1290 Infinity II
Ultra-eficiencia con UHPLC.
Soluciones y configuraciones
con la NUEVA serie Infinity II.
Análisis dirigido mediante
técnicas de LC con acoplamiento
a espectrometría de masas en
tándem
November 20, 2015
1
Mensaje de Eficiencia:
November 20, 2015
2
Eficiencia Analítica
Eficiencia Instrumental
Eficiencia Laboratorio
Un Nuevo Punto de
Referencia
en Eficiencia
Agilent 1290 Infinity II LC, la nueva
generación en “Ultra High
Performance Liquid Chromatography”
Aumenta la eficacia de su empresa
en tres dimensiones:
Eficiencia Analítica
Eficiencia Instrumental
Eficiencia Laboratorio
November 20, 2015
3
:
Eficiencia Analítica.Incomparable rendimiento de Separación y Detección entregar los
datos de análisis de la más alta calidad para la máxima confianza en
sus resultados :
• Máxima eficacia en la separación mediante UHPLC:
• Ultra low Dispersion kits (ULD)
• LC-1DLC-2D comprehensive multidimensional
• 1300 bars a 2mL/min, hasta 5mL/min a 800 bars
• Mínimo “carryover” (contaminación cruzada): <9 ppm con la opción
de multi-lavado con 3 solventes y limpieza del asiento de la aguja.
• Máxima sensibilidad y rango dinámico: DAD: 60mm max Ligth cell
y HDR. // nuevo ELSD 1290 Series II.
• Máxima precisión de tiempos de retención (flujo y composición).
Efficiency MessagingInfinity II – La clave de la Eficiencia
Eficiencia Analítica
Eficiencia Instrumental
Eficiencia Laboratorio
November 20, 2015
4
Efficiency MessagingInfinity II – La clave de la Eficiencia
Eficiencia Instrumental
• Ciclos de inyección más rápidos: hasta 5 seg. con opción de doble
aguja y sin comprometer “carryover” o discriminación de muestras por el
solapamiento inyección & análisis.
• Mayor capacidad de muestras refrigeradas: hasta 6144 muestras en
microplacas, 432 viales 2ml, combinaciones entre múltiples tipos de placas,
viales, eppendforfs,…..
• Mayor Flexibilidad: para todo tipo de cromatografías UHPLC/ HPLC
/Semi-preparativo/ Muldimensional/….
• Trabajar con todo tipo de diámetros de columnas desde 1 hasta 8 mm. d.i.:
• Inyectar desde menos de 1µL hasta 900µL sin intervención del usuario y sin
comprometer prestaciones, gracias a la opción de doble aguja.
• Nuevos conectores para intercambiar muy fácilmente columnas hasta 1300
bars y SIN necesidad de herramientas
• Hasta 8 columnas de 20º por debajo de temperatura ambiente hasta 110ºC
• Mayor capacidad de Automatización:
• Múltiples tipos de válvulas muy fácilmente intercambiables, para selección
de disolventes, intercambio y regeneración de columnas, limpieza o
enriquecimiento de muestra.
• Inyectores programables para preparación de muestra: dilución, mezclado,
derivatización,……
Eficiencia Analítica
Eficiencia Instrumental
Eficiencia Laboratorio
November 20, 2015
5
Eficacia del Laboratorio• Emulación de otros U/HPLC’s (opción ISET): facilitar la transferencia de
métodos.
• Poder disponer de todas las prestaciones de los Agilent 1290 II Infinity
incluso controlándolos desde softwares de otras firmas, gracias a los nuevos
Drivers RC.net.
• Reducir el coste operativo
• Compatible con los módulos 1100/1200/1260/1290.
• “Early Maintenance Feedback” (EMF) y “Lab Advisor”: para que el propio usuario
pueda monitorizar, prever, mejorar el mantenimiento (guiado) del equipo.
• Compromiso Agilent de un mínimo de 10 años de valor de la inversión.
Efficiency MessagingInfinity II – La clave de la Eficiencia
November 20, 2015
6
Nuevo 1290 Infinity II DAD
Nuevo 1290 Infinity II DAD FS
Nuevo 1290 Infinity II VWD
Nuevo 1290 Infinity II ELSD
Nuevo 1290 Infinity II
Multicolumn Thermostat
Nuevo 1290 Infinity II
Multisampler
Vialsampler
Nuevo 1290 Infinity II High Speed Pump
Nuevo 1290 Infinity II Flexible Pump
1290 Infinity II – Descripción del Sistema6
November 20, 2015
7
1290 Infinity II
Sistemas de
Bombeo
Evolución
• Nuevos modelos:
• 1290 Infinity II High Speed Pump (HPM)
• 1290 Infinity II Flexible Pump (LPM)
• Rango de Potencia mejorado con 1300bar
• Nuevo diseño con 2 puertas del
1290 Infinity II
Bombas1290 Infinity II¿Que es nuevo?
