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7/23/2019 BIOQUIMICA INFORME 5.docx

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CROMATOGRAFA

COMPETENCIA GENERAL:

Determina por fraccionamiento losaminocios !"e componen "na m"estrapro#lema e nat"rale$a proteica

PRACTICA N% &


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1. MARCO TEORICO

CROMATOGRAFIALa cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin

de especies qumicas estrechamente relacionadas en mezclas

complejas. La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basadoen la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases

inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil.

El uso de la cromatografa en papel para la separacin e identificacin

de aminocidos es de gran importancia, la fase mvil empleada

generalmente es una mezcla de n'butanol!cido actico!agua. Laseparacin implica que los aminocidos cuya cadena lateral "#$ tenga

un carcter ms apolar, tendrn tendencia a desplazarse con la fase

mvil, mientras que lo aminocidos que sean polares, ya sean con carga

o sin carga, sern retenidos por la fase estacionaria. Ello es as, porquela fase mvil est formada por solventes que son ms apolares que el

agua, que es el solvente de la fase estacionaria.

El papel que se utiliza para la cromatografa est fabricado con celulosa

pura y fibras de celulosa para intercambio inico. Este papel permite

separaciones eficientes y rpidas de sustancias orgnicas o inorgnicas

cargadas. Entre los diferentes tipos de papel se encuentra el tipo %E&'

que es un papel delgado "(,)( mm$ con grupos funcionales de dietil

aminoetilo "%E*E$ celulosa. La velocidad de flujo es de + mm!-( min

"en agua$, acta como un intercambiador de aniones dbilmente bsicopara separacin de aniones, nucletidos y aminocidos, tambin se lo

usa para ensayos enzimticos y aplicacin de la tcnica de la huella

dactilar.


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pa#ilo

cintascotc(

papel

)oma

#a)"eta

(orno

*asoprecipitao

2. MATERIALES UTILIZADOS

3. REACTIVOS UTILIZADOS


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alanina

a)"a

estilaa

al#"

mina

cistina

ar)inina

nin(irin

a

4. PROCEDIMIENTO

i$ /edir ) cm al papel de goma y trazarlo con un lpiz, escribir con )

puntos en ella adems de pegar un pedazo de pabilo en la partesuperior de la hoja.

ii$ En el primer punto agregar cuidadosamente una gota arginina y en el

segundo punto agregar albumina, rodear con un lpiz la parte

humedecida por cada uno de ellos.iii$ 0eguidamente colocar la hoja de goma dentro del frasco contenido

con agua destilada hasta menos de la mitad pero sin tocar los trazos

del lpiz.iv$ Llevarlo al horno para secar.v$ %espus colocarlo en un recipiente contenido de ninhidrina y

humedecerlo por unos segundos y luego volver a llevarlo al horno asecar.vi$ 1olocar la hoja de nuevo en el frasco contenido de agua destilada

por )( minutos as se podr observar que el agua destilada asciende

hasta cierto punto y trazar con el lpiz hasta donde ascendi el agua

destilada y determinar sus #f.


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5. PREGUNTAS

Qu rela!"# $!e#e la %&lu!"# 'e #!#(!'r!#a e# la !'e#$!)!a!"# 'e

a*!#&+!'&%,1uando son digeridos se agrega ninhidrina, la cual reacciona con el

grupo alfa2amino de los aminocidos y los o3ida, reducindose la

ninhidrina a hidridantina,y liberando este alfa2amino como amonio

"4567$ ste se condensa con una ninhidrina y una hidridantina

formando un producto que posee coloracin prpura y por tanto puede

medirse su concentracin por absorbancia, la cual es proporcional a laconcentracin de amonio y sta es proporcional a la de aminocido.

Qu -e#$aa $!e#e la r&*a$&/ra)0a e# la %e1ara!"# 'e

a*!#&+!'&%,

Es ideal para detectar concentraciones bajas de aminocidos,

utilizndose para revelar su presencia en cromatogramas y fracciones

procedentes de otras tcnicas de separacin.

A-er!/ue &$r&% $!1&% 'e r&*a$&/ra)0a%

Qu ara$er0%$!a% 'ee 'e $e#er u# %&l-e#$e 1ara %er u$!l!a'&%

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