrocitos. Ejecutar correctamente el recuento de glóbulos rojos en muestras

sanguíneas. Describir el fundamento del método.

3) Generalidades:

4) Equipo: Agitador eléctrico para pipetas Thoma Reloj de laboratorio Microscopio

5) Material:a) Biológico:1. Sangre obtenida con E.D.T.A.b) De laboratorio1. Pipetas de Thoma para glóbulos rojos con boquilla2. Cámara de Neubauer 3. Liquido diluyente de Hayen 4. Gradilla5. Tubos de ensayo de 13 x 100 mm6. Pipetas serológicas de 5 ml.

6) Procedimiento:

1. Mezclar la sangre por lo menos durante 5 minutos.2. Llenar la pipeta de Thoma con sangre hasta la marca “0.5”.3. Diluir con liquido de Hayen, llenando hasta la marca 101; se debe evitar la

formación de burbujas, que alterarían la dilución. Para ello, se recomienda rotar la pipeta al aspirar y mantenerla en posición vertical. El exceso en la punta se elimina con papel secante. Con esto, obtenemos una dilución de 1 a 200.

4. Agitar durante un minuto en el agitador eléctrico.5. Inmediatamente eliminar las primeras cuatro gotas y cargar la Cámara de

Neubauer en sus dos cuadriculas. Dejar reposar un minuto a temperatura ambiente para permitir la sedimentación de las células.

6. Contar al microscopio con objetivo seco débil o fuerte, verificando primero que la distribución de las células sea homogénea; en caso contrario, se deberá repetir la prueba. La cuenta se realiza en 80 cuadros pequeños del área central de la cámara, seleccionando para ello un cuadro mediano central y cuatro angulares.

7. Multiplicar el número de eritrocitos contados por 10,000 para obtener el total de glóbulos rojos por mm3 de sangre.

8. La fórmula utilizada para realizar los cálculos es la siguiente:

N X 200 X 10 X 400 = N X 10,000

80

Donde:

N= NUMERO DE ERITROCITOS CONTADOS

200= TITULO DE DILUCIÓN

10= CORRECCIÓN DE LA PROFUNDIDAD DE LA CÁMARA PARA AJUSTAR EL VOLUMEN A 1 mm3.

400= TOTAL DE CUADROS PEQUEÑOS DEL CUADRO CENTRAL DE LA CÁMARA

80= TOTAL DE CUADROS PEQUEÑOS CONTADOS

7) Valores de referencia:

Al igual que con la hemoglobina, se modifican con la edad, sexo y altura sobre el nivel del mar. En la CD. De Xalapa, Ver a 1400 m sobre el nivel de mar son los mostrados en la tabla.

TABLAERITROCITOS

VALORES DE REFERENCIA

EDAD SEXO VALORES(x 106/mm3)

RECIÉN NACIDO F/M 4.5 a 6.51 MES A 2 AÑOS F/M 3.5 a 4.0

3 A 10 AÑOS F/M 4.1 a 5.011 A 60 AÑOS FEM 4.6 a 5.8

MAS DE 60 AÑOS F/M 4.1 a 5.0

En la siguiente tabla, se muestran los valores promedio de eritrocitos a diferentes alturas sobre el nivel del mar:

TABLAERITROCITOS

VALORES A DIFERENTES ALTITUDESALTURA EN METROS MUJERES

Erit. X 106/mm3HOMBRES

Erit. X 106/mm3

MEDIA RANGO MEDIA RANGONIVEL DEL MAR 4.65 3.88 a 5.42 5.15 4.39 a 5.91

1000 4.069 4.17 a 5.21 5.28 4.63 a 5.93

1860 4.092 4.32 a 5.51 5.76 4.94 a 6.58

2220 4.99 4.27 a 5.71 5.69 5.10 a 6.28

2670 4.95 4.34 a 5.59 5.63 4.95 a 6.31

8) Comentarios:

9) RESULTADOS:10) Bibliografía:

Practica no 9

RECUENTO DE PLAQUETAS

1) Fundamento:

2) Objetivos:

Al terminar la práctica, el alumno será capaz de:

Justificar la utilidad clínica del recuento de plaquetas.