Mezcla en baja presión Mezcla en alta presión
Page 8
Alta velocidad y resolución
1300 bar @ 2.0 mL/min
800 bar @ 5.0 mL/min
Volumen muerto: 10 µl / 45 µl
Amortiguador electrónico de pulsos
Procesador de doble nucleo
dedicado al control de pulsos
Motores de 300 picolitros por
paso
Largos intervalos de mantenimiento
“Automatic Leak-Correction“
150 Litros de disolvente
Automatismo
Purga automática
Válvula de
Selección de disolvente
Mezclador
“Jet Weaver“
Desgasificador
Pistones de
“Silicon –Carbide“ Válvula de
purga
Canal
B
Canal
A
Page 9
1290 Infinity II LC Binary PumpLa siguiente generación en Tecnología de Bombas LC
ON
OFFMotor del Pistón
1290 Inifinity II
Chanel A
1290 Inifinity II
Chanel B
• Motores independientes
para cada pistón
• Pasos de 300 picolitros
HPLC 1200
UHPLC 1290-II
Page 10
1290 Infinity Binary PumpAmortiguación electrónica de pulsos
1200 Series
Channel A
Passive Damper
0 - 300 µl
Passive Mixer
400 µl
1200 Series
Channel B
1290 Inifinity II
Chanel A
1290 Inifinity II
Chanel B
Very Low Noise
~ 800 µl
+ =Aktive Damping
10µl
Jet Weaver Mixer
35µl
Lowest Noise
• min. 50% lower
Delay Volume
• 10µl / 45µl
• 80x / 20x lower
Page 11
1290 Infinity Binary PumpEl mas bajo volumen muerto y el mas bajo ruido de mezcla
El 1290 Infinity II “Flexible Pump” es la única Bomba con
mezcla en baja presión que combina el rendimiento de la
mezcla en alta presión de las bombas UHPLC, con la
flexibilidad de la Bomba Cuaternaria. Esta Bomba alcanza
la máxima calidad de gradiente en el rango de composición
del 1 to 99 %.
Mayor precisión del tiempo de retención para una
Identificación de picos mas segura
Page 12
13
Nuevo mezclador InletWeaver
basado en la super-eficiente
tecnología Jet Weaver
Mezclador opcional en alta presión (sólo para
condiciones muy críticas- p.e. TFA)
Premezcla el eluyente
antes de entrar en el
cabezal de bombeo
Agilent Inlet WeaverPremezclador en baja presión de alta eficacia
14
0 10 20 30 40 50
mAU
0
50
100
150
200
250
Gradiente EscalonadoSaltos 1 % del 0 a 10 %
1290 Infinity II Quaternary systemQuaternary UHPLC from other vendor
1%
3%
7%
10%
Salto in
icia
l
Influencia Rango Composición: Prestaciones con Pequeñas Proporciones de % Orgánico
1290 Infinity II
Inyectores Automáticos
Evolución y Revolución
November 20, 2015
15
Nuevo Multisampler Revolución
1260 Multisampler
600 bar
Infinity II Multisampler
1300 bar
Refrigeración por compresor interno (opcional)
Doble puerto de Inyección (opcional)
Multi-lavado (opcional)
Infinity II 12901260
16
November 20, 2015
1290 Infinity LCpág.: 17
Opción Multi-lavado• Sofisticada opción de lavado integrada: para el asiento y el exterior de la la aguja en
“contra corriente”, con 3 disolventes.
Opción de refrigeración • Refrigeración basada en compresor, de: 4°C – en adelante!
• Integrada en el Inyector y auto instalable por el usuario
Programa Manual de Inyección• Permite realizar mezclas, derivatizaciones, diluciones …..
Alta capacidad de muestras• Hasta 16 Well Plates (8 Deep), 8 Vial Plates / 6144 muestras).
• 432 viales 2ml refrigerados
• Combinaciones de multiples tipos de placas, viales, eppendfor’s,….
