UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
Aislamiento de géneros de Bacteroidetes de sedimento marino de la reserva Bahía Paracas.
Enero-Julio 2016
Tesis para obtener el Título Profesional de Biólogo - Microbiólogo
AUTOR: Br. LIZBETH NOHELY ARMAS MANTILLA
ASESOR: Dra. ICELA RODRIGUEZ HARO
COASESOR: Mg. MAYAR GANOZA YUPANQUI
TRUJILLO – PERÚ
2016
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Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE
TRUJILLO
DR. ORLANDO GONZÁLES NIEVES
RECTOR
DR. RUBÉN VERA VÉLIZ
VICE-RECTOR ACADÉMICO
DR. WEYDER PORTOCARRERO CÁRDENAS
VICE-RECTOR DE INVESTIGACIÓN
DR. ESTEBAN ILICH ZERPA
PROFESOR SECRETARIO GENERAL
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AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS
BIOLÓGICAS
DR. MARCO LEONCIO SALAZAR CASTILLO
DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DR. SANTOS ENRIQUE PADILLA SAGASTEGUI
PROFESOR SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS
BIOLÓGICAS
DRA. EVA ELIZABETH VILLANUEVA TARAZONA
DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
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CERTIFICACIÓN DEL ASESOR
El que suscribe, Dr. Icela Rodriguez Haro, en calidad de profesor asesor de la
tesis: “Aislamiento de géneros de Bacteroidetes de sedimento marino de la reserva
Bahía Paracas. Enero-Julio 2016”
CERTIFICA:
Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con los objetivos
propuestos en su perfil académico y que el informe ha sido revisado y acoge las
observaciones y sugerencias alcanzadas.
Por ello, autorizo a la Br. Armas Mantilla Lizbeth Nohely para continuar con
los procedimientos según sus fines.
Dra. Icela Rodríguez Haro
ASESOR
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PRESENTACIÓN
Señores miembros del jurado dictaminador:
En cumplimiento con las disposiciones reglamentarias vigentes para la
obtención de grados y títulos de las Escuela Académica Profesional de Microbiología
y Parasitología, Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de
Trujillo, someto a vuestra consideración y criterio el presente informe de tesis titulado:
“Aislamiento de géneros de Bacteroidetes de sedimento marino de la reserva
Bahía Paracas. Enero-Julio 2016”, con la cual pretendo cumplir con los requisitos
para optar el título de Biólogo-Microbiólogo.
Trujillo, Agosto del 2016
Br. Lizbeth Nohely Armas Mantilla
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MIEMBROS DEL JURADO
DR. JUAN GUEVARA GONZALES
PRESIDENTE
DR. EDUARDO MUÑOZ GANOZA
SECRETARIO
DRA. ICELA RODRIGUEZ HARO
VOCAL
APROBACIÓN
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Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran
que el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y
fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.
DR. JUAN GUEVARA GONZALES
PRESIDENTE
DR. EDUARDO MUÑOZ GANOZA
SECRETARIO
DRA. ICELA RODRIGUEZ HARO
VOCAL
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DEDICATORIA
A Dios, por haberme permitido llegar hasta este punto
encaminándome por el camino correcto dándome salud para lograr mis
objetivos, y por su infinita bondad y amor.
A mis familiares:
Rosa y Santos mis padres, por ser mi fortaleza, mi apoyo
incondicional en cada paso que he dado y a quienes les debo la vida.
Bryan y kenny, por darme la fuerza y la alegría para seguir adelante.
Mamá Julia, por su apoyo durante todo este tiempo, sabios consejos y
apoyo para conseguir mis objetivos.
Mis queridos tíos y primos quienes me alentaron durante todo el
proceso con buenos consejos.
A mis amigos Yuli, Iris, Rossy, Ivan, Wilson y Gabriel por el día a
día, por su paciencia, sus ocurrencias, sus consejos, su cariño, por
permitirme compartir estos años a su lado, por ser mi familia cercana.
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AGRADECIMIENTO
Al proyecto de investigación básica PIBA-2-P-247-14 “Biodiversidad
mixobacterial marina del Perú: potencial fuente de biomoléculas
antibióticas contra patógenos multidrogo resistentes” financiado por el
Fondo Nacional de Desarrollo Científico, Tecnológico y de Innovación
Tecnológica (FONDECYT) del Consejo Nacional de Ciencia, Tecnología
e Innovación Tecnológica (CONCYTEC) del gobierno Peruano.