Realizar el recuento de plaquetas.

3) Generalidades:

4) Equipo:

a) microscopiob) contador de células c) agitador eléctrico para pipetas de Thoma.

5) Material:

a) Biológico:

1. Sangre obtenida con E.D.T.A.

b) De laboratorio:

1. Pipetas de Thoma para leucocitos, con boquilla.2. Cámara de Neubauer.3. Caja de Petri.4. Papel filtro.5. Tubos de ensaye de 13 x 100 mm.6. Solución de oxalato de amonio al 1% 7. Pipetas serológicas de 5 ml.

6) Procedimiento:

1. Con la pipeta de Thoma, aspirar el diluyente recientemente filtrado, hasta la marca “0.5”.

2. Ahora, cuidando que no se salga el diluyente, aspirar sangre bien mezclada hasta la marca “1”.

3. Cuidando igualmente que no se salga la sangre, aspirar nuevamente liquido de dilución hasta la marca “11”. Con esto obtenemos una disolución de 1:20.

4. Mezclar inmediatamente la pipeta en el agitador eléctrico durante un minuto.

5. En una caja de Petri, poner un disco de papel filtro húmedo. Esto nos servirá como cámara de humedad.

6. Llenar la Cámara de Neubauer en sus dos cuadriculas y colocarla en la cámara de humedad. Dejarla en reposo durante 10 minutos para permitir la sedimentación de las plaquetas.

7. Contar al microscopio en las mismas superficies usadas para el recuento de glóbulos rojos. Sacar el promedio de ambas cuadriculas.

8. Hacer los cálculos con la siguiente fórmula:

N X 20 X 10 X 400 = N X 1000

80

Donde:

N= Numero de eritrocitos contados.

20= Titulo de dilución

10= Corrección de la profundidad de la cámara para ajustar el volumen a 1mm3.

400= Total de cuadros pequeños del cuadro central de la cámara.

80= Total de cuadros pequeños contados.

7) Valores de referencia:

De 200,000 a 500,000/ mm3 de sangre.

8) Comentarios:

9) Resultados:

10) Bibliografía:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003647.htm

Practica no. 10

RECUENTO DE RETICULOCITOS

1) Fundamento:

.2) Objetivos:

Al terminar la práctica, el alumno será capaz de: Identificar la importancia y utilidad clínica del recuento de reticulocitos.

Realizar correctamente el recuento porcentual de reticulocitos en muestras de sangre.

Calcular a partir del recuento porcentual, las cifras absolutas de reticulocitos por mm3 de sangre.

3) Generalidades:

4) Equipo:a) Baño María a 37°C.b) Microscopio

5) Material:a) Biológico:1. Sangre obtenida con E.D.T.A.

b) De laboratorio:1. Tubos de ensayo de 10 x 75 mm.2. Pipetas Pasteur3. Portaobjetos4. Puentes de vidrio para tinción5. Solución colorante de nuevo azul de metileno6. Solución de azul de cresil brillante7. Gradilla8. Aceite de inmersión

6) Procedimiento:

Con ambos colorantes, se sigue la misma técnica:1. Usando pipeta Pasteur, colocar dos gotas de sangre perfectamente

mezclada en un tubo de ensaye de 10 x 75 mm.2. Agregar 2 gotas del colorante (azul de cresil brillante o nuevo azul de

metileno).3. Mezclar suavemente e incubar a 37°C durante 15 a 20 minutos.4. Resuspender los eritrocitos mediante mezclado suave y hacer extensiones

delgadas.5. Cuando el frotis esté seco, leer al microscopio. Contar 500 eritrocitos,

anotando el número de reticulocitos encontrados durante esa cuenta.6. Obtener el porcentaje de reticulocitos mediante la siguiente formula.