Opción Doble Jeringa de Inyección• La Inyección con doble jeringa permite realizar inyecciones cada “5 sec”
• La Inyección con doble jeringa permite configurar los dos puertos con loops
preparativos / analíticos sin contaminaciones ni cambios en el Hardware
Nuevo Agilent 1290 Infinity “Multisampler”Capacidades principales
pág.: 181290 Infinity LC
Bomba de lavado de aguja
Dispositivos de medida de muestra
Opciones de cabezales:
• 40 µL (1300 bars)
• 100 µL (1300 bars)• 500 µL (600 bars) / 900µL (400bars)
• Opción Multi-draw
Doble Aguja setup
• Idénticos o Diferentes
volúmenes de Inyección
Válvula de 6 puertos
• Rápido intercambio
• 1300 bar
• Bomba peristaltica
• Lavado de aguja (1 solvente)
Hidraulica del MultisamplerDoble-aguja setup
1290 Infinity LCpág.: 19
Único sistema de Doble Aguja
• Incremente la velocidad de Inyección
Eliminando el tiempo extra necesario para la
aspiración de la muestra y de lavado de la
aguja, al usar 2 bucles de tamaño similar
(e.g. 20µL/20µL)
• Flexibilidad única
Permite montar Loop´s analíticos y
Preparativos en cada puerto de Inyección, sin
compromisos de contaminación ni cambios en
el Hardware (e.g. 20µL/500µL)
• Sin Contaminación Cruzada
Se puede utilizar un puerto para los Standard y
otro para las muestras
1 ÚNICO
Meetering device
con 2 loops
Injection de Doble AgujaLa Inyección separada para calibrantes & muestras previene la
contaminación
1290 Infinity II Multisampler
1290 Infinity LCpág.: 20
Configurando el 1290 Infinity II Multisampler con una
segunda aguja de Inyección, se pueden reducir los ciclos de
Inyección a pocos segundos – eliminando los tiempo de
espera de los Inyectores convencionales incluso cuando se
utilizan altos volúmenes de inyección y procedimientos de
lavado.
Ciclos rápidos de inyección con inyector de doble aguja
pág.: 211290 Infinity LC
• 3 diferentes disolventes de lavado
• Bomba inerte para el lavado de la aguja
• Bomba de alta presión
• Lavado del asiento en contra
corriente
Dispositivos de medida de muestra
Opciones de cabezales:
• 40 µL
• 100 µL
• 500 µL / 900µL
• Opción Multi-draw
Valvula de selección de disolventes
Bomba de lavado
Válvula de 6 puertos
• Rápido intercambio
• 1200 bar
Hidraulica del MultisamplerMulti lavado setup
1290 Infinity LCpág.: 22
Lavado del interior de la aguja
Se hace pasar flujo por el interior de la
aguja.
Lavado del exterior de la aguja
Programa de selección de tres disolventes
externos para el lavado exterior de la aguja.
Lavado del asiento de la aguja en
contracorriente
Programa de selección de tres disolventes
externos para el lavado del asiento
Utilizando la nueva Opción de Multi-lavado se podrán
lavar interna y externamente todos los conductos y aguja
con tres distintos disolventes, así como el asiento de la
aguja, en contracorriente
Baja contaminación cruzada Para una alta calidad de sus datos
1290 Infinity LCpág.: 23
El 1290 Infinity II Multisampler con Multi-Lavado
reduce la contaminación cruzada a menos de 9 ppm!
Baja contaminación cruzada Para una alta calidad de sus datos
1290 Infinity II - Máxima EficienciaIntuitivo y fácil de usar
24
Entrada de Muestras Grafica
• Simple y efectiva herramienta
grafica para la entrada de
muestras en OpenLAB-CDS
• Para todos los Agilent LC
Autosamplers
• Configurable para cualquier
tipo de bandeja de viales o
pocillos
Blancos
Muestras?
Patrones?
November 20, 2015
Nuevo Vialsampler
G7129B with MCT G7116BG7129B with ICC Option
Page 25
1260 Vialsampler
600 barInfinity II Vialsampler
1300 bar
Infinity II 1290Infinity 1260
ICC Compartimento de Columnas Interno (opcional)
Máximo 2 columnas, 30 cm
Nuevo Agilent 1290 Infinity II Vialsampler
132 viales
Refrigeración Liquida (opcional)
Bandeja de viales externa para funcionamiento en Open Access
Multidraw Kit para inyecciones hasta 1500 µl
Page 26
Horno de Columnas
1290 Infinity II
Multicolumn
November 20, 2015
27
Máxima Eficiencia de la Industria- Significativas mejoras – MCT
Horno de Columnas Multicolumn con acceso a las
columnas mucho mas fácil
• Capacidad para 4 columnas de (30 cm)
• 4°C hasta110°C
Tapa vasculante: • Apertura 90°utilizable como soporte para facilitar la instalación de las columnas
• Apertura 180 ° para facilitar el acceso a las columnas
• Retirada de la Tapa para un acceso total
El 1290 Infinity II Horno Multicolumn con espacio para
alojar hasta ocho columnas cortas, o cuatro columnas
de 30 cm o cualquier combinación de columnas conectadas
a la válvula de selección interna, permite un rápido y simple
cambio de método.