Un cordial agradecimiento a mi asesora de tesis Dra. Icela Rodriguez
Haro por brindarme su apoyo de manera incondicional en todo este
tiempo.
Al Dr. Till F. Schäberle y MSc. Luis Linares Otoya del Instituto de
Biología Farmacéutica, Universidad de Bonn (Alemania) por los
conocimientos brindados.
Mg. Mayar Ganoza Yupanqui, Dr. Julio Campos Florián y Ing.
Virginia Linares Otoya de la Universidad Nacional de Trujillo por los
conocimientos y el apoyo.
A los miembros del jurado, quienes aportaron con sus conocimientos
en esta investigación.
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FINANCIAMIENTO
Financiado por el Fondo Nacional de Desarrollo Científico, Tecnológico y de
Innovación Tecnológica (FONDECYT) del Consejo Nacional de Ciencia,
Tecnología e Innovación Tecnológica (CONCYTEC) del Gobierno Peruano, con
convenio de adjudicación Nº 092-2014-FONDECYT- DE.
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RESUMEN
Los Bacteroidetes son bacterias con una amplia distribución en la naturaleza
y algunos géneros son especies marinas siendo algunas patógenas para peces marinos
y de agua dulce, anfibios, y otros animales marinos, o algas marinas e invertebrados.
En el presente trabajo de investigación se aislaron cuatro géneros de Bacteroidetes de
la reserva Bahía Paracas, para lo cual se tomaron muestras de sedimentos de hasta
0,5 cm de profundidad, del área intermareal conteniendo material orgánico y se
depositarón en tubos estériles debidamente codificados. Cada muestra fue colocada
en los 3 parches circulares de E. coli en placas con agar agua de mar artificial (ASW-
WCX agar) incubándose a 30 °C y monitoreando el crecimiento de las colonias con
un estereoscopio. Se seleccionaron las colonias características: pequeñas de 1-2 mm
de diámetro con bordes irregulares, pigmentadas, adheridas al agar. Se realizó una
tinción Gram para verificar la presencia de bacilos gramnegativos. Las colonias que
presentaron las características macroscópicas y microscópicas mencionadas se
subcultivaron en agar VY/4, se incubo por 3-5 días a 30 °C. Se aislaron 10 cepas a
las cuales se le realizó previamente la identificación bioquímica con las pruebas de
oxidasa, catalasa e hidrolisis de caseína, gelatina, almidón, celulosa, tween 20, 40 y
80. Finalmente se realizó la identificación molecular. Se logró aislar e identificar
cuatro géneros de bacterias diferentes de las cuales dos de ellas se identificó la
especie siendo Fulvivirga sp., Tenacibaculum sp. Marivirga sp. y Reichenbachiella
sp.
Palabras claves: Fulvivirga sp., Tenacibaculum sp. Marivirga sp. y Reichenbachiella sp
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CONTENIDO
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ............ii
AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ...............iii
CERTIFICACIÓN DEL ASESOR ..........................................................................iv
PRESENTACIÓN ...................................................................................................v
MIEMBROS DEL JURADO ...................................................................................vi
APROBACIÓN .......................................................................................................vii
DEDICATORIA ......................................................................................................viii
AGRADECIMIENTO .............................................................................................ix
FINANCIAMIENTO ...............................................................................................ix
RESUMEN ..............................................................................................................xi
INTRODUCCIÓN ...................................................................................................1
MATERIAL Y MÉTODO .......................................................................................6
RESULTADOS .......................................................................................................9
DISCUSIÓN ............................................................................................................14
CONCLUSIONES ...................................................................................................18
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ....................................................................19
ANEXOS .................................................................................................................23
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I. INTRODUCCIÓN
Las bacterias tienen una amplia distribución en la naturaleza siendo una de
ellas los ambientes marinos. Los sedimentos marinos superficiales contienen grandes
cantidades de materia orgánica y allí se encuentran grupos de bacterias
pertenecientes al phylum Bacteroidetes que buscan un lugar para poder crecer
degradando algas y materia orgánica derivadas de aguas y sedimentos marinos, los
que constituyen uno de sus importantes habitas y desde donde han sido aislados en
países como Taiwán, Corea e India1, 2
.
