Practicas de Laboratorio Biología de Procariotas

PRACTICA 2

Tinción de GramIntroducción

Las bacterias son incoloras y se observan con dificultad al microscopio

óptico. Los cocos y los bacilos se pueden identificar por su forma, agrupación y

por la afinidad a los colorantes utilizados en la tinción de Gram. Las bacterias

Gram positivas retienen el color azul violeta y las bacterias Gram negativas el

color rojo pálido. En general la tinción de Gram no es aplicable a otros

microorganismos como protozoos y hongos, exceptuando a las levaduras que se

tiñen como Gram positivas.

Objetivos1. Clasificar algunas especies bacterianas en Gram positivas o Gram

negativas de acuerdo a esta tinción.

Materiales de laboratorio por equipo1 Asa bacteriológica de aro Fucsina

1 Microscopio Cristal violeta

2 Mecheros Lugol

6 Portaobjetos y

cubreobjetos

Alcohol-cetona

Cultivos bacterianos Papel para lente

Aceite de inmersión Pinzas para tubo de ensaye

Cronómetro

Material del equipoCerillos

Colores

Marcador indeleble o lápiz graso

Cloro

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Franela

Actividad de la práctica Preparación del frotis

Se realizará el mismo procedimiento de la práctica 2

Fijación del frotis

Se realizará el mismo procedimiento de la práctica 2

Tinción diferencial de Gram.

1. Cubrir el frotis con dos gotas de cristal violeta durante 30 segundos a 1

minuto.

2. Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destilada para

eliminar el exceso de colorante.

3. Sacudir un poco y dejar secar, cubrir el frotis con dos gotas de lugol por 30

segundos.

4. Repetir el paso 2

5. Inclinar el portaobjeto y aplicar gota a gota el decolorante dejando que

escurra hasta que no fluya más tintura.

6. inmediatamente repetir el paso 2.

7. aplicar dos gotas de safranina durante 30 segundos.

8. repetir el paso 2, eliminar cuidadosamente el exceso de agua con una toalla

de papel y dejar secar al aire.

9. observar al microscopio.

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Resultados.

Reportar las observaciones de forma, agrupación color y tamaño relativo tal

como se indica en el cuadro de resultados. Hacer los dibujos de la

morfología de cada uno de los microorganismos y colorearlos.

Comparar las observaciones realizadas con las reportadas en la literatura.

Tinción de Gram Escherichia coli

Esquema

Descripción

Forma:

Agrupamiento de

células:

Reacción Gram

Cuestionario1. Explique en forma completa la teoría que explica la tinción de Gram.

Investigue otros dos ejemplos de tinción diferencial.

2. ¿Cuáles son las fuentes de error más comunes en la tinción de Gram?

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Fichas catolográficas del material bibliográfico sugerido que se encuentran en la biblioteca de la UMARFicha No. 2014 CLASIFICACION 579 T759 1996 ISBN: 84-458-0371-9 Título: Tratado de microbiología / Bernanrd D. Davis ... (et.al.), trad. Diorki, S. L. Autor: Editorial: Barcelona : Masson, 1996 Descripción: 1145 p. TEMAS: 1. BACTERIOLOGIA - FISIOLOGIA - GENETICA \ 2. INMUNOLOGIA - VIROLOGIA - BACTERIAS \ 3. MICROBIOLOGIA - VIRUS Y MICROBIOS - ESTUDIO Y ENSEÑANZA \ 4. PATOLOGIA - MICROORGANISMOS VIRALES –

Ficha No. 2194 CLASIFICACION 579 S713m ISBN: 84-282-1030-6 Título: Microbiología general / Hans G. Schlegel Autor: Schlegel, Hans G. Editorial: Barcelona : Omega, 1997 Descripción: 654 p. TEMAS: 1. BACTERIOLOGIA - METABOLISMO CELULAR \ 2. HONGOS - MICROBIOS - BACTERIAS \ 3. BACTERIAS - ESTRUCTURA CELULAR - GENETICA

Ficha No. 2295 CLASIFICACION 616.01 B150m 2005 ISBN: 970-729-136-2 Título: Microbiología médica de Jawetz, Melnick y Adelberg / Geo F. Brooks, Janet S. Butel, Stephen A. Morse, trad. Francisco Sánchez Fragoso Autor: Brooks, Geo F. Editorial: México : El Manual Moderno, 2005 Descripción: 786 p. TEMAS: 1. INMUNOLOGIA - BACTERIOLOGIA - VIROLOGIA \ 2. MICOLOGIA - PARASITOLOGIA - DIAGNOSTICO \ 3. CLINICA BACTERIOLOGICA - MICROBIOS - BIOLOGIA MOLECULAR \ 4. MICROORGANISMOS - CULTIVO - CRECIMIENTO

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Ficha No. 2761 CLASIFICACION 579 C159m 1979 ISBN: 968-25-0205-5 Título: Microbiología / Philip L. Carpenter, trad. José Rafael Blengo, Roberto Espinosa Zarza, Alberto Folch Pi. Autor: Carpenter, Philip L. Editorial: México : Interamericana, 1979 Descripción: 518 p. TEMAS: 1. MICROORGANISMOS - MORFOLOGIA - IDENTIFICACION \ 2. BACTERIAS - VIRUS - METABOLISMO Y MECANISMOS GENETICOS \ 3. PROTISTAS - PROTOZOARIOS - ALGAS \ 4. MOHOS - LEVADURAS - ECOLOGIA \ 5. ENFERMEDADES INFECCIOSAS - MICROBIOLOGIA AMBIENTAL E INDUSTRIAL Notas: Incluye índice, glosario y referencias bibliográficas

Ficha No. 2284 CLASIFICACION 636.089 692 T759 ISBN: 84-200-0766-8 Título: Tratado de microbiología veterinaria / Editado por Ernst L. Biberstein, Yuan Chung Zee, Trad. Manuel Ramis Vergés Autor: Biberstein, Ernst L. Editorial: Zaragoza : Acribia, 1994 Descripción: 673 p. TEMAS: 1. PARASITISMO - PATOLOGIA ANIMAL - MICOBIOS \ 2. BACTERIAS Y HONGOS - VIRUS - ANALISIS \ 3. MICROBIOLOGIA VETERINARIA