Flexible para todas las aplicaciones
Page 29
1290 Infinity II MCT
¿Que es Nuevo? Nuevos…Intercambiadores de calor
November 20, 2015
Agilent Confidential
30
Intercambiadores de
calor para su uso en el
modelo G1316C 1290
Infinity TCC
Baja Dispersión Intercambiador de Calor de
conexión rapida para su uso en el modelo G7116B ,
1290 Infinity II MCT
Nuevos intercambiadores de calor de Conexión Rapida
• Facilmente instalables e intercambiables
• Capacidad hasta 8 columnas individuales
• Diferentes volumenes (1, 1.6 ó 3µL) para cada tipo de
columna y flujo de trabajo
delicados
30
November 20, 2015
G1316-80022
31
Nuevos Conectores: Pequeños detalles que facilitan el trabajo
El muelle empuja al capilar constantemente hacia el puerto receptor
Volumen muerto
cero garantizado
Nuevo conector
Quick-Connect Conector sin Herramientas
hasta1300 bar
Nuevo conector
Quick-Turn Apretado manual hasta 600 Bar
Utilizando una llave hasta 1300 Bar
• Capilar intercambiable.
• Reutilizable (+200 veces)
para todos tipo de columnas.
1290 Infinity II
Detectores
November 20, 2015
32
Evolución
1290 Infinity II VWD (G7114B) Doble Longitud de Onda (hasta 5 Hz) con mejores especificaciones
de ruido
Velocidad de adquisición 240 Hz para separaciones ultra rápidas
3 Celdas Preparativas compatibles con 1290 Infinity I VWDs
1290 Infinity II DAD (G7117B) Rendija programable 1,2,4 8 nm
Velocidad de adquisición 240 Hz para separaciones ultra rápidas
Mejores especificaciones de precisión en la Longitud de Onda
Segunda generación de Control Electrónico de Temperatura ETC
proporciona la máxima estabilidad de línea de base haciendo el
Detector, insensible a las condiciones de temperatura y humedad del
laboratorio.
1290 Infinity II DAD FS (G7117A) Precio mas bajo que el 1290 Infinity DAD G7117B
Rendija fija de 4 nm
Velocidad de adquisición 120 Hz para separaciones rápidas
Resto de especificaciones similares al modelo1290 Infinity DAD G7117B
1290 Infinity II Detectores UV
Page 33
34
1290 Infinity UHPLC Diode Array Detector- La necesidad de una nueva tecnología
10 mm camino óptico13 µL volumen
4.6 mm id column
+ =
Columna corta
d.i. 2.1 mm
?Dispersión pico• Pérdida de resolución• Menor señal (S/N)
¿Cómo lograr celdas de menor volumen?
Corto camino óptico (3 mm, 2 µL)
Alta transmisión de luz => bajo ruido Baja S/N Baja transm. de luz => elevado ruido Low S/N
Largo camino óptico (10 mm, 0.5 µL)
Guía de ondas Optofluídica
• Largo camino óptico
• Pequeño d.i./ volumen de celda
• Alta transmisión de luz La mayor S/N
Solución:
Non-coated fiber (fused
silica)
CELDA Estandard: De 10 mm de camino óptico y tan solo 1 µl de volumen
CELDA de Alta Sensibilidad: De 60 mm de camino óptico y tan solo 4,8 µl de volumen
DISEÑO OPTICO PARA OFRECER UNA MINIMA DISPERSIÓN
Page 35
Cartucho de Celda “Max-Light“Tipos de Celda
36
Deuterium lamp
Max-Light cartridge cell
Programmable
slit
1024 element
diode-array
GratingMirror 240 Hz
Guía de ondas optofluídica
1290 Infinity II Detector Diode Array Como trabaja la óptica
min0 0.1 0.2 0.3 0.4
mAU
0
10
20
30
40
50
60
La nueva Celda de Flujo ULD optimizada y la velocidad de
adquisición hasta 240 Hz incrementan dramáticamente la
resolución Cromatográfica en sus separaciones ultra rápidas
min0 0.1 0.2 0.3 0.4
mAU
0
20
40
60
80
100
Data rate = 240 Hz
Data rate = 20 Hz
Baja dispersión para una alta resolución
Page 37
Para las muestras con grandes diferencias de niveles de
concentración, la solución High Dynamic Range DAD del
1290 Infinity II ofrece un rango lineal 30x permitiendo
detectar y cuantificar todos los componentes de la mezcla
con una única inyección.