El phylum Bacteroidetes está conformado por un grupo diverso de bacilos
Gram negativos que no forman endosporas, este phylum presenta cuatro clases:
Cytophagia, Flavobacteriia, Bacteroidia y Sphingobacteria1.
Los miembros de la clase Cytophagia, son organismos Gram negativos, no
formadores de esporas, quimiorganotrofos, movilidad por deslizamiento y sus
colonias son generalmente pigmentadas de color anaranjado, amarillo, rosa o rojo
dependiendo de los carotenoides que contengan. Esta clase tiene una amplia
distribución en la naturaleza y algunos géneros son de origen marino necesitando
para su crecimiento in vitro la adición de sales, siendo el medio de aislamiento
comúnmente utilizado el denominado agua de mar artificial1. La clase Cytophagia
incluye numerosos géneros siendo las más importantes: Marivirga,
Reichenbachiella, Fulvivirga, Roseivirga entre otros.
El género Marivirga pertenece a la familia Flammeovirgaceae; son células en
forma de bastón, Gram negativas, movilidad por deslizamiento, no formadora de
endosporas, estrictamente aerobia y quimioorganotrofos. Usualmente producen
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pigmento anaranjado o amarillo no difusibles y bioquímicamente son oxidasa,
catalasa y fosfatasa alcalina positiva3.
El género Reichenbachiella pertenece a la familia Flammeovirgaceae del
phylum Bacteroidetes1. Son células en forma de barra y presentan movimiento por
deslizamiento, son Gram negativas, producen pigmentos del tipo flexirrubin no
difusibles de color anaranjado. Son estrictamente aerobias, quimiorganotróficos;
oxidasa, catalasa y fosfatasa alcalina positivo, hidrolizan agar, gelatina, alginato,
caseína, urea, almidón, ADN y tween 204.
El género Fulvivirga se encuentra también formando parte de la familia
Flammeovirgaceae del phylum Bacteroidetes. Sus células son estrictamente
aeróbicas, Gram negativas, no formadores de endosporas, producen pigmentos no
difusibles y/o difusibles, sus colonias se caracterizan por ser brillantes de color
amarillo-marrón después de 2 días de incubación, son quimiorganotróficos, oxidasa,
catalasa y fosfatasa alcalina positiva 5.
Estudios de los géneros, mencionados anteriormente, pertenecientes a la
familia Flammeovirgaceae son en su mayoría susceptibles a carbenicilina,
doxiciclina, oleandomicina, lincomicina y tetraciclina pero resistentes a ampicilina,
bencilpenicilina, cloranfenicol, kanamicina, lincomicina, eritromicina,
estreptomicina, gentamicina, neomicina y polimixina B , entre otros.1,5,6
La clase Flavobacteriia incluye a los miembros más dominantes de los
Bacteroidetes seguidos de la clase Cytophagia2. La clase Flavobacteriia incluye
organismos Gram negativos, no formadores de esporas, quimiorfanotróficos,
aerobias o anaerobias facultativas, movimiento por deslizamiento y colonias
pigmentadas o no pigmentadas y crecen adheridas o hundidas en el agar1. Se
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encuentran en gran variedad de habitas incluyendo el agua de mar, lagos, sedimentos
marinos, hielo polar y aguas hidrotermales7. Este grupo ha sido reportado como
importante en la degradación de sustancias poliméricas en ambientes acuáticos y
frecuentemente se encuentran asociados a partículas en los océanos formando parte
del fitoplancton8.
Esta clase incluye numerosos géneros que son patógenas para peces marinos
y de agua dulce, anfibios, y otros animales marinos, o algas marinas e invertebrados,
siendo el más importante el género Tenacibaculum1.
El género Tenacibaculum comprende organismos Gram negativos, en forma
de bacilos, no formadores de esporas1, sus colonias son de color amarillo pálido o
amarillo brillante, aeróbicos, quimiorganotrofos; oxidasa, catalasa positivos y
degradan la caseína.8,9
Algunas especies del género Tenacibaculum son patógenos de peces muy
conocidos en todo el mundo y de gran importancia en la acuicultura marina, y se les
consideran como agentes etiológicos de la tenacibaculosis que viene a ser una de las
enfermedades infecciosas más devastadoras en peces marinos cultivados en el
mundo7. La patología de esta enfermedad causada por estos organismos marinos se
caracteriza principalmente por la destrucción de las células epiteliales y del tejido
conectivo, dejando la musculatura expuesta, causando de esta manera lesiones
macroscópicas en la superficie del cuerpo de los peces tales como ulceras, necrosis,
pudrición de la cola, aletas y boca erosionada 10, 11, 12, 13
Los miembros del género Tenacibaculum no solo causan enfermedades en
peces, sino también estudios recientes demuestran que han podido ser aislados de
anémonas, moluscos y algas en Taiwán, Corea y China respectivamente8, 14,15
.
