Estudios sobre rizogénesis en
‘Guayabo del país’
Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320 1
Facultad de Agronomía
Ing. Agr. Mag. Beatriz Vignale
(EEFAS)
Ing. Agr. Evelin Pechi Midón
Bach. José Pedro Scaltritti
Participantes
INIA – “Las Brujas”
Ing. Agr. MSc. Danilo Cabrera
Ing. Agr. Dra. Alicia Castillo
Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320
Bach. José Pedro Scaltritti
Lic. Mag. Susana Rodriguez
Dra. Gabriela Speroni
Ing. Agr. PhD. Pablo Speranza
Ing. Agr. Mag. Silvia Ross
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Objetivo general
Ajustar metodologías de propagación vegetativa para 'Guayabo del país', a partir del estudio de las bases anatómicas y fisiológicas del proceso de diferenciación
de raíces adventicias en esta especie, identificando marcadores de enraizamiento que permitan desarrollar un protocolo eficiente
Objetivos específicos
Taller Frutos Nativos, 2015
�Evaluar la capacidad de enraizamiento de los materiales preseleccionados
�Identificar las fases del proceso, reconociendo factores promotores o inhibidores y en que fase actúan.
�Desarrollar un protocolo para propagar vegetativamente esta especie demanera eficiente
Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320 3
Evaluación de la capacidad de enraizamiento de los materiales preseleccionados
Factorial 9 x 2
9 genotipos
2 tratamientos:
2500 ppm AIB
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CondicionesHR: 90%
T basal: 25ºC
2500 ppm AIB
Sin hormonas
Resultados del ensayo (Anava efecto clon)
Menor enraizamiento
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Menor enraizamiento
Mayor enraizamiento
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Ensayo estaquillado con genotipos contrastantes
Temperatura basal: 25ºC
HR: 90%
Sustrato: perlita
2500 ppm AIB
Genotipos contrastantes (TF y C-74)
Factorial: 2 x 2
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Muestreos:
•Cortes anatómicos
•Determinaciones enzimáticas
6
Enraizamiento materiales contrastantes
40,0
50,0
60,0
% e
nrai
zam
ient
o
Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320
0,0
10,0
20,0
30,0
C74 TF
% e
nrai
zam
ient
o
C/AUX
S/H
7
Promedio raíces/estaca
1,50
2,00
2,50
nº r
aíce
s/es
taca
C/AUX
8
0,00
0,50
1,00
C74 TF
nº r
aíce
s/es
taca
C/AUX
S/H
Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320
Largo de raíces
5,00
6,00
7,00
8,00
Long
itud
prom
edio
(cm
)
C/AUX
9
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
C74 TF
Long
itud
prom
edio
(cm
)
C/AUX
S/H
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10Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320
Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320
Planta de estaca con flor, al año
Estaca enraizada y aclimatada
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Proteína
0,200
0,250
0,300
0,350
0,400
Abs
orba
ncia TF S/H
TF C/AUX
B S/H
B C/AUX
Cuantificación de proteínas totales.
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-0,100
-0,050
0,000
0,050
0,100
0,150
0 7 14 19 28 34 39
Tiempo (d)
Abs
orba
ncia
TF C/AUX
C74 S/H
C74 C/AUX
B C/AUX
A S/H
A C/AUX
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A = TF (no enraiza)B = C-74 (enraiza)
Formación de canales secretores
Caracterización anatómica
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Formación de canales secretores
Zona cambial, xilema, floema y floema interno
Presencia de drusas
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Presencia de esclerénquima TF
Presencia de esclerénquima (27-1)
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Evaluación de multiplicación y enraizamiento in vitro.
Multiplicación
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IntroducciónMedio WPM + PVP
MultiplicaciónMedio WPM + CK
IBA+PG IBA PG SNP CONTROLEnraizamiento
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3
4
5
6
BAP 2Ip Z CONTROL
Tasa
mu
ltip
lica
ció
n (
ye
ma
s/e
xp
lan
to)
Efecto de las citoquininas en la proliferación de yemas
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0
1
2
3
A B
GenotypeGenotipo
Tasa
mu
ltip
lica
ció
n (
ye
ma
s/e
xp
lan
to)
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A = C-74 B = 27-1
% Enraizamiento Número de raíces/microestaca Tratamiento de
enraizamiento A B A B
Control 69 ± 19.49 a 15.00 ± 7.07 a 2.17 ± 0.70 a 2.00 ± 0.00 b
PG 60 ± 33.17 a 0 ± 0.00 a 1.68 ± 0.58 a 0 ± 0.00 a
Resultados de enraizamiento in vitro
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AIB 58 ± 34.21 a 62.50 ± 3.54 b 1.85 ± 0.74 a 1.00 ± 1.41 ab
SNP 60 ± 23.45 a 5.00 ± 7.07 a 2.24 ± 0.78 a 0.50 ± 0.71 a
AIB + PG 68 ± 23.87 a 20.00 ± 28.25 a 2.02 ± 0.26 a 1.00 ± 1.41 ab
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18Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320
Plantas de 2 años Planta de 1 año
Búsqueda de genes asociados a enraizamiento
Identificación de genes de enraizamiento en otras especies
Diseño de primers
“Levantamiento” a partir de ADN de A. sellowiana
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Secuencias editadas
Diseño de primers para qRT-PCR
Análisis de la expresión de genes en materiales contrastantes
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Genes que se estudiaron
TIR
PIN
SHR
SCR
NIA
ACT2
EF2
UBI
TUA
H2B
A partir de secuencias conocidas
(Arabidopsis; Eucalyptus).
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Genes que amplificaron bien y quedaron seleccionados
PIN (1,2)
SHR (2)
TIR (2)
H2B
EF2
UBI
Enraizamiento Constitutivos
20
MPM 10 10 10Q-92 Q-92 Q-92B B B
500500
300 300
PRUEBAS EN A. sellowiana
10 Q92 B 10 Q92 BMPM 10 10 10Q-92 Q-92 Q-92B B B
500
Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320
1 PIN-1MIX 1 MIX 2 MIX 3
100
EF 2
Tamaño Esperado
102 pb
H2B
200
Tamaño Esperado
145pb
1 PIN-1
300
MIX 1 MIX 2 MIX 3
3 Repeticiones para cada primer y ADN.
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PRUEBAS EN A. sellowiana
MPM 10 Q-92 B 10 Q-92 B 10 Q-92 B
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2 -SHR
500
400
MIX 1 MIX 2 MIX 3
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Conclusiones
El genotipo es la principal determinante de la capacidad de enraizamiento
El único tratamiento de enraizamiento que tuvo un efecto positivo in vitro fue el
agregado de auxina (AIB)
No se encontró el efecto esperado con el agregado de floroglucinol o de
nitroprusiato de sodio en los clones evaluados
Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320
nitroprusiato de sodio en los clones evaluados
Se identificó en A. sellowiana la presencia de genes que en otras especies están
asociados a la diferenciación de raíces adventicias. Actualmente se estudian los
niveles de expresión de estos genes en materiales contrastantes.
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Muchas gracias
Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320
Muchas gracias
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