Capacidades de detección únicas
Page 38
Para las muestras con grandes diferencias de niveles de
concentración, la solución High Dynamic Range DAD del
1290 Infinity II ofrece un rango lineal 30x permitiendo
detectar y cuantificar todos los componentes de la mezcla
con una única inyección.
Capacidades de detección únicas
Page 39
Infinity II
Aplicaciones
especiales
November 20, 2015
40
La innovadora tecnologia de emulación Agilent iSET permite
utilizar sus metodos validados sin ninguna modificación,
consiguiendo los mismos resultados en el 1290 Infinity II
que el LC de origen. Ya es posible reemplazar sus viejos
LC´s sin necesidad de modificar sus preciados métodos.
Todos los 1290 Infinity II pumps viene con iSET incluido.
Sistema de emulación iSET
Page 41
42
Tecnología de Emulación Inteligente ISET¿Como funciona?
43
Programa de gradiente
1290 gradiente
1200 gradiente
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
0
50
100
150
200
250
300
350
400
min
mAU
InjecciónMismas condiciones de gradiente pero
desplazando el gradiente y emulando el
perfil de gradiente a clonar
Tecnología de Emulación Inteligente ISET¿Como trabaja (p.e. 1290 con un 1200)?
44
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
0
50
100
150
200
250
300
350
400
min
mAU
InyecctiónMismas condiciones de gradiente pero
desplazando el gradiente y emulando el
perfil de gradiente a clonar
Programa de gradiente
1290 gradiente
1200 gradiente
Tecnología de Emulación Inteligente ISET¿Como trabaja (p.e. 1290 con un 1200)?
45
Alliance
2695
345 bar
1290 Infinity
1200 bar
1290 Infinity
1200 bar
with ISET
EJEMPLO DE TRANSFERENCIA DE METODO4.6 x 100 mm Zorbax Eclipse Plus, 5 µm, flow: 2 mL/min, 25-95% ACN-Water
Used Method: % B: 25-95 %; Time : 8 min; Flowrate: 2 ml/min
1290
ISET
1200
1290
1260
Page 46
EJEMPLO DE TRANSFERENCIA DE METODO4.6 x 100 mm Zorbax Eclipse Plus, 5 µm, flow: 2 mL/min, 25-95% ACN-Water
Seleccione el tipo de separación deseada con un simple giro de conmutador
para seleccionar Cromatografía convencional o 2D, dependiendo de la
complejidad de la muestra.
Flexible para todas las aplicaciones
Page 47
Cuando una dimensión no es suficiente…Análisis de muestras complejas con necesidad de alta capacidad de picos
min20 40 60 80 100
mAU
0
10
20
30
40
50
min10 20 30 40 50
mAU
0
20
40
60
Column: 2.1 x 150 mm, 1.8 µm
Back pressure: 402 bar
Peak capacity: 313
Column: 2.1 x 300 mm*, 1.8 µm
Back pressure: 598 bar
Peak capacity: 406
*300 mm column by coupling two 150 mm columns
Page 48
Incremento de la Capacidad de picos…en la 2ª Dimensión
Page 49
LC
Peak capacity = 10
+ LC
Peak capacity = 10 Peak capacity = 20
xLC
Peak capacity = 10
LC
Peak capacity = 10 Peak capacity = 100 !
50
Modos de Operación LC-2D Soportados
Comprehensive LCxLC:• Standard: muestreo en continuo
• Time-/Peak-triggered: ahorra disolvente de la 2ª
dimensión (muestreo discontinuo).
Heart-cutting LC-LC:• Time-triggered
• Peak-triggered
level
1D chromatogram
2D sampling
2D gradient
level
Muestras Desconocidas/ Complejas:
Biofarma, Alimentación, Polímeros....
Muestras Conocidas/Aumentar la Confianza:
Farma, Desarrollo de métodos,...
2D sampling
2D gradient
2D sampling
2D gradient
2D sampling
2D gradient
51
Hardware: Elevada Flexibilidad Modular
1. Dimensión
2. Dimensión
1290 Infinity
Binary Pump
1290 Infinity
Binary Pump
1290 Infinity
Autosampler or 1260
HiP Autosampler
Optional
1260/1290
Infinity
Detector
1 ó 2
1290 Infinity TCC
Optional
1260/1290
Infinity
Detector
1260/1290
Infinity
detector 2ª
dimensión
1260 Infinity Binary or
Quaternary Pump
1260 Infinity
Capillary Pump 1260 Infinity
Autosampler
Monitorizar
cromatograma 1ª
dimensión y
peak-triggering
Monitorizar línea
de desecho
Casi cualquier bomba, inyector automático Agilent puede utilizarse en la 1 ª dimensión!