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La reserva nacional de Bahía Paracas es una zona protegida del Perú ubicada
en la provincia de Pisco dentro del departamento de Ica. La reserva es una Bahía con
una gran productividad biológica, que protege y conserva muestras representativas de
la diversidad biológica de los ecosistemas marinos- costera del Perú donde algas,
artrópodos marinos, aves y peces aportan la mayor diversidad específica.
La finalidad es obtener información de los géneros que están siendo de gran
importancia ya que no se han reportado estudios en el Perú y los resultados puedan
favorecer a estudios posteriores. Dado la importancia de los miembros de estos
géneros la presente investigación tuvo como propósito determinar que géneros de
bacterias del phylum Bacteroidetes se encuentran en el sedimento marino de la
reserva Bahía Paracas Enero-Julio 2016.
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OBJETIVO GENERAL
Aislar géneros del phylum Bacteroidetes de muestras de sedimento marino de
la reserva Bahía Paracas.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Identificar la morfología de las colonias típicas, de las formas individuales y
reacción al Gram de géneros bacterianos de Bacteroidetes.
Realizar la identificación bioquímica de géneros de Bacteroidetes.
Realizar la identificación genética de géneros bacterianos de Bacteroidetes.
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II. MATERIAL Y MÉTODOS
1. MATERIAL
1.1. Material de estudio
Sedimento marino de la zona intermareal de la Reserva Bahía
Paracas.
2. PROCEDIMIENTO
2.1 Toma y recolección de muestras
Las muestras fueron tomadas de 25 puntos diferentes de la reserva
Bahía Paracas, obteniéndose una muestra de sedimento marino por
cada punto. La muestra fue tomada del área intermareal17
a 0,5 cm de
profundidad conteniendo material orgánico y se depositaron en tubos
estériles debidamente codificados. Estas fueron transportadas a
temperatura ambiente al Laboratorio de Farmacología, Facultad de
Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.
2.2 Preparación de parches de E. coli
Se sembró E. coli XL1Blue en 250 ml del medio de cultivo Luria
Bertani (LB)19
y se incubó a 37 °C en agitación a 130 rpm durante 48
horas. Después se centrifugó a 4 000 rpm por 5 minutos, se eliminó el
sobrenadante y, se resuspendió las células en 4 ml de agua destilada
estéril. Luego en tres puntos diferentes de la superficie del agar agua
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de mar artificial (ASW-WCX agar)18
se colocaron 40µl de la
suspensión en cada punto (parches-spot)20
.
2.3 Aislamiento de géneros bacterianos de Bacteroidetes
Cada muestra de sedimento marino fue colocada en los tres parches
circulares de E. coli XL1Blue en placas ASW-WCX agar. La
incubación se llevó cabo a 30 °C por 48 horas y las placas fueron
observadas con un estereoscopio para observar el crecimiento de las
colonias características. Inmediatamente se seleccionaron las colonias
que presentaron las características morfológicas, colonias de 1-2 mm
de diámetro con bordes irregulares, pigmentadas, adheridas al agar y
seguidamente se realizó la tinción Gram para verificar la presencia de
bacilos gramnegativos. Las colonias que presentaron las
características mencionadas fueron subcultivadas en agar VY/419
e
incubadas de 3-5 días a 30 °C para obtención de cultivo puro.1,20
(Anexo 1)
2.4 Identificación bioquímica géneros bacterianos de Bacteroidetes
Para la identificación bioquímica se realizaron las pruebas de oxidasa,
catalasa, hidrólisis de caseína, gelatina, almidón, celulosa, tween 20,
40 y 80.1,21
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2.5 Identificación genética de géneros bacterianos de Bacteroidetes por
secuenciamiento de 16S ADNr
La identificación genética se realizó por secuenciamiento de genes
16S ADNr en el laboratorio de la Universidad de Bonn -Alemania.