% DE RETICULOCITOS= # DE RETICULOCITOS X 100

500 ERITROCITOS

7. Para obtener la cantidad de reticulocitos por mm3 de sangre, se requiere realizar una cuenta de eritrocitos, como se describió en la practica anterior y posteriormente se calculan usando la siguiente formula:

RETICULOCITOS/mm3= % DE RETICULOCITOS X ERITROCITOS/mm3

100

7) Valores de referencia:

Porcentual: 0.5 a 2%

Absolutos: 20000 a 120000/mm3

8) Comentarios:

9) Resultados :

10) Bibliografía:

http://kidshealth.org/parent/en_espanol/medicos/reticulocyte_esp.html#

Practica no 11

CLASIFICACIÓN DE ANEMIAS

1) Fundamento:

2) Objetivos:

Al terminar la práctica el alumno será capaz de:

Definir, describir y calcular los índices eritrocíticos. Clasificar morfológicamente las anemias

3) Generalidades:

4) Equipo:a) Ninguno

5) Material:a) Biológico, ninguno.b) De laboratorio, ninguno.

6) Procedimiento:

7) Resultados:8) Bibliografía:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000560.htm

http://www.entornomedico.org/enfermedadesdelaalaz/index.php?option=com_content&view=article&id=95:anemia&catid=35:enfermedades&Itemid=56

Practica no 12

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR

1) Introducción:

2) Fundamento:

3) Objetivos:

Efectuar la técnica de la velocidad de sedimentación de los eritrocitos. Adquirir habilidad en el manejo de esta técnica.

4) Generalidades:

5) Material:

Tubos de ensayo de 13 x 100mm. Tubos de Wintrobe de 11.5cm de largo por 3mm de diámetro. Pipetas Pasteur con bulbo Gradilla de sedimentación

5.2 Material biológico

Sangre capilar o venosa con anticoagulante.

5.3 Equipo

Centrifuga clínica

6) Técnica:

1. Seguir todos los pasos de la técnica del macrohematocrito para llenar un tubo de Wintrobe.

2. Después de que el tubo de Wintrobe esté lleno de sangre, colocarlo en posición vertical en una gradilla de sedimentación por un lapso de 60 minutos.

3. Leer en la escala descendente de la izquierda el nivel en que se encuentra la zona de separación entre el plasma y los eritrocitos sedimentados.

4. Informar el resultado en milímetros en una hora.

7) Cálculos:

Corrección por hematocrito.

La velocidad de sedimentación se corregirá cuando el valor de HTO de la muestra se encuentre por debajo de los valores de referencia.

Utilizar la tabla de corrección

8) Valores de referencia:

Niños 0 – 20 mm/h

Mujeres 0 – 20 mm/h

Hombres 0 – 9 mm/h

9) Resultado:

10) Bibliografía:

http://www.tuotromedico.com/temas/velocidad_sedimentacion.htm

Lista de reactivos1. Anti A, 2. Lectina antiA1, 3. Anti B, 4. Anti AB 5. Anti Rh 6. Albumina bovina al 22% 7. Antigamaglobulina humana o suero de Coombs 8. Solución salina isotónica 9. Solución patrón de hemoglobina de 60 mg/dl.

10. Amortiguador de fosfatos de PH 6.8 A 7.0 11. Solución colorante de May Greenwald 12. Solución colorante de Giemsa 13. Solución colorante de Wright 14. Amortiguador para colorante de Wright 15. Aceite de inmersión 16. Liquido diluyente de Hayen 17. Solución colorante de nuevo azul de metileno18. Solución de azul de cresil brillante19. Alcohol etílico20. Oxalato de amonio21. Oxalato de potasio22. Citrato disódico23. Dextrosa24. Ácido etilen diamino tetraacético (E.D.T.A.)25. Heparina26. Agua destilada