Casi todos los detectores son compatibles!
Una bomba binaria 1290 Infinity es necesaria para la segunda dimensión.
Desecho
Loop1
Loop2
2pos/4port-duo
Nueva vávula exclusiva
Agilent 2D-LC con 2
rutas de flujo
completamente
simétricas y vaciado a
contracorriente de
ambos “loops“.
1D-LC 2D-LC
Flexible para todas las aplicaciones
Page 52
Technical Note 5991-4843EN
Page 53
Transferencia de métodos de HPLC a UHPLC
DMRM y tMRM
LC MS/MS
Mayor confianza en la
confirmación
Agilent Innovation Tour 201555
Reto analítico
Residuos:
>1000 Pesticidas
>300 Drogas veterinarias
Contaminantes
naturales:
>500 Micotoxinas
>500 Toxinas de plantas
>100 Biotoxinas marinas
>1000 Contaminanates:
Medioambientales:
Dioxinas, PCBs, HPAs,
Retardantes de llama, PFCs,
Biocidas, Disruptores
endocrinos, Metales pesados
>>Cientos de
contaminantes de
procesos y adulterantes:
Acrilamida, Aminas
heterocíclicas, Furanos,
desinfectantes, Melamina…
Niveles;
•0.001-10 mg/Kg
Múltiples
matrices
FDA
EPA
EU
Agilent Innovation Tour 201556
Sistema Agilent 6495Nuevos desarrollos para la mayor sensibilidad
Tecnología de
Ionización y
Transferencia de Iones
• Agilent Jet Stream Ion
Generation
• Hexabore capillary
• Tecnología Dual ion funnel
(iFunnel)
Celda de colisión
• Campo Hexapolar, con foco
Axial y celda curvada
• Estructura cónica para
incrementar la entrada
de iones
• Reducción del ruido
Mejora an la
Electrónica del Quad
Drive
• Mejor respuesta de la
frecuencia Quad DC
• Mayor capacidad de
potencia RF
• Frecuencia del Quad drive
aumentada a 1.4 MHz
Agilent Innovation Tour 201557
Sistema Agilent 6495Nuevos desarrollos para la mayor sensibilidad
Tecnología de
Ionización y
Transferencia de Iones
• Agilent Jet Stream Ion
Generation
• Hexabore capillary
• Tecnología Dual ion funnel
(iFunnel)
Celda de colisión
• Campo Hexapolar, con foco
Axial y celda curvada
• Estructura cónica para
incrementar la entrada
de iones
• Reducción del ruido
Mejora an la
Electrónica del Quad
Drive
• Mejor respuesta de la
frecuencia Quad DC
• Mayor capacidad de
potencia RF
• Frecuencia del Quad drive
aumentada a 1.4 MHz
Agilent Innovation Tour 201558
Herramientas para el enfoque dirigido en LCMSMS
El enfoque Dirigido basa la confirmación en la
respuesta relativa de una 2a o 3a MRM que en
demasiadas ocasiones la matriz desvirtúa por
interferencias o en técnicas de atrapado lentas que
deterioran la cuantificación.
• Dynamic MRM: Herramienta para
aumentar el rendimiento de los
métodos analíticos.
• tMRM : Para una mayor confianza en
la confirmación
Herramientas
Agilent
Muestra real– Napropamida en extracto de limón 1ug/Kg
Agilent Innovation Tour 201559
x3 x4 x4 x3 x4 x2 x1
Nº de TransicionesConcurrentes =
Rt
Selección de 24 transiciones de analitosPara ilustrar la eficacia de los Tiempos de Ciclo usando dynamic MRMs.