El ADN genómico se aisló con el kit de purificación de ADN
Promega de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
La amplificación del 16S ADNr se realizó por PCR utilizando los
primers pA (5'AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3') y pH
(5'AAGGAGGTGATCCAGCCCCA3'). (Anexo 2)
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III. RESULTADOS
Los resultados obtenidos en la presente investigación se reportan en las
siguientes tablas:
Se muestra el número total de muestras de sedimento marino trabajados, el
porcentaje de muestras positivas y negativas al aislamiento de géneros de
Bacteroidetes de la reserva Bahía Paracas. Enero-Julio 2016, en esta tabla permite
observar que del 100% de muestras trabajadas (25) el 40% de muestras resultaron ser
positivas al aislamiento de géneros del phylum Bacteroidetes. (Tabla 1)
Se observa el número de cultivos de Bacteroidetes aislados según morfología
de colonias, morfología individual y reacción al Gram en 10 muestras positivas de
sedimento marino de la reserva Bahía Paracas. Enero – Julio 2016, que pone de
manifiesto que los cultivos aisladas presentaron la caracterización típica de la
morfología de las colonias, morfología individual y reacción al Gram de los géneros
en estudio. (Tabla 2)
Se muestra el número de cultivos de Bacteroidetes aislados según pruebas
bioquímicas en 10 muestras positivas de sedimento marino de la reserva Bahía
Paracas. Enero-Julio 2016, donde se puede observar que la identificación bioquímica
de los cultivos en estudio corresponde a los géneros del phylum Bacteroidetes.
(Tabla 3)
Se observó el número de cepas de géneros de Bacteroidetes aislados según
identificación genética (16 ADNr) en 10 muestras positivas de sedimento marino de
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la reserva Bahía Paracas. Enero-Julio 2016, que pone de manifiesto aislamiento de
cuatro géneros del phylum Bacteroidetes.(Tabla 4)
Tabla 1. Número total de muestras de sedimento marino trabajados, porcentaje de
muestras positivas y negativas al aislamiento de géneros de Bacteroidetes de la
reserva Bahía Paracas. Enero-Julio 2016
Muestras Ni de muestra fi (%)
Positivos
Negativos
10
15
40
60
Total 25 100
Ni : cantidad de nuestras analizadas
fi : porcentaje
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Tabla 2. Número de cultivos de Bacteroidetes aislados según morfología de
colonias, morfología individual y reacción al Gram en 10 muestras positivas de
sedimento marino de la reserva Bahía Paracas. Enero – Julio 2016
Numero
cultivos
Aislados
Código
cultivos
Aislados
Cultivos de género de Bacteroidetes
Morfología Morfología
individual
Gram
1 BP-23
Colonias
amarillas, bordes
irregulares Bacilos Negativos
1 BP-17
Colonias amarillo
oscuro, bordes
irregulares,
brillosas Bacilos Negativos
2
BP-1
BP-22
colonias amarillas
claros, bordes
irregulares,
convexas
Bacilos Negativos
2
BP-8
BP-16
Colonias
amarillas, bordes
irregulares,
convexas,
brillantes
Bacilos Negativos
2
BP-9
BP-25
Colonias
anaranjadas,
bordes
irregulares,
deslizantes
Bacilos Negativos
2
BP-12
BP-14
Colonias
anaranjadas,
bordes irregulares Bacilos Negativos
BP-1: Bahía Paracas - cultivo Nº 1(de la muestra Nº1)
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Tabla 3. Número de cultivos de Bacteroidetes aislados según pruebas bioquímicas en 10 muestras positivas de sedimento
marino de la reserva Bahía Paracas. Enero-Julio 2016
Nº de
cultivos
aislados
Código de
cultivos
aislados
PRUEBAS BIOQUIMICAS
Almidón Caseína Celulosa Tween
20
Tween
40
Tween
80
Oxidasa Catalasa Gelatina
3
BP-1
BP-8
BP-16
+ + - - - - + + +
3
BP-9
BP-23
BP-25
+ + - - - - + + +
2 BP-12
BP-14 + - + + + + + + -
1 BP-17 + + - + - - + + +
1 BP-22 + + - + - - + + +
BP-1: Bahía Paracas - cultivo Nº 1(de la muestra Nº1); (+): reacción positiva;(-): reacción negativa
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Tabla 4. Número de cepas de géneros de Bacteroidetes aislados según identificación
genética (16 ADNr) en 10 muestras positivas de sedimento marino de la reserva
Bahía Paracas. Enero-Julio 2016
BP-1: Bahía Paracas - cultivo Nº 1(de la muestra Nº1)
Nº DE CEPAS CÓDIGO DE
CEPAS
IDENTIFICACION GENETICA
(16S ADNr)
1 BP-1 Tenacibaculum sp. KK1.21.3
3
BP-8
BP-16
BP-22
Tenacibaculum sp. sw0106-03(3)
