Análisis microbiológico de
aguaRodrigo Pérez Rivera
José Roberto Acono CarbajalGabriel Cordero Martínez
Juanita Tlalmis Corona
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
Se puede definir el análisis microbiológico como el conjunto de operaciones encaminadas a determinar los microorganismos presentes en una muestra problema de AGUA.
El interés se centra en los microorganismos patógenos, que son los diferentes tipos de bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que transmiten enfermedades
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
ENFERMEDAD AGENTEORIGEN BACATERIANO
Fiebres tifoideas y paratifoideas
Salmonella typhi, Salmonella Paratyphi A y B
Disentería bacilar
Shigella
cólera Vibrio choleraeGastroenteritis agudas y diarreas
Escherichia coli.CampylobacterYersiniae nterocoliticaSalmonella spShigellas
En el análisis rutinario de aguas no se aíslan patógenos
Podrían no aparecer en muestras de laboratorio pues:◦ Tienen acceso en forma esporádica◦ No sobreviven en el agua por mucho
tiempo Necesitan mucho tiempo para detectarse Si están en número muy pequeño no se
pueden detectar por métodos de laboratorio
Microorganismos indicadores de la calidad del agua
Su presencia en el agua prueba que está polucionada con material fecal de personas o animales de sangre caliente
Se encuentran sólo en aguas polucionadas
Y cuando están presentes en el agua indican que hay patógenos
Se usan microorganismos indicadores:
Las muestras que se tomarán para el análisis deben ser representativas para poder determinar así su calidad microbiológica.
Su análisis debe comenzar antes de que hayan transcurrido 6 horas desde el momento de la toma de muestras.
TOMA DE MUESTRAS PARA ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
En circunstancias excepcionales, las muestras pueden conservarse a una temperatura de 4ºC durante un periodo máximo de 24 h antes de su análisis.
Para su muestreo debe utilizarse frascos estériles y debe recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml.
Cuando se estime probable que el agua a analizar contenga trazas de cloro, cloramina u ozono, será necesario neutralizar su efecto bactericida en el momento del muestreo.
Se añadirá una cantidad suficiente de tiosulfato sódico. - Para un volumen de 250 ml son suficientes 0,2 ml de una
solución acuosa al 3% de tiosulfato sódico
FUNDAMENTO: Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de morfología bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativa, no esporuladas y que fermentan la lactosa con producción de ácido a 37ºCen 24-48 horas
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS COLIFORMES
El método consiste en desarrollar solo una prueba presuntiva en el que una reacción negativa excluye la presencia del grupo coliforme.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS COLIFORMES
ColimetríaPrueba Presuntiva
Inoculación en caldo lactosado
Prueba ConfirmativaResiembra a partir de los tubos positivos caldo lactosado
Producción de gas + No producción de gas -Fin de la prueba
Siembra de muestras + en EMBColonias pequeñas, con centro oscuro y brillo metálico + O Siembra en tubos con CLVBBProducción de gas +
Terminación de la pruebaColonias más típicas de siembra por estría EMB Coloración de Gram: Bacilos Gram - no
esporulados
PROCEDIMIENTO. Inocular caldo de peptona con diluciones decimales de la muestra de agua, expresados en 10-1, 10-2, 10-3. Inocular 3 tubos de lactosa bilis verde brillante (a los que se les añade un tubo de Durham invertido) con 1 ml de cada dilución. Incubar a 37ºC (+/-1ºC) durante 24 ó48h.
Número de patógenos
Número de unidades formadoras de colonias totales o de una especie
determinada en un gr o en 1 ml de material investigado bajo condiciones
de cultivo definidas
Método de determinación del número de patógenos
Métodos de determinación del número de gérmenes:
Métodos del número más probable (NMP).
Método de filtro de membrana Método de la placa vertida Método de título
Paralelamente varias series decimales de dilución (mínimo tres) en medio de cultivo líquido.
Número de tubos con crecimiento NMP, tablas de McRady, 100 ml de muestra
Método del número más probable
Filtro estéril sobre unidad de filtración de 0.45
Se filtra cierto volumen de agua: bacterias quedan retenidas
El filtro se coloca sobre soporte absorbente saturado con el medio adecuado. Incubar en cajas de petri especiales que permiten acomodar el soporte y el medio adecuado
Desarrollo de colonias sobre el filtro
Método de filtro de membrana
Ventajas: Examinar grandes volúmenes de
agua Más rápidas que técnicas de tubo Estimación cuantitativa de tipos de
bacterias (coliformes, etc.)
Limitación Aguas con muchos sólidos disueltos o
suspendidos
NMP = #coliformes x 100/ vol filtrado
Manual de ANALISIS BACTERIOLOGICO DEL AGUA, Fuentes de agua y agua potable, Blga. Margarita Aurazo de Zumaeta
http://bvs.per.paho.org/texcom/cd048437/aurazoan.pdf
Análisis microbiológico del agua, Universidad Politécnica de Cartagenahttp://www.upct.es/~minaeees/analisis_microbiologico_aguas.pdf
NOM-127-SSA1-1994, Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano. Límites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilización.
Referencias
CARACTERISTICA LIMITE PERMISIBLE
Organismos coliformes totales
2 NMP/100 ml2 UFC/100 ml
Organismos coliformes fecales
No detectable NMP/100 mlCero UFC/100 ml
Anexos Norma4. Límites permisibles de calidad del agua4.1 Límites permisibles de características bacteriológicasEl contenido de organismos resultante del examen de una muestra simple de agua, debe ajustarse a lo establecido en la Tabla 1.Bajo situaciones de emergencia, las autoridades competentes deben establecer los agentes biológicos nocivos a la salud a investigar.TABLA 1
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