Tiempo de Ciclo
MRM dinámico
Agilent Innovation Tour 201560
Time >>>
Abundance
>>
>
Compuestos
adquiridos
MRM dinámico - Simulación
Agilent Innovation Tour 201561
¿Para qué sirve el triggered MRM?Cuantificación y Confirmación : Fingerprinting
Enfoque de barrido:
Barrido de la huella del compuesto
Estrategia tMRM:
Foco en las características (fragmentos)
del compuesto
Dos posibles escenarios:
- Confirmación de positivos con información adicional (confirmación
espectral)
- Eliminación de negativos debido a interferencias de la matriz
Mayor confianza en la confirmación
Agilent Innovation Tour 201562
Analisis con Triggered MRM (tMRM)
Threshold
MRM Secundarias
“Triggered”
MRMs Primarias (bajo threshold)
Triggered MRM (sobre threshold)
Compound Precursor Product
Analyte 1 334.0 145.0
Analyte 1 334.0 117.0
Compound Precursor Product
Analyte 1 334.0 145.0
Analyte 1 334.0 117.0
Analyte 1 334.0 132.1
Analyte 1 334.0 105.1
Analyte 1 334.0 91.1
Analyte 1 334.0 76.0
Analyte 1 334.0 119.0
Mayor confianza en la confirmación
Agilent Innovation Tour 201563
Espectro tMRM Product Ion (344.2 > )
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
080 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340
334.2171.1
145.0
132.1
117.0
105.191.176.0
Espectro tMRM Product Ion
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
080
76.0
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
080 100
91.1
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
080 100 120
105.1
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
080 100 120
117.0
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
0100 140
132.1
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
080 100 120
119.0
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
0100 140 180
145.0x103
8
7
6
5
4
3
2
1
0100 140 180
147.0
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
080 100 120 140 160 180
171.1
334 > 76 334 > 91 334 > 105 334 > 117 334 > 119
334 > 132 334 > 145 334 > 147 334 > 171
Agilent Innovation Tour 201564
0 .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7 .8 .9 1.0
Trap Product Ion Scan = 200ms
Acquisition Time (seconds)
Scanning por Atrapado vs tMRM
Trigger
Full Scan
Full Scan
Full Scan
Full Scan
Requiere analisis más largos con picos
más anchos
Perfil de pico pobre,
cuantificación no reproducible
MUY BAJA PRECISIÓN
Agilent Innovation Tour 201565
Scanning por Atrapado vs tMRM
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0
tMRM Scan < 50ms
Acquisition Time (seconds)
tMRM Scans
Compatible con UHPLC
buen perfil cromatográfico +
buena cuantificación
Trigger
tMRM
Mayor confianza en la confirmación
Agilent Innovation Tour 201566
Busqueda en librerías tMRMTebufenpyrad Standard 50 ppb
Librería match score: 96.75
Análisis de Micotoxinas
Agilent Innovation Tour 201568
MicotoxinasFundamentos
Bajo peso molecular, tóxicas, metabolitos secundarios del hongo
Producidos por diferentes tipos de hongos
• Fusarium esp., Aspergillus esp., Penicillium esp.
Diferente tipo de toxicidad
• carcinógenos, mutagénicos, teratogénico, estrogénicos e
inmunotóxicos.
pro
vid
ed
by P
rof.
Bü
rstm
ayr
MICOTOXINA
Toxicum
(Latin)
tóxico
Myces
(Griego)
hongo
Agilent Innovation Tour 201569
• Cientos de compuestos
• Dos clases principales
• Diversidad química
• Aflatoxinas, Ocratoxinas (OTA), Tricotecenos, Zearalenona, Fumonisinas, PatulinaMicotoxinas mayoritarias
• Ergot alkaloides, Citrinina, Acido Ciclopiazonico, Esterigmatocistina, Monoliformina,
Gliotoxina, Citreoviridina, Tremorgenicas, Acido Penicillico, Roquefortina, Acido 3-
Nitropropionico, Fusaproliferina…)Micotoxinas minoritarias
MicotoxinasUn reto para la preparación de la muestra
Agilent Innovation Tour 201570
Micotoxinas¿Porqué son una preocupación?
>25% de todos los productos
agrícolas se hayan contaminadas
por micotoxinas
A nivel mundial se producen
pérdidas de varios centenares de
millones de toneladas de
alimentos
Pérdidas económicas anuales :
1 billón de $ (sólo en EEUU)
Más de 100 países disponen de
regulación para el control de las
micotoxinas en alimentación
Se encuentran en cereales,
frutos secos, especias, uva,
café, cacao, zumos de fruta;
Como contaminación
secundaria se encuentran en
leche, huevos y carne;
Son resistentes al cocinado
doméstico
¿En que alimentos se encuentran?