1 BP-12 Reichenbachiella sp.
1 BP-14 Reichenbachiella sp. strain NBRC
16625
1 BP-9 Marivirga sp.
2 BP-23
BP-25
Marivirga sp. DSM 4126
1 BP-17 Fulvivirga sp
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IV. DISCUSIÓN
La distribución de las bacterias del phylum Bacteroidetes es muy extensa en
el suelo pero también podemos encontrarlas en el mar en las zonas templadas,
tropicales o polares siendo estas poco estudiadas. Se realizaron estudios analizando
comunidades microbianas en el sedimento marino encontrando predominio de
Bacteroidetes en un 3,5 a 5% de las muestras tomadas de la superficie del mar del
norte de Alemania, así mismo, en presente trabajo se demuestra que se encontró un
40 % de muestras positivas de 25 muestras tomadas en la superficie del sedimento
marino de la reserva de bahía paracas (Tabla 1), el porcentaje de las muestras
positivas se debe a la biodisponibilidad de la materia orgánica presente en el lugar el
cual desempeña un papel muy importante en la determinación de este phylum. En los
sedimentos marinos superficiales, la materia orgánica es fácilmente degradable
siendo utilizada preferentemente por los Bacteroidetes , ya que la materia orgánica
detrítica sirve como una fuente principal de energía para estos microorganismos que
ahí habitan.1,2
De acuerdo con la tabla 2 las características morfológicas de las colonias
aisladas resultaron ser un paso importante para poder diferenciar de otras
comunidades microbianas presentes en este hábitat. Las colonias amarillas oscuras,
brillosas y con bordes irregulares aisladas, presentaron la morfología típica al género
Fulvivirga que es perteneciente al phylum estudiado, se realizo estudios en las costas
del mar de la India aislando colonias con las mismas características encontradas en
el aislamiento de este trabajo, por otro lado los estudios en sedimento marino de un
criadero de mejillones (ostras) en China, logrando aislar Bacteroidetes del mismo
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género con presencia de colonias amarillas oscuras, brillantes con bordes irregulares,
debiéndose la coloración oscura a el periodo de incubación entre 4 a 7 días.1,5,16
Otras colonias características son las colonias anaranjadas con bordes
irregulares que por sus características estarían relacionadas con el género Marivirga,
al igual que en los estudios realizados en el océano atlántico, se aisló colonias
anaranjadas de agua de mar con la diferencia que presentaban bordes circulares y
eran convexas, también aisló colonias anaranjadas en China y encontró también
variantes con pigmentación blanquecina o amarillenta, las variaciones de
pigmentación blanquecinas no se encontraron en el presente trabajo, sin embargo las
colonias con pigmentación amarillenta si fueron encontradas. Las colonias
anaranjadas con bordes irregulares también es la morfología típica del género
Reichenbachiella según estudios las colonias de Reichenbachiella agariperforans
son colonias anaranjadas con bordes irregulares las cuales fueron aisladas de
sedimento marino en Korea. La diferencia entre las colonias de Marivirga y las de
Reichenbachiella en el medio de cultivo es el poder deslizante que presentaron las
colonias del género Marivirga mientras que las de Reichenbachiella no lo
presentan.4,6,22,23
Las colonias amarillas claras, amarillas con bordes irregulares, convexas y
brillantes aisladas en el trabajo están ligadas a las características morfológicas del
género Tenacibaculum, de acuerdo con estudios realizados en sedimento marino de
las costas del pacifico se aisló colonias con las siguientes características:
amarillentas, amarillo pálido, amarillo brillantes, al igual que las colonias amarillas
pálidas aislada del sedimento marino del mar de Korea. Estudios posteriores también
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indican el aislamiento de este género a partir de criaderos de ostras, lo cual
concuerda con la presente investigación realizada, ya que algunas de las muestras de
trabajadas de sedimento marino contenían restos de ostras las cuales se usaron en la
siembra.12,14
En lo relacionado a la identificación bioquímica, esta basada al sometimiento
de los cultivos a diversas pruebas que después de las lecturas positivas o negativas
permiten una identificación presuntiva de cada género lográndose así una probable
ubicación del cultivo.1
El aislamiento de bacterias del género Tenacibaculum se debe a que estas
bacterias se encuentran circulando en ambientes marinos, en los que pueden
descomponer la materia orgánica y por presentar la capacidad para degradar una
variedad de biopolímeros, tales como diversos derivados de celulosa, xilano, agar, y
quitina presentes en el sedimento marino.1,11
A través de la identificación genética por secuenciamiento del 16S ADNr,
que es muy utilizada por ser rápida y sencilla7, se logró identificar cuatro géneros del
phylum Bacteroidetes entre ellos Fulvivirga sp., Marivirga sp., Reichenbachiella sp.