Agilent Innovation Tour 201571
Regulaciones (UE y FDA)
Agilent Innovation Tour 201572
Muestra:
• triturada, homogeneizada y
pesada
Extracción
•AcN:Agua:AcFormico
(80:19.9:0.1 v:v:v)
•60 min a temp ambiente en
agitador
Centrifugación
Extracción
•AcN:Agua:AcFormico
(20:79.9:0.1 v:v:v)
•30 min a temp ambiente en
agitador
CentrifugaciónAdicion de ISTD C13
Secado Reconstitución
Sample preparationUniversal extraction procedure
Agilent Innovation Tour 201573
Stable Isotope Dilution Assay (SIDA)HPLC method
Agilent 1290 Infinity LC system consisting of:
- binary pump
- wellplate sampler
- column compartment
HPLC method
Separation column: ZORBAX Eclipse Plus C-18 RRHD column,
100 x 2.1 mm, 1.8 µm @ 30°C
Mobile phase: A: 5 mM HCOONH4+ 0.1% formic acid
B: methanol + 5 mM HCOONH4 + 0.1% formic acid
Flow: 0.35 ml/min
Gradient: 0.00 min 30 % B
0.50 min 30 % B
8.00 min 100 % B
9.50 min 100 % B
9.60 min 30 % B
Inj.Vol.: 3 µl
Agilent Innovation Tour 201574
Stable Isotope Dilution Assay (SIDA)MS methodSpray chamber conditions:
Gas temp.: 140°C
Dry gas: 16 l/min
Nebulizer: 25 psi
Sheath gas temp: 350°C
Sheath gas flow: 11 l/min
Positive Negative
CapVoltage: 4000 V 3000 V
Nozzle voltage 0 V 0 V
DMRM : Automatic setup of MRM tables based on selected cycle time, retention times and retention time windows for the individual compounds
• Cycle time 400 ms
• Interscan delay 3.5 ms
• Total No. of MRMs 33
• Maximum No. Of concurrent MRMs 12
• Minimum Dwell time 39.8 ms
• Maximum Dwell time 196.5 ms
Agilent Innovation Tour 201575
5x10
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
2
2.2
2.4
2.6
2.8
3
3.2
3.4
3.6
3.8 3.87
4.42
4.17
6.44
3.58
5.40
5.961.50
3.37 5.55
Counts vs. Acquisition Time (min)0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2 3.4 3.6 3.8 4 4.2 4.4 4.6 4.8 5 5.2 5.4 5.6 5.8 6 6.2 6.4 6.6
Stable Isotope Dilution Assay (SIDA)Cromatograma Debido a las mismas transiciones, se requiere una buena resolución cromatogrçafica para :
• aflatoxina G1 y 13C-aflatoxina B1
• aflatoxina G2 y 13C-aflatoxina B2
DON T-2
FB1
FB2
ZEN
OTA
AFG2
AFG1
AFB2
AFB1
HT-2
Spiked maize sample,6490 QqQ
Agilent Innovation Tour 201576
Debido a las mismas transiciones, se requiere una buena resolución
cromatográfica para :
• fumonisina B2 y B3
Stable Isotope Dilution Assay (SIDA)Cromatograma
FB3
FB2
4x10
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
2
2.2
2.4
2.6
2.8
3
Cpd 18: Fumonisin B2 + B3: +ESI MRM (706.4000 -> 336.4000)
6.46158157
6.06345538
Counts vs. Acquisition Time (min)
5.7 5.8 5.9 6 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8
FB3
FB2
Agilent Innovation Tour 201577
Appendix - Validation of SIDA methodMethod characteristics vs. legal requirements
AnalytesLinear range
ng/mL
LOQs
(maize)
µg/kg
MRLs
(EC Reg. No
1881/2006)
Commodities
Aflatoxin B1 0.0075 - 74.6 0.04
0.1 processed cereal-based baby food
2.0-12
sum of aflatoxins:
4.0-15.0
nuts and cereals
Deoxynivalenol 0.23 - 225 2.5200
500 - 1750
processed cereal-based baby food
processed / unprocessed cereals,
bread, pasta, breakfast cereals
Fumonisin B1 0.075 - 249 2.5 200
800
1000 / 4000
processed maize-based baby food
maize-based breakfast cereals
maize / unprocessed maizeFumonisin B2 0.075 - 251 0.64
HT-2 toxin 0.2 - 202 2.0 implementation of
MRLs is expected in
the near future
unprocessed cereals and cereal
productsT-2 toxin 0.023 - 75.4 0.17
Ochratoxin A 0.023 – 23.0 0.23
0.5
3.0 / 5.0
10.0
15 / 20 / 80
processed cereal-based baby food
processed / unprocessed cereals
dried vine fruit
spices / liquorice root / extract
Zearalenone 0.076 - 252 1.0
20
50
75-350
processed cereal-based baby food
bread, biscuits, breakfast cereals
processed / unprocessed cereals
Top Related