y Tenacibaculum sp. las cuales cumplieron con las características morfológicas y
bioquímicas en la identificación preliminar.
Algunos géneros del phylum Bacteroidetes como son Fulvivirga sp.,
Marivirga sp. y Reichenbachiella sp. son aisladas e identificadas de sedimento
marino por que presentan resistencia a diferentes medicamentos como a la
gentamicina, ampicilinas, kanamicina, polimixina B, penicilina, estreptomicina y son
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escasos los estudios realizados para demostrar su capacidad patogénica, sin embargo
existen estudios más avanzados en lo que concierne al género Tenacibaculum sp que
tratan de demostrar la patogenicidad de especies de este género en peces y estudios
recientes lo reportan en anemonas , criaderos de ostras y mejillones. 1,24
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V. CONCLUSIÓN
En las condiciones trabajadas se logró aislar 4 géneros siendo estos
Fulvivirga sp., Marivirga sp. Reichenbachiella sp. y tenacibaculum sp.del phylum
Bacteroidetes en muestras de sedimento marino de la zona intermareal de la reserva
Bahía Paracas.
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ANEXOS
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ANEXO 1
FIGURA 1. Crecimiento de las colonias del phylum
Bacteroidetes en agar ASW-WCX
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Figura 2. Crecimiento de las colonias del phylum Bacteroidetes en agar
VY/4
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Figura 3. Coloración Gram de bacterias pertenecientes al phylum
Bacteroidetes
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ANEXO 2
IDENTIFICACION GENETICA DE LAS BACTERIAS AISLADAS
Cepa BP- 1: Tenacibaculum sp. KK1.21.3
taccctaggcngctccttgcggtaaccgacttcaggcacccccagcttccatggcttgacggcggtgtgtac
aaggcccgggaacgtattcaccggatcatggctgatatccgattactagcgattccagcttcacggagtcga
gttgcagactccgatccgaactgtgatatggtttatagattcgctccaactcgcgttgtggctgctcattgtccat
accattgtagcacgtgtgtagcccaggacgtaagggccgtgatgatttgacgtcatccccaccttcctcgcgg
tttgcaccggcagtctcgctagagtcctcagctttacctgctagcaactaacgataggggttgcgctcgttata
ggacttaacctgacacctcacggcacgagctgacgacaaccatgcagcaccttgnaaagtgtccgaagaa
aaggtatctctacccctatcactctacatttaagccctggtaaggttcctcgcgtatcatcgaattaaaccacatg
ctccaccgcttgtgcgggcccccgtcnaattcctttgagtttcaatcttgcgatcgtactccccaggtgggaca
cttatcactttcgcttagtcactgagacaaatcccaacaactagtgtccatcgtttacggcgtggactaccagg
gtatctaatcctgttcgctccccacgctttcgtccatgagcgtcagtatatacgtagtagactgccttcgcaatc
ggtattctaagtaatatctatgcatttcaccgctacactacttattctatctacttccgtatnactcaagtcaaccag
tatcaaaggcagttccatagttaagctatgggatttcacctctgacttaattgaccgcctgcggaccctttaaac
ccaatgattccggataacgcttgcaccctccgtattaccgcggctgctggcacggagttagccggtgcttatt
cttacagtaccgtcagtactctacacgtagagcagtttcttcctgtataaagcagtttacaacccatagggcagt
cttcctgcacgcggcatggctggttcagagttgcctccattgaccaatattcctcactgctgcctcccgtagga
gtctggtccgtgtctcagtaccagtgtgggggataatcctctcagacccctacctatcgttgccatggtaagcc
gttaccttaccatctagctaataggacgcatagtcatcttgtaccaataaatctttaatttaaaaatgatgccacct
ctaaacattatggagtattaatcttcatttctaaaggctatcctcctgtacaaggcagattctatacgcgttacgca
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cccgttcgccggtcgccgacatctagcaagctagattcgctgcccctcgacttgcatgtgttaagcctgccgc
tagcgttcatcctganccnnnatcaa
Cepa BP- 9: Marivirga tractuosa DSM 4126,
ccgaattcgtcgacaacagagtttgatcctggctcaggatgaacgctagcggcaggcctaatacatgcaagt
cgaacggtaacatatccgcttgcggatgatgacgagtggcgcacgggtgcgtaacgcgtatgcaacctacc
ctttacagggggatagcccggggaaactcggattaataccccatggtatcataagatcacctgatctaatgatt
aaagatttatcggtaaaggatgggcatgcgtctgattagttagatggtgaggtaacggctcaccatgacgatg
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atcagtaggggttctgagaggatgatcccccacactggtactgagacacggaccagactcctacgggagg
cagcagtagggaatattggtcaatgggtgagagcctgaaccagccatgccgcgtgtaggatgacggccttc
tgggttgtaaactacttttctacaggaagaaaaccctcatgcgtgaggaattgacggtactgtaggaataagc
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gttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccctattcttagttgccagcacataatggtggggactctaggaa
gactgcctgcgcaagcagagaggaaggaggggacgacgtcaagtcatcatggcccttacgcccagggct
acacacgtgctacaatggtgcatacagagggtagcaagctagcaatagcaagccaatctcaaaaagtgcat
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ggttgccgcaaggcgctgtttagggttaaaccagtaactagggctaagtcgtaacaaggtagccgtaccgg
aaggtgtggctggatcacctccttaagcttgatcccgggaattcccgcggccanngcggccgagc
Cepa BP- 12: Reichenbachiella agariperforans strain NBRC 16625
tttgatcctggctcaggatgaacgctagcggcaggcctaatacatgcaagtcgaggggcagcatgagtactt
gtacttgatggcgaccggcgcacgggtgcgtaacgcgtatgcaacctacccattactggaggatagcccgg
ggaaactcggattaatactccatagtatactagaatcgcatggtttaagtattaaagatttattggtaatggatgg
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tgatcccccacactggtactgagatacggaccagactcctacgggaggcagcagtagggaatattggtcaa
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tgggcgagagcctgaaccagccatgccgcgtgcaggaagacggccttctgggttgtaaactgcttttgaca
gggaaaaaaacggctatgcgtagctaattgacggtacctgtagaataagcaccggctaactccgtgccagc
agccgcggtaatacggagggtgcaagcgttgtccggatttattgggtttaaagggtgcgtaggtggctattta
agtcagtggtgaaatcccgcagcttaactgtggaactgccattgatactggatagcttgagtgttgttgaggca
ggcggaatttatgatgtagcggtgaaatgcatagatatcataaagaacaccgatagcgaaggcagcttgcta
agcgataactgacactaaggcacgaaagcgtgggtagcgaacaggattagataccctggtagtccacgcc
gtaaacgatgctcactcgatgtatgcgatattacagtatgcgtccaagcgaaagcgttaagtgagccacctgg
gggagtacgctggcaacagtgaaactcaaaggaattgacgggggtccgcacaagcggtggagcatgtgg
tttaattcgatgatacgcgaggaaccttacctgggctcgaatgtgagcgctattcccagagatgggaagttctt
cggacgtgaaacaaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgccgtgaggtgttgggttaagtcccgcaac
gagcgcaacccctactgttagttgccatcaggttaagctggggactctaacaggactgcctacgcaagtaga
gaggaaggtggggacgacgtcaagtcatcatggcccttacgcccagggctacacacgtgctacaatggtg
catacagagggtcgcaagctggcaacagcaagccaatctcaaaaagtgcatctcagttcggatcggggtct
gcaactcgaccccgtgaagttggaatcgctagtaatcgcgtatcagcaatgacgcggtgaatacgttcccgg
accttgtacacaccgcccgtcaagccatggaagttgggaggacctgaagacggttgctgtaaggcgctgttt
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Cepa BP-17: Fulvivirga sp. MOLA 70
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Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
BIBLIO
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NCIAS B
IOLO
GICAS
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